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C210对增殖期和静止期鼻咽癌细胞的抑制作用及其机制研究

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C210对增殖期和静止期鼻咽癌细胞的抑制作用及其机制研究

作者：黄莹莹福建医科大学

学位级别：硕士

鼻咽癌是常见的肿瘤之一,目前的治疗方式以放、化疗为主,但其转移和复发成了治疗的阻碍。在鼻咽癌细胞中,有快速增殖期以及代谢增殖比较缓慢的相对静止期两群癌细胞。传统的化疗药通过抑制细胞DNA合成等方式,对增殖期的细胞有较好的作用... 详细信息

鼻咽癌是常见的肿瘤之一,目前的治疗方式以放、化疗为主,但其转移和复发成了治疗的阻碍。在鼻咽癌细胞中,有快速增殖期以及代谢增殖比较缓慢的相对静止期两群癌细胞。传统的化疗药通过抑制细胞DNA合成等方式,对增殖期的细胞有较好的作用,然而对细胞周期阻滞在G0/G1期的相对静止期的细胞并不具备很好的杀伤作用。而这群静止期细胞在适宜的条件下又可以被再次激活,因此杀伤静止期的鼻咽癌细胞对于抑制癌细胞的复发和转移有着重要的意义。热休克蛋白90（Heat shock protein 90,Hsp90）在多种肿瘤中高表达,也成为了治疗肿瘤细胞的重要靶标。本研究利用课题组合成的可以双重分布于胞浆和线粒体的新型Hsp90抑制剂C210,进一步探究其对肿瘤细胞的抑制作用及相关的机制,从而为临床上鼻咽癌的治疗、攻克肿瘤的转移与复发提供一定的理论和实验基础。目的:探讨新型胞浆与线粒体Hsp90双重抑制剂C210对增殖期以及低糖低氧诱导的静止期鼻咽癌细胞的抑制作用,探究其是否通过抑制能量代谢通路减少ATP生成起到抗肿瘤作用。方法:1.采用不同的培养条件,常氧（21%O）、低氧（1%O）、常糖（2g/L）、低糖（1g/L）培养鼻咽癌细胞48h,检测哪一种条件可以诱导鼻咽癌细胞进入慢增殖、静止状态,并通过Edu参入实验、细胞免疫荧光法检测Ki67的表达情况来反映鼻咽癌细胞的增殖情况;2.MTT法检测C210、常用化疗药顺铂、传统Hsp90抑制剂17-AAG在常氧常糖培养（21%O,5%CO,2g/L,1640）与低氧低糖培养（1%O,5%CO,1g/L DMEM）状态下对鼻咽癌细胞的抑制率;3.集落形成实验检测C210对鼻咽癌细胞增殖的影响;4.流式细胞术检测C210对鼻咽癌细胞线粒体内ROS的影响;5.流式细胞术检测C210对增殖期和静止期鼻咽癌细胞凋亡的影响;6.蛋白免疫印迹检测C210对鼻咽癌细胞凋亡相关蛋白表达的影响;7.化学发光法检测C210对不同状态下的鼻咽癌细胞ATP、耗氧率（OCR）、细胞外酸化率（ECAR）水平的影响;8.蛋白免疫印迹实验检测C210对糖酵解和氧化磷酸化代谢通路相关蛋白的影响;9.肿瘤细胞成球试验检测不同培养条件下鼻咽癌细胞的干性以及C210对肿瘤细胞自我更新能力的影响;10.细胞划痕实验检测C210对肿瘤迁移能力的影响。结果:1.与正常培养条件相比,在低氧低糖培养条件下鼻咽癌细胞C666-1、CNE2的Edu参入率明显减少:低氧低糖条件下C666-1细胞的Edu参入率为37.55%±0.55%,CNE2细胞的Edu参入率为25.45%±0.65%;2.与正常培养条件相比,在低氧低糖培养条件下的鼻咽癌细胞C666-1及CNE2的增殖蛋白Ki67荧光值明显降低;3.C210抑制增殖期和静止期鼻咽癌细胞的增殖,并且呈药物浓度依赖性,IC50分别为1.585μM～2.719μΜ及4.901μM～6.046μM,顺铂以及17-AAG对增殖期的肿瘤细胞具有明显的抑制作用,但对静止期的肿瘤细胞作用大大减弱,顺铂的IC50高达1460μM,而17-AAG对静止期肿瘤细胞几乎没有抑制作用,无法测得IC50;4.C210抑制增殖期和静止期的CNE2细胞的集落形成,并且随着药物暴露浓度的提高,集落形成率降低;在3μM的药物浓度下,增殖期的CNE2集落形成是对照组的43.82%±1.73%,静止期的CNE2集落形成是对照组的35.20%±0.96%;5.与对照组相比,经过C210作用后的鼻咽癌细胞的ROS荧光强度明显增加,并且在低氧的条件下,线粒体ROS的荧光强度增加更加明显;6.C210对增殖期和静止期鼻咽癌细胞都有明显的促凋亡作用,经过C210作用后增殖期和静止期CNE2细胞的凋亡率分别为62.35%±2.67%、58.25%±0.35%;C666-1细胞的凋亡率分别为72.33%±2.32%、71.81%±1.60%;7.经过C210作用后的肿瘤细胞内ATP含量降低:增殖期CNE2细胞经过C210处理后ATP含量为对照组的66.50%±3.57%,静止期的则为的18.91%±1.03%;C666-1细胞则分别为35.51%±3.79%和14.17%±3.11%;8.C210抑制增殖期和静止期鼻咽癌细胞的细胞外酸化率（ECAR）水平,并下调m TOR、HK2、HIF1α、AKT、GLTU1、PKM2、PFKP、PDK1、c-myc糖酵解相关蛋白的表达;9.C210抑制增殖期和静止期鼻咽癌细胞的耗氧率（OCR）水平,下调线粒体呼吸链氧化磷酸化相关蛋白NDUSA9、NDUFS1、SDHA、SDHB、UQCRC2、Cyp D的表达水平;10.鼻咽癌细胞C666-1在低氧低糖培养条件下的成球能力最强,C210可以抑制肿瘤细胞的成球能力;11.C210抑制鼻咽癌细胞CNE2的迁移,药物处理组24h划痕愈合率明显低于对照组。结论:低糖低氧条件可以诱导鼻

