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敲除LTA4H基因的PK-15细胞系构建及其对口蹄疫病毒复制的影响

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微生物学报 2024年第3期64卷 733-744页

作者：王家丽蒲秀瑛杨帆邵文华黄梦瑶曹伟军郑海学张伟兰州理工大学生命科学与工程学院甘肃兰州730050 中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

【目的】利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建白三烯A4水解酶(leukotriene A4 hydrolase,LTA4H)基因缺失的猪肾细胞系(porcine kidney-15,PK-15),探究LTA4H对口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)复制的影响,为开展LTA4H功能研究及调控病毒复制机制研究提供理论依据。【方法】设计2条针对猪LTA4H基因的引导RNA(small guide RNA,sgRNA),分别构建至载体pX459-puro-MCS中;将CRISPR重组质粒转染PK-15细胞,用嘌呤霉素(puromycin)抗生素筛选,并通过有限稀释法筛选单克隆细胞,之后通过Western blotting和测序检测LTA4H基因的敲除,获得LTA4H基因功能缺失细胞系。使用Western blotting、RT-qPCR及病毒滴度测定等方法检测敲除LTA4H基因后对FMDV复制及相关蛋白的表达情况。【结果】获得的单克隆敲除细胞系与野生型细胞相比,能够显著抑制FMDV复制。【结论】本研究成功构建了LTA4H基因敲除的PK-15细胞系,证明LTA4H对FMDV的复制具有促进作用,研究结果为后续LTA4H功能研究提供理论依据。

关键词： CRISPR/Cas9 白三烯A4水解酶细胞系口蹄疫病毒

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KLHL家族蛋白的研究进展

中国兽医科学 2024年

作者：陈创伟张伟吕岳芹黄梦瑶孙琬珈周嘉慧李敏曹伟军郑海学杨帆中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心

本文从Kelch-like（KLHL）家族蛋白的结构特点出发，围绕其在天然免疫、肿瘤等疾病方面的作用展开叙述，旨在为KLHL家族蛋白功能的研究和肿瘤等疾病的预防和治疗提供思路。

关键词： KLHL 结构与功能天然免疫疾病肿瘤

基于蒙特卡洛与牛顿-拉夫逊迭代的钻锚机器人机械臂逆运动学求解方法

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煤炭学报 2024年

作者：雷孟宇张旭辉杨文娟万继成董征杜昱阳陈鑫黄梦瑶田琛辉陕西省矿山机电装备智能监测重点实验室西安科技大学机械工程学院

钻锚机器人机械臂逆运动学精确求解是实现煤矿巷道自动支护的关键，针对钻锚机器人机械臂这种非传统结构机械臂逆运动学求解方法存在的精度低、实时性差和容易陷入局部最优难以收敛的难题，提出了一种融合蒙特卡洛和牛顿-拉夫逊迭代的... 详细信息

钻锚机器人机械臂逆运动学精确求解是实现煤矿巷道自动支护的关键，针对钻锚机器人机械臂这种非传统结构机械臂逆运动学求解方法存在的精度低、实时性差和容易陷入局部最优难以收敛的难题，提出了一种融合蒙特卡洛和牛顿-拉夫逊迭代的非传统结构机械臂逆运动学求解方法。首先根据钻锚机器人机械臂结构构建运动学模型，建立各个关节坐标系，利用坐标系转换关系实现机械臂正运动学求解；其次，利用基于蒙特卡洛随机采样方法计算机械臂运动空间，设定步长将运动空间轮廓外接立方体分割为若干个小立方体，构建小立方体内空间点的三维坐标和对应关节变量与小立方体的映射关系，根据给定的目标空间点对应的转换矩阵，通过索引函数确定其对应的小立方体，计算立方体内与目标空间点误差最小的点，将其对应的关节变量值作为初始值；引入牛顿-拉夫逊迭代方法，利用多元函数迭代公式确定各关节变量的变化量，循环往复实现非传统结构机械臂逆运动学的求解。仿真实验结果表明，与基于随机初始值的牛顿-拉夫逊迭代方法和粒子群优化算法相比，所提方法计算结果对应的平均角度误差分别降低了64.98%和57.34%，平均耗时分别降低了35.90%和22.33%，求解精度和时效性均有所改善，验证了所提融合蒙特卡洛随机采样与牛顿-拉夫逊迭代方法针对非传统结构机械臂逆运动学求解的可行性和有效性。

