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论唐宋枢密使

论唐宋枢密使

作者：黄洁琼厦门大学

学位级别：硕士

本文旨在通过探讨枢密使在唐代中后期、五代、宋不同时代背景下的特点与表现，及对时政所产生的影响，对枢密使产生、发展和衰亡的全过程作出系统的分析。全文共分五部分。前言。这一部分主要是学术史的回顾，列举了近二十年来史学... 详细信息

本文旨在通过探讨枢密使在唐代中后期、五代、宋不同时代背景下的特点与表现，及对时政所产生的影响，对枢密使产生、发展和衰亡的全过程作出系统的分析。全文共分五部分。前言。这一部分主要是学术史的回顾，列举了近二十年来史学界的研究状况，总结了枢密使研究方面的主要成果与不足之处。提出本文的写作目的是在已有的研究成果的基础上，对枢密使进行系统、全面、深入的探讨，并结合时代背景进行综合考察，以期对君主专制体制下君权与相权的相互制约、中枢权力的转移和重新分配的历史过程作一具体的诠释。第一章《中晚唐枢密使》。第一部分主要对枢密使的始置时间的几种不同看法及所掌握史料进行分析，得出枢密使制从代宗试点，宪宗朝实行，至敬宗宝历年间定型的结论。第二部分对枢密使在唐代中后期产生的社会历史条件进行分析，指出枢密使的兴盛是唐代宦官专权以及中唐以来政治中枢演化的结果，也是中国封建社会政治制度发展变化的特点所决定的。第三部分将枢密使在唐代的发展划分为四个阶段，总结出唐代枢密使的职掌有一个从小到大的变化过程，总的包括：承传诏令表奏、参掌机密、插手朝臣的任命甚至皇帝的废立等几个方面。第四部分主要分析了在唐中后期宦官势力恶性膨胀和地方藩镇林立的历史条件下，枢密使在中枢的地位及其对政局的影响。第二章《五代枢密使》。第一部分主要对比分析五代枢密使与唐代枢密使的不同特点，得出枢密使在五代以士人充任，枢密院机构日趋完善，枢密使有权发布自己的文告“宣”或“头子”，其参政预政的权力已有了制度上的保障。第二部分探讨枢密使在五代战乱频仍的情势下势力急剧膨胀，其职权范围已扩展至封建社会的财、政、军等各大要务，权力实已凌驾于宰相之上。第三部分分析五代枢密使权重的原因，首先是当时的政治、军事形势所致;第二，任枢密使者原有的政治地位助长了五代枢密使的气焰;第三，从封建内容摘要社会政治制度演变的特点来看，五代枢密使权势最重是历史发展的必然。第三章《宋代枢密使权势的衰退》。第一部分概述宋代枢密院的职掌、机构的完备及枢密使的职权。第二部分论述在宋代加强中央集权的大背景和抑武佑文思想的指导下，统治者对枢密使进行分权，使宋代枢密使的职权范围由五代时的“无所不包”缩小为专掌军事，而军权又被进一步分割，枢密使的权力大大缩小。第三部分探讨枢密使权势的衰退。宋制，中书与枢密院对掌文武大政，“事干国体”的大事则需宰相决定。每遇战事宰相便预闻军事，军权随之部分地回到宰相手中。南宋时由于长期处于战争的威胁之下，宰相便基本上兼任枢密使，中书与枢密院形式上的分权基本结柬，二府在实质上己基本合一。再加上宋代对武人的防范，对军权进行分割，掌握在枢密使手中的就剩调兵权了，其权势实已今非昔比。第四章《结语》。得出结论：枢密使专权是我国封建社会历史发展的产物，其产生、发展及衰亡的全过程都是与不同的历史环境相适应的。枢密使产生、发展的过程还是历史上亲近之职在政治上发展的典型，是中国古代政治制度演变的结果，反映了封建社会君相权力相互制约，中枢权力不断转移的历史发展规律。

关键词：唐五代宋枢密使

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加拿大外国投资审查法律制度研究

加拿大外国投资审查法律制度研究

作者：黄洁琼武汉大学

学位级别：硕士

加拿大作为一个用统一成文法对外国投资进行规制的国家,其制定统一外资法的经历可追溯至1973年,加拿大颁布了其第一本外资法——《外国投资审查法》。这部法律是在加拿大国家民族经济主义的大力推崇下诞生,对当时的加拿大带来了巨大的影... 详细信息