关键词：鼻咽癌 Hsp90 静止期细胞糖酵解氧化磷酸化

平安产险黑龙江分公司车险业务营销策略优化研究

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平安产险黑龙江分公司车险业务营销策略优化研究

作者：黄莹莹黑龙江科技大学

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黄莹莹作品

大众文艺 2016年第13期 2-2页

作者：黄莹莹重庆市长江师范学院美术学院

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功能性防水透气医用敷料的研究及制备

功能性防水透气医用敷料的研究及制备

作者：黄莹莹青岛大学

学位级别：硕士

纺织材料与我们的生活息息相关,它们在医疗领域发挥着重要作用。随着医疗领域科技的不断进步与发展,医疗卫生机构对医用纺织材料的需求与日剧增,同时也对医用纺织材料的性能、技术和质量提出了更高的要求。本课题首先利用等离子体技术... 详细信息

纺织材料与我们的生活息息相关,它们在医疗领域发挥着重要作用。随着医疗领域科技的不断进步与发展,医疗卫生机构对医用纺织材料的需求与日剧增,同时也对医用纺织材料的性能、技术和质量提出了更高的要求。本课题首先利用等离子体技术制备聚乙烯(PE)防水透气膜,在此基础上使用静电纺丝技术制备聚乙烯醇(PVA)与聚乙烯(PE)复合的防水透气敷料,随后,应用磁控溅射技术将银(Ag)纳米粒子镀覆在石英(Quartz)织物表面,与PVA/PE膜复合后对其在功能性防水透气医用敷料领域的应用进行探讨。本论文主要进行了以下三方面工作:(1)PE防水透气膜的制备:利用等离子体技术,对PE膜表面进行空气等离子体处理。通过改变等离子体处理的次数,对PE膜表面形成不同程度的刻蚀效果。采用扫描电镜(SEM)、傅里叶变换红外光谱(FTIR)、热重(TG)、差示扫描量热法(DSC)等手段观察分析了材料的结构性能。同时,还测量了PE经过等离子体处理后的接触角、透气性和水蒸气透过率变化,并进行分析;(2)PVA/PE防水透气医用膜的制备:以经等离子体处理的防水透气PE膜为基底,采用静电纺丝法制备PVA/PE复合防水透气敷料。随后应用戊二醛对复合样品进行交联,以提高其水稳定性和力学性能。同时,对复合敷料的结构性能、水蒸气透过率、透气性、拉伸强度和抗菌性能进行分析,并使用成纤细胞评估复合样品的细胞毒性,以证明所制备的防水透气敷料在伤口上的可应用性。(3)Ag@quartz/PVA/PE功能性敷料的制备及应用:通过磁控溅射技术,将银纳米粒子镀覆在石英织物表面,制备的Ag@quartz与PVA/PE复合得到Ag@quartz/PVA/PE,研究其在生物检测领域的应用。研究结果表明:(1)经过等离子体处理后,PE薄膜的水接触角从112.67°降低至45°,PE膜表面从疏水状态转变为亲水状态。透气性提高至0.450 mm/s,水蒸气透过率可以提高到1419.788 g/m?h。(2)复合PVA/PE防水透气膜的WVT为238.292 g/m?h,透气性为5.798 mm/s,其红外透过率高达70%。且具有合适的抗菌性能,以及良好的细胞相容性。(3)所制备的Ag@quartz/PVA/PE显示出优异的增强性能,增强因子为3.4×10,检测限低于10 M/L,信号重现性好,相对标准差(RSD)为5.31%,信号稳定性好,RSD为3.54%。通过将Ag@quartz/PVA/PE与便携式拉曼光谱仪联用检测尿素浓度信号,其检测性能极佳,精度高。研究结论:(1)处理后的聚乙烯薄膜具备透气性,但不透过液态水。聚乙烯薄膜性能的提高,扩大了防水透气聚乙烯薄膜在医药领域的应用。(2)与非织造布等传统敷料相比,PVA/PE复合敷料具有良好的冷却性能,及较好的防水透气性能,可增强伤口愈合能力,在伤口敷料方面具有很大的应用潜力。(3)Ag@quartz/PVA/PE作为一种可用于生物检测的防水透气材料,在功能性医用敷料领域有很好的应用潜力。

