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过表达LncRNAMEG3通过促进铁死亡增强肝癌细胞对顺铂的化疗敏感性

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南方医科大学学报 2024年第1期44卷 17-24页

作者：朱权黄柏胜位磊艳罗奇志中南大学基础医学院免疫学系湖南长沙410008 中南大学基础医学院生理学系湖南长沙410008

目的探讨过表达LncRNAMEG3对肝癌细胞HepG2和LM3增殖、迁移和顺铂化疗敏感性的影响及机制。方法生物信息学在线网站分析MEG3在健康人群与肝细胞癌(HCC)患者的表达情况;将HepG2和LM3细胞各自分成2组,NC组:转染pcDNA3.1(+)空载体的细胞;ME... 详细信息

目的探讨过表达LncRNAMEG3对肝癌细胞HepG2和LM3增殖、迁移和顺铂化疗敏感性的影响及机制。方法生物信息学在线网站分析MEG3在健康人群与肝细胞癌(HCC)患者的表达情况;将HepG2和LM3细胞各自分成2组,NC组:转染pcDNA3.1(+)空载体的细胞;MEG3-OE组:转染pcDNA3.1(+)-MEG3质粒的细胞。另外在检测活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)实验中,将上述两组细胞分别各自给予顺铂(DDP)或铁死亡抑制剂Fer-1处理,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中MEG3的表达;CCK8和划痕实验检测肝癌细胞的增殖和迁移;另外采用CCK8实验检测DDP对肝癌细胞的抑制率;活性氧荧光探针(DCFH-DA)检测肝癌细胞中ROS的表达,MDA试剂盒检测肝癌细胞中MDA的浓度;Westernblotting实验检测铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和铁蛋白重链1(FTH1)的蛋白表达水平。结果MEG3在肝癌细胞中的表达显著低于LO2细胞,与生物信息学分析结果一致(P<0.05);与阴性对照组相比,MEG3-OE组肝癌细胞增殖迁移能力降低(P<0.05)、DDP的抑制率增高(P<0.05)、ROS水平升高、MDA表达水平升高(P<0.05);MEG3-OE组肝癌细胞GPX4和FTH1蛋白表达均显著降低。结论肝癌细胞中LncRNA-MEG3表达降低,过表达MEG3可抑制肝癌细胞增殖与迁移,增强DDP的化疗敏感性,其机制与促进肝癌细胞铁死亡有关。

关键词：肝细胞癌 LncRNAMEG3 顺铂化疗敏感性铁死亡

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MICA*008基因与人巨细胞病毒感染的相关性分析

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南方医科大学学报 2007年第4期27卷 509-511页

作者：黄柏胜罗奇志梅冰余平中南大学湘雅医学院生理学系湖南长沙410078 中南大学湘雅医学院免疫学教研室湖南长沙410078

目的研究慢性粒细胞性白血病（CGL）MICA^＊008基因与HCMV感染的相关性。方法应用PCR／SSP方法分别检测86例慢性粒细胞性白血病患者和81例无血缘关系的随机健康个体的MICA^＊008基因。同时用ELISA的方法分别检测随机健康个体和慢性粒细... 详细信息

目的研究慢性粒细胞性白血病（CGL）MICA^＊008基因与HCMV感染的相关性。方法应用PCR／SSP方法分别检测86例慢性粒细胞性白血病患者和81例无血缘关系的随机健康个体的MICA^＊008基因。同时用ELISA的方法分别检测随机健康个体和慢性粒细胞性白血病患者接受骨髓移植手术前、后外周血HCMV-IgM抗体。结果①CGL患者组MICA^＊008基因频率（22．2％）比对照组（34．3％）低（Х^2=4．98，P〈0．05）；②MICA^＊008基因阴性个体的HCMV感染率高于阳性个体的HCMV感染率fP〈0．05），MICA^＊008基因与HCMV感染关系呈中度相关（C=0．5829．0．6142）。结论MICA^＊008基因阳性个体对HCMV不易感，阴性个体对HCMV易感，即MICA^＊008基因与HCMV负相关。

关键词： MICA基因人巨细胞病毒慢性粒细胞性白血病

shRNA-PAX6慢病毒载体构建及其对胶质瘤U251细胞增殖的影响

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南方医科大学学报 2017年第12期37卷 1603-1608页

作者：廖晓红尹蔚兰王芳邬力祥黄柏胜中南大学湘雅医学院生理学系湖南长沙410078

目的构建shRNA-PAX6慢病毒载体并观察其对胶质瘤U251细胞增殖的影响。方法根据文献报道的PAX6靶点序列,设计两条PAX6基因的si RNA靶点干扰序列,引物退火形成带粘性末端的双链,与经BamH I、EcoR I双酶切后线性化的慢病毒载体进行连接、转... 详细信息