加拿大作为一个用统一成文法对外国投资进行规制的国家,其制定统一外资法的经历可追溯至1973年,加拿大颁布了其第一本外资法——《外国投资审查法》。这部法律是在加拿大国家民族经济主义的大力推崇下诞生,对当时的加拿大带来了巨大的影响,标志着加拿大在外国投资法律领域的起步与发展。在接下来的十年时间里,随着投资保护主义的愈演愈烈,在国家能源计划施行以后,国家经济发展面临着来自各方的巨大压力,国内对于开放自由的呼声越来越高,最终伴随着民族经济主义的失势,投资保护主义色彩浓厚的《外国投资审查法》为自由开放的《加拿大外国投资法》所取代,该法于1985年正式颁布生效。国际贸易全球化发展至今,国际间投资越来越自由、便利,这种趋势正在深刻的影响着每个国家外国投资法的变迁,如何在保护外资和国家利益间寻求平衡以有效利用外资,成为每个国家制定外国投资法的重要着眼点。本文从加拿大外国投资法等相关法律条文出发,对加拿大外国投资领域的法律进行宏观历史梳理与微观制度分析,以动态的视角对其所包含的便捷投资与国家安全理念进行评析,综合分析其对外国投资者的影响,为我国今后的在外国投资立法提供有益的经验与启示。本文的第一章对加拿大外国投资审查法律制度进行概述,对加拿大外国投资法律制度的演变和发展的历史进行梳理,并对加拿大外国投资审查制度的立法模式进行分析,对加拿大外国投资审查法律制度的特点进行了总结。本文的第二章对加拿大外国投资审查法律制度的理论基础进行了分析,得出加拿大的外国投资双重审查法律制度的诞生不仅源于加拿大对于国家经济安全的重视,更出于对国家安全的保护。除此之外,为了有效利用外资,加拿大外国投资查制度致力于在鼓励外资和国家利益之间寻求良好平衡。本文的第三章、第四章对加拿大外国投资审查法律制度中的“净效益”审查制度和国家安全审查制度进行了具体的介绍。其内容包括审查的主体、审查的对象以及审查的标准和审查的程序,并在第四章的最后一节归纳了二制度的关系,以求正确把握二制度的运行。本文的第五章则在对加拿大特色的外国投资审查制度和我国《草案》所规定的外资准入制度和国家安全审查制度进行比较分析的基础上,对加拿大外国投资审查制度对我国的启示进行了阐述,并提出了完善《草案》的建议。

关键词：加拿大外国投资审查法律制度 “净效益” 审查国家安全审查

论《FIDIC施工合同条件》中的词汇衔接手段

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论《FIDIC施工合同条件》中的词汇衔接手段

作者：黄洁琼广西大学

学位级别：硕士

合同是一种有着很强约束力的协议。一旦双方签订,合同就具有法律效力,因此,合同具有法律文本的文体特征。作为国际通用的合同,FIDIC施工合同同样具有法律文本的特点。FIDIC施工合同条件是一个把工程技术、法律、经济和管理等有机结合起... 详细信息

