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Identification of novel cyclic nucleotide phosphodiesterase gene cDNAs in the brain of guinea pig

Neuroscience Bulletin 2010年第5期26卷 365-370页

作者：龙跃生黄敏齐廖卫平广州医学院第二附属医院神经科学研究所神经遗传与离子通道病省部共建教育部重点实验室广州510260 广州医学院第二附属医院耳鼻喉科广州510260

Objective Cyclic nucleotide phosphodiesterase（PDE）is a critical component of the nitric oxide（NO）signaling pathway and plays critical roles in cognition and learning,Parkinson’s disease,attention deficit hyperactivity disorder, psychosis and *** PDEs in the brain of guinea pig have not yet been *** present study aimed to detect the unknown Pde cDNAs in the brain of guinea *** Reverse transcription polymerase chain reaction（RT-PCR）and sequence comparison analysis were performed to detect the expression of Pde cDNAs and to assess the identity rates of cDNA and amino acid sequences between guinea pig and human or mouse,*** RT-PCR primers were located on the conserved region of human PDE and mouse Pde *** Eleven novel Pde cDNAs were detected in the brain of guinea pig（Cavia porcellus）,including CpPde1a,CpPde1b,CpPde2a,CpPde4a,CpPde4d,CpPde5a,CpPde6c,CpPde7b, CpPde8a,CpPde9a,and *** identity rates of the Pde cDNA sequences between guinea pig and human ranged from 83.8%to 94.3%,and those of the amino acid sequences ranged from 91.9%to 100%.The identity rates of Pde cDNA sequences between guinea pig and mouse ranged from 84.6%to 92.1%,and those of amino acid sequences ranged from 91.2% to 99.2%.The average identity rate of the 11 Pde cDNA sequences between guinea pig and human was significantly higher（P 0.01）than that between guinea pig and *** putative partial amino acid sequences of guinea pig contained at least one of the conserved domains of human and mouse PDE *** These results indicate that the brainexpressed Pde genes are identified in guinea pig,which lays the foundation for further investigating the physiological roles of PDE proteins in the brain.

关键词： cyclic nucleotide phosphodiesterase the central nervous system nitric oxide guinea pig cross-species comparison

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豚鼠磷酸二酯酶基因cDNA的鉴定与分析

豚鼠磷酸二酯酶基因cDNA的鉴定与分析

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作者：黄敏齐广州医学院

学位级别：硕士

耳蜗是一种非常复杂的感受器,是听觉信号转换及传导的枢纽。其听觉功能的运行需要多个信号转导途径共同协作完成,其中一氧化氮(nitric oxide, NO)信号转导途径是其中之一,该信号途径参与耳蜗血流调节和神经传导,在内耳多种疾病形成过程... 详细信息

