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沙门菌SptP调控巨噬细胞MAPK-CDK6-RB通路的初步分析

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畜牧兽医学报 2023年第3期54卷 1187-1198页

作者：姚敏石博妹黄廷华长江大学动物科学学院荆州434025

本研究旨在探讨沙门菌毒力因子SptP对猪巨噬细胞MAPK-CDK6-RB通路及外陷网(METs)形成的影响。首先比较Salmonella 13312(猪霍乱沙门菌)和Salmonella 14028(鼠伤寒沙门菌)、Salmonella 13314(亚利桑那沙门菌)诱导的METs水平的差异,然后... 详细信息

本研究旨在探讨沙门菌毒力因子SptP对猪巨噬细胞MAPK-CDK6-RB通路及外陷网(METs)形成的影响。首先比较Salmonella 13312(猪霍乱沙门菌)和Salmonella 14028(鼠伤寒沙门菌)、Salmonella 13314(亚利桑那沙门菌)诱导的METs水平的差异,然后生物信息学预测参与METs调控的沙门菌基因,最后采用ChIP和MALDI-TOF试验进行验证。结果表明,Salmonella 13312和Salmonella 14028诱导的METs水平显著低于Salmonella 13314(P<0.05),提示沙门菌基因可能通过某种途径调控METs释放的某些关键步骤。Domain—Domain相互作用生物信息学预测结合ChIP、MALDI-TOF试验验证表明沙门菌基因SptP参与了该过程,其作用的宿主靶分子可能为MAPK通路下游基因ABL1和CDK6,SptP可能通过调节ABL1和CDK6的去磷酸化而参与MAPK-CDK6-RB通路的调控,该通路可能与METs的生成有关。SptP-MAPK-CDK6-RB通路可能是沙门菌逃避宿主免疫系统的重要途径,该研究结果为沙门菌逃避宿主免疫造成仔猪感染和长期携带机制的研究提供了新的见解。

关键词：沙门菌 SptP 细胞外陷网巨噬细胞 MAPK ABL1

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凡纳滨对虾钙网蛋白cDNA序列的克隆及组织表达分析

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江苏农业科学 2016年第1期44卷 36-40,47页

作者：郜卫华田罗黄廷华姚敏许巧情长江大学动物科学学院水产系湖北荆州434025 汕头大学广东省海洋生物技术重点实验广东汕头515063 荆州职业技术学院湖北荆州434023

利用RACE技术,克隆了凡纳滨对虾钙网蛋白(calreticulin,CRT)基因(GenBank登录号:JQ682618)。该基因(LvCRT)cDNA全长1866bp,含有1个长达1221bp的完整开放阅读框(ORF),编码的成熟肽由406个氨基酸组成,5'UTR(5'非编码区)长度为222bp,3'UTR长度为423bp,3'端加尾信号AATAAA位于poly(A)尾巴上游27bp处。预测其理论分子量是15.3ku,等电点pI为4.90。具有1个保守的钙网蛋白家族标签(KHEQNIDCGGGYLKVF),1个信号肽(MKTWVFLALFGVVLVES)和保守的HDEL内质网回收标签。经NCBIBLASTX比对表明,LvCRT基因与中国明对虾和斑节对虾的LvCRT具有高度的相似性和一致性。系统进化分析表明,LvCRT在亲缘关系上更接近昆虫的钙网蛋白基因。荧光定量PCR结果显示CRT在肌肉组织中表达量最低,在肠中的表达量最高。对凡纳滨对虾CRT基因全长cDNA序列克隆和表达的研究为更进一步了解CRT多肽在凡纳滨对虾中的重要功能奠定了基础。

关键词：凡纳滨对虾钙网蛋白基因克隆表达

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通城猪保种与利用信息管理系统的研制与应用

中国畜牧杂志 2006年第3期42卷 50-51页

作者：黄廷华樊斌徐三平李奎刘榜华中农业大学动物科技学院动物分子生物学与育种实验室湖北武汉430070 湖北省通城县畜牧局湖北通城437400

通城猪是我国著名地方猪品种，具有肉质嫩美、繁殖力高、杂交配合力好、适应性强等特点，是“华中两头乌”中最具代表性的一个类群，于2000年被列入全国第1批地方品种资源保护名录。据统计，通城猪现有15个血统，每个血统保留2头公猪，... 详细信息

通城猪是我国著名地方猪品种，具有肉质嫩美、繁殖力高、杂交配合力好、适应性强等特点，是“华中两头乌”中最具代表性的一个类群，于2000年被列入全国第1批地方品种资源保护名录。据统计，通城猪现有15个血统，每个血统保留2头公猪，其中县种畜场和6个生猪品种改良站各保存每个血统的1头公猪，各乡镇种猪场和农户保存每个血统的另1头公猪；存栏纯种通城母猪约1万头，其中县种畜场饲养80头，乡镇种畜场、保种基地及保种专业户饲养约6000头，农村分散养殖3000余头。

