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西藏林芝牦牛源产气荚膜梭菌的分离鉴定及耐药性分析

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中国兽医学报 2024年第1期44卷 97-106页

作者：蔡重振罗润波黄家旗吴丹郭晓庆白吉格桑卓玛边巴央拉索朗斯珠西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860000 西藏动物疫病预防控制中心西藏拉萨850000

为了解西藏林芝牦牛源产气荚膜梭菌的流行特点及耐药情况,为当地牦牛源产气荚膜梭菌病的防治提供理论基础和数据支持。对采集自西藏林芝市的87份牦牛腹泻粪便样品中的产气荚膜梭菌进行分离鉴定、毒素分型、药敏试验及耐药基因检测,并分... 详细信息

为了解西藏林芝牦牛源产气荚膜梭菌的流行特点及耐药情况,为当地牦牛源产气荚膜梭菌病的防治提供理论基础和数据支持。对采集自西藏林芝市的87份牦牛腹泻粪便样品中的产气荚膜梭菌进行分离鉴定、毒素分型、药敏试验及耐药基因检测,并分析耐药基因与耐药表型的相关性。结果显示:从87份牦牛腹泻粪便样品中分离鉴定得到20株产气荚膜梭菌,分离率为22.99%;其中17株为A型,3株为D型。遗传进化分析发现Nyingchi-C12(OQ704284)与北京人源(KP944151.1)产气荚膜梭菌具有较近的亲缘性。分离株对氨基糖苷类药物耐药率分别为庆大霉素85.0%、卡那霉素90.0%,对多黏菌素B、磺胺甲噁唑的耐药率分别为80.0%、85.0%;对头孢唑啉、头孢噻吩、多西环素、米诺霉素100%敏感;35.0%的菌株4重耐药,甚至出现6重及7重耐药的情况。检测到qnrS(55%)、aac(6′)-Ib(100%)、aac(6′)/aph(2″)(10%)、flor(95%)、bla_(TEM)(10%)、tetM(45%)、tetA(P)(15%)、tetB(P)(10%)、sul2(65%)、sul3(20%)共10种耐药基因;抗磺胺类耐药基因与耐药表型的相符率最高,为70.6%。表明林芝市存在牦牛源产气荚膜梭菌的流行,并存在不同程度的耐药情况,提示我们需持续监测产气荚膜梭菌的流行及耐药情况,合理防控牦牛产气荚膜梭菌病。

关键词：产气荚膜梭菌牦牛分离鉴定进化分析耐药表型耐药基因

4种藏药提取物与抗生素对产气荚膜梭菌生物被膜的影响

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中国兽医学报 2024年第4期44卷 766-773页

作者：罗润波蔡重振黄家旗吴丹郭晓庆白吉格桑卓玛边巴央拉苏中华索朗斯珠西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860000 农业农村部西藏包虫病防治重点实验室西藏林芝860000 西藏自治区动物疫病预防控制中心畜牧总站西藏拉萨850000

采用微量肉汤稀释法测定3种方法提取的4种藏药提取物及12种抗生素对(Clostridium perfringens,***)的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),棋盘法检测藏药提取物与抗生素的联合抑菌效果,结晶紫染色法测定20株牦牛源产... 详细信息

采用微量肉汤稀释法测定3种方法提取的4种藏药提取物及12种抗生素对(Clostridium perfringens,***)的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),棋盘法检测藏药提取物与抗生素的联合抑菌效果,结晶紫染色法测定20株牦牛源产气荚膜梭菌生物被膜(biofilm,BF)成膜能力,并检测藏药提取物与抗生素单用及联合使用对BF的抑制效果。结果显示:水提诃子对45.0%的***的MIC≤0.80g/L;波棱瓜子75%乙醇提取物及马兜铃甲醇提取物对20株***的MIC均≤0.40g/L;强力霉素和氨苄西林对19株***的MIC≤0.25mg/L,万古霉素的MIC均≤0.50mg/L;诃子75%乙醇提取物与庆大霉素联用抑菌效果较好,对70.0%的***产生协同作用;20株产气荚膜梭菌均具有BF成膜能力,55.0%的菌株呈强成膜能力;被检抗生素中多黏菌素B对BF的抑制作用最强,在1/4MIC处有强抑制效果;被检藏药提取物中马兜铃甲醇提取物与诃子75%乙醇提取物在1/2MIC处对BF具有强抑制效果;庆大霉素与诃子75%乙醇提取物联用及多黏菌素B与马兜铃甲醇提取物联用在两者均为1/4MIC时对BF仍有强抑制效果。结果表明,4种藏药提取物对***具有抑菌效果,对其BF的形成具有抑制作用,与抗生素联用能增强抑制效果,需进一步对藏药抑菌机制进行研究。

