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作者：黄春正吉林大学

学位级别：硕士

链球菌(Streptococcus spp)是一类危害严重的人畜共患病原菌。目前,抗生素仍是治疗链球菌感染的首选药物,如:β-内酰胺类(以青霉素为代表)、大环内酯类、氟喹诺酮类抗生素等。但世界各地包括中国、东南亚、北欧和美洲等多个国家和地区... 详细信息

链球菌(Streptococcus spp)是一类危害严重的人畜共患病原菌。目前,抗生素仍是治疗链球菌感染的首选药物,如:β-内酰胺类(以青霉素为代表)、大环内酯类、氟喹诺酮类抗生素等。但世界各地包括中国、东南亚、北欧和美洲等多个国家和地区均有链球菌耐药表型和耐药基因(mef A、erm B、Tet M等)的报道。再加上新候选抗生素的减少迫使人们研发新型抗菌制剂。裂解酶是一种由噬菌体编码的水解酶,可特异性切割细菌细胞壁肽聚糖上不同的化学键,破坏细胞壁完整性,使细菌在渗透压的作用下发生崩解。该类酶可以在体外表达,具有易于获取、易于改造、起效快、安全、不易使细菌产生抗性的特点。另外,链球菌细胞壁肽聚糖中含有相似的交联桥结构,这使得链球菌噬菌体裂解酶较其它种属裂解酶相比天然具有更宽的裂解谱,可裂解属内多种链球菌。因此,裂解酶有望成为抗链球菌感染的新型抗菌制剂。在本研究中,以马链球菌属临床分离株3518为宿主菌,在其全基因组序列中挖掘到一个具有良好裂解活性的前噬菌体裂解酶,将其命名为Lys LF1。将Lys LF1的氨基酸序列上传至生物信息学在线分析网站NCBI,进行同源性比对分析。分析结果表明,Lys LF1与其它已被研究过功能的链球菌裂解酶的同源性最高为21.88%,表明Lys LF1为一个新的链球菌属裂解酶;基本生物学特性测定结果表明,Lys LF1具有较宽的宿主范围,可裂解受试菌株中的马链球菌、猪链球菌和解没食子酸链球菌,细菌减少比率在30%～99%;p H稳定性测定结果表明,Lys LF1具有较强的耐酸碱能力,在4～8 p H范围内保持良好的杀菌活性可裂解约70%～99%的活菌;温度稳定性结果表明,Lys LF1对温度较为敏感,温度高于40°C时其活性完全丧失;Na Cl稳定性结果显示,高浓度Na Cl会影响Lys LF1活性,使用200 m M Na Cl,会使其杀菌量减少1.24×10CFU/m L;EDTA稳定性结果显示,金属离子是该酶发挥活性所非必须的。体外裂解实验结果进一步表明,Lys LF1具有良好的杀菌活性。100μg/m L的Lys LF1可使活菌数下降约2个Lg单位(起始菌量为10CFU/m L),杀死约99%的活菌。以上结果表明,Lys LF1具有良好的应用前景。随后,通过生物信息学在线分析工具Phyre预测了Lys LF1各结构域的3D结构和关键催化作用位点,并使用一步法将预测的关键催化位点逐一突变为丙氨酸,通过比较各突变体蛋白(N11A、C26A、H91A、G108A、G158A、D241A、D276A、D337A)与Native Lys LF1的杀菌活性,确定其关键催化位点。实验结果表明,C26A、G108A的杀菌活性较Native Lys LF1相比,分别下降了81.99%,61.61%。从而确定了C26和G108是Lys LF1发挥裂解活性的关键氨基酸作用位点;通过构建截短体蛋白(Lys LF1A(1～170 aa)、Lys LF1B(1～360 aa)、Lys LF1C(330～445 aa))采用体外杀菌活性实验确定各结构域的裂解活性;结果表明,Lys LF1A(1～170 aa)、Lys LF1B(1～360 aa)具有裂解活性,Lys LF1C(330～445aa)不具有裂解活性;通过构建融合蛋白(Lys LF1A-EGFP、Lys LF1B-EGFP、EGFP-Lys LF1C),使用激光共聚焦显微镜确定各结构域的结合活性。结果表明,Lys LF1B-EGFP、EGFP-Lys LF1C具有结合活性,Lys LF1A-EGFP不具有结合活性。从而确定了Lys LF1的结构形式为双催化域和一个结合域,发挥结合活性的结构域与SH3相似,GH25结构域也与结合有关,发挥催化活性的关键结构域与CHAP相似。以上结果,为日后Lys LF1的人工设计与改造奠定了基础。最后,通过使用宿主菌马链球菌临床分离株3518建立小鼠肺炎感染模型,使用不同浓度的Lys LF1治疗小鼠,评价Lys LF1的体内抗菌效果。结果显示,200μg/只和400μg/只剂量的Lys LF1均有提高小鼠存活率和减慢小鼠死亡的效果。200μg/只剂量的Lys LF1可保护37.5%的小鼠免受死亡,400μg/只剂量的Lys LF1可使小鼠存活率提高到75%。小鼠肺部细菌载量检测结果表明,400μg/只剂量的Lys LF1对菌株3518有清除作用。肺部病理组织学切片结果显示,与未治疗组相比,400μg/只剂量的Lys LF1可缓解小鼠肺部病理组织学损伤。在12 h和48 h的肺间质厚度、肺泡内出血、炎性细胞浸润等情况均有所减轻。综上所述,本研究发现并成功获得一个具有良好体内外抗菌活性的新链球菌噬菌体裂解酶,该酶在治疗链球菌感染中具有良好的应用潜力,为丰富链球菌细菌裂解酶酶库和新型抗菌制剂的研发奠定基础。