耳蜗是一种非常复杂的感受器,是听觉信号转换及传导的枢纽。其听觉功能的运行需要多个信号转导途径共同协作完成,其中一氧化氮(nitric oxide, NO)信号转导途径是其中之一,该信号途径参与耳蜗血流调节和神经传导,在内耳多种疾病形成过程中起重要作用。NO分子是NO信号转导途径重要成员,它在人体各个系统中的功能具有双重性:既保护组织也会伤害组织,浓度过高过低都可导致疾病发生。NO合成酶(NOS)和磷酸二酯酶(PDE)是决定NO浓度高低的两个重要酶,前者负责NO的合成,后者负责NO的降解。迄今已发现三种NOS:神经细胞型NOS(nNOS)、内皮型NOS(eNOS)和诱导型NOS(iNOS),不同类型NOS的分布及功能均有较大的差别。PDE是一个超家族酶系,由12个族23亚族组成,每个成员分布不同,均有各自作用的特异性底物和抑制剂,部分抑制剂已开发成治疗疾病的药物。目前发现耳蜗中表达三种NOS酶:nNOS、iNOS和eNOS,但却未见有PDE的表达。豚鼠的听觉范围与人类接近,是一种理想的听觉实验模式动物。然而豚鼠中Pde基因家族成员及其组织特异性表达情况至今还未见报道。本研究的目的是通过分析人及小鼠的Pde基因cDNA编码序列的保守区,并采用RT-PCR方法检测耳蜗及其他组织中表达的未知Pde基因cDNA编码序列保守区,对阳性PCR片段进行直接测序,用生物信息学软件分析序列特征,以期发现豚鼠耳蜗及其他组织中表达的未知Pde基因,为克隆豚鼠Pde基因cDNA全长及其在耳蜗等其他组织中的生理功能和相关疾病的研究打下坚实基础。方法: 从NCBI数据库中下载人及小鼠PDE基因家族成员cDNA编码序列,在豚鼠基因组数据中进行比对,获得豚鼠Pde基因同源序列。将不同物种同源序列进行比较分析,得到保守区;提取豚鼠不同组织的总RNA,以总RNA为模板进行反转录,获得第一链cDNA,再以cDNA为模板进行PCR扩增。PCR产物进行直接双向测序,将所得未知序列与人、小鼠及家兔的PDE基因cDNA编码序列进行比对分析,计算同源率;采用蛋白翻译软件对部分cDNA序列进行翻译,得到部分蛋白多肽序列,并进行物种间的同源性分析,用t-检验进行统计学分析。结果: 序列比对发现,所有人及小鼠Pde基因cDNA编码区序列在豚鼠中的同源序列均散布在基因组20 kb至800 kb范围内,形成类似于人和小鼠PDE基因的编码外显子,序列的同源率均高达85%以上,人与豚鼠的PDE基因同源率大部分高于小鼠与豚鼠的同源率(PDE6D、PDE8B和PDE9A除外);豚鼠部分同源外显子在人和小鼠中是高度保守的(同源率高达90%以上,片段长度差异小于10 bp)。 RT-PCR结果显示:豚鼠耳蜗中检测6个与预期大小相符合的Pde基因cDNA阳性片段(Pde3a、Pde4d、Pde8a、Pde8b、Pde9a和Pde11a);其他组织也获得不同Pde基因cDNA阳性片段:其中胃15个,睾丸14个,骨骼肌12个,脑12个,心脏9个,小肠8个,肾6个,肺脏3个,肝脏2个,它们涵盖了所有23个Pde基因,不同组织中Pde基因阳性片段也互不相同,与文献报道的Pde基因表达产物在人及小鼠不同组织中的分布情况大致相同。 PCR产物直接测序获得20个Pde基因部分cDNA序列。PDE基因cDNA及蛋白序列比较分析发现,豚鼠与人PDE基因cDNA序列的同源在83.8%5.5%之间,蛋白序列的同源率在91.0%00%之间;豚鼠与小鼠之间cDNA序列的同源在83.6%3.0%之间,蛋白序列的同源率在86.6%00%之间。豚鼠与人之间的大多数PDE基因cDNA和蛋白序列同源率要高于豚鼠与小鼠之间的同源率。统计豚鼠与人及小鼠之间的20个PDE基因cDNA和蛋白序列同源率,发现豚鼠与人的PDE基因cDNA序列的同源率要显著高于豚鼠与小鼠之间的同源率(P<0.05);虽然大多数豚鼠与人蛋白序列的同源率高于豚鼠与小鼠之间的同源率,但没有显著性差异(P=0.267)。还发现大部分豚鼠与家兔的Pde基因cDNA序列同源率介于人和小鼠之间,提示与家兔和小鼠相比较,豚鼠与人可能有着更近的亲缘关系。结论: 首次发现耳蜗中存在6个Pde基因mRNA产物,获得豚鼠中20个未知Pde基因部分cDNA序列及其在不同组织的表达情况;与小鼠和家兔相比,豚鼠与人PDE基因序列同源性更高,提示豚鼠与人可能有着更近的亲缘关系,从另外一个角度上增强了豚鼠作为疾病研究模式动物的优势。

关键词：磷酸二酯酶耳蜗一氧化氮 RT-PCR 豚鼠

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西洛他唑对强噪声所致豚鼠耳蜗血流及听阈偏移的影响

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实用医学杂志 2011年第24期27卷 4385-4387页

作者：黄敏齐张建国广州医学院第二附属医院耳鼻喉科广州市510260

目的:探讨在强噪声条件下,磷酸二酯-3A(phosphodiasterase-3A,PDE3A)特异性抑制剂西洛他唑(cilostazol)对豚鼠耳蜗血流及听阈偏移的影响。方法:将40只雄性豚鼠随机分为4组(每组10只):对照组、无噪声给药组、强噪声不给药组,强噪声给药... 详细信息