关键词：等离子体静电纺丝防水透气生物检测医用敷料

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多级传动锥齿轮箱高速轴故障诊断及改进方法

热能动力工程 2022年第S1期 96-101页

作者：黄莹莹王苏鸣赵宇陈芃樾中国船舶集团有限公司第七〇三研究所

针对多级传动锥齿轮箱运行中高速输出轴滚动轴承出现的短寿命和轴承碎裂现象，本文通过故障诊断及分析，在原有轴承寿命计算基础上增加轴向力和轴系变形因素，采用穷举法列举并计算不同类型轴承布置及安装形式下的轴承寿命，对比寿命结... 详细信息

针对多级传动锥齿轮箱运行中高速输出轴滚动轴承出现的短寿命和轴承碎裂现象，本文通过故障诊断及分析，在原有轴承寿命计算基础上增加轴向力和轴系变形因素，采用穷举法列举并计算不同类型轴承布置及安装形式下的轴承寿命，对比寿命结果确定最优轴承布置形式。结果表明：改进后轴系结构延长了轴承的使用寿命，能够安全稳定运行两年，解决了多级传动锥齿轮箱的滚动轴承故障问题。

关键词：多级传动高速轴主轴轴承故障诊断穷举法

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教学临摹:教师走向教育精通之路

教育科学 2022年第2期38卷 29-36页

作者：马健生黄莹莹北京师范大学国际与比较教育研究院北京100875 香港中文大学教育学院中国香港999077

教学临摹是一种教师系统模仿心仪名师的课堂教学活动并将其神髓再现于自己课堂的教学形式,它以名师课堂教学实录(录像或视频)为临摹的“法课”,通过选、读、摹—临、思等步骤而实施教学实践与研修,具有“心仪”“法课”“系统”“再现... 详细信息

教学临摹是一种教师系统模仿心仪名师的课堂教学活动并将其神髓再现于自己课堂的教学形式,它以名师课堂教学实录(录像或视频)为临摹的“法课”,通过选、读、摹—临、思等步骤而实施教学实践与研修,具有“心仪”“法课”“系统”“再现”四个特点。现代信息技术为教学临摹提供了技术基础,动力定型理论、示范学习理论、反省思维理论与教师教育智慧理论提供了理论基础。教学临摹的实施需要学校支持、教研组协调和教师主动参与其中。教学临摹为教师教学专业研修提供了具体标准和反省工具,有助于教师形成教学风格、促进教师专业快速成长,是教师由“入课”到“出课”、由“亦步亦趋”的形似到“融会贯通”的神似,继而通向教育精通境界的旅程,也是学校创新教研方式、提高育人质量的有效途径。

关键词：教师专业发展校本教研教学临摹新手教师教育精通

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羟基化聚脱氢枞酸/GMA酯微球的制备与表征

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高校化学工程学报 2022年第6期36卷 900-907页

作者：许建本郑燕菲黄莹莹农克良广西民族师范学院化学与生物工程学院广西崇左532200 广西高校桂西南特色植物资源化学重点实验室培育基地广西崇左532200

为了制备新型功能化聚合物微球,以自制的脱氢枞酸/甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)酯化物为单体,明胶为分散剂,甲基丙烯酸乙二醇酯为交联剂,偶氮二异丁腈为引发剂,采用悬浮聚合法制备了羟基化聚脱氢枞酸/GMA酯微球。对反应中的温度、明胶质... 详细信息