关键词：信息管理系统通城猪保种应用地方品种资源地方猪品种杂交配合力种畜场保护名录品种改良

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不同铁源对仔猪骨骼肌转录谱的影响

中国畜牧杂志 2021年第S1期57卷 268-275页

作者：黄霞丽姚敏田棋黄廷华万丹长江大学动物科学学院湖北荆州434025 中国科学院亚热带农业生态研究所湖南长沙410006

试验旨在探究不同部位肌肉铁沉积差异,揭示不同铁源对仔猪骨骼肌基因转录的影响及其可能的差异机制。选用27头体重(1.7±0.2)kg的1日龄杜×长×大新生公猪随机分为3组,每组9个重复,分别于2、7、12、17d灌服生理盐水2mL、硫酸亚铁和甘氨... 详细信息

试验旨在探究不同部位肌肉铁沉积差异,揭示不同铁源对仔猪骨骼肌基因转录的影响及其可能的差异机制。选用27头体重(1.7±0.2)kg的1日龄杜×长×大新生公猪随机分为3组,每组9个重复,分别于2、7、12、17d灌服生理盐水2mL、硫酸亚铁和甘氨酸亚铁(25mg,以铁计)。试验于第21天屠宰采样,采集膈肌、心肌、背最长肌和腓肠肌,采用ICP-OES法分析样本中铁含量,发现铁源对背最长肌的铁沉积影响显著。随后,运用RNA-Seq技术对背最长肌进行转录组学分析,并结合生物信息学筛选与骨骼肌生长发育相关的差异基因和信号通路,以及蛋白质互作的核心基因。结果表明:共获得805个差异基因;GO结果显示,与骨骼肌生长发育相关的差异基因主要参与Wnt信号通路、JAK-STAT级联负调控、炎症反应以及趋化因子活动;KEGG主要参与Wnt信号通路和炎症介质对TRP通道的调节,蛋白质互作分析得到10个核心基因;通过RT-qPCR随机选取4个基因进行验证,其表达量结果与转录组测序结果一致;补充甘氨酸亚铁对仔猪骨骼肌生长发育的促进效果可能优于硫酸亚铁。

关键词：铁骨骼肌仔猪转录组生长发育

凡纳滨对虾儿茶酚-氧位-甲基转移酶cDNA序列克隆及组织表达分析

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江苏农业科学 2016年第2期44卷 26-30页

作者：郜卫华田罗黄廷华姚敏许巧情长江大学动物科学学院水产系湖北荆州434025 汕头大学广东省海洋生物技术重点实验室广东汕头515063 荆州职业技术学院湖北荆州434023

利用RACE(rapid amplification of cDNA ends)技术,克隆了凡纳滨对虾儿茶酚-氧位-甲基转移酶(catechol-O-methyltransferase,COMT)基因cDNA序列。该基因(LvCOMT)cDNA全长910 bp(Gen Bank登录号JQ345478),含有666 bp的开放阅读框(ORF),编码221个氨基酸,理论分子量74.9 ku,等电点4.98。经软件分析,该成熟肽有12个磷酸化的氨基酸位点,不具信号肽,推测凡纳滨对虾COMT基因可能是依赖12个可能的氨基酸发生可逆的磷酸化反应来进行调控作用。LvCOMT基因与斑节对虾、中国明对虾的氧位-甲基转移酶具有高度相似性,系统进化分析表明,LvCOMT在亲缘关系上更接近于哺乳动物的儿茶酚-氧位-甲基转移酶。应用RQ-PCR分析COMT在凡纳滨对虾中的组织特异性分布,结果显示COMT在肝胰腺组织中表达量最高,在鳃中的表达量最低。

关键词：凡纳滨对虾儿茶酚-氧位-甲基转移酶基因克隆表达

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一种基于支持向量机的种猪疾病早期预测方法

黑龙江畜牧兽医 2019年第16期 69-72页

作者：孙奴奴黄廷华吴珍芳运城学院生命科学系山西运城044000 长江大学动物科学学院湖北荆州434025 华南农业大学动物科学学院/国家生猪种业工程技术研究中心广州510642 广东省温氏食品集团股份有限公司广东新兴527400

抗病育种是当前国内外发展健康养殖业的一项重要内容。笔者采用支持向量机的方法,利用免疫群体相关数据构建了一个种猪疾病早期诊断模型。利用该模型可以通过测量数个相关的生理生化指标较准确地预测初生仔猪的健康状况。该模型不仅可... 详细信息

抗病育种是当前国内外发展健康养殖业的一项重要内容。笔者采用支持向量机的方法,利用免疫群体相关数据构建了一个种猪疾病早期诊断模型。利用该模型可以通过测量数个相关的生理生化指标较准确地预测初生仔猪的健康状况。该模型不仅可以应用于生猪生产,亦可用于高抗病型种猪的早期选种。