目的:探讨在强噪声条件下,磷酸二酯-3A(phosphodiasterase-3A,PDE3A)特异性抑制剂西洛他唑(cilostazol)对豚鼠耳蜗血流及听阈偏移的影响。方法:将40只雄性豚鼠随机分为4组(每组10只):对照组、无噪声给药组、强噪声不给药组,强噪声给药组。强噪声组给予4 KHz的倍频窄带噪声(105 dB SPL)处理13 h。处理后立即腹腔注射西洛他唑(10 mg/kg),分别测定处理后各组动物的耳蜗血流速度及ABR阈值。结果:与对照组相比较,强噪声不给药组的血流速度在处理后60、90、120 min时均显著性下降(P<0.01);与强噪声不给药组比较,强噪声给药组的血流速度在处理后30、60、90、120 min时均显著性增高(P<0.05)。与对照组相比较,强噪声不给药组在处理后ABR阈值显著性高于对照组(P<0.05);与强噪声组不给药组相比较,强噪声组给药组ABR阈值要显著性降低(P<0.01)。

关键词：西洛他唑噪声耳蜗血流 ABR阈值

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鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤的鼻内镜治疗策略及疗效

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临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2010年第17期24卷 802-803页

作者：陈观贵张建国严小玲谢鼎华翟锦明黄敏齐广州医学院第二附属医院耳鼻咽喉科广州510260 中南大学湘雅二医院耳鼻咽喉-头颈外科

回顾性分析56例鼻内镜下治疗鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤(sinonasal inverted papilloma,SNIP)患者的临床资料,现报告如下

关键词：乳头状瘤,内翻性鼻腔鼻窦乳头状瘤内镜检查外科手术

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悬雍垂腭咽成形术后留置气管插管的研究

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现代临床医学生物工程学杂志 2004年第1期10卷 46-47页

作者：张明梁健新黄敏齐广州医学院第一附属医院耳鼻咽喉科广州510120 广州医学院第二附属医院耳鼻咽喉科广州510260

目的　探讨阻塞性睡眠呼吸暂停综合征 (OSAS)术后发生急性呼吸道梗阻的原因和预防 .方法　对 2 9例OSAS患者行经鼻气管插管全麻下行悬雍垂腭咽成形术 (UPPP)治疗 ,评价术后保留气管插管结果并与对照组进行比较 .结果　 2 9例病人在术后... 详细信息

目的　探讨阻塞性睡眠呼吸暂停综合征 (OSAS)术后发生急性呼吸道梗阻的原因和预防 .方法　对 2 9例OSAS患者行经鼻气管插管全麻下行悬雍垂腭咽成形术 (UPPP)治疗 ,评价术后保留气管插管结果并与对照组进行比较 .结果　 2 9例病人在术后完全清醒状态下拔除气管插管 ,无一出现急性呼吸道梗阻或死亡 ,效果明显优于对照组 .

关键词：悬雍垂腭咽成形术气管插管阻塞性睡眠呼吸暂停综合征 OSAS 治疗并发症

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《耳鼻咽喉-头颈外科学》网络辅助教学的构建与实践

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当代教育论坛（综合版） 2010年第7期 108-109页

作者：陈观贵张建国黄敏齐广州医学院第二附属医院耳鼻咽喉科广州医学院第二附属医院耳鼻喉科

利用网络教学平台辅助《耳鼻咽喉-头颈外科学》教学,实现了"以学生为主体"的教学,在教师指导和网络辅助教学的共同作用下充分发挥学生学习的主动性和创造性,提高了学生的学习兴趣和效率,提高了教学质量和教学水平。

关键词：网络教学耳鼻咽喉-头颈外科学教学研究

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小儿急性喉炎的急救处理

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广东医学 1999年第2期20卷 127-128页

作者：黄敏齐袁旭平广州医学院第二附属医院耳鼻咽喉科 510260

目的　为解除小儿急性喉炎的呼吸困难提出一套快速有效的治疗模式。方法　 2 0 1例患儿确诊为急性喉炎后 ,即予足量抗生素、激素静滴 ,咽喉部直接喷雾或超声雾化吸入药物 ,并给予适当的吸氧、镇静、钙剂及利尿剂。喉阻塞性呼吸困难Ⅲ度... 详细信息

