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异氟醚抑制大鼠伤害性电刺激后脊髓C-Fos的表达效应与逃避运动反应的研究

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异氟醚抑制大鼠伤害性电刺激后脊髓C-Fos的表达效应与逃避运动反...

作者：黄海琼昆明医学院

学位级别：硕士

目的：研究电刺激大鼠后肢后，吸入麻醉药Iso抑制C-FOS在脊髓表达的效应，从而探讨Iso产生肌松作用的作用位点及作用机制。方法：32只大鼠在箱内用异氟醚(Iso)麻醉后，经面罩吸入Iso，切开颈部，游离气管，气管内插管，机械通气，随机... 详细信息

目的：研究电刺激大鼠后肢后，吸入麻醉药Iso抑制C-FOS在脊髓表达的效应，从而探讨Iso产生肌松作用的作用位点及作用机制。方法：32只大鼠在箱内用异氟醚(Iso)麻醉后，经面罩吸入Iso，切开颈部，游离气管，气管内插管，机械通气，随机分别吸入0.6MAC、0.9MAC、1.1MAC和1.4MAC的Iso，对应分为6F、9F、11F、14F组(n=8只)，稳定15min后，电刺激大鼠左后肢股二头肌肌腱端，1h后，主动脉灌注、固定，取L-L腰膨大处脊髓，用抗C-FOS抗体进行免疫组织化学染色法，计数多张切片上的脊髓各层的C-FOS阳性神经元(FLIN)数。将脊髓分为浅表层(Ⅰ、Ⅱ层)、核心部分(Ⅲ、Ⅳ层)、脊髓背角颈部(Ⅴ、Ⅵ层)以及腹侧灰质部(Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ和Ⅹ层)，将前三层作为脊髓背角灰质部计数，以及腹侧灰质部(Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ和Ⅹ层)计数，将此四组的FLI数进行比较，并做直线相关与回归分析。结果：FLI不仅见于同侧脊髓背角Ⅰ、Ⅱ及Ⅴ、Ⅸ层，也见于Ⅲ、Ⅳ层;在腹侧灰质部14F组与6F、9F、11F组相比，FLI数明显减少(P＜0.05)，6F、9F、11F组之间，FLIN数变化不大(P＞0.05);脊髓背侧FLIN数呈剂量依赖性减少，在Ⅰ、Ⅱ层、Ⅳ、Ⅵ层呈直线负相关关系，14F与6F、9F、11F组相比，FLIN数明显减少(P＜0.05)，但6F与9F组相比，FLIN数变化不大(P＞0.05)。结论：1．很可能脊髓背角和腹角都是Iso抑制伤害性刺激引发的逃避运动反应的作用位点之一，其中脊髓腹角起了主要的作用;2．吸入 14MAC的异氟醚，脊髓背角、腹角C一FOS的表达显著减少，伤害性逃避运动反而消失

关键词：异氟醚伤害性电刺激 C-FOS 脊髓逃避运动反应大鼠

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中国疫苗援助对受援国出口的影响研究

中国疫苗援助对受援国出口的影响研究

作者：黄海琼广东外语外贸大学

学位级别：硕士

TNF-α、MMP-9和VEGF在鼻息肉中的表达及意义

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TNF-α、MMP-9和VEGF在鼻息肉中的表达及意义

作者：黄海琼福建医科大学

学位级别：硕士

目的观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)以及血管内皮生长因子(VEGF)在人鼻息肉组织中的表达情况,探讨它们在鼻息肉发病机制中的可能作用。方法采用免疫组织化学技术SP法检测TNF-α、MMP-9及VEGF在40例鼻息肉、10例... 详细信息

