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白菜、甘蓝及甘蓝型油菜减数分裂中交叉频率的细胞学分析

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白菜、甘蓝及甘蓝型油菜减数分裂中交叉频率的细胞学分析

作者：黄纪红华中农业大学

学位级别：硕士

研究表明,减数分裂中染色体配对行为的适应性改变是新形成多倍体稳定化的重要机制。拟南芥同源四倍体中,同源染色体间的交叉次数明显较二倍体少,有效降低了多价体形成的机会,保证同源染色体能正常分离。甘蓝型油菜(Brassica napus,AACC,... 详细信息

研究表明,减数分裂中染色体配对行为的适应性改变是新形成多倍体稳定化的重要机制。拟南芥同源四倍体中,同源染色体间的交叉次数明显较二倍体少,有效降低了多价体形成的机会,保证同源染色体能正常分离。甘蓝型油菜(Brassica napus,AACC,2n=38)为十字花科芸薹属越年生或一年生植物,是我国重要的油料作物之一。甘蓝型油菜为白菜(***,AA,2n=20)和甘蓝(***,CC,2n=18)在7500-1000年之前经天然杂交与加倍而形成的异源四倍体。人工合成的甘蓝型油菜极不稳定,但天然甘蓝型油菜较为稳定,减数分裂中具有与二倍体类似的染色体配对与分离过程。因此,本研究以天然白菜、从甘蓝型油菜中分离的白菜、甘蓝和甘蓝型油菜为材料,应用荧光原位杂交技术(FISH)分析减数分裂早期同源染色体配对现象和终变期同源染色体交叉频率的变化,了解甘蓝型油菜进化过程中减数分裂二倍体化的可能机制。主要研究结果如下:1、以着丝粒重复序列为探针对甘蓝、白菜和甘蓝型油菜花粉母细胞减数分裂早期进行FISH分析,发现这三种材料均在间期时信号数目较多,强度较弱,但在早细线期信号数目逐渐减少,强度逐渐增强。这说明不论是二倍体或四倍体,同源染色体着丝粒区在早细线期既已开始配对,且可能是所有着丝粒区先聚集配对,再散开为俩俩配对。2、以着丝粒重复序列和45SrDNA为探针对上述材料终变期花粉母细胞进行FISH分析。结果显示在两种天然白菜中,单个花粉母细胞及单条染色体平均具有14.1(11-17)和1.41个交叉。从甘蓝型油菜中分离的白菜单个花粉母细胞及单条染色体平均具有14.98(13-17)和1.49个交叉,略高于天然白菜。两种甘蓝中,单个花粉母细胞及单条染色体平均具有13.2(10-16)和1.46个交叉。3、在甘蓝型油菜中,单个花粉母细胞中A、C基因组染色体总交叉数分别为14.1(12-18),和14.1(11-17)个,单条染色体平均具有的交叉数分别为1.41和1.56个。与天然白菜与甘蓝相比,甘蓝型油菜形成后,两个基因组染色体交换数目与天然白菜与甘蓝间无显著差别。4、根据已经发表的高密度连锁遗传图谱,我们发现无论是天然白菜与甘蓝间,还是甘蓝油菜A与C基因组之间,A基因组染色体交换频率显著高于C基因组染色体,这与我们细胞学观察的结果并不一致,具体原因需要进一步探究。

关键词：白菜甘蓝甘蓝型油菜减数分裂交叉频率

精子DNA单双链损伤与支原体、衣原体感染男性不育关系的研究

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精子DNA单双链损伤与支原体、衣原体感染男性不育关系的研究

作者：黄纪红浙江中医药大学

学位级别：硕士

目的1.建立双尾彗星试验的优化条件和效果分析;2.研究泌尿生殖道支原体、衣原体感染的男性不育患者的精子DNA单双链损伤情况;3.探索精子DNA单双链损伤与支原体、衣原体感染男性不育之间的相关性。方法1.对双相单细胞凝胶电泳在中性和碱... 详细信息