合同是一种有着很强约束力的协议。一旦双方签订,合同就具有法律效力,因此,合同具有法律文本的文体特征。作为国际通用的合同,FIDIC施工合同同样具有法律文本的特点。FIDIC施工合同条件是一个把工程技术、法律、经济和管理等有机结合起来的合同条件,在国际工程承包中享有很高的地位,被誉为国际工程承包的“圣经”。因此,FIDIC施工合同条件的理解和翻译的准确性和完整性是至关重要的。自从韩礼德和哈桑于1976年提出衔接理论,衔接就成为了学术界许多学者们广泛研究的对象。衔接,作为语篇研究的重要组成部分之一,可分为语法衔接和词汇衔接。词汇衔接是指通过词汇的选择来实现语篇的衔接与连贯,是创造语篇连贯的主要手段之一,其手段包括重复、同义或近义词、反义词、上义词和搭配。本文以韩礼德和霍伊的词汇衔接理论为指导,通过数据统计,旨在对FIDIC施工合同条件语篇的词汇衔接手段进行定性定量相结合的研究,得出该合同词汇衔接手段的运用频率和特征并分析其原因,以期对该合同的理解、翻译、以及对其它合同的编写有所借鉴和指导。通过分析统计数据,本文有如下发现：一、在统计的四种词汇衔接手段中,重复手段在FIDIC施工合同条件中出现频率最高,所占百分比高达67%,其余三种手段出现频率依次为同义词或近义词、反义词以及上下义衔接手段。搭配衔接手段贯穿整本FIDIC施工合同条件,是使该合同完整、连贯不可或缺的衔接手段。二、对FIDIC施工合同条件进行词汇衔接手段的研究有助于理解和翻译该合同以及FIDIC的其他文件。三、FIDIC施工合同条件中的条款之间既是相对独立,又是相互联系的,对这些词汇的衔接手段的了解能够促进对合同中各个条文的具体理解。作者认为了解词汇衔接手段在FIDIC施工合同条件文本中的使用规律对该合同的研究者以及使用者都会产生积极的影响。

关键词：《FIDIC施工合同条件》衔接词汇衔接手段

形象与现实 ——《唐五代笔记小说大观》中的女鬼形象解析

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形象与现实 ——《唐五代笔记小说大观》中的女鬼形象解析

作者：黄洁琼安徽大学

学位级别：硕士

自汉武帝推行“罢黜百家,独尊儒术”起,儒家几千年来被视为社会的正统思想。随着政权更替,儒佛道文化在融合斗争中此消彼长,进入唐朝时期,儒家势力被极大削弱,佛、道两教先后达到顶峰。武则天时期奉行“抑道崇佛”,佛教一时风头无两,占... 详细信息

自汉武帝推行“罢黜百家,独尊儒术”起,儒家几千年来被视为社会的正统思想。随着政权更替,儒佛道文化在融合斗争中此消彼长,进入唐朝时期,儒家势力被极大削弱,佛、道两教先后达到顶峰。武则天时期奉行“抑道崇佛”,佛教一时风头无两,占据社会主流地位,神佛为世人敬仰依赖。而唐玄宗开始,出于政治上的考虑,实行“以道压佛”,道教迎来黄金时代,求仙学道成为个人的人生追求,出世为修仙之人追求的最高境界。唐代佛道思想的盛行反映在文化上,便是鬼神怪说在市井盛行,难辨真伪。其中,女鬼故事在经历了魏晋志怪小说到唐传奇,已初具规模,为宋话本、元杂剧直到明清集大成者的女鬼系列小说提供了丰富的素材。本文的研究便是以《唐五代笔记小说大观》中的女鬼形象为基础,通过与小说中其她女性异类的描写进行比较,总结出《唐五代笔记小说大观》女鬼的独特性,继而探索其艺术想象背后反映出的唐代人民的思想观念和精神追求,总结出女鬼形象对唐朝社会的意义。本文主要分为五个部分：第一部分为导论,交代本文的研究内容,说明研究的方向和意义。其次介绍了本文的研究方法,主要采取文献法,再对不同主体的形象描写进行直观对比,有利于全面的总结出女鬼形象的特殊性。然后对本研究涉及的“鬼”、“神”、“精”、“怪”、“巫”这五个概念进行界定,确定本文的研究范畴。第二部分简单介绍了《唐五代笔记小说大观》一书,重点在于分析《唐五代笔记小说大观》中女鬼形象的特征。首先,从外貌、服饰、性格、爱好四个方面进行简单概括。接着,详细描述女鬼和人类的七种互动形式。最后,比较小说中的女鬼与女神、女精、女怪、女巫的不同描写,从而全面直观的展现出《唐五代笔记小说大观》中的女鬼形象。第三部分,整理了唐代以前的女鬼形象,总结出唐代女鬼的两大特征——世俗化、人性色彩。然后对于女鬼类型、故事情节等所表达的佛教、道教观点进行阐述,说明唐代笔记小说中的女鬼形象所独有的文化内涵。第四部分讲述《唐五代笔记小说大观》女鬼形象与唐朝社会的关联性。首先是宗教在唐代迎来发展契机,政治需要推动了佛教和道教的繁荣,佛教和道教自身发展的需要又推动了鬼神小说的普及,丰富了女鬼形象,宗教教义的世俗化也为女鬼形象的世俗化创造了思想条件。其次,唐朝女性政治地位的提高,佛教、道教对男女平等的倡导,都为女性的个人发展提供了广阔的平台,但儒家文化对女性的束缚仍然存在,这就导致笔记小说中女鬼的形象呈现多样化特征。然后是小说领域中的创新,唐传奇作者都是当代文化水平较高的知识分子,也不乏当朝重臣,这使得唐朝笔记小说无论是文字风格还是思想内容都白成一派,女鬼形象也被赋予了独特的思想内涵。最后,神鬼精怪描写满足了唐朝人民的好奇心理,是唐朝好奇文化的产物。第五部分主要分析《唐五代笔记小说大观》中女鬼形象所蕴涵的意义。从文化功能理论来看,无论是借女鬼宣扬宗教观念,还是以女鬼经历影射社会现实问题,又或是女鬼的形象对唐朝以后的小说创作产生了深远影响,都反映出唐朝各阶层的需求,是唐朝社会思想的体现。最后,结语总结全文内容,说明本研究的局限性,指明需要深入研究的相关问题。