关键词：链球菌裂解酶新型抗菌制剂结构域小鼠肺炎模型

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治理视角下的越南新农村建设研究 ——以11个国家重点指导乡为例

治理视角下的越南新农村建设研究 ——以11个国家重点指导乡为例

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作者：黄春正广西大学

学位级别：硕士

农村、农民、农业在越南发展进程中始终是一个具有重要意义的问题。越南农村、农业领域虽然已经过几次的改革创新,得到了一些重要结果,但从总体上来看,农村、农业还处于落后程度、农民的收入和生活水平遇到很多困难。导致“三农”领域... 详细信息

农村、农民、农业在越南发展进程中始终是一个具有重要意义的问题。越南农村、农业领域虽然已经过几次的改革创新,得到了一些重要结果,但从总体上来看,农村、农业还处于落后程度、农民的收入和生活水平遇到很多困难。导致“三农”领域中存在的主要原因是国家的综合潜力和发展投资资金有限;农村社会事务管理模式还单一;农民的自主自助习惯,生产能力与技术不高;农村、农业经济发展中的合作性、组织性和市场化偏低;缺乏合理有效的机制来发挥社会经济组织、政府以外的投资资源共同参加农村农业建设等。越南的农村、农民、农业如何发展,关键在于要探索、创建一套适合越南的特殊条件、具有优越性的农村农业发展战略与模式。当前,越南再一次对农村、农业管理的革新、提出并推动实施新农村建设政策。新农村建设的主要内容是全面、有效地加快建设农村,以新的管理机制、新的措施及观念为基础。治理理论现在成为世界各国在政治发展和行政改革领域中的理论基础。该理论提出社会公共事务管理的新型模式,强调治理过程中的多元共治、多元化投资、建设政府与社会经济组织之间的互动合作关系,发挥公民社会的作用等内容。越南新农村建设中所预期的建设运行机制与治理的核心内容有很多共同点,治理理论对克服越南当前新农村建设的缺陷提出了许多启示,所以要借鉴治理的合理指导价值,通过构建新农村建设政策的新型执行模式来推动、提高新农村建设执行的质量。

关键词：越南新农村建设政策执行对策

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1株吉式库特菌噬菌体vb_KgiM_P1的生物学特性及全基因组分析

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中国兽医学报 2023年第1期43卷 85-92页

作者：欧红达赵日虹张梅梅刘明黄春正顾敬敏韩文瑜吉林大学、动物医学学院吉林长春130062

吉式库特菌在自然界普遍存在,有的作为机会致病菌可引起动物疾病。本研究发现了1株吉式库特菌(Kurthia gibsonii)噬菌体vb_KgiM_P1(简称MP1),并对其生物学特性和全基因组进行研究。透射电镜观察显示MP1具有典型的二十面体结构的头部和... 详细信息

