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乳腺癌易感基因BRCA1研究进展

遗传 2004年第3期26卷 367-372页

作者：严景华叶棋浓黄翠芬军事医学科学院生物工程研究所北京100850

BRCA1是目前所发现的最重要的乳腺癌易感基因之一,它在DNA损伤修复,细胞周期调节,基因的转录激活,染色质稳定性,细胞增殖等方面都起着重要作用。该文着重介绍近几年来BRCA1基础研究方面的进展,并讨论BRCA1在肿瘤发生、发展过程的作用。... 详细信息

BRCA1是目前所发现的最重要的乳腺癌易感基因之一,它在DNA损伤修复,细胞周期调节,基因的转录激活,染色质稳定性,细胞增殖等方面都起着重要作用。该文着重介绍近几年来BRCA1基础研究方面的进展,并讨论BRCA1在肿瘤发生、发展过程的作用。为BRCA1在临床上的应用提供理论依据。

关键词： BRCA1 DNA损伤修复细胞周期调节基因的转录激活染色质稳定性

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FHL2转录激活结构域的定位

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第7期35卷 643-648页

作者：严景华叶棋浓方言朱建华黄翠芬军事医学科学院生物工程研究所军事医学科学院生物工程研究所北京100850

LIM蛋白家族成员FHL2 (fourandhalfLIMdomainprotein)在转录调节、细胞凋亡及肿瘤的发生发展中都起着重要作用。利用GAL4转录因子中的DNA结合结构域 (DBD)和含有与DBD结合序列的荧光素酶报告基因(GAL4 LUC)构建了哺乳动物细胞转录激活... 详细信息

LIM蛋白家族成员FHL2 (fourandhalfLIMdomainprotein)在转录调节、细胞凋亡及肿瘤的发生发展中都起着重要作用。利用GAL4转录因子中的DNA结合结构域 (DBD)和含有与DBD结合序列的荧光素酶报告基因(GAL4 LUC)构建了哺乳动物细胞转录激活系统 ,并利用该系统定位了FHL2的转录激活结构域。首先将GAL4 DBD序列以正确读框插入到pcDNA3载体的多克隆位点中 ,构建成真核表达载体pDBD ,再将野生型FHL2及其不同片段以正确读框与pDBD中GAL4 DBD序列融合 ,构建成野生型FHL2及其缺失突变体表达载体。将这些表达载体分别瞬时转染 2 93T胚胎肾细胞 ,野生型FHL2及其缺失突变体都得到了表达。利用GAL4 荧光素酶报告基因对野生型FHL2及其不同突变体的转录激活活性检测表明 ,在 2 93T胚胎肾细胞和乳腺癌MCF 7细胞中 ,野生型FHL2具有转录激活活性 ,缺失N端半个LIM结构域使FHL2转录激活活性降低 ,缺失C末端第二个LIM结构域对FHL2的转录激活功能影响不大 ,缺失C末端最后一个LIM结构域则使FHL2的转录激活功能完全丧失 ,而C末端缺失 2个LIM结构域使FHL2转录激活活性又有所恢复。这说明FHL2C末端最后一个LIM结构域对其转录激活功能是必需的 ,而C末端第二个LIM结构域可能对FHL2的转录激活功能有负调控作用 ,这种负调控作用取决于

关键词： FHL2 转录激活结构域定位

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重组工程及其应用

Acta Genetica Sinica 2003年第10期30卷 983-988页

作者：周建光洪鑫黄翠芬军事医学科学院生物工程研究所北京100850

随着功能基因组研究的需要 ,新近建立起一项新型高效的基于体内同源重组的遗传工程技术———重组工程技术。重组工程可定义为 :基于噬菌体短同源序列重组功能的遗传工程 ,或者基于同源重组的遗传工程。λ噬菌体Red系统完全不同于传统... 详细信息