目的构建shRNA-PAX6慢病毒载体并观察其对胶质瘤U251细胞增殖的影响。方法根据文献报道的PAX6靶点序列,设计两条PAX6基因的si RNA靶点干扰序列,引物退火形成带粘性末端的双链,与经BamH I、EcoR I双酶切后线性化的慢病毒载体进行连接、转化,构建shRNA-PAX6慢病毒重组载体,再经菌落PCR及测序鉴定重组载体;在293T细胞中包装病毒,将包装后的shRNA-PAX6慢病毒重组载体感染U251细胞。Real-time PCR检测PAX6 mRNA的表达水平,Western blot检测PAX6蛋白的表达,MTT法检测U251细胞增殖。结果慢病毒载体p LKD-CMV-G&NR-U6-shRNA经双酶切后可见线性化的8208 bp大片段,菌落PCR及测序鉴定证实shRNA-PAX6慢病毒重组载体构建成功,构建的shRNA-PAX6慢病毒载体在293T细胞完成包装,测得慢病毒滴度为6.73×10~8TU/m L;Real-time PCR结果显示,沉默PAX6的表达可见U251细胞PAX6 mRNA表达水平明显低于正常对照组及慢病毒空载体组(P<0.05);Western blot结果显示,PAX6蛋白表达亦明显低于正常对照组及慢病毒空载体组(P<0.05);MTT结果显示,与正常对照组及慢病毒空载体组细胞比较,感染shRNA-PAX6慢病毒重组载体组的细胞,细胞增殖能力明显增强(P<0.05)。结论成功构建人PAX6基因的shRNA-PAX6慢病毒重组载体,沉默PAX6基因的表达,U251细胞的增殖能力增强。

关键词： PAX6基因胶质瘤细胞细胞增殖 RNA干扰慢病毒载体

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来自生活的数学应用题

中学生数理化（教与学） 2006年第9期 28-29页

作者：黄柏胜江西丰城市梅林中学

应用性问题大多来源于生活,涉及面广,题型比较灵活.《数学课程标准》强调从学生已有的生活经验出发,让学生亲身经历将实际问题抽象成数学模型来解决并应用的过程,进而使学生在获得对数学理解的同时,在思维能力、情感态度与价值观等多方... 详细信息

应用性问题大多来源于生活,涉及面广,题型比较灵活.《数学课程标准》强调从学生已有的生活经验出发,让学生亲身经历将实际问题抽象成数学模型来解决并应用的过程,进而使学生在获得对数学理解的同时,在思维能力、情感态度与价值观等多方面得到进步和发展.

关键词：态度学生学校食堂应用题问题数学情感生活

低浓度凝血酶预处理对星形胶质细胞氧糖剥夺损伤的影响

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中南大学学报（医学版） 2007年第5期32卷 845-849页

作者：罗小玲邬力祥刘发益黄柏胜贺芳中南大学湘雅医学院生理学系

目的:研究低浓度凝血酶(TB)预处理对培养的鼠脑星形胶质细胞(As)在氧糖剥夺(OGD)诱导损伤后的影响。方法:原代培养的大鼠大脑皮层AS,预先用不同低浓度(0.005～5.000kU/L)的TB处理(TB预处理,TPC),观察在缺糖和缺氧(氧糖剥夺)培养状态下... 详细信息

目的:研究低浓度凝血酶(TB)预处理对培养的鼠脑星形胶质细胞(As)在氧糖剥夺(OGD)诱导损伤后的影响。方法:原代培养的大鼠大脑皮层AS,预先用不同低浓度(0.005～5.000kU/L)的TB处理(TB预处理,TPC),观察在缺糖和缺氧(氧糖剥夺)培养状态下细胞的功能状态和损伤情况。以四甲基偶氮唑盐(MTT)还原试验检测细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)漏出率作为细胞损伤指标,流式细胞术检测细胞凋亡发生率,[3H]-谷氨酸摄取法测定As对谷氨酸(Glu)摄取能力的变化。结果:OGD引起细胞活力下降,LDH漏出率增高,OGD诱发细胞凋亡,降低As对Glu的摄取,上述指标与正常对照组相比均具有统计学意义(P(0.01);而经低浓度TB预处理后,OGD损伤造成的LDH漏出率较低,细胞凋亡发生率降低,同时MTT值提高,As对Glu的摄取也增高,与OGD组比较有统计学意义(P<0.05),其中最佳TB效应剂量为0.10kU/L。结论:低浓度TB预处理的As,可增强在OGD环境下的损伤耐受能力,具有细胞保护作用。

