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ppr-miR-1260的鉴定及其在LMBV-GD感染过程中的调控作用

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ppr-miR-1260的鉴定及其在LMBV-GD感染过程中的调控作用

作者：黄鉴涛广东海洋大学

学位级别：硕士

大口黑鲈虹彩病毒(Largemouth bass virus,LMBV)系大口黑鲈虹彩病毒病的病原,可感染多种温水性鱼类,大口黑鲈虹彩病毒病的防治急需解决,LMBV的致病机制亟待解析。微小RNA(micro RNA,mi RNA)是细胞多项生理病理活动的重要调控因子,在病... 详细信息

大口黑鲈虹彩病毒(Largemouth bass virus,LMBV)系大口黑鲈虹彩病毒病的病原,可感染多种温水性鱼类,大口黑鲈虹彩病毒病的防治急需解决,LMBV的致病机制亟待解析。微小RNA(micro RNA,mi RNA)是细胞多项生理病理活动的重要调控因子,在病毒感染、复制及宿主免疫中发挥重要调控作用。已有研究表明,mi R-1260参与调控多种病毒的复制和细胞促炎效应。本研究对胖头鱥mi R-1260(Pimephales promelas mi R-1260,ppr-mi R-1260)在大口黑鲈虹彩病毒GD分离株(Largemouth bass virus GD,LMBV-GD)感染FHM(胖头鱥肌肉细胞系,Fathead monnow cell line)过程中的调控作用进行探索。本研究制备了LMBV-GD感染FHM样品,采用茎环RT-PCR(Stem-loop RT-PCR)方法扩增获得ppr-mi R-1260,测序确定获得的ppr-mi R-1260序列正确;LMBV-GD感染FHM可快速产生细胞病变效应(Cytopathic effect,CPE),细胞在12 h内全部裂解死亡。因此,收集LMBV-GD感染FHM后0 h、2 h、4 h、6 h、8 h和10 h样品,检测ppr-mi R-1260在LMBV-GD感染过程中的时序表达特性,q RT-PCR结果表明在LMBV-GD感染过程中,ppr-mi R-1260的表达持续上升,且差异显著(p<0.05),提示ppr-mi R-1260在LMBV-GD感染过程中可能发挥调控功能。应用生物信息学软件mi RBase、mi Randa、mi RDB和RNA22.V2预测ppr-mi R-1260的靶基因,共同预测到ppr-mi R-1260的4个靶基因,即转化生长因子-β受体1(transforming growth factor-βreceptor 1,tgf-βr1)、细胞通讯网络因子1(cellular communication network factor 1,ccn1)、酪蛋白激酶IIβ亚基(casein kinase 2β,csnk2β)、锌指蛋白574(zinc finger protein 574,znf574)。构建4个靶基因的野生型双荧光素酶报告质粒和突变型双荧光素酶报告质粒,并进行双荧光素酶报告基因实验。结果显示,4个靶基因的野生型双荧光素酶报告质粒与ppr-mi R-1260 mimic共转染后,其双荧光素酶活性均显著降低(p<0.05);而突变型双荧光素酶报告质粒与ppr-mi R-1260 mimic共转染后,其双荧光素酶活性无显著变化,说明tgf-βr1、ccn1、csnkβ和znf574均与ppr-mi R-1260靶向结合。转染ppr-mi R-1260 mimic和ppr-mi R-1260 inhibitor对ppr-mi R-1260的表达进行上调和下调,用q RT-PCR检测其靶基因的表达。q RT-PCR检测结果显示,上调pprmi R-1260后,4个靶基因的表达水平显著下降(p<0.05);下调ppr-mi R-1260后,4个靶基因的表达水平显著升高(p<0.05),说明ppr-mi R-1260对tgf-βr1、ccn1、csnk2β和znf574的转录表达起着负调控作用。对ppr-mi R-1260的表达进行上调和下调后,应用q RT-PCR和western blot分别检测LMBV-GD mcp(主要衣壳蛋白,major capsid protein)基因和MCP蛋白的表达,并采用Reed-Muench法测定LMBV-GD在FHM细胞中增殖的滴度。q RT-PCR检测结果显示,上调ppr-mi R-1260表达后,LMBV-GD mcp基因的表达显著升高(p<0.05);下调ppr-mi R-1260表达后,LMBV-GD mcp基因的表达显著降低(p<0.05)。Western Blot检测显示,上调ppr-mi R-1260表达后,LMBV-GD MCP蛋白的表达显著上升(p<0.05);下调ppr-mi R-1260表达后,LMBV-GD MCP蛋白的表达显著降低(p<0.05)。Reed-Muench法计算病毒滴度结果显示,上调ppr-mi R-1260表达后,LMBV-GD的滴度显著上升(p<0.05);下调ppr-mi R-1260表达后,LMBV-GD的滴度显著下降(p<0.05)。上述结果表明,ppr-mi R-1260正向调控LMBV-GD的复制。综上所述,本研究通过分析ppr-mi R-1260在LMBV-GD感染过程中的时序表达特性,发现LMBV-GD感染