关键词：《唐五代笔记小说大观》女鬼形象独特性

浙中丘陵地区燃煤电厂周边土壤重金属污染特征研究

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浙中丘陵地区燃煤电厂周边土壤重金属污染特征研究

作者：黄洁琼浙江大学

学位级别：硕士

燃煤电厂是重金属的重要来源之一,其释放的重金属通过干湿沉降等方式进入土壤中不断累积,对环境造成污染。开展电厂周围土壤重金属的污染特征研究对了解电厂周围土壤的污染状况具有重要意义。本文以浙中丘陵地区某燃煤电厂周围土壤为研... 详细信息

燃煤电厂是重金属的重要来源之一,其释放的重金属通过干湿沉降等方式进入土壤中不断累积,对环境造成污染。开展电厂周围土壤重金属的污染特征研究对了解电厂周围土壤的污染状况具有重要意义。本文以浙中丘陵地区某燃煤电厂周围土壤为研究对象,选用辐射状布点法布置了31个采样点位,并选择其中的16个采样点进行剖面土壤采集,共采集了79个土壤样品。分析了Hg、Pb、Cr和Cd四种重金属在土壤表层和剖面的浓度水平。采用GS+地统计分析法、ArcGIS技术、相关性分析等研究方法探明了四种重金属在电厂周围土壤中的水平与垂直分布特征及其影响因素,结合分布特征初步识别了重金属的可能来源。结合单因子污染指数和内梅罗综合指数对土壤重金属污染进行评价。采用Tiesser五步连续浸提法,分析了表层土壤中的四种重金属五种形态的浓度水平,探究了重金属形态的分布特征和影响因素。通过各形态含量初步评价了Hg、Pb、Cr和Cd的生物有效性。得到如下结果:(1)电厂周围表层土壤中,Hg、Pb、Cr和Cd的浓度范围分别为0.009～0.946 mg/kg、41.896～92.503 mg/kg、9.246～87.595 mg/kg和0.075～0.960 mg/kg。Hg和Pb两种重金属浓度值高于金华市土壤背景值,土壤总体属于轻度污染。根据GS+地统计分析,Cr具有强烈空间自相关性,Hg、Pb和Cd呈中等空间自相关性。根据克里格插值法分析,Hg、Pb、Cr和Cd水平分布特征不完全一致,推测四种重金属可能来自不同的污染源和人为活动。Hg可能受电厂影响较大,而Pb、Cr和Cd可能受电厂影响相对较小。(2)电厂周围剖面土壤(0-80cm)中,Hg、Pb、Cr和Cd的浓度变化范围分别为0.014～0.341 mg/kg,17.637～75.934 mg/kg,8.643～35.544 mg/kg和0.021～0.960mg/kg。Hg、Pb和Cd呈现出较明显的表层富集现象,在剖面中含量随着深度的增加而减小,而Cr剖面各层间的含量稳定,变化不大。剖面土壤中Hg、Pb、Cr和Cd的浓度与pH的相关性不显著,说明研究区域中土壤pH值可能不是影响土壤重金属垂直分布的主要因素。Hg、Pb和Cd与土壤中的有机质含量呈显著正相关关系,Cr与有机质含量无明显相关性。(3)电厂周围表层土壤中Hg的形态分布特征为残渣态>有机结合态>铁锰结合态>碳酸盐结合态>可交换态,土壤MeHg浓度在剖面A-D层的总体浓度范围为0.01～0.96ng/g。土壤汞的甲基化率为0.021%～2.273%,属于相对较低水平。甲基汞含量与总汞和有机质含量存在显著的正相关关系,说明外源汞的输入和有机质含量的增加都会提高土壤甲基汞的含量;Pb的形态分布特征为残渣态>铁锰结合态>有机结合态>碳酸盐结合态>可交换态;Cr的形态分布特征为残渣态>有机结合态>铁锰结合态>可交换态>碳酸盐结合态;Cd的形态分布特征为可交换态>碳酸盐结合态>残渣态>铁锰结合态>有机结合态。重金属总量与各形态存在显著正相关关系,Hg、Pb、Cr和Cd的有机结合态均与pH值呈负相关关系。四种重金属的有机结合态与土壤有机质含量均呈正相关关系,碳酸盐结合态与土壤有机质含量均成负相关关系,其中Pb与土壤有机质含量相关系数为0.802,呈极显著正相关。(4)电厂周边表层土壤不同重金属的潜在环境风险不同。Hg主要以稳定的残渣态存在,生物可利用性低,对环境的危害相对较小;Pb和Cr主要以潜在生物有效态和残渣态存在,说明随着环境的变化,潜在生物有效态可能会向生物有效态转化,存在潜在的生物可利用性和危害性;Cd的生物有效态占总量比例超过50%,稳定的残渣态仅为21.69%,存在较大的潜在危害。