关键词：星形胶质细胞凝血酶氧糖剥夺谷氨酸摄取

LncRNA MEG3通过抑制HIF1α的表达降低胶质瘤U251细胞的增殖与侵袭能力

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南方医科大学学报 2021年第1期41卷 141-145页

作者：罗奇志张帆李威王芳邬力祥黄柏胜中南大学基础医学院免疫学系湖南长沙410008 中南大学基础医学院生理学系湖南长沙410008

目的探讨lncRNAMEG3过表达通过调控HIF1α对胶质瘤U251细胞增殖和侵袭的影响。方法采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)法检测人胚脑胶质细胞(HFGC)和胶质瘤U251细胞lncRNA MEG3和HIF1α的表达,HIF1α蛋白的表达则采用Western blot法检测;将U... 详细信息

目的探讨lncRNAMEG3过表达通过调控HIF1α对胶质瘤U251细胞增殖和侵袭的影响。方法采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)法检测人胚脑胶质细胞(HFGC)和胶质瘤U251细胞lncRNA MEG3和HIF1α的表达,HIF1α蛋白的表达则采用Western blot法检测;将U251细胞分为3组,6孔/组。Con组:正常培养的U251细胞;NC组:采用脂质体lipofectamine2000将pcDNA3.1空载体转染至U251细胞;pcDNA3.1-MEG3组:采用脂质体lipofectamine2000将pcDNA3.1-MEG3载体转染至U251细胞。另外,对上述3组细胞进行缺氧处理12 h。分别通过qRT-PCR法或Western blot法检测各组细胞HIF1α的表达,采用MTT法检测各组U251细胞增殖情况,Transwell侵袭实验检测各组U251细胞的侵袭。结果U251细胞中lncRNAMEG3的表达明显低于HFGC(P<0.05),而HIF1αmRNA和蛋白的表达均高于HFGC(P<0.05);U251细胞中,MEG3过表达组HIF1αmRNA和蛋白的表达均降低(P<0.05),而且在缺氧12 h后HIF1α蛋白的表达亦降低(P<0.05)。过表达MEG3导致细胞增殖及侵袭力下降(P<0.05)。结论lncRNAMEG3通过调控HIF1α的表达抑制U251细胞的增殖和侵袭,并可能为胶质瘤的临床治疗提供潜在的分子靶点。

关键词：胶质瘤长链非编码RNAMEG3 缺氧诱导因子1α 细胞增殖侵袭

Mettl9基因过表达促进氧糖剥夺大鼠离体星形胶质细胞损伤

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中国病理生理杂志 2021年第3期37卷 518-523页

作者：罗奇志韩仰李威张帆邬力祥黄柏胜中南大学基础医学院免疫学系湖南长沙410008 中南大学基础医学院生理学系湖南长沙410008

目的:探讨甲基转移酶样蛋白9(Mettl9)基因过表达对氧糖剥夺(OGD)大鼠离体星形胶质细胞损伤的影响及机制。方法:体外原代培养SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞,建立OGD诱导的星形胶质细胞损伤模型。实验分为正常对照(Con)组、慢病毒空载体转染... 详细信息

目的:探讨甲基转移酶样蛋白9(Mettl9)基因过表达对氧糖剥夺(OGD)大鼠离体星形胶质细胞损伤的影响及机制。方法:体外原代培养SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞,建立OGD诱导的星形胶质细胞损伤模型。实验分为正常对照(Con)组、慢病毒空载体转染(NC)组、慢病毒重组载体pLenti6.3-Mettl9转染组(Mettl9组)、正常对照+OGD处理(Con+OGD)组、慢病毒空载体转染+OGD处理(NC+OGD)组及慢病毒重组载体pLenti6.3-Mettl9+OGD处理(Mettl9+OGD)组。慢病毒载体pLenti6.3-Mettl9转染后48 h,收集细胞,采用RT-qPCR及Western blot法检测Mettl9的表达以验证转染效率。采用MTT法检测各组细胞活力;以乳酸脱氢酶(LDH)漏出率作为细胞损伤指标;RT-qPCR法检测Bcl-2和Bax的mRNA表达;Western blot法检测Bcl-2和Bax的蛋白表达。结果:慢病毒载体pLenti6.3-Mettl9转染星形胶质细胞后,RT-qPCR及Western blot检测结果显示Mettl9的mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05),获得了Mettl9基因过表达的星形胶质细胞。与Con组比较,Mettl9组星形胶质细胞的LDH漏出率升高,细胞活力下降(P<0.05),促凋亡蛋白Bax的mRNA及蛋白表达升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2的mRNA及蛋白表达降低(P<0.05)。与Con+OGD组比较,Mettl9+OGD组星形胶质细胞的LDH漏出率显著升高,细胞活力显著下降(P<0.05),Bax的mRNA及蛋白表达显著升高,而Bcl-2的mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论:Mettl9基因过表达促进OGD大鼠离体星形胶质细胞损伤,其机制可能与调控Bcl-2/Bax信号通路有关。

