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细菌源脂肪酶的发酵生产及其纯化和固定化工艺研究

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细菌源脂肪酶的发酵生产及其纯化和固定化工艺研究

作者：黄家岭贵州师范大学

学位级别：硕士

为了给扩大脂肪酶的生产源提供基础性材料,本文从细菌的筛选,脂肪酶的纯化、固定化以及其相关性质等方面展开研究,具体工作如下:从贵阳市附近的炼油厂、蔬菜园、粮油市场、贵州师范大学食堂采集土壤样品,经过初筛、复筛、分离和鉴定,从7... 详细信息

为了给扩大脂肪酶的生产源提供基础性材料,本文从细菌的筛选,脂肪酶的纯化、固定化以及其相关性质等方面展开研究,具体工作如下:从贵阳市附近的炼油厂、蔬菜园、粮油市场、贵州师范大学食堂采集土壤样品,经过初筛、复筛、分离和鉴定,从78份土样中共筛选到24株脂肪酶产生菌,这些菌株发酵液的脂肪酶活性为1.0～13.2U/mL,其中从炼油厂土样中筛选到的A7菌株的产脂肪酶活性最高。分别以不同碳源和氮源培养A7菌株,结果表明:细菌发酵产脂肪酶的最佳碳源和最佳氮源分别是蔗糖和酵母粉。通过正交试验对菌株A7液体发酵产脂肪酶培养基进行了优化,确定其最适产酶发酵培养基为(%):酵母粉3.5g,蔗糖1g,菜子油2mL,硫酸镁0.25g,磷酸氢二钾0.2g,硫酸铵0.3g,pH8.0;此外,还发现菌株A7的最佳培养时间为48h。细菌发酵液经过饱和硫酸铵沉淀和Sephadex G-75排阻层析两步处理,脂肪酶活回收率分别为49.32%和22.32%;所得脂肪酶溶液经SDS-PAGE电泳检测,得到单一的电泳条带;根据电泳结果计算得到细菌菌株A7所产脂肪酶的分子量为29.5kd。对脂肪酶分别进行物理吸附和包埋法固定化研究发现,包埋法的效果明显好于物理吸附法。其中高岭土-海藻酸钠结合法效果最好,其相对酶活力达到62.55%,比硅藻土吸附法高出近30个百分点。通过比较游离脂肪酶和固定化酶的性质研究发现,脂肪酶在固定化处理后最适温度没有发生变化,均为40℃;而最适pH值则由游离态的8.0降低为固定化后的7.5。另外还发现固定化酶比游离态脂肪酶更稳定,重复使用5次后,脂肪酶活力从30U/g降到15.48U/g,每次反应时间为15min,所以固定化酶的半衰期为75min(5×15)。

关键词：脂肪酶细菌发酵纯化固定化

离子色谱法测定酸汤中13种有机酸的分析方法

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食品科技 2022年第8期47卷 256-263页

作者：龙四红陈谢花李红洲徐丽红黄家岭贵州省产品质量检验检测院国家酒类及加工食品质量监督检验中心贵州贵阳550016 茅台学院贵州遵义564507

文章建立了测定酸汤中13种有机酸的离子色谱法。采用Dionex Ion Pac AS11-HC色谱柱和电导检测器,以流速为1.5 mL/min的KOH淋洗液进行梯度洗脱,奎宁酸、乳酸、乙酸、丙酸、甲酸、丁酸、己酸、山梨酸、己二酸、苹果酸、酒石酸、草酸和柠... 详细信息

文章建立了测定酸汤中13种有机酸的离子色谱法。采用Dionex Ion Pac AS11-HC色谱柱和电导检测器,以流速为1.5 mL/min的KOH淋洗液进行梯度洗脱,奎宁酸、乳酸、乙酸、丙酸、甲酸、丁酸、己酸、山梨酸、己二酸、苹果酸、酒石酸、草酸和柠檬酸可以在40 min内分离和定量。标准曲线相关系数R^(2)为0.9919~0.9999,检出限为0.001~0.015μg/mL,定量限为0.004~0.068μg/mL,精密度试验结果相对偏差(RSD)为0.52%~1.79%,重复性试验结果相对偏差(RSD)为2.48%~4.94%,样品加标平均回收率为93.8%~109.3%,RSD范围在0.85%~2.41%。该方法操作简单、精密度和准确度高、重复性好,能同时将酸汤中13种有机酸完全分离,可用于酸汤中有机酸的检测。

关键词：酸汤离子色谱法有机酸

蒸馏法-气相色谱法联用测定葡萄酒中乙醛和糠醛

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食品工业 2022年第1期43卷 273-276页

作者：王焕琦李红洲黄家岭王正强贵州省产品质量检验检测院贵阳550016

建立蒸馏法-气相色谱法联用同时配合内标法测定葡萄酒中乙醛和糠醛含量的检测方法,简化以往的衍生化法和固相微萃取法试验步骤和试验成本,并且优化蒸馏法中纯水添加量和色谱分析条件。结果表明,乙醛和糠醛分别在质量浓度5.0~100.0μg/mL... 详细信息