关键词：燃煤电厂土壤重金属空间分布重金属形态生物有效性

新型抗HIV复方制剂LC-MS/MS检测方法的建立及比格犬药动学研究

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新型抗HIV复方制剂LC-MS/MS检测方法的建立及比格犬药动学研究

作者：黄洁琼苏州大学

学位级别：硕士

目的:建立快速、灵敏、简便的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定比格犬血浆中替诺福韦、拉米夫定和ACC007,并应用于ACC008复合片剂在比格犬体内药动学研究。方法:以甲苯磺丁脲为内标,血浆样品经甲醇沉淀,离心进样分析。流动相A相为10 m... 详细信息

目的:建立快速、灵敏、简便的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定比格犬血浆中替诺福韦、拉米夫定和ACC007,并应用于ACC008复合片剂在比格犬体内药动学研究。方法:以甲苯磺丁脲为内标,血浆样品经甲醇沉淀,离心进样分析。流动相A相为10 mmol·L-1醋酸铵含0.1%甲酸,B相为甲醇,以Venusil MP C18柱(150×2.1 mm,5μm)为分析柱,流速为0.4 m L·min-1,进样体积为10.0μL,色谱运行时间为8 min。采用Sciex API4000型三重四极杆串联质谱仪(Applied Biosystem MDS Sciex,Ontario,Canada),电喷雾电离源(Electrospray Ionization,ESI),以多反应离子监测(MRM)方式进行正离子监测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 288.1→176.2(替诺福韦),m/z 230.0→112.1(拉米夫定),m/z 326.1→298.3(ACC007),m/z 271.1→172.2(内标,甲苯磺丁脲)。结果:测定比格犬血浆中替诺福韦、拉米夫定及ACC007的线性范围均为20.00000 ng·m L-1,定量下限均为20.00 ng·m L-1;待测物日内和日间精密度(RSD)均小于10.38%,准确度(RE)在-4.13.37%之间,符合生物样品分析相关要求。色谱运行时间为8 min。本分析方法成功应用于雄性健康比格犬空腹口服ACC008复合片剂(含富马酸替诺福韦二吡呋酯300 mg,拉米夫定300 mg,ACC007 150 mg)后药动学研究。结论:本文建立了LC-MS/MS法测定比格犬血浆中替诺福韦、拉米夫定及ACC007,并进行了完整的方法学验证。本方法具有灵敏度高、选择性好、简便、易操作的特点,并成功应用于新型抗HIV复合片剂ACC008比格犬药动学研究。

