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microRNA与急性移植物抗宿主病研究进展

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中华血液学杂志 2015年第10期36卷 894-896页

作者：胡彬黄斯勇梁英民第四军医大学唐都医院血液科西安710038

急性移植物抗宿主病（aGVHD）是异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后的常见并发症之一，重度aGVHD患者病死率高。HLA全相合患者allo-HSCT aGVHD发生率为40%～60%，HLA不全相合患者发生率更高［1］。aGVHD发病机制复杂，通常认为与免疫... 详细信息

急性移植物抗宿主病（aGVHD）是异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后的常见并发症之一，重度aGVHD患者病死率高。HLA全相合患者allo-HSCT aGVHD发生率为40%～60%，HLA不全相合患者发生率更高［1］。aGVHD发病机制复杂，通常认为与免疫激活、炎症因子释放、细胞数量的改变和影响GVHD中的特定蛋白质水平有关。目前临床上诊断aGVHD主要根据临床特征及病理学证据，仍然缺乏监测、诊断aGVHD的生物标志物。最近，许多文献报道microRNA （miRNA）在aGVHD及肿瘤方面有重要作用。本文我们将miRNA在aGVHD中的研究进展进行综述。

关键词：急性移植物抗宿主病 microRNA allo-HSCT 异基因造血干细胞移植 GVHD发生率 aGVHD miRNA 临床特征

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工程咨询业的“坐标”在哪?

决策 1998年第Z1期 38-39页

作者：黄斯勇王群

在新的历史时期，综合性工程咨询如何按照建立和完善比较成熟的充满活力的社会主义市场经济体制的要求，开拓思路，转变机制，促进工程咨询事业的健康发展，进一步认识综合性工程咨询在社会主义初级阶段经济建设中所面临的形势、所处的... 详细信息

在新的历史时期，综合性工程咨询如何按照建立和完善比较成熟的充满活力的社会主义市场经济体制的要求，开拓思路，转变机制，促进工程咨询事业的健康发展，进一步认识综合性工程咨询在社会主义初级阶段经济建设中所面临的形势、所处的地位及应发挥的作用，是工程咨询业面临的?（共2页)

关键词：工程咨询业工程咨询机构综合性政府决策风险约束机制社会主义市场经济体制科学管理项目决策科学决策工程咨询服务

PTD-ABD融合蛋白对髓系白血病细胞的增殖和凋亡的影响

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第三军医大学学报 2014年第5期36卷 417-421页

作者：康志杰闫金松崔嵩李国辉黄斯勇梁亮尹郸丹梁英民第四军医大学第二附属医院血液科西安710038 大连医科大学附属二院血液科大连116021 大连医科大学附属中心医院SICU 大连116033 第四军医大学基础医学部医学遗传学与发育生物学教研室西安710032

目的研究癌基因BCR/ABL C末端肌动蛋白结合域(actin-binding domain,ABD)蛋白对白血病细胞增殖和凋亡的影响。方法构建含有ABD基因的重组表达载体,应用蛋白转导结构域(protein transduction domain,PTD)将蛋白转入白血病细胞内,应用West... 详细信息

目的研究癌基因BCR/ABL C末端肌动蛋白结合域(actin-binding domain,ABD)蛋白对白血病细胞增殖和凋亡的影响。方法构建含有ABD基因的重组表达载体,应用蛋白转导结构域(protein transduction domain,PTD)将蛋白转入白血病细胞内,应用Western blot与免疫荧光法确定蛋白是否进入白血病细胞,然后分别应用流式细胞仪及MTT法检测融合蛋白对白血病细胞凋亡及增殖的影响。结果成功构建PTD-ABD融合表达载体,获得高纯度PTD-ABD融合蛋白。同时构建PTD表达载体并获得高纯度表达蛋白。将PTD、PTD-ABD蛋白与白血病细胞K562、HL60共培养,Western blot与免疫荧光法确定PTD、PTD-ABD蛋白成功进入细胞内。与阴性对照比较,PTD-ABD蛋白能显著抑制HL60细胞的生长,并且对HL60细胞的凋亡具有明显的促进作用,差异具有统计学意义(P0.05);PTD蛋白对K562、HL60细胞的增殖及凋亡无影响,与阴性对照比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论PTD转导的ABD蛋白抑制HL60细胞的增殖,并诱导细胞凋亡。

关键词： BCR ABL融合蛋白肌动蛋白结合域蛋白转导结构域 K562细胞 HL60细胞细胞增殖细胞凋亡

单倍体异基因造血干细胞移植术后合并可逆性后部脑病综合征一例并文献复习

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白血病．淋巴瘤 2017年第8期26卷 485-487页

作者：黄斯勇刘利刘强李国辉梁英民西安高新医院血液科 710075 第四军医大学唐都医院血液科西安710038

目的探讨单倍体异基因造血干细胞移植术后可逆性后部脑病综合征（RPES）的临床表现、诊治及预后情况.方法回顾性分析1例单倍体异基因造血干细胞移植术后合并RPES患者的临床及影像学资料.结果该患者诊断为急性淋巴细胞白血病（前B细胞... 详细信息

