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作者：黄走方南方医科大学

学位级别：硕士

背景与目的: 急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)是一种异质性髓细胞肿瘤,目前标准化疗可以获得70%—80%的完全缓解(complete remission,CR)率,但大部分CR后的患者终将复发,甚至一部分患者难以达到CR而成为难治性白血病,治疗... 详细信息

背景与目的: 急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)是一种异质性髓细胞肿瘤,目前标准化疗可以获得70%—80%的完全缓解(complete remission,CR)率,但大部分CR后的患者终将复发,甚至一部分患者难以达到CR而成为难治性白血病,治疗无效而死亡。目前对AML的预后判断主要根据患者年龄、外周血白细胞计数和染色体核型等指标。但即使在核型完全正常的患者的预后也不尽相同。因此,寻找在判断预后的敏感性指标具有重要意义。近年来,从基因水平上研究预后棚关的指标已成为热点,并且展现了有意义的前景。本课题组前期工作用高通量基因芯片技术,研究了首次完全缓解持续时间相差显著的AML M2a亚型患者之间的基因表达谱差异,筛选出差异表达的基因22个。其中GGTLA1、FAM3A等基因在完全缓解持续时间短的3例患者中表达均上调4倍以上,PDCD7、CGI135、CA6、KIAA1872、KLRF1、APP等基因在上述3例患者中表达均下调4倍以上。因基因芯片仅是定性而非定量分析,且病例数少,仅局限于一个亚型,需要进一步明确它们在AML中的临床意义。实时荧光定量RCR法具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确等优点。本研究采用了SYBR GreenⅠ染料法实时荧光定量PCR,反应时设定熔解曲线分析用于区分特异产物和非特异性产物、引物二聚体,保证实验数据的可信性,可以很好的检测患者的基因表达水平。依据本课题组曾应用基因芯片检测AML M2a亚型患者所获得的初步结果,本研究通过生物信息学分析筛选了可能有价值的PDCD7、GGTLA1、FAM3A、KIAA1872、CGI135、KLRF1、APP、CA6、Ang29个基因,应用实时荧光定量RCR技术检测其在初诊AML患者骨髓细胞表达及其临床意义,旨在寻找预后不良指标用于早期诊断难治性白血病及其治疗靶点。方法: 1.研究对象:77例新诊断的AML患者均符合当前公认的诊断标准。对照组为年龄、性别匹配的非恶性血液病患者20例。 2.引物设计与合成:根据GeneBank的序列设计PDCD7、KLRF1、APP、CGI135、FAM3A、KIAA1872、CA6、GGTLA1、Ang2各基因及管家基因β-actin引物。 3.按常规方法获取研究对象的骨髓单个核细胞,提取总RNA,逆转录成cDNA,进行实时荧光定量PCR。通过熔解曲线确定PCR产物的特异性。取两管平均Ct值计算2值,作为各标本mRNA的相对表达量,ΔCT=(目的基因CT值-内参基因CT值)。 4.应用SPSS13.0统计软件分析数据,计量资料呈非正态分布,用中位数描述;两组计量资料间分布比较用Mann-Whitney U test;两变量间相关分析采用Spearman rank correlation analysis;率的比较采用chi-square test;生存分析用Kaplan-Meier曲线;单因素分析及多因素分析用Cox Regression;检验水准α=0.05,双侧检验。结果 ***、cDNA纯度和质量分析:所提取总RNA、cDNA经紫外分光光度计检测,比值在1.8～2.0之间。 2.同一标本cDNA经2倍比稀释后,设6个梯度,测各梯度浓度,范围是8.1～258.8ng/μl,分别对管家基因和目的基因进行扩增,6个梯度的ΔCT相差很小,说明在浓度范围内管家基因与目的基因的扩增效率一致,其CT值可以反应扩增基因的丰度。扩增后进入熔解程序后生成熔解曲线,熔解曲线显示锐利的单一峰,说明扩增产物均一,无非特异扩增及引物二聚体。琼脂糖凝胶电泳显示各基因所扩增片段条带单一,无引物二聚体和非特异性扩增。 3.基因表达:PDCD7、GGTLA1、FAM3A、KIAA1872、CGI135、KLRF1、APP、CA6、Ang29个基因在初诊AML组的表达率分别是:100%、97%、98%、99%、100%、100%、100%、66%、100%,在非恶性血液病组的表达率分别是:100%、90%、100%、100%、100%、100%、100%、75%、100%。发现PDCD7、Ang2基因表达水平在AML组显著高于非恶性血液病组(Z=-2.380,P=0.017;Z=-2.849,P=0.004),KLRF1基因表达水平在AML组显著低于非恶性血液病组(Z=-2.401,P=0.016),其余基因在两组间比较无统计学意义(P＞0.05)。 4.基因表达水平与临床的关系:将PDCD7等9基因的表达水平与患者初诊时年龄、血红蛋白水平、白细胞计数、血小板计数、乳酸脱氢酶水平和外周血白血病细胞比例及骨髓白血病细胞比例、是否表达CD34、是否表达CD117等指标做相关性分析,结果显示FAM3A与血红蛋白水平呈