目的1.建立双尾彗星试验的优化条件和效果分析;2.研究泌尿生殖道支原体、衣原体感染的男性不育患者的精子DNA单双链损伤情况;3.探索精子DNA单双链损伤与支原体、衣原体感染男性不育之间的相关性。方法1.对双相单细胞凝胶电泳在中性和碱性电泳环境下的各个实验条件进行摸索,确定更加稳定、准确的试验方法。2.临床收集有泌尿生殖道支原体、衣原体感染的男性不育患者的精液及正常男性各30例,用伟力彩色精子质量检测系统分析精液的各项常规参数,并应用双尾彗星试验检测精子DNA碎片化指数,分析支原体、衣原体感染的男性不育患者精子DNA单、双链损伤情况及与正常男性的差异。3.根据药敏结果,选择敏感抗生素治疗,2个月后,用伟力彩色精子质量检测系统分析精液的各项常规参数,双尾彗星试验检测精子DNA完整性,与治疗前的结果分析比较,探讨感染对精子DNA单、双链损伤的影响。4.对泌尿生殖道支原体、衣原体感染的男性不育患者与正常男性精子DNA损伤程度进行数据分析,探讨精子DNA单双链损伤与男性不育的相关性。结果1.通过优化双尾彗星试验的实验条件,我们选择1%低熔点琼脂糖凝胶作为试验用凝胶浓度。试验中,我们选择将精子密度调整为5 × 106/ml以备后续试验使用。选用DTT浓度为0.8mol/L作为细胞裂解液,同时中、碱性电泳时间各20min作为电泳最佳条件。2.泌尿生殖道支原体、衣原体感染男性不育者（病人组）与正常生育男性（对照组）的精液量多在正常范围内,无显著性差异。泌尿生殖道支原体、衣原体感染男性不育者精子密度、活动率都要低于对照组,精子畸形率高于对照组,差异显著,有统计学意义。泌尿生殖道支原体、衣原体感染男性不育者精子DNADSB-DFI显著高于正常对照组,而SSB-DFI在两组间无明显差异。3.与正常对照组相比,支原体、衣原体感染不育组的重度SSB占比显著增加（P＜0.05）,重度DSB占比极显著增高（P＜0.01）。而轻度SSB、DSB占比无统计学差异（P＞0.05）。4.泌尿生殖道支原体、衣原体感染男性不育者经抗感染治疗后精液常规参数和精子DNA完整性与治疗前比较。支原体、衣原体感染不育组在治疗后的正常形态精子百分率明显好转（P＜0.01）,而精子浓度、精子存活率、前向运动精子百分率改善不明显。治疗后,不育组的DSB-DFI、DFI和DSB-DFI/DFI有一定的好转率（P均＜0.01）,而SSB-DFI、SSB-DFI/DFI 未见明显改变。5.与治疗前相比,支原体、衣原体感染不育组在治疗后的重度SSB占比显著减少（P＜0.05）,重度DSB占比极显著减少（P＜0.01）。而轻度SSB、DSB占比无统计学差异（P＞0.05）。结论1.优化后的双尾彗星试验,重复性好,稳定性高,利于标准化,能更好地检测精子DNA单双链损伤,对男性生殖能力的评估有更大的参考价值。2.泌尿生殖道支原体、衣原体感染男性不育病人的精子DNA双链损伤明显高于健康生育男性,相应抗生素治疗可以降低感染造成的精子DNA损伤,精子DNA完整性分析在支原体、衣原体感染不育男性诊疗中意义较大。

关键词：精子DNA单双链损伤支原体衣原体男性不育双尾彗星试验

不育患者精子DNA链损伤类型的研究及临床意义

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中华男科学杂志 2015年第7期21卷 604-609页