关键词：大口黑鲈虹彩病毒GD株 ppr-miR-1260 靶基因调控作用复制

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新冠肺炎疫情时期四川盆地大气污染成因分析

气象科学 2022年第3期42卷 377-389页

作者：黄鉴涛刘婧懿徐家炜周德荣黄昕南京大学大气科学学院南京210023

由于新型冠状肺炎病毒(COVID-19)的爆发,中国从2020年春节起实施了限制出行、交通管制等一系列措施,污染物排放量大幅度减少,但四川盆地区域仍出现了多次轻度空气污染事件。本文结合空气质量观测数据与WRF-Chem模式模拟分析了疫情封控... 详细信息

由于新型冠状肺炎病毒(COVID-19)的爆发,中国从2020年春节起实施了限制出行、交通管制等一系列措施,污染物排放量大幅度减少,但四川盆地区域仍出现了多次轻度空气污染事件。本文结合空气质量观测数据与WRF-Chem模式模拟分析了疫情封控减排时期四川盆地污染的时空分布及成因。四川盆地区域二氧化氮(NO_(2))因人为活动减排从35.0μg·m^(-3)下降至20.2μg·m^(-3),减少比例约为40%~60%,而臭氧(O_(3))因NO_(X)-VOCs-O_(3)的非线性关系以及四川盆地区域氮氧化物(NO_(X))、挥发性有机物(VOCs)排放与减排的不均衡反而从27.5μg·m^(-3)上升至41.4μg·m^(-3),在重庆甚至增幅高达100%,进而促进了四川盆地区域气态污染物的氧化和二次细颗粒物的生成。疫情减排对污染的影响存在较为显著的区域差异,在成都、重庆地区,二次污染的生成一定程度上抵消了一次污染物减排的影响,二次污染物与一次污染物的比例变化幅度为-10%~20%,而在南遂广、川南、达万区域,细颗粒物(PM_(2.5))平均质量浓度从57.0μg·m^(-3)降低至47.4μg·m^(-3),二次污染物与一次污染物的比例下降幅度约为30%~60%。总体而言,减排在疫情期间发挥主导作用,不平衡的一次减排和大气氧化性的增强促进了部分区域二次污染物生成过程,四川盆地区域的污染防治仍需注重多种污染物的协同治理。

关键词：新冠肺炎疫情减排 PM_(2.5)污染 O_(3)污染 WRF-Chem模拟

cid-miR-146a在LCDV-cn感染中的差异表达及其调控作用

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广东海洋大学学报 2022年第4期42卷 31-41页

作者：胡海浩黄鉴涛马嘉霖杨硕闫秀英简纪常广东海洋大学水产学院/广东省水产动物病害防控与健康养殖重点实验室/水产经济动物病害控制广东普通高校重点实验室广东湛江524088