随着功能基因组研究的需要 ,新近建立起一项新型高效的基于体内同源重组的遗传工程技术———重组工程技术。重组工程可定义为 :基于噬菌体短同源序列重组功能的遗传工程 ,或者基于同源重组的遗传工程。λ噬菌体Red系统完全不同于传统的依赖RecA的大肠杆菌重组系统 ,特点是使用长度仅为 <5 0个碱基的同源臂高效率地催化体内同源重组反应。体内重组过程不再需要预先构建含有同源序列的质粒或噬菌体的中间产物 ,只需要简单在体外合成寡核苷酸同源序列 ,或者用PCR方法合成线性打靶序列。重组反应不依赖大肠杆菌RecA系统 ,不需要限制性内切核酸酶和连接酶 ,不需要复杂的体外重组操作 ,可在大肠杆菌体内对染色体DNA、对BAC和PAC质粒或普通质粒载体进行精确的修饰 ,包括真核或原核细胞基因组DNA的基因敲除、基因敲入、基因克隆和各种突变体的引入。由于该技术具有高效率、简单性和应用的广泛性等独特优点 ,将来完全有可能取代传统的遗传工程技术。

关键词：重组工程功能基因组同源重组 red基因

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生物技术在医药领域应用的进展

解放军医学情报 1991年第5期5卷 225-226页

作者：黄翠芬

利用染色质结构检测技术研究乳腺癌易感蛋白BRCA1转录激活区突变

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Acta Genetica Sinica 2002年第11期29卷 941-948页

作者：叶棋浓胡艳芬钟红君李熔黄翠芬军事医学科学院生物工程研究所北京100850 美国弗吉尼亚大学生物化学和分子遗传系弗吉尼亚22908

乳腺癌易感基因BRCA1突变引起的遗传性乳腺癌占 4 0 %～ 5 0 % ,其突变引起的遗传性乳腺癌和卵巢癌的比例至少为 80 %。许多乳腺癌易感突变发生在BRCA1C末端转录激活结构域 (15 6 0～ 186 3aa) ,但该区域大部分突变导致何种表型 (良性... 详细信息

乳腺癌易感基因BRCA1突变引起的遗传性乳腺癌占 4 0 %～ 5 0 % ,其突变引起的遗传性乳腺癌和卵巢癌的比例至少为 80 %。许多乳腺癌易感突变发生在BRCA1C末端转录激活结构域 (15 6 0～ 186 3aa) ,但该区域大部分突变导致何种表型 (良性多态性或乳腺癌易感突变 )目前还不清楚。由于染色质结构调节是基因转录调节的早期事件 ,该文基于lac阻遏物识别和结合lac操纵基因的原理 ,利用染色质结构检测技术比较BRCA1转录激活结构域不同突变体与野生型的染色质伸展活性。将 1种野生型、2种良性多态型 (S16 13G和M16 5 2I)和 4种乳腺癌易感突变型(A170 8E、M1775R、W1837R和Y185 3term)转录激活区片段以正确相位融合于lac阻遏物的下游 ,得到野生型重组质粒pwt和pS16 13G、pM16 5 2I、pA170 8E、pM1775R、pW1837R及pY185 3term 6种突变型重组质粒。Westernblot检测表明 ,这些重组质粒分别转染AO3-1细胞后均表达了相应的融合蛋白。对这些重组质粒的染色质伸展活性检测表明 ,野生型pwt和两种良性多态性突变体不具有染色质伸展活性或只有极微弱的染色质伸展活性 ,而其他 4种乳腺癌易感突变体均具有过强的染色质伸展活性 ,提示利用染色质伸展技术可预测BRCA1转录激活区基因型与乳腺癌发生风险的表现型的关系。