关键词：产气荚膜梭菌藏药 MIC 药敏试验 BF

GZLSi7MgTi高强度铝合金在生产中的应用

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特种铸造及有色合金 1990年第6期10卷 31-34页

作者：黄家旗靳斌全河南省平顶山高压开关厂

本文通过对比和分析引进法国A—S7G06和自制GZLSi7MgTi合金的化学成分及力学、铸造等性能。得出:本合金具有综合力学性能、铸造性能和机加工性能俱佳等特点,用于批量生产,效果显著。

关键词：铝合金化学成分机械性能变质

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玻璃纤维过滤网作铝合金铸件易割冒口片

铸造 1993年第2期42卷 42-44页

作者：黄家旗靳斌全薛会生平顶山高压开关厂

用玻璃纤维过滤网作铝合金铸件易割冒口片取得了较好的效果.经试验和生产验证,对于直径中φ90mm的冒口,采用补缩通道为φ15~40mm的玻璃纤维过滤网作易割冒口片,生产的铝合金铸件(30~40kg重),冒口容易除掉,冒口根无任何缺陷,成品合格率10... 详细信息

用玻璃纤维过滤网作铝合金铸件易割冒口片取得了较好的效果.经试验和生产验证,对于直径中φ90mm的冒口,采用补缩通道为φ15~40mm的玻璃纤维过滤网作易割冒口片,生产的铝合金铸件(30~40kg重),冒口容易除掉,冒口根无任何缺陷,成品合格率100%.不仅减轻了劳动强度,改善了工作环境,而且省去了锯冒口设备.

关键词：铝合金铸件过滤网冒口片

牦牛源C型产气荚膜梭菌动物致病性及其β毒素基因生物信息分析

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中国兽医学报 2022年第6期42卷 1184-1193页

作者：吴丹黄家旗罗润波郭欣冉吕家煌宋仁德索朗斯珠西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860000 江苏农业科学研究院兽医研究所江苏南京210014 青海玉树藏族自治州畜牧兽医工作站青海玉树815000

复苏培养本实验室保存的牦牛源C型产气荚膜梭菌Qinghai-06(GenBank登录号:MW980095),利用振荡比浊法、动物试验和病理切片方法对菌株生长曲线及动物致病性进行研究,随后通过对β毒素基因扩增、克隆、双向高通量测序、生物软件分析等分... 详细信息

复苏培养本实验室保存的牦牛源C型产气荚膜梭菌Qinghai-06(GenBank登录号:MW980095),利用振荡比浊法、动物试验和病理切片方法对菌株生长曲线及动物致病性进行研究,随后通过对β毒素基因扩增、克隆、双向高通量测序、生物软件分析等分子生物学与生物信息学方法对其编码蛋白的一级结构、二级结构、三级结构、蛋白特殊区域及B细胞线性抗原表位进行分析。结果显示,牦牛源C型产气荚膜梭菌Qinghai-06菌株按照5%体积分数接种后,2~6h为对数期;菌液D_(600 nm)值与稀释倍数的关系式为y=-0.857ln(x)+2.236;菌液D_(600 nm)值与菌落CFU的关系式为:y=0.881x-0.017;菌株对感染小鼠的LD_(50)为0.408×10^(8)CFU/m L。H.E染色镜检观察到可引起肠、脑、肾脏、肝脏、脾脏组织病理变化。β毒素基因序列长927bp,共编码309个氨基酸,分子式为C_(1535)H_(2396)N_(406)O_(502)S_(9),相对分子质量为34.9ku,p I=5.52,不稳定指数为35.91,亲水性总平均值为-0.567,含有全部20种氨基酸,为单体,含1个Zn^(2+)配体。结果表明:牦牛源C型产气荚膜梭菌Qinghai-06属强致病菌株,其β毒素蛋白为含丰富无规则卷曲结构和潜在磷酸化位点的、稳定的亲水性蛋白,有效B细胞线性抗原表位主要集中于140~290区段。