为了制备新型功能化聚合物微球,以自制的脱氢枞酸/甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)酯化物为单体,明胶为分散剂,甲基丙烯酸乙二醇酯为交联剂,偶氮二异丁腈为引发剂,采用悬浮聚合法制备了羟基化聚脱氢枞酸/GMA酯微球。对反应中的温度、明胶质量分数及搅拌速度等条件进行了优化。利用红外光谱仪(FT-IR)、热重分析仪(TGA)、X射线衍射仪(XRD)、扫描电子显微镜(SEM)对微球的结构和性能进行了表征。结果表明,反应温度为85℃、明胶质量分数为6%、搅拌速度为500 r·min^(-1),此条件下制备的羟基化聚脱氢枞酸/GMA酯微球球形良好,粒径分布均匀,属于无定型的非晶态结构。

关键词：脱氢枞酸悬浮聚合羟基化微球

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舒尼替尼诱导耐药白血病细胞K562/ADR焦亡的作用及其通路研究

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中国实验血液学杂志 2023年第5期31卷 1272-1277页

作者：林艳凤黄莹莹洪小颖吴玮林东红薛龑福建医科大学医学技术与工程学院医学检验系福建福州350004

目的:探讨舒尼替尼(SU11248)对耐药白血病细胞K562/ADR死亡的诱导作用及其相关信号通路。方法:使用不同浓度舒尼替尼干预K562/ADR细胞,分别于24、48、72、96 h收集各组细胞,采用MTS法检测舒尼替尼对K562/ADR细胞增殖能力的影响,确定适... 详细信息

目的:探讨舒尼替尼(SU11248)对耐药白血病细胞K562/ADR死亡的诱导作用及其相关信号通路。方法:使用不同浓度舒尼替尼干预K562/ADR细胞,分别于24、48、72、96 h收集各组细胞,采用MTS法检测舒尼替尼对K562/ADR细胞增殖能力的影响,确定适当的舒尼替尼干预时间和浓度。通过qPCR和Western blot检测舒尼替尼干预后K562/ADR细胞的凋亡相关基因mRNA和蛋白表达水平变化。使用4种不同细胞死亡抑制剂Nec-1、VX-765、CQ、Fer-1检测舒尼替尼干预后K562/ADR细胞的死亡方式。通过qPCR和Western blot检测舒尼替尼干预后K562/ADR细胞的焦亡相关基因mRNA和蛋白表达水平变化。结果:舒尼替尼可明显抑制K562/ADR细胞的增殖,抑制效果呈一定的时间及浓度依赖性(r_(48 h)=0.9579、r_(4μg/ml)=0.9740),其48 h的IC_(50)为(3.96±0.14)μg/ml;舒尼替尼干预后K562/ADR细胞凋亡相关基因Bax、BCL-2、Caspase-3、Caspase-9的mRNA和蛋白表达水平均无明显变化;4种不同细胞死亡抑制剂处理后,仅焦亡抑制剂VX-765能够明显逆转舒尼替尼对K562/ADR细胞的增殖抑制作用(P<0.01);舒尼替尼干预后K562/ADR细胞焦亡相关基因Caspase-1、Caspase-4、Caspase-5、NLRP3、GSDMD、IL-1β的mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。结论:舒尼替尼可诱导耐药白血病细胞K562/ADR发生焦亡,深入研究细胞焦亡相关信号通路有望为耐药白血病治疗提供实验依据。

关键词：舒尼替尼耐药白血病细胞 K562/ADR 焦亡信号通路

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西部陆海新通道对西部地区与东盟之间贸易的影响研究

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社会科学前沿 2022年第12期11卷 5246-5253页

作者：黄莹莹重庆大学公共管理学院重庆

合理的通道建设是有效开展区域间贸易的重要条件,研究通道建设对区域间贸易的影响对通道建设开展的合理化与高效化有着重要意义。2019年10月正式开启的西部陆海新通道建设正如火如荼开展中,而西部陆海新通道对西部地区与东盟之间的贸易... 详细信息

合理的通道建设是有效开展区域间贸易的重要条件,研究通道建设对区域间贸易的影响对通道建设开展的合理化与高效化有着重要意义。2019年10月正式开启的西部陆海新通道建设正如火如荼开展中,而西部陆海新通道对西部地区与东盟之间的贸易产生了正向还是负向影响?本文基于2014年第一季度至2020年第四季度中国21个省市对东盟十国的季度贸易数据,利用双重差分模型(DID)分析西部陆海新通道的政策影响。研究发现:西部陆海新通道的开通对西部地区与东盟之间的贸易产生了显著的促进作用,且对于中心枢纽城市的促进作用更显著。本文从通道经济理论的视角出发,用DID方法实证检验了西部陆海新通道建设对西部地区与东盟之间贸易的影响,弥补了现有研究较少基于西部陆海新通道开展定量实证研究的空白,为西部陆海新通道的后续建设提供了实证证据及政策建议。

关键词：西部陆海新通道东盟贸易双重差分法