关键词：实时荧光定量PCR 急性髓系白血病基因预后

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急性淋巴细胞白血病患儿临床路径治疗5年的效果分析

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重庆医学 2017年第20期46卷 2844-2846页

作者：黄走方李海亮赣南医学院第一附属医院血液内科江西赣州341000

目的探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿在临床路径下治疗5年的缓解及生存情况。方法选取2010年10月至2015年10月该院共收治的108例ALL患儿作为研究对象,对患儿的临床特征和治疗情况进行回顾性分析。结果 108例患者中,完全缓解率为98.2%... 详细信息

目的探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿在临床路径下治疗5年的缓解及生存情况。方法选取2010年10月至2015年10月该院共收治的108例ALL患儿作为研究对象,对患儿的临床特征和治疗情况进行回顾性分析。结果 108例患者中,完全缓解率为98.2%。低危组3年和5年总生存(OS)率分别为82.7%、75.1%,无事件生存(EFS)率分别为78.2%、76.8%。中危组3年和5年OS率分别为72.7%、64.6%,3年和5年EFS率分别为68.8%、58.8%。结论临床路径治疗儿童ALL行之有效。

关键词：前体细胞淋巴母细胞白血病淋巴瘤缓解率生存率临床路径

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异型淋巴细胞增多两例并文献复习

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中国医学科学院学报 2023年第6期45卷 1005-1010页

作者：单亚鑫李晶杨翔李林黄走方赣南医学院第一临床医学院江西赣州341000 赣南医学院第一附属医院血液内科江西省地方病(地中海贫血)临床医学研究中心江西赣州341000

为探讨异型淋巴细胞的鉴别诊断,减少误诊率,分析2例细胞形态提示异型淋巴细胞的病历资料,其中1例诊断传染性单核细胞增多症,1例诊断侵袭性NK细胞白血病。本文旨在强调仅凭细胞形态学判读的异型淋巴细胞可能有误,需结合患者的临床症状、... 详细信息

为探讨异型淋巴细胞的鉴别诊断,减少误诊率,分析2例细胞形态提示异型淋巴细胞的病历资料,其中1例诊断传染性单核细胞增多症,1例诊断侵袭性NK细胞白血病。本文旨在强调仅凭细胞形态学判读的异型淋巴细胞可能有误,需结合患者的临床症状、体征、影像学检查、细胞免疫表型、疾病转归等综合诊断。

关键词：白血病淋巴细胞异型 NK细胞单核细胞

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急性髓系白血病患者骨髓细胞Ang2mRNA表达水平及其临床意义

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中华血液学杂志 2009年第11期30卷 775-777页

作者：黄走方孟凡义王巍刘理想南方医科大学南方医院血液科广州510515

血管生成素2（angiopoietin2，Ang2）为内皮细胞特异性生长因子之一，近年来研究发现其表达水平与急性髓系白血病（AML）预后密切相关。我们通过实时荧光定量PCR方法对57例初诊AML患者骨髓单个核细胞（MNC）中的Ang2mRNA表达水平进行检... 详细信息

血管生成素2（angiopoietin2，Ang2）为内皮细胞特异性生长因子之一，近年来研究发现其表达水平与急性髓系白血病（AML）预后密切相关。我们通过实时荧光定量PCR方法对57例初诊AML患者骨髓单个核细胞（MNC）中的Ang2mRNA表达水平进行检测，并分析其与临床的关系。

关键词：急性髓系白血病 mRNA表达临床意义 Ang2 白血病患者骨髓细胞荧光定量PCR方法特异性生长因子

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多发椎管内髓系肉瘤进展为急性髓系白血病伴t(8;21)异常1例并文献复习

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赣南医学院学报 2015年第1期35卷 126-127,130页