关键词：疾病早期预测支持向量机模式识别种猪生理生化

猪基因表达调控数据库(GereDB)的构建

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南方农业学报 2020年第4期51卷 929-936页

作者：石博妹姚敏余平黄廷华长江大学动物科学学院湖北荆州434025

【目的】构建猪基因表达调控数据库(GereDB),为从基因水平解释猪的生长发育规律、遗传育种和疾病防控等提供科学依据。【方法】从NCBI下载小鼠和猪的RNA序列原始数据进行序列比对,根据序列同源性将小鼠的基因表达调控信息转移给猪,并建... 详细信息

【目的】构建猪基因表达调控数据库(GereDB),为从基因水平解释猪的生长发育规律、遗传育种和疾病防控等提供科学依据。【方法】从NCBI下载小鼠和猪的RNA序列原始数据进行序列比对,根据序列同源性将小鼠的基因表达调控信息转移给猪,并建立猪基因表达调控信息网络,整理加工后根据区域结构,以Linux为操作系统、Apache为Web服务器、MySQL为数据库、Python为服务器端脚本解释器构建猪GereDB数据库。【结果】从NCBI下载的Fast数据共包含291182条猪核苷酸序列,通过序列比对和手工整理,注释筛选出67000多条猪核苷酸序列;将小鼠的基因表达调控信息转移给猪,获得的猪基因表达调控关系链接有67027条,构建了猪GereDB数据库(http://***/geredb-wp/),并开发GEREA生物信息学分析工具以发现猪基因表达调控因子。在猪GereDB数据库中有116个调控因子可调控100多个基因,说明其在猪转录组调控中发挥重要作用。GEREA生物信息学分析工具在已发表的猪乳腺组织数据集上进行测试,结果显示,与母猪分娩前14 d相比,分娩后1 d母猪乳腺中26个调控因子的靶基因显著差异表达(FDR<0.05),其中FGF2调控因子在母猪泌乳方面发挥重要作用。【结论】猪GereDB数据库能提供猪基因表达和调控间关系的信息,且能使用GEREA生物信息学分析工具发掘猪基因表达调控数据,有助于揭示调控因子对高通量测序差异表达基因的调控机制,为从基因水平探究猪的生长发育及疾病防控提供数据信息。

关键词：猪基因表达调控因子 GereDB数据库

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用圆锥曲线的定义求一类最值问题

数学教学通讯 2003年第6期 42-43页

作者：黄廷华曹华荣重庆市荣昌中学重庆市荣昌中学 402460 402460

各种数学资料中,经常出现如下一类问题:点M为圆锥曲线上一动点,求它到圆锥曲线的一个焦点F和平面上一定点A的距离和的最值.大多数学生对这类问题感到困难,不知如何入手.本文利用圆锥曲线的定义巧妙地求出这类问题.

关键词：最值问题 MQ MF 圆锥曲线双曲线

鼠伤寒沙门氏菌荧光定位报告菌株的构建及其在猪肺泡巨噬细胞的示踪应用

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华北农学报 2023年第2期38卷 232-238页

作者：肖红何珍田棋黄鑫淼廖卫东黄廷华姚敏长江大学动物科学学院湖北荆州434020

利用增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)表征鼠伤寒沙门氏菌株14028(Sal-14028),以研究其在猪肺泡巨噬细胞(3D4/21)中的示踪作用,首先将增强型绿色荧光蛋白基因通过电击法转入Sal-14028,经卡那霉素抗性培养基筛选和测序鉴定,获得了具有绿色... 详细信息

利用增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)表征鼠伤寒沙门氏菌株14028(Sal-14028),以研究其在猪肺泡巨噬细胞(3D4/21)中的示踪作用,首先将增强型绿色荧光蛋白基因通过电击法转入Sal-14028,经卡那霉素抗性培养基筛选和测序鉴定,获得了具有绿色荧光信号的阳性菌株并检测其荧光稳定性,命名为Sal-pPpagC-EGFP。接着在同等条件下对比荧光菌株和野生菌株(WT)的生长特性,通过小鼠感染试验检测EGFP基因的插入对荧光菌株毒力有无明显影响,以分析荧光菌株的生物学特性;应用荧光显微镜和间接免疫荧光法检测荧光菌株在猪肺泡巨噬细胞3D4/21吞噬溶酶体中的定位情况。结果显示,在不同时间点,EGFP标记的鼠伤寒沙门氏菌在荧光显微镜下发出强烈的绿色荧光,且所带荧光不受抗性选择的影响,可稳定遗传。相同培养条件下,荧光菌株Sal-pPpagC-EGFP生长曲线的变化趋势与野生株基本相同。另外,经过改良寇氏法计算出的LD_(50)与野生株相比无显著差异(P>0.05),说明EGFP基因的插入对荧光菌株毒力无明显影响。荧光菌株在感染猪肺泡巨噬细胞后,吞噬溶酶体内可观察到标记菌株,并随着时间增加菌株数量呈现增长趋势。表明荧光菌株除了具备发光特性外,其他生物学性状没有明显改变。

关键词：鼠伤寒沙门氏菌 EGFP 电转化生物学特性胞内示踪

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