【目的】在鱼淋巴囊肿中国病毒株(LCDV-cn)感染草鱼卵巢细胞系(GCO)过程中,分析cid-miR-146a的表达特性,探索cid-miR-146a的调控作用。【方法】采用颈环RT-PCR方法,从LCDV-cn感染的GCO细胞中获得cidmiR-146a;在LCDV-cn感染GCO过程中,用... 详细信息

【目的】在鱼淋巴囊肿中国病毒株(LCDV-cn)感染草鱼卵巢细胞系(GCO)过程中,分析cid-miR-146a的表达特性,探索cid-miR-146a的调控作用。【方法】采用颈环RT-PCR方法,从LCDV-cn感染的GCO细胞中获得cidmiR-146a;在LCDV-cn感染GCO过程中,用定量PCR方法获取cid-miR-146a的表达变化;用生物信息学方法预测和双荧光素酶系统验证cid-miR-146a的靶基因;转染cid-miR-146a mimic和cid-miR-146a inhibitor对cid-miR-146a进行上调和下调,用定量PCR检测cid-miR-146a、靶基因Flt1和LCDV-cn mcp基因在GCO中的表达。【结果】LCDV-cn感染GCO后3~6 d细胞聚集形成“疤痕”,之后细胞逐渐脱落、裂解,呈现空洞。cid-miR-146a的长度为23 bp,在LCDV-cn感染GCO过程中,cid-miR-146a的表达先上升(72 h前)后下降(72 h后)。用不同生物信息学方法共同预测到cid-miR-146a的靶基因为Flt1,在双荧光素酶系统验证实验中,cid-miR-146a靶向Flt1重组载体后荧光素酶活性降低(P<0.05),证实Flt1为cid-miR-146a的靶基因。对cid-miR-146a进行上调下调后,GCO中cid-miR-146a的表达差异显著(P<0.05)。在cid-miR-146a上调后,靶基因Flt1的表达显著下降(P<0.05),LCDV-cn mcp基因的表达显著上升(P<0.05);在cid-miR-146a下调后,靶基因Flt1的表达显著上升(P<0.05),LCDV-cn mcp基因的表达显著下降(P<0.05)。【结论】在LCDV-cn感染GCO过程中,CPE的变化与cid-miR-146a的表达变化时间点呈正相关。cid-miR-146a负调控其靶基因Flt1的表达,并对LCDV-cn的复制起着正调控作用。生物信息学方法预测说明cid-miR-146a参与调控的信号通路与免疫和肿瘤发生相关。

关键词：鱼淋巴囊肿病毒中国株草鱼卵巢细胞系草鱼miR-146a Fms相关酪氨酸激酶1 定量PCR

草鱼miR-218鉴定及其对鱼淋巴囊肿病毒中国株感染的调控作用

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广东海洋大学学报 2023年第4期43卷 52-61页

作者：黄鉴涛胡海浩马嘉霖战盈瑾闫秀英简纪常广东海洋大学水产学院/广东省水产动物病害防控与健康养殖重点实验室/水产经济动物病害控制广东普通高校重点实验室广东湛江524088