关键词：液相色谱串联质谱法替诺福韦拉米夫定比格犬药动学

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城市湿地公园规划初探

城市湿地公园规划初探

作者：黄洁琼南京林业大学

学位级别：硕士

湿地是重要的国土资源和自然资源，基于其众多的生态功能而被形象地喻为“地球之肾”。城市湿地，作为湿地的一大类型，和城市的发展密切相关，它在为城市生产和生活提供多种资源的同时，还伴随着重要的生态服务和景观功能。随着我国城... 详细信息

湿地是重要的国土资源和自然资源，基于其众多的生态功能而被形象地喻为“地球之肾”。城市湿地，作为湿地的一大类型，和城市的发展密切相关，它在为城市生产和生活提供多种资源的同时，还伴随着重要的生态服务和景观功能。随着我国城市化进程的加快，城市各项建设和发展给城市湿地带来了一些“灾难”，如何更好地保护城市湿地，发挥城市湿地的综合效益，成为迫切需要解决的难题。基于城市湿地所处的特殊环境，它并不适合以湿地自然保护区的形式进行保护，在这样的背景下，城市湿地公园应运而生，它的出现在一定程度上解决了城市湿地保护、开发和利用这一难题，被认为是城市湿地保护的一种较好的模式。为了更好地促进城市湿地公园的健康发展，对其进行合理的规划显得至关重要，因此，对城市湿地公园规划展开深入的理论研究和实践探索具有十分重要的意义。本文研究的主要内容包括：通过解读湿地，对湿地，特别是城市湿地的定义、类型、特征和功能等进行了阐述;对城市湿地公园的概念、类型，以及其建设的功能和意义进行了详细的阐述，以期对城市湿地公园有个全方位的认识;通过对国内外一些城市湿地公园的介绍和分析，归纳了一些成功经验，并指出当前国内城市湿地公园发展过程中所存在的一些问题;结合相关理论，包括可持续发展理论、景观生态学理论、生态恢复理论、环境承载力理论、游憩学理论和社区理论对城市湿地公园规划进行了初步研究，并提出在规划过程中应当综合运用调查法、人均指标法、景观生态敏感度分析法等一些具体的方法，此外还对公园规划的目标和基本原则进行了阐述;在理论研究的基础上，论文结合杭州西溪湿地公园规划实例，对城市湿地公园规划的主要内容和方法展开了研究;论文在结尾部分，对今后我国城市湿地公园的发展提出了一些建议。通过本文研究，对我国城市湿地公园的发展进行阶段性总结，对城市湿地公园规划进行了初步探索，这些将对今后城市湿地公园规划提供理论指导。

关键词：湿地城市湿地城市湿地公园规划

腕踝针配合耳穴压豆在鼻内镜鼻窦手术病人围术期的应用效果

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全科护理 2023年第34期21卷 4839-4841页

作者：熊笑饶菊芳黄洁琼朱秀梅江西中医药大学附属医院 330006

目的:观察腕踝针配合耳穴压豆对鼻内镜鼻窦手术病人围术期的应用效果。方法:选取2022年5月—2023年5月在医院行鼻内镜手术的80例鼻窦炎病人为研究对象,按照随机数字表法将其分为对照组和观察组,每组40例。对照组病人行常规护理,观察组... 详细信息

目的:观察腕踝针配合耳穴压豆对鼻内镜鼻窦手术病人围术期的应用效果。方法:选取2022年5月—2023年5月在医院行鼻内镜手术的80例鼻窦炎病人为研究对象,按照随机数字表法将其分为对照组和观察组,每组40例。对照组病人行常规护理,观察组在对照组基础上行腕踝针配合耳穴压豆干预,连续干预7 d。比较两组术后不同时点疼痛程度、负性情绪、护理满意度、舒适度情况。结果:观察组术后24、48、72 h视觉模拟评分法(VAS)评分低于对照组(P<0.05);干预后两组焦虑自评量表(SAS)、抑郁自评量表(SDS)评分均降低,且观察组低于对照组(P<0.05);干预后观察组护理总满意度、舒适度高于对照组(P<0.05)。结论:腕踝针配合耳穴压豆可缓解鼻内镜鼻窦手术病人疼痛程度,改善负性情绪,提升临床护理满意度,提高病人舒适度。