关键词：牦牛产气荚膜梭菌病理切片 β毒素生物信息分析

1株牦牛源A型产气荚膜梭菌的生长特性及致病性研究

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黑龙江畜牧兽医 2023年第11期 79-84,138,139页

作者：黄家旗吴丹罗润波李宇鹏李彬石红梅参木友索朗斯珠西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860000 江苏农业科学研究院兽医研究所南京210014 甘南州畜牧工作站甘肃甘南747000 西藏自治区农牧科学院草业科学研究所拉萨850000

为了了解青海牦牛源产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,Cp)的生长特性及致病性,并计算其对感染小鼠的半数致死量(LD_(50)),以及观察感染小鼠各器官组织的损伤情况,试验复苏牦牛源产气荚膜梭菌ZD-01(CpA ZD-01)并配制种子液,采用振... 详细信息

为了了解青海牦牛源产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,Cp)的生长特性及致病性,并计算其对感染小鼠的半数致死量(LD_(50)),以及观察感染小鼠各器官组织的损伤情况,试验复苏牦牛源产气荚膜梭菌ZD-01(CpA ZD-01)并配制种子液,采用振荡比浊法绘制CpA ZD-01菌株的生长曲线,并研究对数期菌液的OD_(600)值与稀释倍数和细菌数量的关系;测定其外毒素粗提取液OD_(280)值和OD_(260)值,计算出不同培养时间毒素蛋白含量;给小鼠腹腔注射菌液,根据小鼠死亡情况确定LD_(0)和LD_(100),并计算LD_(50),解剖小鼠观察牦牛源CpA ZD-01菌株对各组织器官的影响。结果表明:按照5%接种量接种菌株后,>2~10 h为对数期;菌液OD_(600)值(y)与稀释倍数(x)的关系式为y=-0.607lnx+1.551,R^(2)=0.990,P<0.05;菌液OD_(600)值(y)与细菌数量(z)的关系式为y=4.679z-4.448,R^(2)=0.995,P<0.05;在培养12 h后菌株所产生的毒素蛋白含量达到3.480 mg/mL,且第12小时为最佳产毒时间;菌株对感染小鼠的LD_(50)为5.955×10^(8)cfu/mL。急性死亡小鼠各器官无明显病理变化;慢性死亡小鼠脾脏白髓可见细胞增生,红髓淤血;大脑组织间质血管充血;肝细胞空泡变性;肾小管变性并伴有透明管型;肠道组织出现自溶现象。说明牦牛源CpA ZD-01菌株致病性较强。

关键词：牦牛产气荚膜梭菌生长特性致病性病理切片

青海玉树牦牛源产气荚膜梭菌的分离鉴定及耐药性研究

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中国兽医学报 2022年第3期42卷 522-528,546页

作者：吴丹罗润波黄家旗刘安静夏子涵吕家煌李彬宋仁德索朗斯珠西藏农牧学院动物科学院西藏林芝860000 江苏农业科学研究院兽医研究所江苏南京210014 国家肉牛牦牛产业技术体系玉树综合试验站青海玉树815000

无菌采集青海玉树地区牦牛源腹泻粪样,利用常规方法和分子生物学技术对样品中的产气荚膜梭菌进行分离鉴定,通过动物试验、药敏试验、耐药基因检测等方法对分离到的菌株进行了分析。结果显示,从148份样品中成功分离鉴定出牦牛源产气荚膜... 详细信息

无菌采集青海玉树地区牦牛源腹泻粪样,利用常规方法和分子生物学技术对样品中的产气荚膜梭菌进行分离鉴定,通过动物试验、药敏试验、耐药基因检测等方法对分离到的菌株进行了分析。结果显示,从148份样品中成功分离鉴定出牦牛源产气荚膜梭菌14株,其中10株为A型,4株为C型。利用16S rRNA基因序列对部分分离菌系统遗传进化树分析,结果发现,YS-1(MW980090)与印度豹源(MN326666.1)产气荚膜梭菌具有较近的亲缘性,YS-4(MW980093)和YS-13(MW980102)为单独的一枝,YS-6(MW980095)与北京人源(KP944154.1)产气荚膜梭菌具有相似性。A型菌YS-1(MW980090)和C型菌株YS-6(MW980095)动物试验结果显示,C型产气荚膜梭菌外毒素具有强致死性,A、C型菌具有强致死性。药敏试验结果表明,分离菌对复方新诺明、多黏菌素、青霉素、多西环素、四环素耐药,对克林霉素、氯霉素、万古霉素、氧氟沙星敏感。本研究为预防和治疗因产气荚膜梭菌导致牦牛腹泻等疾病提供用药指导。