目的观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)以及血管内皮生长因子(VEGF)在人鼻息肉组织中的表达情况,探讨它们在鼻息肉发病机制中的可能作用。方法采用免疫组织化学技术SP法检测TNF-α、MMP-9及VEGF在40例鼻息肉、10例因鼻中隔偏曲行鼻中隔矫正术时切下的下鼻甲粘膜的表达。采用SPSS13.0软件进行统计学分析。结果TNF-α及MMP-9阳性表达可见于鼻息肉的腺体、小血管、粘膜上皮及部分炎症细胞,呈强阳性表达,阳性强度以(+++)以上为主,阳性率分别为82.5%、85.0%,均明显高于对照组(P值均小于0.05)。而对照组阳性表达少见,阳性产物主要表达于粘膜上皮,染色较淡,以(+)为主;VEGF在鼻息肉及正常下鼻甲粘膜的上皮细胞、血管内皮细胞、腺体细胞和散在分布的炎症细胞均有表达,鼻息肉组明显高于对照组(P0.05,所以可以认为TNF-α与VEGF在鼻息肉中的表达无相关性。结论1.在鼻息肉组织中TNF-α、MMP-9与及VEGF均过度表达,表明它们在疾病发生中是共同而非单独起作用的。在鼻息肉组织中,MMP-9的表达与TNF-α及VEGF均具有一定程度的正相关,MMP-9作为炎症反应的调节剂,TNF-α及VEGF可能通过各种途径促进MMP-9的表达,从而加剧炎症反应,最终使正常鼻腔粘膜向鼻息肉转化。而TNF-α与VEGF的表达没有相关性,它们对鼻息肉的作用方式可能无直接关系。2. VEGF在鼻息肉与正常鼻粘膜均有表达,少量的VEGF可维持鼻腔粘膜的正常生理作用,VEGF在鼻息肉中过度表达提示它在鼻息肉的发生发展中起重要作用,可能与鼻息肉组织的高度水肿有关。***-α、MMP-9及VEGF在鼻息肉腺体中均呈过度表达,提示腺体在鼻息肉中或许不仅仅是各种细胞因子作用的靶器官,鼻息肉腺体细胞也可分泌多种细胞因子,通过自分泌或者旁分泌作用促进鼻息肉的发生发展。

关键词： TNF-α MMP-9 VEGF 鼻息肉免疫组化

表达鸡传染性喉气管炎病毒gB基因的重组马立克病毒疫苗株的构建

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表达鸡传染性喉气管炎病毒gB基因的重组马立克病毒疫苗株的构建

作者：黄海琼扬州大学

学位级别：硕士

鸡传染性喉气管炎(Infectious Laryngotracheitis, ILT)是由鸡传染性喉气管炎病毒(Infectious Laryngotracheitis Virus, ILTV)引起的急性呼吸道疾病。该病具有急性爆发和潜伏感染的特点,给养禽业造成巨大的经济损失。由于ILTV弱毒疫苗... 详细信息

鸡传染性喉气管炎(Infectious Laryngotracheitis, ILT)是由鸡传染性喉气管炎病毒(Infectious Laryngotracheitis Virus, ILTV)引起的急性呼吸道疾病。该病具有急性爆发和潜伏感染的特点,给养禽业造成巨大的经济损失。由于ILTV弱毒疫苗能引起潜伏感染,并且在鸡群中的传播会造成毒力返强,从而成为新的感染来源;因此,迫切需要研制安全、高效的新型ILT疫苗。本研究以马立克氏病毒(MDV) CVI988/Rispens疫苗毒株为载体,构建表达ILTV保护性抗原gB糖蛋白的重组病毒,并分别评价重组病毒对ILT和马立克氏病的免疫效果。本研究以CVI988/Rispens疫苗毒株基因组短独特区的sorf1和sorf2作为ILTV gB基因插入位点,以网状内皮增生症病毒(REV)的长末端重复序列(LTR)为启动子、绿色荧光蛋白(EGFP)基因为报告基因,构建转移载体质粒pMDV-gB-GFP。用磷酸钙共沉淀法将pMDV-gB-GFP和CVI988/Rispens基因组DNA共转染鸡胚成纤维(CEF)细胞,获得带有EGFP标志的重组病毒;经有限稀释法纯化、筛选,获得带有EGFP标志的重组病毒rMDV-gB-GFP。用Cre重组酶去除rMDV-gB-GFP的EGFP基因,得到重组病毒rMDV-gB。经PCR、间接免疫荧光试验(IFA)和Western-blot试验鉴定,证明重组病毒rMDV-gB基因组中插入了ILTV gB基因,并能表达ILTV gB糖蛋白。本研究评价了rMDV-gB对ILTV强毒株攻击的免疫保护效果。将90只1日龄SPF鸡随机分成4组：rMDV-gB免疫组、rMDV-gB与ILTV弱毒疫苗联合免疫组、ILTV弱毒疫苗免疫组、攻毒对照组。前两组的试验鸡1日龄时分别颈部皮下接种5000空斑形成单位(PFU)的rMDV-gB;第二组和第三组的试验鸡于21日龄时接种1羽份的ILTV弱毒疫苗;42日龄时,各组试验鸡均用105EID50/鸡的ILTV强毒株攻击。观察试验鸡的症状表现,并于攻毒后第10天进行剖检和病理组织学检查。结果显示,在ILTV强毒株攻击后,rMDV-gB免疫组的保护率为65%,而ILTV弱毒疫苗组的保护率为41%,rMDV-gB的保护效力明显高于ILTV弱毒疫苗。本研究还发现,在1日龄雏鸡接种rMDV-gB后,再于21日龄接种ILTV弱毒疫苗,并不能提高对ILTV强毒株攻击的保护作用;表明1日龄雏鸡接种rMDV-gB后就能建立起针对ILTV的有效免疫力。本研究还评价了rMDV-gB对MDV RB1B超强毒株攻击的免疫保护效果。将60只1日龄SPF鸡随机分为3个试验组：rMDV-gB免疫组、CV1988/Rispens免疫组、攻毒对照组,每组20只试验鸡;rMDV-gB免疫组和CVI988/Rispens免疫组的试验鸡分别于1日龄时颈皮下接种5000PFU/鸡的相应疫苗;7日龄时,所有试验鸡经腹腔接种500PFU/鸡的MDV RB1B超强毒株。连续观察90天,记录各试验组鸡的发病和死亡情况。经统计,攻毒对照组90%的鸡死于马立克氏病,而rMDV-gB免疫组和CVI988/Rispens疫苗组的保护率均为100%,表明rMDV-gB可对MDV超强毒株的攻击能产生足够的保护。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒马立克病毒 gB糖蛋白同源重组免疫效力