吉式库特菌在自然界普遍存在,有的作为机会致病菌可引起动物疾病。本研究发现了1株吉式库特菌(Kurthia gibsonii)噬菌体vb_KgiM_P1(简称MP1),并对其生物学特性和全基因组进行研究。透射电镜观察显示MP1具有典型的二十面体结构的头部和可收缩的尾部,属于肌尾病毒科(Myoviridae)。生物学特性研究表明,MP1的最佳感染复数为1,裂解周期在50 min左右,潜伏期约为15 min,暴发期约为50 min,平均暴发量约为83 PFU/cell,表明该噬菌体有高效的杀菌活性。MP1的稳定性良好,在25~50℃之间和pH值3~11之间保持稳定的裂解活性。全基因组测序显示该噬菌体基因组全长为15855 bp,G+C含量为32%,有20个开放阅读。系统发育分析结果表明MP1与葡萄球菌噬菌体和肠球菌噬菌体属于共同起源的不同进化分支,且相似性较低,证明MP1是1株全新的烈性噬菌体。

关键词：噬菌体基因组分析吉式库特菌

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越南新农村建设政策实施的成效及看法

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东南亚纵横 2012年第7期 7-12页

作者：叶大凤黄春正广西大学公共管理学院

越南当代新农村建设政策主要包括设计乡级新农村模型建设规划、发展农村经济社会基础设施、调整经济结构、发展农村的社会事业、完善乡村治理机制等方面。自2008年开始实施以来,在越南新农村建设的11个国家重点指导乡取得了很大的成就... 详细信息

越南当代新农村建设政策主要包括设计乡级新农村模型建设规划、发展农村经济社会基础设施、调整经济结构、发展农村的社会事业、完善乡村治理机制等方面。自2008年开始实施以来,在越南新农村建设的11个国家重点指导乡取得了很大的成就。但越南新农村建设政策在执行过程中也遇到了很多困难。本文认为应通过发挥政府的导向作用、发挥基层组织和党员干部的主导作用、发挥农民的主体作用、发展农村经济等措施,提高越南新农村建设政策的实效。

关键词：越南新农村建设政策对策

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牛干扰素调节因子9基因的克隆、序列分析与抗原优势区表达

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中国畜牧兽医 2020年第2期47卷 326-335页

作者：卢盈妃黄春正戴海越郭永丽张忆蕾张博洋鲁兆祥徐玮程王君伟高明春东北农业大学动物医学学院

本研究旨在克隆牛干扰素调节因子9(bovine interferon regulatory factor 9,BoIRF9)基因,分析其生物学信息,并表达其抗原优势区。从感染水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)的EBK细胞中提取总RNA,以反转录得到的cDNA第一条... 详细信息

本研究旨在克隆牛干扰素调节因子9(bovine interferon regulatory factor 9,BoIRF9)基因,分析其生物学信息,并表达其抗原优势区。从感染水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)的EBK细胞中提取总RNA,以反转录得到的cDNA第一条链为模板,参考GenBank中牛IRF 9基因序列设计特异性引物进行BoIRF 9基因的扩增,对克隆得到的BoIRF 9基因进行分子特征、高级结构与分子进化等生物学分析。根据BoIRF9的亲水性、抗原指数和表面可及性,设计1对特异性引物克隆BoIRF9的抗原优势区域片段,将其连接至pET30a(+)载体,构建重组表达质粒pET30a-IRF9-Part。将鉴定正确的质粒转化大肠杆菌Rosetta感受态细胞,经IPTG诱导表达抗原优势区域蛋白,运用SDS-PAGE和Western blotting方法进行蛋白质鉴定。结果显示,本研究克隆得到BoIRF 9基因全长1684 bp,CDS区长1320 bp,编码439个氨基酸;BoIRF9氨基酸序列与人、马、猪、山羊相似性为80.0%~96.2%;进化树分析结果显示,荷斯坦奶牛与山羊亲缘关系最近,其次为猪、马、非洲象和人;BoIRF9蛋白的分子式为C 2139 H 3342 N 594 O 658 S 18,分子质量为48.5 ku,理论等电点(pI)为5.71;BoIRF 9基因编码蛋白不存在跨膜结构,无信号肽,存在1个潜在的N-糖基化位点和多个磷酸化位点;BoIRF9蛋白二级结构含有115个α-螺旋、22个β-转角、68个延伸链和234个无规则卷曲;BoIRF9蛋白包含2个保守结构域,选择包含第一个保守结构域的第12-221位氨基酸作为抗原优势区域,克隆出648 bp的基因片段,并表达出分子质量为27 ku的重组蛋白。本研究结果可为干扰素调节因子的深入研究提供参考。