作者：黄走方赣南医学院第一附属医院血液内科江西赣州341000

目的:提高对椎管内髓系肉瘤(MS)的诊断、治疗及预后的认识。方法:报告1例多发椎管内MS进展为急性髓系白血病(AML)伴t(8;21)异常患者,并就其临床特点、诊治过程及预后进行讨论。结果:病理及免疫组织化学支持MS诊断,骨髓染色体核型示46,X,... 详细信息

目的:提高对椎管内髓系肉瘤(MS)的诊断、治疗及预后的认识。方法:报告1例多发椎管内MS进展为急性髓系白血病(AML)伴t(8;21)异常患者,并就其临床特点、诊治过程及预后进行讨论。结果:病理及免疫组织化学支持MS诊断,骨髓染色体核型示46,X,-Y,t(8;21)(q22,q22)。结论:病理及免疫组织化学是确诊MS的主要手段,孤立性MS确诊前应重视行AML特异性融合基因和染色体核型检查。尽早联合化疗及异基因造血干细胞移植可能是治疗该病的理想策略。

关键词：髓系肉瘤急性髓系白血病 t(8,21 )

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赣南地区老年急性白血病初治患者放弃化疗相关因素分析

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赣南医学院学报 2016年第2期36卷 258-259页

作者：黄走方廖长风赣南医学院第一附属医院血液科江西赣州341000

目的:探讨老年急性白血病初治患者放弃化疗的相关因素,为老年急性白血病初治患者的化疗提供理论依据。方法:选取71例老年急性白血病初治患者作为研究对象,对患者的化疗情况进行调查,并分析患者放弃化疗的相关因素。结果:71例患者中,48... 详细信息

目的:探讨老年急性白血病初治患者放弃化疗的相关因素,为老年急性白血病初治患者的化疗提供理论依据。方法:选取71例老年急性白血病初治患者作为研究对象,对患者的化疗情况进行调查,并分析患者放弃化疗的相关因素。结果:71例患者中,48例放弃化疗,23例坚持化疗,老年急性白血病初治患者的放弃化疗率为67.6%。年龄、医疗费用来源、是否愿意承担化疗痛苦、城乡来源、家庭经济好坏与老年急性白血病患者放弃化疗密切相关(P0.05)。结论:老年急性白血病初治患者放弃化疗的比率较高,且年龄大、自费医疗费用、不愿承担化疗痛苦、家庭经济差是患者放弃化疗的主要因素。

关键词：老年人急性白血病初治患者放弃化疗相关因素

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成人T细胞急性淋巴细胞白血病治疗及预后分析

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中国医学科学院学报 2019年第4期41卷 485-491页

作者：黄走方王婷玉傅明伟刘薇郝牧邱录贵邹德慧中国医学科学院北京协和医学院血液病研究所血液病医院淋巴瘤中心实验血液学国家重点实验室

目的探讨成人T细胞急性淋巴细胞白血病的治疗与预后。方法回顾性研究2003年1月1日至2017年6月30日中国医学科学院血液病医院淋巴瘤中心收治的68例初治成人T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)患者,分析其疗效及预后。结果 68例成人T-ALL患... 详细信息

目的探讨成人T细胞急性淋巴细胞白血病的治疗与预后。方法回顾性研究2003年1月1日至2017年6月30日中国医学科学院血液病医院淋巴瘤中心收治的68例初治成人T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)患者,分析其疗效及预后。结果 68例成人T-ALL患者中位年龄23(14~60)岁,男性多见。第1疗程后完全缓解(CR)率73%,皮质T-ALL的CR率最高,其他T-ALL其次,早期前体T淋巴细胞白血病最低,分别为100%、73%、54%(χ^2=5.712,P=0.058);年龄>35岁病例组首疗程CR率低于≤35岁病例组(40%比79%,χ^2=6.364,P=0.012),性别、白细胞计数各组的首疗程CR率比较差异无统计学意义。第2疗程后总CR率93%。化疗、自体造血干细胞移植(auto-SCT)、异基因造血干细胞移植(allo-SCT)中位无进展生存时间分别为10个月、24个月、未达到(P=0.002)。5年总生存率为25%,化疗、auto-SCT、allo-SCT中位OS分别为24、34、30个月(P=0.007),5年总生存率分别为9%、33%、38%(P=0.037)。将性别、年龄、白细胞计数、达CR时间>4周、T亚型等因素进行多因素分析,结果显示白细胞计数≥100×10^9/L是影响无复发生存时间的危险因素(风险比2.540,95%CI=1.058~6.099,P=0.037)。结论成人T-ALL患者预后差,造血干细胞移植可能改善患者预后。

关键词：白血病,淋巴样治疗预后

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