关键词：运动空间蒙特卡洛牛顿-拉夫逊迭代运动学分析索引函数关节变量

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基于改进最佳缝合线的矿井图像拼接方法

工矿自动化 2024年第4期50卷 9-17页

作者：张旭辉王悦杨文娟陈鑫张超黄梦瑶刘彦徽杨骏豪西安科技大学机械工程学院陕西西安710054 西安科技大学陕西省矿山机电装备智能检测与控制重点实验室陕西西安710054

煤矿井下掘进工作面高粉尘、低照度的恶劣环境导致图像信噪比较低,且有效特征点数量严重减少,处理后的图像存在较大色差和噪声,在使用最佳缝合线算法进行图像拼接时出现细节错位、缝合线处过渡不自然或拼接痕迹明显的现象。针对上述问题... 详细信息

煤矿井下掘进工作面高粉尘、低照度的恶劣环境导致图像信噪比较低,且有效特征点数量严重减少,处理后的图像存在较大色差和噪声,在使用最佳缝合线算法进行图像拼接时出现细节错位、缝合线处过渡不自然或拼接痕迹明显的现象。针对上述问题,提出了一种基于改进最佳缝合线的矿井图像拼接方法。首先,对原始图像进行HSV空间变换,采用改进的Retinex算法对亮度分量进行增强,利用双边滤波函数代替中心环绕函数,以解决亮度差异大处产生的光晕问题,通过增强算法有效提高特征点提取数量。然后,采用SIFT算法提取特征点,并以余弦距离作为匹配度指标;引入像素余弦相似度作为约束项,并采用形态学操作对颜色差异强度进行改进,利用动态规划法对最佳缝合线进行搜索,以避免图像拼接处的错位现象。最后,结合渐入渐出融合算法,使图像过渡平滑,实现煤矿井下掘进工作面的图像融合。模拟井下实际工况环境进行实验验证,结果表明:基于改进最佳缝合线的矿井图像拼接方法与传统最佳缝合线算法相比,避免了颜色差异和噪声引起的错位拼接现象,拼接缝处的图像过渡更加自然,避免了“鬼影”和明显拼接缝的产生,且图像平均梯度提高2.38%,拼接时间提高32.5%,使得融合区域更加平滑自然,提高了拼接质量。

关键词：掘进工作面图像拼接图像增强最佳缝合线 Retinex算法改进能量函数像素余弦相似度

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Tollip敲除猪肾细胞系的构建

畜牧兽医学报 2024年第4期55卷 1810-1818页

作者：王家丽杨帆邵文华黄梦瑶曹伟军蒲秀瑛张伟郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730000 兰州理工大学生命科学与工程学院兰州730050 甘肃省病原生物学基础学科研究中心兰州730046

旨在探究Toll作用蛋白(toll-interacting protein, Tollip)对口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)增殖的影响,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Tollip基因缺失的猪肾细胞系(porcine kidney cell line, PK-15),并通过PCR测序和Western blot确认敲除效果,然后利用CCK-8试剂盒测定Tollip缺失后细胞活力变化,确认敲除细胞与野生细胞无显著差异,用FMDV感染敲除细胞后,采用Western blot、间接免疫荧光、实时荧光定量和病毒滴度测定等方法测定病毒在敲除细胞系中复制情况。结果显示:感染FMDV后,敲除细胞与野生细胞相比,显著促进了病毒的复制。综上,在PK-15细胞上,成功构建Tollip缺失细胞系,且试验表明Tollip的缺失有助于FMDV的复制。研究结果为后续Tollip功能研究及抗病毒机制研究提供理论依据。

关键词： CRISPR/Cas9 Tollip基因细胞系口蹄疫病毒

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口蹄疫病毒非结构蛋白3A的研究进展

中国兽医科学 2024年第4期54卷 441-445页

作者：王家丽杨帆邵文华黄梦瑶曹伟军张伟郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046 兰州理工大学生命科学与工程学院甘肃兰州730050 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的一种最具影响、最难控制的动物疫病之一,严重危害着偶蹄动物的健康。FMDV属于单股正链RNA病毒,由结构蛋白和非结构蛋白组成。本文系统总结了口蹄疫病毒非结构蛋白3A的结构和功能特点,有助于进一... 详细信息

