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核定位人源α-突触核蛋白转基因小鼠的建立

中国实验动物学报 2024年第3期32卷 307-316页

作者：韦梦晨范胜涛吴海婷张艺薇王子鸥黄璋琼北京协和医学院中国医学科学院医学生物学研究所昆明650118

目的建立一种核定位人源α-突触核蛋白(α-synuclein, α-syn)转基因小鼠,并探究人源α-syn核输入对小鼠行为的影响。方法构建hSNCA-NLS和EGFP的慢病毒载体,利用显微注射法建立转基因小鼠模型,通过PCR和Western Blot方法鉴定转基因首... 详细信息

目的建立一种核定位人源α-突触核蛋白(α-synuclein, α-syn)转基因小鼠,并探究人源α-syn核输入对小鼠行为的影响。方法构建hSNCA-NLS和EGFP的慢病毒载体,利用显微注射法建立转基因小鼠模型,通过PCR和Western Blot方法鉴定转基因首建鼠及其子代基因型和蛋白表达情况。采用免疫荧光鉴定人源α-syn在小鼠脑组织中的共定位情况,同时采用旷场、转棒、O迷宫实验评价转基因小鼠的行为改变情况。结果 hSNCA-NLS基因成功插入小鼠基因组中,人源α-syn成功表达,并且有明显的核定位现象。进一步研究发现,核定位人源α-syn转基因小鼠在2月龄时开始表现出了运动功能障碍,发生了星形胶质细胞增生和炎症反应,于9月龄时表现出了明显的焦虑样症状,γ-氨基丁酸(GABA)基因表达减少,这些表现一直持续到小鼠12月龄。结论成功构建了核定位人源α-syn转基因小鼠,小鼠表现出明显的运动功能障碍和焦虑样症状。该模型的成功建立可以为研究α-syn核定位现象在帕金森病中的作用提供一定的研究基础。

关键词：人源α-突触核蛋白小鼠核定位转基因运动功能障碍

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尼古丁对帕金森病的预防作用机制研究进展

山东医药 2024年第18期64卷 107-110页

作者：黄璋琼潘玥马开利李牧遥张艺薇吴海婷韦梦晨朱洲海管莹中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 澳门科技大学创新工程学院-计算机科学与工程学院中国澳门烟草与健康联合研究院

研究发现,尼古丁可能降低帕金森病(PD)的发病风险。尼古丁预防PD发生的具体机制尚不明确,尼古丁可能通过多种途径刺激多巴胺(DA)能神经系统,预防PD的发生:尼古丁可以抑制α突触核蛋白或者α突触核蛋白原纤维聚集,预防PD的发生;尼古丁通... 详细信息

研究发现,尼古丁可能降低帕金森病(PD)的发病风险。尼古丁预防PD发生的具体机制尚不明确,尼古丁可能通过多种途径刺激多巴胺(DA)能神经系统,预防PD的发生:尼古丁可以抑制α突触核蛋白或者α突触核蛋白原纤维聚集,预防PD的发生;尼古丁通过抑制活性氧簇的形成或降低单胺氧化酶B的活性而抑制脑组织过度氧化应激反应,预防PD的发生;尼古丁通过上调脑组织α7-烟碱型乙酰胆碱受体(nAChRs)表达而抑制脑组织炎症反应,预防PD的发生;尼古丁通过神经元nAChRs结合后抑制脑组织细胞凋亡,预防PD的发生;尼古丁通过促进神经营养因子表达促进DA能神经元的存活,预防PD的发生。

关键词：尼古丁 α突触核蛋白氧化应激炎症反应细胞凋亡多巴胺能神经元帕金森病

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笼养猕猴种群异常妊娠原因的分析研究

笼养猕猴种群异常妊娠原因的分析研究

作者：黄璋琼中国协和医科大学

学位级别：硕士

猕猴作为珍贵的灵长类动物资源已相对匮乏，医学生物学研究所灵长类中心是全国最大的猕猴饲养繁殖基地之一，通过记录统计，中心近几年来每年发生的自然流产、死胎、难产(统称为异常妊娠)总数占婴猴出生率的20-35％，这是一个很大的经... 详细信息