建立蒸馏法-气相色谱法联用同时配合内标法测定葡萄酒中乙醛和糠醛含量的检测方法,简化以往的衍生化法和固相微萃取法试验步骤和试验成本,并且优化蒸馏法中纯水添加量和色谱分析条件。结果表明,乙醛和糠醛分别在质量浓度5.0~100.0μg/mL和0.5~50.0μg/mL,线性关系良好,相关系数R^(2)分别为0.999 33、0.999 75。乙醛和糠醛重复性检测值S_(RSD)值为1.55%~1.80%,3个水平样品加标平均回收率分别为82.47%~89.66%、89.44%~92.15%、93.14%~95.26%,方法精密度(S_(RSD))分别为1.47%~4.23%、1.66%~5.33%、1.54%~4.52%(n=5),乙醛和糠醛的方法最低检出限分别为4.48μg/mL和0.54μg/mL,5种市售葡萄酒乙醛含量范围为10.22~65.24μg/mL,糠醛含量范围为1.51~5.78μg/mL。该方法适用于葡萄酒中乙醛和糠醛的测定。

关键词：乙醛糠醛葡萄酒蒸馏法-气相色谱内标法

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细菌A007菌株脂肪酶的纯化及性质研究

安徽农业大学学报 2010年第1期37卷 170-173页

作者：黄家岭乙引张习敏王岚贵州师范大学生命科学学院贵阳550001

微生物产生的脂肪酶种类繁多、pH和温度的适应范围广,有十分广泛的应用。细菌在油脂培养基中30℃培养24 h,经1次硫酸铵沉淀和2次Sephadex G-75排阻层析得到电泳纯脂肪酶。经SDS-PAGE测得其分子量为29.5 ku,经酶促反应测定最适温度为40℃... 详细信息

微生物产生的脂肪酶种类繁多、pH和温度的适应范围广,有十分广泛的应用。细菌在油脂培养基中30℃培养24 h,经1次硫酸铵沉淀和2次Sephadex G-75排阻层析得到电泳纯脂肪酶。经SDS-PAGE测得其分子量为29.5 ku,经酶促反应测定最适温度为40℃,最适pH为8.0,表现出较好的温度和pH稳定性。

关键词：细菌脂肪酶纯化凝胶层析酶学性质

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细菌脂肪酶的固定化研究

安徽农业科学 2009年第25期37卷 11849-11850,11852页

作者：黄家岭乙引张习敏王岚邹晶贵州师范大学生命科学学院贵州贵阳550001

[目的]在传统海藻酸钠包埋的基础上,探索出一种固定化脂肪酶的有效方法,为其工业化生产提供参考。[方法]以高岭土和海藻酸钠为载体,用包埋法制备固定化脂肪酶,并测定固定化脂肪酶的活力及酶活得率。[结果]固定化脂肪酶的相对活力达到30.... 详细信息

[目的]在传统海藻酸钠包埋的基础上,探索出一种固定化脂肪酶的有效方法,为其工业化生产提供参考。[方法]以高岭土和海藻酸钠为载体,用包埋法制备固定化脂肪酶,并测定固定化脂肪酶的活力及酶活得率。[结果]固定化脂肪酶的相对活力达到30.00%,酶活得率为62.55%。[结论]固定化脂肪酶具有良好稳定性,有利于工业化生产应用。

关键词：细菌固定化脂肪酶包埋

产脂肪酶细菌的筛选及碳、氮源对其产酶活性的影响

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安徽农业科学 2009年第6期37卷 2395-2396页

作者：黄家岭乙引王岚邹晶张习敏贵州师范大学生命科学学院贵州贵阳550001

[目的]为扩大脂肪酶的生产源提供基础资料。[方法]从贵阳市附近的炼油厂、粮油市场、贵州师范大学食堂采集土壤样品,从中筛选高产脂肪酶的细菌菌株。[结果]经过初筛、复筛、分离和鉴定,从78份土样中共筛选到24株脂肪酶产生菌,这些菌株... 详细信息

[目的]为扩大脂肪酶的生产源提供基础资料。[方法]从贵阳市附近的炼油厂、粮油市场、贵州师范大学食堂采集土壤样品,从中筛选高产脂肪酶的细菌菌株。[结果]经过初筛、复筛、分离和鉴定,从78份土样中共筛选到24株脂肪酶产生菌,这些菌株发酵液的脂肪酶活性为1.0-13.2 U/m l,其中从炼油厂土样中筛选到的A7菌株的产脂肪酶活性最强。分别以不同碳源和不同氮源培养A7菌株,发现各碳源对其产酶活性的促进作用分别为蔗糖〉葡萄糖〉果糖〉可溶性淀粉〉甘露醇,各氮源对其产酶活性的促进作用分别牛肉膏〉蛋白胨〉尿素〉黄豆饼粉、酵母粉〉硝酸钠。[结论]炼油厂土样中细菌的产酶活性较高,细菌发酵产脂肪酶的最佳碳源为蔗糖,最佳氮源为牛肉膏。