内皮素1过表达经Akt／PKB信号通路抑制大鼠肺细小动脉平滑肌细胞凋亡的体外研究

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中华心血管病杂志 2008年第6期36卷 551-555页

作者：黄海琼王震姜桢陈灏珠复旦大学附属中山医院麻醉科上海200032 复旦大学附属中山医院心内科上海200032 复旦大学上海医学院病理学系

目的探讨过表达内皮素1（ET-1）对体外培养的大鼠肺细小动脉平滑肌细胞（RPMC）凋亡的影响及其作用机制。方法采用组织灌注法体外分离和培养原代RPMC，经免疫荧光法和电镜鉴定后，脂质体法瞬时转染ET-1基因，用流式细胞技术检测细胞周... 详细信息

目的探讨过表达内皮素1（ET-1）对体外培养的大鼠肺细小动脉平滑肌细胞（RPMC）凋亡的影响及其作用机制。方法采用组织灌注法体外分离和培养原代RPMC，经免疫荧光法和电镜鉴定后，脂质体法瞬时转染ET-1基因，用流式细胞技术检测细胞周期和凋亡，免疫印迹法检测丝／苏氨酸蛋白激酶（Akt／PKB）的磷酸化水平和剪切的半胱天冬酶-3（Caspase-3）的表达。结果成功分离和培养出原代RPMC，实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应检测显示，RPMC中ETA受体mRNA表达水平明显高于ETB受体。瞬时转染ET-1基因48h后，流式细胞仪结果显示，与空载相比，RPMC的凋亡明显下降。免疫印迹法检测显示，过表达ET-1后，Akt／PKB的磷酸化水平升高，剪切的Caspase-3的表达水平下降。结论过表达ET-1可能主要通过ETA受体，并经Akt／PKB-Caspase-3信号通路抑制RPMC的凋亡，从而在肺动脉高压的血管重塑过程中发挥重要作用。

关键词：高血压肺性肌细胞平滑肌内皮缩血管肽1 细胞凋亡

大鼠肺细小动脉和大动脉平滑肌细胞的分离培养及其增殖特性比较

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中华病理学杂志 2008年第5期37卷 346-348页

作者：黄海琼王震姜桢陈灏珠复旦大学附属中山医院麻醉科上海200032 复旦大学上海医学院病理学系复旦大学附属中山医院心内科上海市心血管病研究所

肺动脉高压（PAH）主要组织病理学改变在肺细小动脉，尤其是肌性细小动脉内膜-中膜的肥厚、无肌细小动脉的肌化，在PAH的发生发展过程中起着重要作用。但引起PAH中肺细小动脉改变的病理学机制尚不明确，而又因实验大鼠肺细小动脉难以定... 详细信息

肺动脉高压（PAH）主要组织病理学改变在肺细小动脉，尤其是肌性细小动脉内膜-中膜的肥厚、无肌细小动脉的肌化，在PAH的发生发展过程中起着重要作用。但引起PAH中肺细小动脉改变的病理学机制尚不明确，而又因实验大鼠肺细小动脉难以定位和取材，使大鼠肺细小动脉平滑肌细胞（RPMC）不易分离和培养，