作者：魏任雄陈建伟黄纪红张晓霞崔云浙江中医药大学附属宁波中医院男科实验室浙江宁波315012 宁波市药品检验所浙江宁波315000 浙江中医药大学研究生院浙江杭州310053 浙江中医药大学附属宁波中医院男性科浙江宁波315012

目的:观察精子DNA单、双链损伤(SSB、DSB)在男性不育中的特征,探讨DSB与男性不育的关系,为男性不育的诊疗提供新的观察指标与思路。方法:选择男性不育患者60例以及同期因女方因素不孕前来检查的生育力评估正常的健康男性30例作为对照组... 详细信息

目的:观察精子DNA单、双链损伤(SSB、DSB)在男性不育中的特征,探讨DSB与男性不育的关系,为男性不育的诊疗提供新的观察指标与思路。方法:选择男性不育患者60例以及同期因女方因素不孕前来检查的生育力评估正常的健康男性30例作为对照组,分析两组精子DNA损伤及精液主要参数的差异。精子浓度及活力采用计算机辅助精子分析系统,精子存活率分析采用低渗膨胀试验,精子形态采用Diff-Quik染色法,精子DNA损伤采用双尾彗星实验。结果:双尾彗星实验检测精子DNA完整性共有9种彗星模型。不育患者精子DNA损伤指数(DFI)为(33.8±13.1)%,单链损伤指数(SSB-DFI)为(19.2±11.4)%、SSB占所有损伤精子的比率(SSB-DFI/DFI)为(56.8±32.4)%,双链损伤指数(DSB-DFI)为(23.9±13.4)%、DSB占所有损伤精子的比率(DSB-DFI/DFI)为(70.8±19.5)%;与对照组比较[分别为(16.3±7.9)%、(14.9±7.6)%、(91.4±27.8)%、(6.1±2.7)%、(37.4±11.3)%)],SSB-DFI无显著性差异(P>0.05),DSB-DFI、DFI和DSB-DFI/DFI显著高于对照组(P均0.05),DFI与前向运动精子百分率、精子存活率及正常形态精子百分率呈负相关(P0.05),精子DSB-DFI及DSB-DFI/DFI与精子浓度、精子存活率、前向运动精子百分率及正常形态精子百分率均呈负相关(P<0.05或P<0.01)。结论:影响男性不育的DAN损伤因素可能是DSB,而与SSB相关性不大,精子DNA链的损伤类型对男性生殖能力的评估有较大的参考价值。

关键词：男性不育精子DNA链损伤类型精子DNA单链损伤精子DNA双链损伤双尾彗星试验

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浙江省乙肝酶免阳性核酸阴性献血者结果分析

中华实验和临床病毒学杂志 2023年第4期37卷 429-434页

作者：王敏丰芳君胡一钦黄纪红吴丹霄浙江省血液中心杭州310052

目的分析浙江省血液中心无偿献血者乙肝酶免阳性核酸阴性感染情况[以下简称HBsAg-ELISA(+)/HBV-DNA(-)],探讨造成酶免与核酸结果不一致的原因。方法对常规血液筛查结果为HBsAg-ELISA(+)/HBV-DNA(-)献血者进行单人份核酸再次检测,分析该... 详细信息