关键词：腕踝针耳穴压豆鼻内镜手术鼻窦炎护理

农杆菌活体转化技术的优化与高抗草甘膦棉种质的创制

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农杆菌活体转化技术的优化与高抗草甘膦棉种质的创制

作者：黄洁琼浙江大学

学位级别：硕士

棉花是唯一可由种子生产纤维的农作物,棉花生产需要投入较多劳动力。由于劳动力的转移,我国的人工价格不断上涨,植棉的比较效益和经济效益下降,导致近年我国棉花生产的连年滑坡。我国的棉花生产仍以人工作业为主,其中棉田除草是植棉用... 详细信息

棉花是唯一可由种子生产纤维的农作物,棉花生产需要投入较多劳动力。由于劳动力的转移,我国的人工价格不断上涨,植棉的比较效益和经济效益下降,导致近年我国棉花生产的连年滑坡。我国的棉花生产仍以人工作业为主,其中棉田除草是植棉用工的主要内容之一,占植棉用工的1/3以上。草甘膦(Glyphosate)是一种典型的广谱性、内吸传导型灭生性除草剂,是杂草控制的首选除草剂。本研究将具有自主知识产权的抗草甘膦除草剂基因(EPSPS-G6)构建进植物表达载体,用农杆菌活体转化方法将目的基因转入陆地棉推广品种中棉所49,创制高抗草甘膦棉花种质系,分析其抗性表现及相关农艺性状,探讨其生产应用前景。主要研究结果如下：1、利用本实验室构建的表达载体pCAMBIA1300-EPSPS-G6,酶切获得目的基因EPSPS-G6.并与空载体pCAMBIA2301连接构建棉花高效表达载体——pCAMBIA2301-EPSPS-G6,去除原载体中的NPII筛选标记基因,将目的基因作为筛选标记。2、对本实验室创制的农杆菌活体转化方法进行优化。结果表明,含50mg/L乙酰丁香酮(acetosyringone,AS)的转化液可将阳性率提高至22.18%,是对照(9.72%)的2.28倍。此外,不同转化时间转化效率差异显著,其中开花当天中午12：00～14：00转化得到阳性率最高(22.18%),下午13：00～15：00次之(18.86%),上午8：00～10：00转化效率最低(11.29%)。3、采用优化的农杆菌活体转化方法,将EPsPS-G6基因导入到陆地棉推广品种——中棉所49,共收获转化种子14.3 kg,T0转化植株经20 mM草甘膦喷施,阳性率达22.18%。经PCR验证,共获得了35株含EPSPS-G6基且抗草甘膦的To转基因植株。4、T1转基因后代的抗性分离比例从1/4-3/4不等。对T1阳性植株进行自交,按单株收获,T2抗性稳定材料占19.8～32.1%,基本符合一对杂合基因分离的规律。5、田间草甘膦抗性水平和莽草酸含量结果表明,转EPSPS-G6基因棉花种质系可抗3倍以上的推荐浓度,其抗性水平明显优于美国抗草甘膦品种和本实验室创制的第一代抗草甘膦棉花种质系,其中EPSPSG6-501种质系抗草甘膦的能力最强。6、转EPSPS-G6基因棉花种质系籽棉产量、皮棉产量、衣分均与中棉所49近似;铃重、籽指略高于对照;株高与对照近似;果枝数略低于对照;单株铃数与对照一致。纤维品质检测结果表明,转EPSPS-G6基因棉花种质系的纤维长度和整齐度略优于对照;马克隆值与对照在同一品级且略好于对照;伸长率略低于对照;断裂比强度与对照相同。说明外源基因对于转基因棉花种质系的产量、农艺性状和纤维品质无明显影响。7、调查了金华地区的杂草发生情况与防控成本,为抗草甘膦棉花品种的应用提供依据。结果表明,金华地区棉田杂草以牛筋草、马齿苋和小飞蓬为主,化学除草可节省植棉除草用工开支约1000元/亩,抗草甘膦棉花品种的生产应用可取得显著的经济效益,具有广阔的生产应用前景。

关键词：棉花草甘膦 EPSPS-G6 农杆菌活体转化方法草甘膦抗性产量纤维品质