关键词：大动脉平滑肌细胞肺细小动脉分离培养实验大鼠增殖特性细小动脉平滑肌细胞组织病理学改变肺动脉高压

内皮素-1经蛋白激酶B／雷帕霉素靶蛋白信号通路诱导大鼠肺细小动脉平滑肌细胞肥大

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中华结核和呼吸杂志 2009年第4期32卷 287-291页

作者：黄海琼张鹏姜桢陈灏珠复旦大学附属中山医院麻醉科上海200032 复旦大学附属中山医院心内科上海200032

目的探讨过表达内皮素-1（ET-1）对体外培养的大鼠肺细小动脉平滑肌细胞（RPMC）增殖／肥大的影响及其作用机制研究。方法采用组织灌注法体外分离培养RPMC，脂质体介导法瞬时转染ET-1基因，经实时荧光定量逆转录-PCR和免疫印迹法鉴定后... 详细信息

目的探讨过表达内皮素-1（ET-1）对体外培养的大鼠肺细小动脉平滑肌细胞（RPMC）增殖／肥大的影响及其作用机制研究。方法采用组织灌注法体外分离培养RPMC，脂质体介导法瞬时转染ET-1基因，经实时荧光定量逆转录-PCR和免疫印迹法鉴定后，用流式细胞技术检测细胞周期和细胞体积的变化，用免疫印迹法和细胞免疫荧光法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达，同时检测细胞总蛋白／总DNA比值的变化，并用免疫印迹法检测蛋白激酶B（Akt／PKB）、雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和细胞外信号调节激酶（ERK1／2）的磷酸化水平。采用SPSS11．0统计软件处理数据，各组间比较均采用t检验。结果成功分离和培养RPMC并瞬时转染ET-1基因。与空载相比，转染48h后RPMC细胞周期分布和细胞增殖指数未见明显差异，但转染72h后检测到仪-SMA合成功能增强，分别为空载转染组的1．3倍和1．2倍，细胞总蛋白／总DNA比也增高，分别为空载转染组的1．6倍和1．5倍。流式细胞术检测显示，与空载相比，转染72h后RPMC细胞体积增大，分别为空载转染组的1．1倍和1．2倍。免疫印迹法检测显示，转染48h后，Akt／PKB和mTOR的磷酸化水平升高，ERK1／2的磷酸化水平降低。结论过度表达ET-1可能经Akt／PKB—mTOR信号通路诱导RPMC肥大，在肺动脉高压的血管重塑过程中发挥重要作用。

关键词：肺细小动脉平滑肌细胞内皮缩血管肽类雷帕霉素靶蛋白

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小学群文阅读教学的策略

天津教育 2022年第7期 149-151页

作者：黄海琼福建省莆田市涵江区实验小学

小学语文教学实践中,按照新课程标准的要求,构建群文阅读教学体系受到广泛关注,成为教学改革过程中需要重点探究的问题。群文阅读就是围绕一个文章的主题思想,教师和学生将议题作为核心开展集体性的阅读,最终通过有效阅读形成共识的过程。

关键词：群文阅读有效阅读小学语文教学教学改革主题思想新课程标准集体性教学的策略

维普期刊数据库博看期刊

“冒险”不是“玩命”,而是突破C-Zone的成长

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中国校外教育（上旬） 2015年第3期 140-141页

作者：黄海琼自然之友.盖娅自然学校

在自然之友亲子团的开营仪式上,有一个固定的环节,就是由所有爸爸妈妈组成的育成会,全体朗读纪伯伦的诗《孩子》：＂你可以给予他们的是你的爱,却不是你的想法,因为他们有自己的思想。你可以庇护的是他们的身体,却不是他们的灵魂,因为... 详细信息

在自然之友亲子团的开营仪式上,有一个固定的环节,就是由所有爸爸妈妈组成的育成会,全体朗读纪伯伦的诗《孩子》：＂你可以给予他们的是你的爱,却不是你的想法,因为他们有自己的思想。你可以庇护的是他们的身体,却不是他们的灵魂,因为他们的灵魂属于明天,属于你做梦也无法到达的明天……＂彼时气氛十分动情,父母们激动得眼含热泪,然而随后大家开始思考：是否＂无为而治＂才是最好的教育方式？除了爱,我们还能给孩子些什么？我们能做些什么？

关键词：教育方式自然之友纪伯伦 C-Zone 日常环境做事方式恍若隔世体验活动体验式学习直指人心