目的分析浙江省血液中心无偿献血者乙肝酶免阳性核酸阴性感染情况[以下简称HBsAg-ELISA(+)/HBV-DNA(-)],探讨造成酶免与核酸结果不一致的原因。方法对常规血液筛查结果为HBsAg-ELISA(+)/HBV-DNA(-)献血者进行单人份核酸再次检测,分析该类献血者的检测结果。结果2022年5月至11月共114017例献血者中筛选出205例HBsAg-ELISA(+)/HBV-DNA(-)标本,男性献血者(0.14%)显著低于女性献血者(0.24%)(χ^(2)=14.761,P0.005);2种核酸检测系统的再次核酸检测阳性率无显著性差异(χ^(2)=0.626,P>0.005)。血清学补充实验显示11例HBV-DNA(+)标本经化学发光检测后共出现2种血清学组合模式,分别是HBsAg(+)/HBeAb(+)和HBeAb(+),大部分为HBsAg(+)/HBeAb(+),共10例,占90.91%,只有一例为HBeAb(+),占9.09%;HBsAg定量结果显示大多数处于低HBsAg水平。结论通过单人份核酸检测方法再次检测后,献血者HBsAg-ELISA(+)/HBV-DNA(-)标本中有一定比例为HBV-DNA(+)。但大部分标本仍为HBV-DNA(-),还需进行HBV血清学标志物和HBV-DNA的补充实验来确定其真实感染状态,明确造成酶免与核酸结果检测结果不一致的原因。另外,在献血者筛查中,尽可能选择灵敏度和特异度较高的核酸和HBsAg检测试剂,确保结果准确性。

关键词：无偿献血者 HBsAg HBV DNA 献血者筛查

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乙肝酶免无反应而核酸未鉴别反应性结果分析

中华实验和临床病毒学杂志 2023年第4期37卷 422-428页

作者：胡一钦黄纪红王敏吴丹霄王晓娟浙江省血液中心杭州310052

目的分析乙型肝炎病毒表面抗原无反应性的献血者中,初始检测反应性而后续的鉴别试验或重复试验无反应性的未鉴别反应性献血者(non-discriminated reactive,NDR)的感染状态,探讨不同核酸检测系统对HBsAg^(-)/NDR是否存在检测差异性。方法... 详细信息

目的分析乙型肝炎病毒表面抗原无反应性的献血者中,初始检测反应性而后续的鉴别试验或重复试验无反应性的未鉴别反应性献血者(non-discriminated reactive,NDR)的感染状态,探讨不同核酸检测系统对HBsAg^(-)/NDR是否存在检测差异性。方法对2020年1月至2022年8月献血者样本的检测结果以及反应性率进行比较,并对部分样本进行两种核酸检测系统的重复检测,分析HBsAg^(-)/HBV DNA+献血人群特征。结果通过对2020年1月至2022年8月的核酸结果分析,重复核酸检测可提高HBsAg^(-)/NDR献血者的检出,且检出率在不同的循环阈值(cycle threshold valve,Ct值)区间或不同的样本吸光度与临界值吸光度的比值(sample OD/Cutoff,S/CO值)区间存在偏移。同时将Ct值或S/CO值分组发现,在两种核酸检测系统中不同区间的检出率存在差异性(PCR:X^(2)=108.23,P0.05),男性(67.50%)远多于女性。结论不同核酸检测系统对HBsAg^(-)/NDR献血者存在检测差异性,对于Ct值小于38.5、或S/CO值为10至15之间、或献血年龄在41至50岁的献血者,可结合另一检测技术提高检出率,降低HBsAg^(-)/NDR献血者的潜在病毒传播风险,保障临床用血安全。

关键词：核酸检测乙型肝炎病毒血液安全

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长链非编码RNA与男性不育的研究进展

现代实用医学 2016年第3期28卷 419-420页

作者：黄纪红陈建伟魏任雄浙江中医药大学杭州310053 浙江中医药大学附属宁波市中医院

目前世界范围内不育夫妇约占已婚夫妇的15%,而男方因素造成不育的占40%~50%[1]。不育症病因复杂,目前检测手段和相关研究还较单一,从分子领域开展对于男性不育症的研究已成为重要手段,包括精子DNA损伤、精浆游离mi RNA、外周血染色体多... 详细信息

目前世界范围内不育夫妇约占已婚夫妇的15%,而男方因素造成不育的占40%~50%[1]。不育症病因复杂,目前检测手段和相关研究还较单一,从分子领域开展对于男性不育症的研究已成为重要手段,包括精子DNA损伤、精浆游离mi RNA、外周血染色体多态性、精子线粒体基因变异和缺失等研究,为不育症病因分析领域开辟了新的局面。研究发现,长链非编码RNA分子（lnc RNA）在恶性肿瘤、