【目的】鉴定草鱼(Ctenopharyngodon idella)miR-218(cid-miR-218)家族成员,分析cid-miR-218在鱼淋巴囊肿病毒中国株(LCDV-cn)感染草鱼卵巢细胞系(Grass carp ovary cells,GCO)过程中的表达特性,探索cid-miR-218-5p对LCDV-cn感染的调控作用。【方法】从LCDV-cn感染的GCO细胞中,通过茎环RT-PCR获取cid-miR-218家族成员,并进行测序验证和生物信息学分析;用定量PCR分析cid-miR-218家族在LCDV-cn感染GCO过程中的表达;用生物信息学方法预测cid-miR-218家族的靶基因,并利用双荧光素酶报告基因系统验证cid-miR-218-5p的靶基因;通过转染cid-miR-218-5p mimic和cid-miR-218-5p inhibitor上调和下调cid-miR-218-5p的表达,用定量PCR分析cid-miR-218-5p、靶基因il-10和LCDV-cn mcp基因的表达情况;应用GO和KEGG数据库,对cid-miR-218家族可能参与调控的信号通路进行富集分析。【结果】在LCDV-cn感染GCO过程中,鉴定到cid-miR-218-5p、cid-miR-218a、cid-miR-218b、cid-miR-218b-1和cid-miR-218b-2等5个cid-miR-218家族成员,其中cid-miR-218-5p的表达呈先升后降再上升的变化趋势,且差异表达最显著(P<0.05);经生物信息学分析预测,cid-miR-218家族成员有较多共同的潜在靶基因,il-10是共有的靶基因。经验证,pmirGLO-il-10重组质粒与家族成员代表cid-miR-218-5p结合后,其荧光素酶活性降低(P<0.05),证明il-10是cid-miR-218-5p的靶基因。cid-miR-218-5p过表达后,il-10与LCDV-cn mcp表达均显著下降(P<0.05),而抑制cid-miR-218-5p表达后,il-10与LCDV-cn mcp表达则显著上升(P<0.05)。预测表明cid-miR-218家族参与调控病毒感染致瘤相关信号通路。【结论】在LCDV-cn感染GCO过程中,cid-miR-218家族中cid-miR-218-5p起重要调控作用;cid-miR-218-5p负调控其靶基因il-10的表达,并负调控LCDV-cn mcp基因的表达;cid-miR-218-5p和IL-10对鱼淋巴囊肿病诊断和防控有潜在的临床应用价值。

关键词：草鱼卵巢细胞系 cid-miR-218家族鱼淋巴囊肿病毒中国株靶基因白介素10

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中断离港航班恢复的改进NSGA2算法

北京航空航天大学学报 2024年第6期50卷 1784-1793页

作者：陈可嘉吴钧涛福州大学经济与管理学院福州350108

为解决因突发事件产生的航空公司航班中断问题,对中断的离港航班进行恢复,构建最小化航空公司总延误成本和最小化乘客总延误时间的双目标优化模型,设计基于支配强度的自适应非支配排序遗传算法(ANSGA2-DS)。提出3种改进操作:快速支配排... 详细信息

为解决因突发事件产生的航空公司航班中断问题,对中断的离港航班进行恢复,构建最小化航空公司总延误成本和最小化乘客总延误时间的双目标优化模型,设计基于支配强度的自适应非支配排序遗传算法(ANSGA2-DS)。提出3种改进操作:快速支配排序方法、新的拥挤距离和自适应精英保留策略。通过福州长乐国际机场某航空公司的运行数据对所提算法进行验证,实验结果表明:与传统的先规划先服务方法相比,所提算法得到的解有大幅优化;与ε约束法相比,所提算法的求解时间总体上低于ε约束法,且求解结果接近ε约束法所得最优结果;与NSGA2、MOEAD等多目标优化算法相比,所提算法表现出更优的性能,能够有效且高效地解决问题,为航空公司达成优化的解决方案提供基础。

关键词：航空运输中断航班恢复多目标遗传算法离港航班双目标优化

高温高压下不同结构形式裂缝充填花岗岩热力学特性

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煤炭学报 2024年第6期49卷 2660-2674页

作者：阴伟涛冯子军太原理工大学原位改性采矿教育部重点实验室山西太原030024

深部干热岩地热能储层一般为非完整岩体,含有大量因地质构造运动形成的裂缝。构造裂缝随后被热液充填,这种储层被称为裂缝充填储层。为指导深部干热岩地热开发,利用太原理工大学自主研制600℃高温高压岩体三轴试验机研究了中国山西芦芽... 详细信息