关键词： BoIRF 9基因克隆原核表达生物信息学分析

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饲粮非植酸磷水平对14日龄仔鹅肠道组织形态、食糜酶活性及菌群结构的影响

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动物营养学报 2024年第3期36卷 1674-1684页

作者：黄春慧李宁胥蕾正旭城杨海明王志跃扬州大学动物科学与技术学院扬州225009

本试验旨在通过研究饲粮非植酸磷(NPP)水平对14日龄仔鹅肠道生长、肠道重要酶活性、肠道组织形态以及空肠菌群结构的影响,探究NPP水平影响仔鹅生长性能的作用机制。选取216只1日龄的江南白鹅公鹅,随机分为3组,每组6个重复,每个重复12只... 详细信息

本试验旨在通过研究饲粮非植酸磷(NPP)水平对14日龄仔鹅肠道生长、肠道重要酶活性、肠道组织形态以及空肠菌群结构的影响,探究NPP水平影响仔鹅生长性能的作用机制。选取216只1日龄的江南白鹅公鹅,随机分为3组,每组6个重复,每个重复12只。3组饲粮NPP水平依次为0.08%(低磷组,LP组)、0.38%(对照组,CP组)、0.80%(高磷组,HP组)。试验期14 d。结果表明:1)LP组十二指肠、空肠和回肠的绝对长度、绝对重量显著低于CP组和HP组(P0.05);而LP组肠道相对长度均显著高于CP组和HP组(P0.05),LP组和CP组空肠和回肠的相对重量显著高于HP组(P0.05)。3)不同组间各肠段的绒毛高度、隐窝深度、肌层厚度无显著差异(P>0.05)。4)LP组空肠代尔夫特菌属(Delftia)、苍白杆菌属(Ochrobactrum)、不动杆菌属(Acinetobacter)和黄杆菌属(Flavobacterium)的相对丰度显著高于CP组和HP组(P0.05)。综上所述,仔鹅饲粮NPP水平过低可代偿性地增加肠道相对长度,但其造成的肠道功能性酶活性下降、空肠菌群结构失衡可能是饲粮低磷导致仔鹅生长性能下降的重要原因;同时鹅可耐受高达0.80%的NPP且对仔鹅早期肠道发育、空肠菌群结构无负面影响。

关键词：鹅非植酸磷肠道微生物

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基于自注意力与图卷积网络的方面级情感分析

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北京邮电大学学报 2024年第1期47卷 127-132页

作者：陈可嘉黄春香林鸿熙福州大学经济与管理学院福州350108 莆田学院商学院莆田351100

针对以往大多数方面级情感分析研究中方面词与上下文交互信息缺失,无法充分利用语义信息等问题,提出一种基于自注意力与图卷积网络结合的方面级情感分析模型。为了提高模型的语义表示能力,一方面利用多头自注意力机制,获取文本长距离依... 详细信息

针对以往大多数方面级情感分析研究中方面词与上下文交互信息缺失,无法充分利用语义信息等问题,提出一种基于自注意力与图卷积网络结合的方面级情感分析模型。为了提高模型的语义表示能力,一方面利用多头自注意力机制,获取文本长距离依赖关系,与依存关系类型矩阵结合,计算融合位置信息和关系类型信息的权重矩阵,输入图卷积网络获取文本特征表示;另一方面设计了文本-方面注意力层,增强方面与上下文的交互,输入图卷积网络获取方面特征表示;最后连接2个向量,完成情感分析任务。在2个开放数据集中,所提模型的整体性能优于其他对比模型。