猕猴作为珍贵的灵长类动物资源已相对匮乏，医学生物学研究所灵长类中心是全国最大的猕猴饲养繁殖基地之一，通过记录统计，中心近几年来每年发生的自然流产、死胎、难产(统称为异常妊娠)总数占婴猴出生率的20-35％，这是一个很大的经济及资源的损失。因此，在对待这一特殊资源时，应该引起高度重视。逐一查找猕猴流产、死胎、难产原因，针对性地提出预防和控制措施来降低死亡率无论对提高猕猴繁殖率保护猕猴资源和保障国家生命科学的发展具有重大现实意义。猕猴在生殖生理方面与人有很大相似性，尤其是雌性猕猴的月经周期，因此是其它实验动物不能比拟的生殖生理及生育调控机制方面的理想动物模型。在人类中妊娠期妇女由于内分泌的改变和免疫力下降，易发生原发感染，既往感染的体内潜在病毒也易在妊娠期被激活而发生继发感染。人怀孕期间感染病原体可抑制胚胎、胎儿细胞的增殖分化，使胎儿先天畸形，也可造成胎盘病理改变导致流产、早产、死产，目前已知十多种病原体的感染可导致流产或对胎儿造成严重影响，并把对胎儿影响较大的病原体以其英文名缩写而称之为TORCH综合征，分别指弓形虫(toxoplasma，Tox)，风疹病毒(rubellavirus，RV)，巨细胞病毒(cytomegalovirus，CMV)，和单纯疱疹病毒(herpus simplex virus，HSV)及其他病原体(others，O)。猕猴也有相似的情况，因此病原体感染可能是导致雌性猕猴异常妊娠的重要因素之一。本研究通过参照人自然流产的因素，又综合分析了猴易感病原体及生物学特性，主要从以下几个方面入手来分析猕猴流产死产原因：病原体，包括猴易感的巨细胞病毒(RhCMV，rhesus cytomegalovirus)和弓形虫(Tox，toxoplasma);环境因素;妊娠猕猴的自身条件和身体状况;营养条件等。在实验研究中我们在国内首次建立了猕猴巨细胞病毒和弓形虫PCR，检测方法，对一年多收集的29例异常妊娠雌猴样品进行检测分析，并与正常分娩组和正常猴群组做对照，经统计分析结果显示弓形虫感染明显导致猕猴妊娠异常，同时还综合分析了其它因素，从而针对性地提出预防和控制措施来降低异常妊娠率;同时为进一步研究发病机制奠定基础。

关键词：猕猴异常妊娠猴巨细胞病毒弓形虫环境

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笼养猕猴食铁丝造成死亡的病例报告

中国兽医杂志 2012年第5期48卷 50-52,I0007页

作者：黄璋琼李贵胡正飞叶尤松吕龙宝中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118 中国科学院昆明动物研究所云南昆明650223

铁是人和动物体内红细胞合成血红素必不可少的物质,也是许多酶的辅酶,与多种物质的代谢有密切的关系。但是铁的过度积累也可造成机体实质性脏器的损伤,继而影响这些脏器的生理功能[1]。一般动物的铁中毒（iron poisoning）多发生在补充... 详细信息

铁是人和动物体内红细胞合成血红素必不可少的物质,也是许多酶的辅酶,与多种物质的代谢有密切的关系。但是铁的过度积累也可造成机体实质性脏器的损伤,继而影响这些脏器的生理功能[1]。一般动物的铁中毒（iron poisoning）多发生在补充铁剂过量的畜禽中,比如猪、狗和禽类[2]。临床上初期以出血性胃肠炎为特征,伴有腹泻和呕吐,后期以出现休克、惊厥及急性肝坏死为特征。