关键词：男性不育 RNA 已婚夫妇外周血染色体精子发生神经系统疾病线粒体基因不育夫妇精浆男方因素

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干旱胁迫对白菜型冬油菜苗期生理特性的影响

西北农业学报 2015年第2期24卷 84-90页

作者：张朋飞武军艳孙万仓史永弟曹杰黄纪红刘翠平方彦内蒙古鄂托克旗农业技术推广站内蒙古鄂托克旗016100 甘肃省干旱生境作物学重点实验室、甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室、甘肃农业大学农学院兰州730070

对8个白菜型冬油菜品种苗期抗旱胁迫下生理指标的变化特性进行研究,了解不同生理指标与白菜型冬油菜品种耐旱性的相关性,筛选耐旱品种或种质。结果表明,干旱胁迫后,油菜游离脯氨酸(Pro)、超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化... 详细信息

对8个白菜型冬油菜品种苗期抗旱胁迫下生理指标的变化特性进行研究,了解不同生理指标与白菜型冬油菜品种耐旱性的相关性,筛选耐旱品种或种质。结果表明,干旱胁迫后,油菜游离脯氨酸(Pro)、超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性都逐渐增加,丙二醛(MDA)质量分数先降低后增加。MDA与苗期干旱胁迫后幼苗成活率呈极显著相关,POD与幼苗成活率呈显著相关,可作为鉴定白菜型冬油菜抗旱性鉴定的首选指标。综合来看,8个品种中天油7号对干旱反应敏感,表现为不抗旱;陇油7号对干旱反应迟钝,为强抗旱品种;天油2号、陇油9号、天油5号为弱耐旱抗品种,陇油6号、陇油8号、天油8号为中抗旱品种。

关键词：抗旱性白菜型冬油菜生理特性相关性

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习近平文化思想引领新时代思想道德建设

江苏社会科学 2024年第5期 42-49页

作者：邢纪红东南大学

习近平文化思想的提出,促使新时代思想道德建设进入新境界,具体实践有了新引领。习近平文化思想引领新时代思想道德建设涉及建设中华民族现代文明的新使命、网络道德与清朗网络空间的建设、新时代主流意识形态安全的维护、以人民为中心... 详细信息

习近平文化思想的提出,促使新时代思想道德建设进入新境界,具体实践有了新引领。习近平文化思想引领新时代思想道德建设涉及建设中华民族现代文明的新使命、网络道德与清朗网络空间的建设、新时代主流意识形态安全的维护、以人民为中心进行文化建设的立场等方面。习近平文化思想是对马克思主义思想道德建设理论及中国特色社会主义理论关于文化的论述的继承与发展,是对中华优秀传统文化中的思想道德观及以伟大建党精神为源头的中国共产党人精神谱系的继承与发展,是对“新的伟大斗争”实践要求及“物质文明与精神文明协调发展”实践要求的现实顺应,这三者分别构成了引领的理论逻辑、历史逻辑及实践逻辑。在具体实践中,以习近平文化思想为引领,新时代思想道德建设应当系统建构思想道德制度体系,全面塑造社会良好道德风尚,下沉推进思想道德建设工程,从而在新的历史起点上不断提升全民道德素质和社会文明程度。新时代思想道德建设离不开思想文化领域的最新理论建树与政策指引,坚持以习近平文化思想引领新时代思想道德建设,为增强“四个自信”、推进“五位一体”总体布局、实现中国梦提供强大的精神动力。

关键词：习近平文化思想思想道德建设 “四个自信” “五位一体”总体布局中国梦

精子DNA链损伤类型与男性不育症的相关性研究

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精子DNA链损伤类型与男性不育症的相关性研究