目的探讨单倍体异基因造血干细胞移植术后可逆性后部脑病综合征（RPES）的临床表现、诊治及预后情况.方法回顾性分析1例单倍体异基因造血干细胞移植术后合并RPES患者的临床及影像学资料.结果该患者诊断为急性淋巴细胞白血病（前B细胞型,WT1阳性）,给予诱导化疗、强化治疗后获得完全缓解（CR）,后原发病复发,再次完全缓解（CR2）后行单倍体异基因造血干细胞移植.移植后先后出现移植物抗宿主病、血压增高及神经系统症状,结合影像学检查诊断为RPES,经积极治疗后完全恢复,影像学表现迅速改善.结论 RPES是造血干细胞移植后少见的严重并发症,可由多种病因产生,临床表现及影像学检查具有鲜明的特征,一般预后较好,早发现、早治疗可有效减少中枢神经系统损害.

关键词：白血病,淋巴细胞,急性造血干细胞移植可逆性后部脑病综合征

融合蛋白TRX-hJagged1原核表达载体的构建及其在BL21中的表达

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中国实验血液学杂志 2014年第3期22卷 807-811页

作者：李国辉范玉贞黄斯勇刘强尹郸丹刘利陈任安郝淼旺梁英民第四军医大学唐都医院血液科西安710038 第四军医大学唐都医院中医科西安710038

本研究旨在构建原核表达载体并原核表达Notch配体Jagged1。构建不同长度但均包含DSL区的原核表达载体pET-hJagged1,将构建重组原核表达载体pET-hJagged1转化大肠杆菌BL21后,予以IPTG诱导,优化诱导条件,使目的蛋白TRX-hJagged1在上清中... 详细信息

本研究旨在构建原核表达载体并原核表达Notch配体Jagged1。构建不同长度但均包含DSL区的原核表达载体pET-hJagged1,将构建重组原核表达载体pET-hJagged1转化大肠杆菌BL21后,予以IPTG诱导,优化诱导条件,使目的蛋白TRX-hJagged1在上清中有较大量表达。诱导工程菌并以镍柱纯化对可溶性的目的蛋白进行纯化。结果表明,成功构建了原核表达载体pET-hJagged1(BglⅡ)、pET-hJagged1(HindⅠ)及pET-hJagged1(StuⅠ),但仅pET-hJagged1(StuⅠ)表达可溶性的TRX-hJagged1。通过镍柱纯化获得了较单一的TRX-Jagged1蛋白,Western Blot证实了其为目的蛋白。结论:成功地构建了原核表达载体pET-hJagged1,并在原核表达系统表达了TRX-Jagged1融合蛋白,为进一步研究Jagged1在淋巴造血系统中的作用奠定了基础。

关键词： Notch Jagged1 融合蛋白原核表达

Notch信号在造血祖细胞扩增中作用的研究进展

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中国实验血液学杂志 2008年第5期16卷 1227-1231页

作者：李国辉黄斯勇康志杰徐恒梁英民第四军医大学唐都医院血液科西安710038

造血祖细胞扩增具有十分重要的临床价值,传统的方法扩增往往导致造血祖细胞的分化。Notch受体和配体在造血系统中广泛存在,活化的Notch信号可抑制造血祖细胞的分化而促进其扩增,提示可以通过Notch信号途径实现对造血祖细胞的扩增。本文... 详细信息

造血祖细胞扩增具有十分重要的临床价值,传统的方法扩增往往导致造血祖细胞的分化。Notch受体和配体在造血系统中广泛存在,活化的Notch信号可抑制造血祖细胞的分化而促进其扩增,提示可以通过Notch信号途径实现对造血祖细胞的扩增。本文就Notch信号通路、Notch信号与造血祖细胞维持、Notch信号与造血祖细胞扩增,Notch信号维持造血祖细胞未分化状况的分子机制,进行了综述。

关键词： Notch信号造血祖细胞造血扩增

急性淋巴细胞白血病患者血清乳酸脱氢酶和维生素D水平与其预后的关系

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广东医学 2017年第7期38卷 1009-1013页

作者：吴必嘉龚峻梅陈娟娟郭天剑方明黄斯勇中国人民解放军第四二一医院血液科广东广州510318 广州市红十字会医院血液科广东广州510220 第四军医大学唐都医院血液内科陕西西安710032

目的探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)患者血清乳酸脱氢酶(LDH)和维生素D水平与其预后的关系。方法选取成人初治ALL患者63例为ALL组,行大剂量甲氨蝶呤治疗并随访至少1年。并以同期健康查体志愿者30例为对照组。检测比较两组血清LDH和25-羟... 详细信息