关键词：病例报告铁丝死亡猕猴笼养出血性胃肠炎动物体内细胞合成

食蟹猴和恒河猴卵母细胞及早期胚胎玻璃化冻存

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中国细胞生物学学报 2014年第7期36卷 949-955页

作者：黄璋琼薛志刚高家红江勤芳吴正存李聪罕园园曾桥马开利中国医学科学院医学生物学研究所药物安全性评价研究中心昆明650118 同济大学附属同济医院转化医学中心上海200065

为了节省经费和使转基因模型动物品种资源得到妥善保存,该研究利用自制的梯度浓度冷冻液和解冻液结合玻璃化方式分别冷冻和解冻了非人灵长类动物的183个卵母细胞(GV期、MI期和MII期)、114个卵裂期胚胎(2-细胞期、4-细胞期和8-细胞期)及2... 详细信息

为了节省经费和使转基因模型动物品种资源得到妥善保存,该研究利用自制的梯度浓度冷冻液和解冻液结合玻璃化方式分别冷冻和解冻了非人灵长类动物的183个卵母细胞(GV期、MI期和MII期)、114个卵裂期胚胎(2-细胞期、4-细胞期和8-细胞期)及25个桑椹期胚胎。其中食蟹猴卵母细胞67个,卵裂期胚胎45个,桑椹期胚胎11个;恒河猴卵母细胞116个,卵裂期胚胎69个,桑椹期胚胎14个。复苏后存活率分别为56/67(83.58%)、36/45(80.00%)、9/11(81.82%)、102/116(87.93%)、55/69(79.71%)和11/14(78.57%)。结果表明,快速玻璃化冷冻法简便且胚胎存活率高,是一种较好的冷冻食蟹猴和恒河猴卵母细胞及胚胎的方法。

关键词：食蟹猴恒河猴卵母细胞胚胎玻璃化冻存

猕猴巨细胞病毒(RhCMV)nested PCR检测方法的建立与初步应用

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四川动物 2007年第4期26卷 800-803页

作者：黄璋琼叶尤松江勤芳匡德宣孙晓梅中国医学科学院.中国协和医科大学医学生物学研究所昆明650118

目的建立猴巨细胞(RhCMV)病毒的nested PCR检测方法,并初步应用。方法根据GenBank中报道的RhCMV全基因序列,针对其中的保守区域Rh85设计两对引物进行nested PCR反应,利用此方法对20份猕猴全血标本进行检测,将检测到的猕猴阳性标本扩增... 详细信息

目的建立猴巨细胞(RhCMV)病毒的nested PCR检测方法,并初步应用。方法根据GenBank中报道的RhCMV全基因序列,针对其中的保守区域Rh85设计两对引物进行nested PCR反应,利用此方法对20份猕猴全血标本进行检测,将检测到的猕猴阳性标本扩增片段进行克隆测序。结果利用保守区域Rh85设计的引物可对人HCMV阳性对照进行扩增。用此方法检测的20份猕猴全血标本,出现2例阳性。其中一例扩增片段经纯化、回收克隆测序后用BLAST软件进行同源性对比,与GenBank中报道的RhCMV序列基本相同。结论建立了从猴全血中直接检测猴RhCMV病毒DNA的敏感、特异的nested PCR方法。

关键词：猕猴巨细胞病毒 nested PCR 检测

非人灵长类动物异常行为与5-HTTLPR关系研究进展

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医学动物防制 2011年第3期27卷 226-229页

作者：黄璋琼孙晓梅叶尤松江勤芳代解杰中国医学科学院医学生物学研究所云南昆明650118

非人灵长类动物饲养环境被改变或受到控制时将会干扰动物作出正常反应,常表现出许多异常行为(abnormal behavior),与人类相似,这些异常行为多是心理疾患的具体表现,人和非人灵长类动物的异常行为是遗传因素和环境因素相互作用的结果,其... 详细信息