深部干热岩地热能储层一般为非完整岩体,含有大量因地质构造运动形成的裂缝。构造裂缝随后被热液充填,这种储层被称为裂缝充填储层。为指导深部干热岩地热开发,利用太原理工大学自主研制600℃高温高压岩体三轴试验机研究了中国山西芦芽山花岗岩母岩(Ⅰ类花岗岩)、热液充填体(Ⅱ类花岗岩)、充填体与母岩胶结界面横向贯通试样花岗岩(Ⅲ类花岗岩)、充填体与母岩胶结界面纵向贯通试样花岗岩(Ⅳ型花岗岩)等4类花岗岩高温(500℃)高压(20 MPa围压)条件下的热力学特性。研究得出4类花岗岩热膨胀系数随温度升高可分为低温缓慢波动段、中低温快速增加段以及中高温快速减小段3个阶段。4类花岗岩弹性模量随温度升高先缓慢增加后快速降低,溶蚀孔隙结构以及低键合强度矿物的存在导致热液充填体弹性模量最低。此外,得出裂缝充填花岗岩体内原生裂缝闭合的临界温度大约为200℃;胶结界面附近充填体恢复弱面结构特性的临界温度为250℃左右。最后,得出了4类花岗岩高温高压条件下的破坏形式。裂缝充填花岗岩体内的母岩粗晶粒边界处、热液充填体溶蚀孔隙处和胶结界面处极有可能会在水力压裂建造储层过程中形成大范围高效导水通道,为干热岩地热开采储层建造理论和技术提供新的思路。

关键词：裂缝充填花岗岩高温高压微观结构矿物特征热力学特性干热岩地热开发

草鱼NCCRP-1和IL-10的表达、抗体制备及组织病理变化

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广东海洋大学学报 2021年第5期41卷 10-18页

作者：陈静妮代礼平雷燕胡海浩黄鉴涛简纪常闫秀英广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室/水产经济动物病害控制广东普通高校重点实验室广东湛江524088 广州利洋水产科技股份有限公司广东广州510515

【目的】制备草鱼(Ctenopharyngodon idella)非特异性细胞毒性细胞受体蛋白-1(NCCRP-1)和白细胞介素-10(IL-10)的抗血清,探讨重组NCCRP-1和IL-10免疫在草鱼抗病毒感染过程中肾脏和肠病理学变化及对NCCRP-1和IL-10表达的影响。【方法】应... 详细信息

【目的】制备草鱼(Ctenopharyngodon idella)非特异性细胞毒性细胞受体蛋白-1(NCCRP-1)和白细胞介素-10(IL-10)的抗血清,探讨重组NCCRP-1和IL-10免疫在草鱼抗病毒感染过程中肾脏和肠病理学变化及对NCCRP-1和IL-10表达的影响。【方法】应用PCR扩增技术获得草鱼NCCRP-1和IL-10开放阅读框ORF,构建原核表达载体pET-NCCRP和pET-IL10;用表达的重组蛋白分别制备兔抗NCCRP-1和IL-10的抗血清,并采用ELISA方法测定抗血清的效价;分别用重组NCCRP-1和IL-10免疫草鱼,并用草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)GD108攻毒,感染7 d后制备草鱼肾脏和肠的病理切片,用定量PCR和western blot检测NCCRP-1和IL-10的表达。【结果】草鱼NCCRP-1和IL-10的ORF分别编码237个和179个氨基酸;草鱼NCCRP-1和IL-10的原核表达载体pET-NCCRP和pET-IL10在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中成功诱导表达,最优表达条件分别是0.1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)37℃诱导4 h和1.0 mmol/L IPTG 37℃诱导6 h,western blot分析表明重组表达的蛋白为目的蛋白;制备兔抗NCCRP-1和IL-10抗血清的效价均高达1∶40000,免疫和攻毒后,NCCRP-1免疫组草鱼肾脏与肠的病理变化较轻,且NCCRP-1在肾脏与肠中的表达量显著上调(P<0.05);IL-10免疫组草鱼肾脏与肠的病理变化较重,IL-10在肾脏与肠中的表达量变化不显著。【结论】外源性NCCRP-1免疫后增强了草鱼抵御GCRV-GD108感染的免疫应答,NCCRP-1对草鱼抗GCRV GD108感染效果显著;而外源性IL-10免疫后,其对草鱼抗GCRV GD108感染效果不显著。