目的　为解除小儿急性喉炎的呼吸困难提出一套快速有效的治疗模式。方法　 2 0 1例患儿确诊为急性喉炎后 ,即予足量抗生素、激素静滴 ,咽喉部直接喷雾或超声雾化吸入药物 ,并给予适当的吸氧、镇静、钙剂及利尿剂。喉阻塞性呼吸困难Ⅲ度者严密观察 ,做好随时手术的准备。Ⅳ度者立即进行气管切开手术。结果　经以上综合性内科治疗 ,Ⅲ度以下患儿绝大部分在短期内解除喉阻塞 ,避免了气管切开。结论　小儿急性喉炎一旦确诊 ,首先争取时间解决呼吸通畅问题。及时、足量抗生素 ,突击、大剂量激素是首要措施 ;吸入疗法为治疗呼吸困难赢得时间 ;吸氧、镇静、钙剂及利尿剂有助于短时间内喉阻塞缓解 ;气管切开是急救手段。

关键词：喉炎急性儿童急救

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鼻出血预后多因素分析

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山东大学耳鼻喉眼学报 2007年第4期21卷 327-328,331页

作者：黄敏齐郭镇平广州医学院第二附属医院耳鼻咽喉科广东广州510260

目的:探讨影响鼻出血预后的因素。方法:对126例鼻出血患者的临床资料进行统计学分析。结果:对鼻出血预后显著影响的因素有年龄、病程、合并高血压、心理健康状况,以及治疗中是否联合应用裸花紫珠片。结论:发病后3天内治疗,用药中联合裸... 详细信息

目的:探讨影响鼻出血预后的因素。方法:对126例鼻出血患者的临床资料进行统计学分析。结果:对鼻出血预后显著影响的因素有年龄、病程、合并高血压、心理健康状况,以及治疗中是否联合应用裸花紫珠片。结论:发病后3天内治疗,用药中联合裸花紫珠片,加之心理疏导,能显著改善鼻出血的预后。

关键词：鼻出血预后裸花紫珠片

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高功率半导体激光辅助腭咽成形术的护理

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现代医院 2007年第5期7卷 77-78页

作者：颜柳英王玫黄敏齐广州医学院第二附属医院广东广州510260

高功率半导体激光悬雍垂腭咽成形术治疗阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征,有效率高,出血少,反应轻,恢复快,少有并发症,是目前有效的手术方法之一。在手术中体位的安置、麻醉诱导、恢复期的观察、手术配合、器械消毒及维护是确保病人安全... 详细信息

高功率半导体激光悬雍垂腭咽成形术治疗阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征,有效率高,出血少,反应轻,恢复快,少有并发症,是目前有效的手术方法之一。在手术中体位的安置、麻醉诱导、恢复期的观察、手术配合、器械消毒及维护是确保病人安全手术的重要手段。

关键词：激光腭咽成形术手术配合护理

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支撑喉镜下微型电动切削器在声带息肉中的应用

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中国耳鼻咽喉颅底外科杂志 2006年第6期12卷 470-471页

作者：黄映红黄敏齐张建国严小玲广州医学院第二附属医院耳鼻咽喉科广东广州510260

声带息肉是喉科常见病,多发病.手术方法很多,如间接喉镜、直接喉镜、支撑喉镜及纤维喉镜等.各种术式有其利弊,应根据息肉的大小、位置、范围及蒂部情况决定术式[1,2].对于巨大型及广基型声带息肉或弥漫性肿胀遍及整个声带的息肉样变者,... 详细信息

声带息肉是喉科常见病,多发病.手术方法很多,如间接喉镜、直接喉镜、支撑喉镜及纤维喉镜等.各种术式有其利弊,应根据息肉的大小、位置、范围及蒂部情况决定术式[1,2].对于巨大型及广基型声带息肉或弥漫性肿胀遍及整个声带的息肉样变者,适合用支撑喉镜下手术.我科2000年1月～2004年9月采用支撑喉镜下微型电动切削器切除声带息肉116例,现报道如下.

关键词：支撑喉镜电动切削器声带息肉

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