非人灵长类动物饲养环境被改变或受到控制时将会干扰动物作出正常反应,常表现出许多异常行为(abnormal behavior),与人类相似,这些异常行为多是心理疾患的具体表现,人和非人灵长类动物的异常行为是遗传因素和环境因素相互作用的结果,其中遗传因素是指5-HTTLPR。现将近年来有关非人灵长类动物异常行为与5-HTTLPR多态性的关系进展作一概述。

关键词：猕猴 5-HTTLPR 异常行为

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猕猴巨细胞病毒(RhCMV)研究进展

中国比较医学杂志 2007年第3期17卷 177-181页

作者：黄璋琼叶尤松陈瑜孙晓梅中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所昆明650118

猕猴巨细胞病毒(Rhesus Cytomegalovirus,RhCMV)是一种种属特异性极强的疱疹病毒,猕猴是其自然宿主,它的许多特征与人巨细胞病毒(Congenital human cytomegalovirus,HCMV)相似.感染RhCMV时,猕猴呈现出许多和人感染HCMV一样的病理症状,... 详细信息

猕猴巨细胞病毒(Rhesus Cytomegalovirus,RhCMV)是一种种属特异性极强的疱疹病毒,猕猴是其自然宿主,它的许多特征与人巨细胞病毒(Congenital human cytomegalovirus,HCMV)相似.感染RhCMV时,猕猴呈现出许多和人感染HCMV一样的病理症状,在病原学、免疫抑制、胎儿畸形等研究中可作为人类HCMV模型,引起了各研究领域的广泛关注。目前国内对RhCMV研究还比较少,本文就猴群中广泛存在的RhCMV的特征、致病机理、免疫学特征和检测方法的研究进展情况做一概述。为加速开发治疗人类疾病的新方法,促进临床发展提供了一个很好的评价平台,同时也为猕猴自身物种保护提供有效预防手段。

关键词：猕猴巨细胞病毒病毒感染灵长类

食蟹猴体内自然成熟和体外培养成熟的卵母细胞对卵胞质内单精子显微注射(ICSI)结局的影响

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生殖与避孕 2015年第12期35卷 827-833页

作者：黄璋琼曾桥高家红江勤芳吴正存叶尤松李聪李云马开利中国医学科学院医学生物学研究所药物安全性评价研究中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 中国医学科学院基础医学研究所医学灵长类动物研究中心&神经科学中心北京100005 同济大学附属同济医院转化医学中心上海200065

目的：探讨食僖猴体内自然成熟和体外培养成熟（IVM）的卵母细胞对卵胞质内单精子显微注射（ICSI）结局的影响。方法：选取有正常月经周期和生育功能的13只健康成熟的雌性食蟹猴，使用优化的促排卵方案进行促排卵后，B超下观察用药后的... 详细信息

目的：探讨食僖猴体内自然成熟和体外培养成熟（IVM）的卵母细胞对卵胞质内单精子显微注射（ICSI）结局的影响。方法：选取有正常月经周期和生育功能的13只健康成熟的雌性食蟹猴，使用优化的促排卵方案进行促排卵后，B超下观察用药后的卵巢情况，手术取卵后对已成熟的MⅡ期卵母细胞进行ICSI，未成熟的GV及MⅠ期卵母细胞在IVM16-38h后发育为MⅡ期卵母细胞，再进行ICSI，观察IVM及体内自然成熟的卵母细胞的受精情况和胚胎发育情况。结果：IVM为76．1％±14．9％，受精率为56．79％，卵裂率为73．91％，优质胚胎率为44．12％；体内自然成熟的卵母细胞受精率为68．52％，卵裂率为94．59％，优质胚胎率为58．57％。在受精率和卵裂率方面，两者间均有统计学差异（P〈0．05和P〈0．01），而优质胚胎率无统计学差异（P〉0.05）。结论：食蟹猴体外培养成熟的卵母细胞对ICSI结局有较大影响。

关键词：食蟹猴卵母细胞体内自然成熟体外培养成熟(IVM) 卵胞质内单精子显微注射(ICSI)