关键词：染色质结构检测乳腺癌基因突变易感蛋白BRCA1 转录激活区

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PSA启动子结构和表达调控研究进展

遗传 2004年第5期26卷 739-744页

作者：王健周建光黄翠芬军事医学科学院生物工程研究所北京100850

作为前列腺肿瘤标志物的前列腺特异性抗原(prostate specificantigen,PSA)是一种类丝氨酸蛋白酶的激肽释放酶,主要在前列腺上皮细胞和大部分的前列腺癌细胞中表达。雄激素通过雄激素受体而严格调控该基因的表达,当前列腺癌发展为雄激素... 详细信息

作为前列腺肿瘤标志物的前列腺特异性抗原(prostate specificantigen,PSA)是一种类丝氨酸蛋白酶的激肽释放酶,主要在前列腺上皮细胞和大部分的前列腺癌细胞中表达。雄激素通过雄激素受体而严格调控该基因的表达,当前列腺癌发展为雄激素非依赖型的同时也伴随有血清中的PSA水平的提高,这预示着有其他因素在不依赖雄激素的条件下调控PSA的表达。就目前对PSA基因表达调控的机制,以及在调控中发挥重要作用的启动子和增强子区结构的研究进展做一综述。

关键词：前列腺特异性抗原雄激素受体启动子和增强子

胰腺组织表达Cre重组酶转基因小鼠的建立及鉴定(英文)

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生物工程学报 2002年第3期18卷 286-290页

作者：周江程萱吕娅歆黄翠芬杨晓北京生物工程研究所发育和疾病遗传学研究室北京100071

组织特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠是进行组织特异性基因剔除研究的重要工具。为了建立胰腺组织特异性Cre转基因小鼠 ,我们通过PCR克隆了大鼠胰岛素基因启动子 ,并用它指导Cre基因在胰岛细胞中的特异性表达。在Cre重组酶基因 5′端... 详细信息

组织特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠是进行组织特异性基因剔除研究的重要工具。为了建立胰腺组织特异性Cre转基因小鼠 ,我们通过PCR克隆了大鼠胰岛素基因启动子 ,并用它指导Cre基因在胰岛细胞中的特异性表达。在Cre重组酶基因 5′端添加了真核核糖体结合序列和核定位序列以使Cre重组酶能穿越核膜在细胞核中发挥功能 ;同时 ,在Cre基因 3′端添加了含内含子的 3′端人生长激素基因。表达载体经显微注射导入小鼠受精卵以建立转基因小鼠。PCR检测显示共获得 7只Cre整合阳性的转基因首建者小鼠 ;RT PCR结果表明其中 1只首建者小鼠的子代鼠在胰腺中转录了外源基因 ,进一步的Southern杂交结果表明。

关键词：胰腺组织表达 Cre重组酶转基因小鼠鉴定

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细菌学修订本

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重组人GM-CSF/MCAF融合蛋白的变性、复性及纯化研究

丛书名：医士学习丛书

1951年

作者：黄翠芬等

来源：汇雅图书（南通市图书馆... 评论

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生物工程学报 1996年第4期12卷 434-439页

作者：叶棋浓苏国富黄翠芬军事医学科学院生物工程研究所北京100071

人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和单核细胞趋化激活因子(MCAF)融合蛋白在大肠杆菌中高效表达后,表达产物以包涵体形式存在。包涵体经分离和洗涤后,探索了rhGM-CSF/MCAF变性和复性的合适条件。复性后的样品经Sephadex G-75凝胶过... 详细信息

人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和单核细胞趋化激活因子(MCAF)融合蛋白在大肠杆菌中高效表达后,表达产物以包涵体形式存在。包涵体经分离和洗涤后,探索了rhGM-CSF/MCAF变性和复性的合适条件。复性后的样品经Sephadex G-75凝胶过滤和CM-Sepharose FF离子交换两步层析,得到了具有生物学活性的SDS-PAGE纯的rhGM-CSF/MCAF。Western blot检测表明,纯化的rhGM-CSF/MCAF能分别与GM-CSF和MCAF抗体发生特异反应。

关键词：融合蛋白重组 GM-CSF/MCAF 变性复性纯化