口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的一种最具影响、最难控制的动物疫病之一,严重危害着偶蹄动物的健康。FMDV属于单股正链RNA病毒,由结构蛋白和非结构蛋白组成。本文系统总结了口蹄疫病毒非结构蛋白3A的结构和功能特点,有助于进一步研究FMDV的感染机制并为FMD防控提供参考。

关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白 3A 结构功能

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制药企业研发质量管理体系存在的问题及对策

化工管理 2024年第12期 14-17页

作者：陈云霞张贵芹黄梦瑶山东鲁抗医药股份有限公司山东济宁272021

近年来,药品研发发展迅速,为保证药品研发过程的科学性、规范性、真实性,从而最大程度降低药品上市销售后的风险,研发质量管理体系的完善尤为重要。文章主要分析了制药企业研发质量体系的现状以及改善措施,对企业制造安全有效、质量可... 详细信息

近年来,药品研发发展迅速,为保证药品研发过程的科学性、规范性、真实性,从而最大程度降低药品上市销售后的风险,研发质量管理体系的完善尤为重要。文章主要分析了制药企业研发质量体系的现状以及改善措施,对企业制造安全有效、质量可控的药品、保障病患者健康、造福人类具有深远意义。

关键词：药品研发质量管理体系制药企业

过表达JMJD6基因的293T细胞系的构建及对水疱性口炎病毒增殖效率的评价

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中国兽医科学 2024年第5期54卷 569-576页

作者：黄梦瑶杨帆杨洋邵文华王家丽吕岳芹赵晓义陈治彤曹伟军张伟郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

为提高水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)在细胞中的增殖效率,本研究利用慢病毒包装系统构建Jumonji C结构域蛋白6(Jumonji domain-containing protein 6,JMJD6)过表达的HEK-293T/JMJD6细胞系,分析VSV在HEK-293T/JMJD6细胞系与HEK-293T细胞中的复制差异。首先以JMJD6基因为目标,构建重组质粒pLV-puro-3×Flag-JMJD6,并与辅助质粒pMD2.G和psPAX2共转染至HEK-293T细胞进行慢病毒包装。将包装好的慢病毒感染HEK-293T细胞并通过嘌呤霉素筛选获得过表达JMJD6基因的阳性细胞。利用Western-blot、间接免疫荧光试验、流式细胞术和蚀斑试验检测VSV在HEK-293T/JMJD6细胞系中的复制能力。结果显示,在HEK-293T/JMJD6细胞系中,VSV的复制能力显著增强。实时荧光定量检测VSV感染的HEK-293T/JMJD6细胞系和野生型HEK-293T细胞中干扰素下游基因的表达,结果显示HEK-293T/JMJD6细胞系抑制VSV诱导的Ⅰ型干扰素下游基因的产生。总之,本研究构建的HEK-293T/JMJD6细胞系能显著促进VSV的增殖并抑制Ⅰ型干扰素信号通路,为VSV疫苗候选细胞株的筛选奠定了基础。

关键词： JMJD6 水疱性口炎病毒慢病毒包装过表达细胞系干扰素

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旧年

青年文学家 2024年第13期 48-48页

作者：黄梦瑶西安外事学院

年刚过完，却又像是已过去许久了。我不禁回想起来，只觉得这个年不知为何过得极快，开始与结束都是那么仓促。感觉不到一点儿家人团圆的喜庆氛围，品不出一点儿年的韵味和意境。正月那几天，亲戚好友匆匆来去，将礼品和吉祥话一同搁下...

年刚过完，却又像是已过去许久了。我不禁回想起来，只觉得这个年不知为何过得极快，开始与结束都是那么仓促。感觉不到一点儿家人团圆的喜庆氛围，品不出一点儿年的韵味和意境。正月那几天，亲戚好友匆匆来去，将礼品和吉祥话一同搁下。外面看不见烟花，也听不见炮声，只有红灯笼仍像往常一样被挂满了树梢，高高地、孤零零地挂着。没有一点儿过年应有的热闹，没有一点儿过年应有的甜蜜感。

关键词：