关键词：细菌脂肪酶发酵筛选

液相色谱-荧光检测法测定辣椒制品中的辣椒素和二氢辣椒素

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中国调味品 2016年第9期41卷 123-125页

作者：廖妍俨龙四红寻思颖黄家岭孙棣贵州省产品质量监督检验院贵阳550016

研究针对辣椒制品的特点,采用乙腈-四氢呋喃混合溶液（1∶1）作为提取溶剂,经过简便、有效的浸提方式,选择乙腈和水（60∶40）为流动相,通过选择性强的荧光检测器（激发波长229nm,发射波长320nm）进行分析,能简单、快速、高效地检测辣... 详细信息

研究针对辣椒制品的特点,采用乙腈-四氢呋喃混合溶液（1∶1）作为提取溶剂,经过简便、有效的浸提方式,选择乙腈和水（60∶40）为流动相,通过选择性强的荧光检测器（激发波长229nm,发射波长320nm）进行分析,能简单、快速、高效地检测辣椒制品中的辣椒素类物质。该方法对辣椒素的检出限为0.1mg/kg、二氢辣椒素的检出限为0.02mg/kg,回收率为87%～105%,精密度为1.4%～4.9%。该检测方法操作简便,定量准确,重现性好,适用范围广。

关键词：液相色谱荧光法辣椒素二氢辣椒素

GC-MS定性/HS-20顶空结合GC定量测定酒中痕量氰化物

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酿酒科技 2014年第7期 105-108页

作者：张建苏利进李凯黄家岭田志强詹松黄涛宏李欣贵州省产品质量监督检验院贵州贵阳550004 国家酒类及饮料质量监督检验中心贵州贵阳550004 岛津企业管理(中国)有限公司广州分公司广东广州510010

采用GC-MS定性,顶空结合GC定量。利用低毒的KSCN代替KCN与氯胺-T反应,将氰化物衍生为氯化氰。优化平衡温度和平衡时间,建立了测定酒样中氰化物含量的测定方法。在0.05～1.0μg/mL的范围内建立标准曲线,相关系数为0.995,平行5次测定峰面... 详细信息

采用GC-MS定性,顶空结合GC定量。利用低毒的KSCN代替KCN与氯胺-T反应,将氰化物衍生为氯化氰。优化平衡温度和平衡时间,建立了测定酒样中氰化物含量的测定方法。在0.05～1.0μg/mL的范围内建立标准曲线,相关系数为0.995,平行5次测定峰面积的相对标准偏差为5.4%,样品加标回收率在120%,对氰化物检出限为0.0025μg/L。此方法准确、安全、抗干扰、可操作性强,可用于酒样中氰化物含量的测定。

关键词： HS-20顶空 GC-GCMS 酒样氰化物

顶空固相微萃取-气相色谱法检测白酒中吡嗪类化合物

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中国酿造 2016年第8期35卷 163-168页

作者：黄家岭廖妍俨孙棣张倩龙四红贵州省产品质量监督检验院国家酒类及加工食品质量监督检验中心贵州贵阳550016

该研究从样品前处理、萃取条件两个方面对顶空固相微萃取．气相色谱法检测白酒中吡嗪类化合物进行优化，得到最佳检测条件为：用高纯水将白酒样稀释至酒精度为10％vol，同时向样品中加入NaCl，并使其质量浓度为0．05g／mL，调节样品体系... 详细信息

该研究从样品前处理、萃取条件两个方面对顶空固相微萃取．气相色谱法检测白酒中吡嗪类化合物进行优化，得到最佳检测条件为：用高纯水将白酒样稀释至酒精度为10％vol，同时向样品中加入NaCl，并使其质量浓度为0．05g／mL，调节样品体系的pH值为8；在70℃条件下，采用50／30μmDVB／CAR／PDMS固相萃取头萃取50min，汽化室温度250℃的条件下解吸3min。方法学研究表明，在0．05~20mg／L的线性范围内具有良好的线性关系，相关系数R〉0．99，8种吡嗪类物质方法的检出限（S／N=3）为1．37~6．78μg／L，回收率87．6％～105．4％，相对标准偏差为4．61％~6．37％。用该方法对5种酱香型白酒检测，所测样品中吡嗪类物质含量在0～29mg／L，其中1^#酒样中吡嗪类物质的含量最高，达到25．72mg／L。

关键词：吡嗪类物质顶空-固相微萃取气相色谱白酒