关键词：甲基转移酶样蛋白9 氧糖剥夺星形胶质细胞细胞活力细胞凋亡

山楂酸预处理对皮层神经元氧糖剥夺损伤的影响

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南方医科大学学报 2013年第3期33卷 322-325,331页

作者：黄柏胜罗洁韩仰李思敏刘发益邬力祥中南大学湘雅医学院生理学系湖南长沙410078 宜昌市第二人民医院湖北宜昌443000

目的探讨山楂酸预处理对大鼠大脑皮层神经元氧糖剥夺（oxygen-glucose deprivation,OGD）损伤的影响。方法原代培养SD大鼠15~17 d胎鼠皮层神经元,预先用不同浓度的山楂酸（0.1、1、10μmol/L）预处理,观察在OGD培养状态下细胞的功能状... 详细信息

目的探讨山楂酸预处理对大鼠大脑皮层神经元氧糖剥夺（oxygen-glucose deprivation,OGD）损伤的影响。方法原代培养SD大鼠15~17 d胎鼠皮层神经元,预先用不同浓度的山楂酸（0.1、1、10μmol/L）预处理,观察在OGD培养状态下细胞的功能状态和损伤情况。以四甲基偶氮唑盐还原试验检测细胞活力,乳酸脱氢酶（LDH）漏出率作为细胞损伤指标,以Western blot检测凋亡相关蛋白Bax的表达。结果 OGD引起细胞活力下降,LDH漏出率增高,与正常组细胞相比均有非常显著意义;两组细胞经不同浓度山楂酸（0.1、1、10μmol/L）预处理后,分别与未经山楂酸预处理的细胞比较结果显示：OGD组细胞LDH漏出率在山楂酸浓度为1、10μmol/L时降低,而正常组细胞LDH漏出率在山楂酸浓度为10μmol/L明显降低;两组细胞的存活率均在给予山楂酸预处理浓度为1、10μmol/L时明显升高。Western blot结果显示凋亡相关蛋白Bax的表达随着山楂酸的浓度增加而下降,以山楂酸浓度为10μmol/L时更明显。结论山楂酸对体外培养的大鼠大脑皮层神经元OGD损伤有保护作用,可能与凋亡相关蛋白Bax表达降低有关。

关键词：山楂酸神经元原代培养氧糖剥夺

凝血酶对缺氧/复氧星形胶质细胞的毒性作用及其与iNOS的关系

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中南大学学报（医学版） 2007年第5期32卷 831-835页

作者：杨丽娟邬力祥刘发益周烜贺芳张琰黄柏胜中南大学生理学系

目的:观察凝血酶(thrombin,Tm)对缺氧/复氧(H/R)状态下星形胶质细胞(astrocyte,As)功能状态的影响,并探讨其作用机制。方法:将原代培养的鼠脑皮层As分为:正常对照组、Tm对照组、H/R组、Tm+H/R组、水蛭素(HR)对照组、Tm+HR+H/R组,不同方... 详细信息

目的:观察凝血酶(thrombin,Tm)对缺氧/复氧(H/R)状态下星形胶质细胞(astrocyte,As)功能状态的影响,并探讨其作用机制。方法:将原代培养的鼠脑皮层As分为:正常对照组、Tm对照组、H/R组、Tm+H/R组、水蛭素(HR)对照组、Tm+HR+H/R组,不同方法处理后的As采用生化方法测定上清NO含量,MTT比色法测定细胞活性,流式细胞仪测定细胞凋亡率,RT-PCR和免疫细胞化学染色法检测iNOS mRNA和蛋白的变化。结果:H/R损伤使As NO产量增加,细胞活性下降,凋亡率升高。10kU/L的Tm可刺激H/R状态下As产生NO增加、细胞活性下降、凋亡率升高(与H/R组相比P<0.05);预先加入等量HR可抑制Tm的作用。RT-PCR和免疫细胞化学染色显示,H/R损伤激活iNOS表达,Tm刺激使H/R As iNOS表达增加,预先加入HR可抑制Tm诱导的iNOS表达。结论:Tm通过与其受体结合,上调iNOS表达,使NO产生增多,可能是其对H/R状态下As毒性作用的机制之一。

关键词：凝血酶星形胶质细胞缺氧/复氧水蛭素