目的探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)患者血清乳酸脱氢酶(LDH)和维生素D水平与其预后的关系。方法选取成人初治ALL患者63例为ALL组,行大剂量甲氨蝶呤治疗并随访至少1年。并以同期健康查体志愿者30例为对照组。检测比较两组血清LDH和25-羟维生素D[25(OH)D]水平及同期急性生理和慢性健康评分(APACHEⅡ评分)。统计ALL组随访1年的生存预后。分析ALL患者血清LDH和25(OH)D水平与其APACHEⅡ评分及1年生存率的关系及其预测1年生存预后的价值。结果与对照组比较,ALL组治疗前血清LDH水平和APACHEⅡ评分升高而血清25(OH)D水平则降低(P<0.05)。与治疗前比较,ALL组治疗后3d和治疗后1个月的血清LDH水平和APACHEⅡ评分降低而血清25(OH)D水平则升高(P<0.05)。ALL组1年生存率为80.95%。与ALL组存活患者比较,ALL组死亡患者治疗前后的血清LDH水平和APACHEⅡ评分升高而血清25(OH)D水平则降低(P<0.05)。Spearman无条件相关分析结果显示,ALL患者血清LDH水平与APACHEⅡ评分呈正相关(r=0.868,P<0.05)而与1年生存率呈负相关(r=-0.892,P<0.05),其血清25(OH)D水平与APACHEⅡ评分呈负相关(r=-0.705,P<0.05)而与1年生存率呈正相关(r=0.826,P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,ALL患者治疗前、治疗后3d和治疗后1个月的血清LDH和25(OH)D水平联合预测其1年生存预后的准确性分别为88.89%、95.24%和98.41%。结论 ALL患者血清LDH和25(OH)D水平与病情相关且联合预测患者预后的价值良好,可能作为ALL患者病情和预后评估的参考指标。

关键词：急性淋巴细胞白血病乳酸脱氢酶维生素D 预后关系

人Delta-like1^ext-Fc融合蛋白毕赤酵母表达载体的构建及表达

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第5期24卷 450-452,460页

作者：黄斯勇伍艳兰李国辉何飞康志杰刘利韩骅梁英民第四军医大学唐都医院血液内科陕西西安710038 第四军医大学基础部医学遗传学与发育生物学教研室陕西西安710032

目的:构建人Delta-like1ext-Fc融合蛋白毕赤酵母表达载体PIC-hDll1ext-Fc,并在毕赤酵母GS115中表达。方法:以pEF-BOSneo-hdll1ext-Fc为模板PCR扩增人Delta-like1胞外段。通过DNA重组构建毕赤酵母表达载体PIC-hDll1ext-Fc。用MD平板筛选重组子,G418筛选高拷贝转化子,经甲醇诱导表达后,SDS-PAGE、Western blot分析表达蛋白。结果:hDll1基因的胞外段被有效地扩增。序列分析表明,所构建的含hDll1ext-Fc融合基因的质粒与设计相同,融合蛋白hDll1ext-Fc得到正确表达。结论:成功地扩增了人Delta-like1胞外段,构建了hDll1ext-Fc融合基因的毕赤酵母表达载体PIC-hDll1ext-Fc,并在毕赤酵母中正确表达,为进一步研究奠定了实验基础。

关键词：造血干/祖细胞 Notch Delta-like1 融合蛋白毕赤酵母

人Delta-like4^(ext)-93-217原核表达、纯化及蛋白活性检测

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第四军医大学学报 2009年第17期30卷 1537-1540页

作者：伍艳兰黄斯勇牛晓丽张丽陈茹菲何飞张萍梁英民刘利第四军医大学唐都医院血液科陕西西安710038 第四军医大学基础部医学遗传学与发育生物学教研室陕西西安710033

目的:原核表达、纯化融合蛋白TRX/hDll4ext-93-217,并对其活性进行检测.方法:采用PCR方法扩增hDll4ext-93-217多核苷酸序列,克隆入pMD18T载体.测序正确后,将其亚克隆入pET32a(+)原核表达载体,获得pET32a(+)-hDll4ext-93-217载体.以该载体转化***菌株BL21,IPTG诱导其表达.以镍离子螯合柱纯化目的蛋白,采用SDS-PAGE,Western Blot方法鉴定目的蛋白的表达;采用萤光素酶报告基因系统检测目的蛋白活性.结果:通过PCR扩增获得了目的片段hDll4ext-93-217,成功构建了该蛋白的原核表达载体pET32a(+)-hDll4ext-93-217.采用SDS-PAGE,Western Blot等方法均可检测到目的可溶性融合蛋白TRX/hDll4ext-93-217的表达.融合蛋白TRX/hDll4ext-93-217在25℃,IPTG终浓度0.5mmol/L条件下诱导表达8h的蛋白表达量最高.以镍离子螯合柱纯化,获得纯化融合蛋白TRX/hDll4ext-93-217浓度为1.5g/L,其荧光素酶报告基因的刺激活性与空白对照组及TRX组相比较差异具有显著性(P=0.0154,P=0.0227,P<0.05).结论:通过原核表达获得的可溶性融合蛋白TRX/hDll4ext-93-217可活化Notch信号途径.

关键词： Detla-like4 Notch信号途径造血干细胞原核表达