关键词：方面级情感分析图卷积网络自注意力机制语义感知

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“五全五融”:打造媒体融合发展的“三明路径”

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中国广播电视学刊 2024年第1期 30-33页

作者：王克新黄春霖福建省三明市融媒体中心

当前媒体融合改革已进入“深水区”。地市级媒体如何进行深度融合,着力构建新型主流媒体,备受各界关注。文章以福建省三明市融媒体中心四年来的媒体融合改革实践为例,系统梳理了“五全五融”的媒体融合发展路径,从机制、平台、内容、经... 详细信息

当前媒体融合改革已进入“深水区”。地市级媒体如何进行深度融合,着力构建新型主流媒体,备受各界关注。文章以福建省三明市融媒体中心四年来的媒体融合改革实践为例,系统梳理了“五全五融”的媒体融合发展路径,从机制、平台、内容、经营、队伍五个方面剖析转型发展之路。三明市融媒体中心通过一场“自我革命”,打造媒体融合走深走实的实践样本,为更多地市级媒体深度融合发展提供破局借鉴。

关键词：媒体融合发展地市级媒体 “五全五融” 新闻舆论阵地

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微粒体释义及生物化学教材中相关表述修改建议

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中国生物化学与分子生物学报 2024年第3期40卷 393-398页

作者：毕潇文黄春洪南昌大学江西医学院基础医学院医学遗传与细胞生物学教研室南昌330006 南昌大学江西医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室南昌330006

在部分生物化学教材及科研论文中,常出现“微粒体”这个词,且认为微粒体中含有独特的酶类,发挥生物转化功能。但是,在细胞生物学教材中并未把微粒体作为正常的细胞器。为了教材的统一性和科学性,本论文查阅了国内外主要的“细胞生物学... 详细信息

在部分生物化学教材及科研论文中,常出现“微粒体”这个词,且认为微粒体中含有独特的酶类,发挥生物转化功能。但是,在细胞生物学教材中并未把微粒体作为正常的细胞器。为了教材的统一性和科学性,本论文查阅了国内外主要的“细胞生物学”与“生物化学”教材,“术语在线”和维基百科、Genecard网站等,对于微粒体的定义进行了明确,对生物化学教材相关章节中有关微粒体的表述提出了修改建议。

关键词：微粒体术语在线生物化学教材微粒体乙醇氧化系统

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基于非合作-合作两型博弈且押金返还回收商的闭环供应链定价与利润分配研究

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中国管理科学 2024年第2期32卷 166-177页

作者：黄春香李登峰电子科技大学经济与管理学院四川成都611731

在政府对回收商实施押金返还制度下,本文研究由一个回收商和两个竞争制造商组成的闭环供应链如何同时解决成员策略优化与利润分配问题。首先采用非合作-合作两型博弈方法,通过合作博弈与非合作博弈的耦合融通构建一个闭环供应链交易模... 详细信息

在政府对回收商实施押金返还制度下,本文研究由一个回收商和两个竞争制造商组成的闭环供应链如何同时解决成员策略优化与利润分配问题。首先采用非合作-合作两型博弈方法,通过合作博弈与非合作博弈的耦合融通构建一个闭环供应链交易模型。然后在非合作博弈部分考虑两个制造商的定价策略,形成任意竞争局势,通过纳什均衡分析制造商在考虑合作博弈部分分配利润得到的支付值时的最优价格策略与最优利润;并在合作博弈部分,应用冯·诺依曼联盟特征函数方法和Shapley值,分析非合作博弈部分形成的任意竞争局势下闭环供应链回收率、回购价和分配利润。最后通过数值实例说明,押金等相关因素对押金返还制度下闭环供应链成员的最优价格、最优回收率和最优回购价的影响,体现押金返还制度作用于回收商的效果。结果表明,在押金返还回收商的政策作用下,产品回收率上升、售价降低,促进回收再制造的效果显著,但政府与企业都需考虑合理的决策才能达到更好的效果。

关键词：押金返还制度闭环供应链制造商竞争非合作-合作两型博弈

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