关键词：草鱼非特异性细胞毒性细胞受体-1 白细胞介素-10 表达多克隆抗体组织病理学

水-荷耦合作用下沥青桥面铺装层裂缝扩展分析

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吉林大学学报（工学版） 2024年第7期54卷 1988-1996页

作者：崔亚宁司春棣凡涛涛王飞石家庄铁道大学省部共建交通工程结构力学行为与系统安全国家重点实验室石家庄050043 河北省交通安全与控制重点实验室石家庄050043 石家庄铁道大学交通运输学院石家庄050043

沥青混合料桥面铺装层裂缝在水-荷载作用下会进一步引发松散、坑槽等病害,为揭示荷载作用下孔隙水压力对既有裂缝扩展的影响,本文建立了沥青混凝土连续箱梁桥面铺装层有限元模型,并通过现场动载试验,以桥梁动挠度及模态为指标验证有限... 详细信息

沥青混合料桥面铺装层裂缝在水-荷载作用下会进一步引发松散、坑槽等病害,为揭示荷载作用下孔隙水压力对既有裂缝扩展的影响,本文建立了沥青混凝土连续箱梁桥面铺装层有限元模型,并通过现场动载试验,以桥梁动挠度及模态为指标验证有限元模型正确性。在桥面铺装层上面层底部预设纵向裂缝,通过分析裂缝尖端应力强度因子K_(I)和K_(II)的变化规律研究水-荷耦合作用下桥面铺装层既有裂缝扩展对桥面的影响。研究发现,应力强度因子K_(I)的变化反映出动水压力作用会促进铺装层张拉型裂缝扩张,水的存在导致K_(I)值增大约50%,动水压力越大扩展速度越快,动水压力对剪切型裂缝的扩展影响较小,应力强度因子K_(II)变化不大,但由于水的存在使得应力强度因子响应时间变长,因此,水会对桥面铺装层产生持续影响。

关键词：道路工程桥面铺装层裂缝扩展水-荷载耦合应力强度因子

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中国企业绿色投资同群效应研究

系统工程理论与实践 2024年第3期44卷 874-892页

作者：王玉涛王松段梦然中国人民大学商学院北京100872 北京工商大学商学院北京100048

推动经济社会发展绿色化、低碳化是实现经济高质量发展的关键环节.当前,在政府部门提供政策支持的基础上,单个企业的绿色投资意愿仍然不高,这导致宏观经济高质量发展需求与微观企业绿色投资不足的现实矛盾愈发凸显.本文试图从“同群效... 详细信息

推动经济社会发展绿色化、低碳化是实现经济高质量发展的关键环节.当前,在政府部门提供政策支持的基础上,单个企业的绿色投资意愿仍然不高,这导致宏观经济高质量发展需求与微观企业绿色投资不足的现实矛盾愈发凸显.本文试图从“同群效应”来探索这一矛盾的解决之道,或许可以为提升企业绿色投资意愿提供新的思路.基于此,本文以中国沪深A股上市公司为样本,对上市公司绿色投资行业同群效应的存在性、作用机制以及经济后果展开研究.研究发现:企业绿色投资存在显著的同群效应;机制检验表明企业绿色投资同群效应存在学习机制与压力机制,即同行业的跟随者会更愿意向领导者学习,外部压力更大时企业绿色投资同群效应更为明显;进一步分析表明,企业绿色投资同群效应实现了企业生产的降本增效和公司价值的提升.本文的研究结论不仅有助于厘清企业实施绿色投资的真实动因,也为行业绿色投资联动和政府相关部门政策制定提供有力依据.

关键词：绿色投资同群效应学习机制压力机制经济后果