关键词：牦牛产气荚膜梭菌进化树耐药性动物试验

林芝市某藏猪养殖场6种腹泻病原的检测与分析

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黑龙江畜牧兽医 2023年第4期 77-80页

作者：蔡重振罗润波吴丹黄家旗李宇鹏商鹏强巴央宗李彬索朗斯珠西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860000 江苏农业科学研究院兽医研究所南京210014

为了解西藏林芝市某藏猪养殖场猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)、传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、A群轮状病毒(Rotavirus A,RVA)、产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)和肠炎沙门氏菌(Salmonella enteriditis,SE)6种腹泻病原的流行情况,于2021年在该养殖场采集藏猪腹泻粪便样本40份,通过PCR方法对6种病原进行检测。结果表明:40份被检样本中PEDV、PDCoV、TGEV、RVA、ETEC、SE的阳性率分别为50.0%(20/40)、12.5%(5/40)、17.5%(7/40)、10.0%(4/40)、52.5%(21/40)和30.0%(12/40);且60.6%样本中检测出两种或两种以上病原体,其中18.2%样本出现了4种病原混合感染的情况。说明该藏猪养殖场存在多种腹泻病原,且混合感染较为严重,提示该场应开展腹泻疾病净化工作并防止病原扩散。

关键词：藏猪腹泻病原检测流行病学混合感染

1株青海牦牛腹泻产气荚膜梭菌基因分型及cpa基因生物信息学分析

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中国兽医学报 2023年第1期43卷 123-131页

作者：吴丹罗润波黄家旗蔡重振郭欣冉郭晓庆丹增卓嘎李彬宋仁德索朗斯珠西藏农牧学院、动物科学院西藏林芝860000 江苏农业科学研究院、兽医研究所江苏南京210014 国家肉牛牦牛产业技术体系、玉树综合试验站青海玉树815000

为了解1株从青海玉树地区牦牛腹泻中分离的牦牛源产气荚膜梭菌Qinghai-1的分子型和cpa基因编码蛋白的生物信息,首先利用16S rDNA扩增、毒素基因检测、MLST分型、基因克隆等分子生物学方法对菌株毒素基因和管家基因进行分析,随后通过对cp... 详细信息

为了解1株从青海玉树地区牦牛腹泻中分离的牦牛源产气荚膜梭菌Qinghai-1的分子型和cpa基因编码蛋白的生物信息,首先利用16S rDNA扩增、毒素基因检测、MLST分型、基因克隆等分子生物学方法对菌株毒素基因和管家基因进行分析,随后通过对cpa基因双向高通量测序、生物软件分析等生物信息学方法对其编码的α毒素蛋白的一级结构、二级结构、三级结构、蛋白特殊区域、B细胞线性抗原表位及蛋白互作关系进行分析。结果显示,Qinghai-1菌株分型毒素仅含有α毒素,各管家基因的等位基因序号依次为colA:9、groEL:96、sodA:91、plc:44、gyrB:67、sigK:55、pgk:8、nadA:16;cpa基因全长1197 bp,共编码398个氨基酸,与丹麦鸡源(EU839784.1)分离株plc基因差异性较小;其编码的α毒素蛋白分子式为C2036H3061N533O631S12,相对分子质量为45.5 ku,pI=5.68,脂肪指数:61.36,不稳定指数:19.88,亲水性总平均值-0.756,拥有1个跨膜螺旋和43个潜在磷酸化位点,B细胞线性抗原表位存在的区域为:25~36,81~121,194~202,312~324,356~364,389~394;其主要作用蛋白磷脂酶C(plc)与其他10个蛋白共形成23条相互作用连线。综上,Qinghai-1菌株为A型产气荚膜梭菌,是1株新的MLST型菌株,为ST-414型;其α毒素蛋白为含跨膜结构、含信号肽、含磷酸化位点、含多个B细胞线性抗原表位和能与多个蛋白相互作用的、稳定的亲水性蛋白。研究结果可为进一步了解牦牛源产气荚膜梭菌分子型以及通过深入的细胞毒性作用研究为后续进一步研究α毒素致病机理提供重要理论依据。

关键词：牦牛产气荚膜梭菌分子分型 cpa基因生物信息学分析