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不同地理株间日疟原虫环子孢子蛋白基因多态性的特征

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 1996年第1期14卷 20-25页

作者：黄天谊程勤黄亚铭贵州省寄生虫病研究所澳大利亚昆士兰医学研究所广西壮族自治区寄生虫病防治研究所

目的：探讨间日疟原虫环子孢子蛋白（ＣＳＰ）基因多态性的地理特征及其实用意义。方法：用ＤＮＡ的ＰＣＲ扩增与电泳切带纯化法，获得所研究的基因片段；用引物标记周期反应测序法，测定ＤＮＡ序列；用图解法分析比较各地ＣＳＰ基因的... 详细信息

目的：探讨间日疟原虫环子孢子蛋白（ＣＳＰ）基因多态性的地理特征及其实用意义。方法：用ＤＮＡ的ＰＣＲ扩增与电泳切带纯化法，获得所研究的基因片段；用引物标记周期反应测序法，测定ＤＮＡ序列；用图解法分析比较各地ＣＳＰ基因的氨基酸序列的变化。结果：所测定的中国、菲律宾和所罗门的１５个间日疟分离株均属ＰＶ－１型，但各株有较明显的地理性变异。６个中国株与ＮＫ株相似，其中Ｃ－２与ＮＫ株完全一致，而与其他Ⅰ型株有明显区别。结论：根据ＣＳＰ基因中央重复区及重复后可变区推导的氨基酸序列的变异情况，在Ｑａｒｉｔ和Ｍａｎｎ的分组基础上，迄今已发表的所有Ⅰ型株可归纳为２族６个组。分组序列特征有可能用于不同地理株的检出和鉴定，从而在疟疾的流行病学与防治上有实用价值，并将有助于疟原虫的生物学、分类学和种系发生的研究。

关键词：间日疟原虫环子孢子蛋白多态性 DNA 序列分析

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单管单轮多重PCR检测4种疟原虫混合血样

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2015年第3期33卷 200-205页

作者：黄雨婷佘丹娅卢丽丹张念恒黄天谊贵州省疾病预防控制中心贵阳550004

目的建立一种可同时检测4种疟原虫单一及混合感染的单管单轮多重PCR技术。方法在快速巢式PCR的基础上,设计折叠引物,优化PCR反应试剂的主要组分浓度及各条引物的退火温度,建立折叠引物多重PCR法（FP-PCR）。利用优化后的FP-PCR法,对间... 详细信息

目的建立一种可同时检测4种疟原虫单一及混合感染的单管单轮多重PCR技术。方法在快速巢式PCR的基础上,设计折叠引物,优化PCR反应试剂的主要组分浓度及各条引物的退火温度,建立折叠引物多重PCR法（FP-PCR）。利用优化后的FP-PCR法,对间日疟原虫（Plasmodium vivax）、恶性疟原虫（P.falciparum）、卵形疟原虫（P.ovale,包括wallikeri亚种）和三日疟原虫（P.malariae）的单一及混合疟原虫DNA模板进行检测,分析该方法的敏感性和特异性。结果在7次重复实验中,4种疟原虫单一感染检出的最低浓度均接近1个/μl血。此外,在检测2～4种原虫以高、低密度相差100倍的模拟混合感染的滤纸血样中,FP-PCR法正确检出每个组合的所有虫种的成功率为68%（57/84）。在10份健康人滤纸血样中,FP-PCR法除产生少量二聚体外无任何扩增条带。结论 FP-PCR法仅需单管单轮扩增即可同时检测4种人疟原虫单一或混合感染,为疟疾的监测和筛查提供了简便、可靠的诊断方法。

关键词：折叠引物多重PCR 恶性疟原虫疟疾诊断

套式/多重PCR诊断疟疾的敏感性、特异性和稳定性初探

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2007年第3期25卷 213-216页

作者：郭传坤黎学铭李锦辉毛玮林珍杜进发黄天谊广西壮族自治区疾病预防控制中心南宁530021 贵州省疾病预防控制中心贵阳550004

目的提高标签引物-套式/多重PCR诊断疟疾的敏感性、特异性与稳定性。方法用滤纸法采集非疟疾发热病人血样30份及其他传染病(感冒,流感,伤寒,肝炎等)患者血样20份;抽取恶性疟和间日疟各1例患者血4m1,进行系列稀释制备不同疟原虫含量的感... 详细信息

目的提高标签引物-套式/多重PCR诊断疟疾的敏感性、特异性与稳定性。方法用滤纸法采集非疟疾发热病人血样30份及其他传染病(感冒,流感,伤寒,肝炎等)患者血样20份;抽取恶性疟和间日疟各1例患者血4m1,进行系列稀释制备不同疟原虫含量的感染血样;健康者血样作对照。用热裂解法制备DNA模板,用线粒体细胞色素氧化酶基因作为靶基因,应用相关软件和网络资源(PrimerPremier5.0,PUBMED,NCBI-BLAST和Mfold服务器)设计和优化标签引物-套式/多重PCR,并用于检测所采集制备的各种血样。结果间日疟与恶性疟患者血系列稀释为含1000、100、10和1个虫/μl后经标签引物-套式/多重PCR检测,恶性疟和间日疟患者各稀释含虫血样分别在611bp和255bp出现1条带,能检测到原虫密度均为1个虫/μl血;非疟疾发热病人血样30份及其他传染病患者血样均为阴性;健康者血样未出现扩增条带,每种血样反复测试3次以上均获得同样结果。结论经优化的标签引物-套式/多重PCR在疟疾诊断中具有较高的敏感性、特异性和稳定性。

关键词：恶性疟原虫间日疟原虫套式/多重PCR 标签引物疟疾诊断

单管-套式/多重聚合酶链反应在间日疟原虫基因型鉴定中的价值

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中华检验医学杂志 2004年第10期27卷 642-645页

作者：黄天谊黎学铭刘涛郭传坤黄雨婷林睿贵州省疾病预防控制中心慢性病防治研究所贵阳550004 南宁市广西壮族自治区疾病预防控制中心

目的　对单管套式多重聚合酶链反应 (PCR)鉴定间日疟原虫基因型方法的应用价值进行研究。方法　以间日疟原虫环子孢子蛋白 (CSP)基因为模型 ,综合套式多重PCR、等位特异PCR和标签引物扩增等技术 ,使用PrimerPremier 5 0软件和NCBI的BL... 详细信息

目的　对单管套式多重聚合酶链反应 (PCR)鉴定间日疟原虫基因型方法的应用价值进行研究。方法　以间日疟原虫环子孢子蛋白 (CSP)基因为模型 ,综合套式多重PCR、等位特异PCR和标签引物扩增等技术 ,使用PrimerPremier 5 0软件和NCBI的BLAST网络改进与优化引物设计 ,并用矩阵试验法优化反应条件和程序 ,同时 ,用单管套式多重PCR和套式PCR对 71份间日疟患者血标本的间日疟原虫基因型鉴定结果作比较。结果　单管套式多重PCR可同时扩增出 3种不同长度的基因型 /族特异片段 ,且基本消除了二聚体等噪音。用单管套式多重PCR鉴定检测 71份间日疟患者血标本 ,6 2份与套式PCR鉴定结果一致 ,并新发现 6份不同基因型和PV Ⅱ型的混合感染 ;还将 2份套式PCR鉴定为热带族的血标本纠正为PV Ⅱ型 ,1份阴性血样鉴定为温带族。结论　研究建立的单管套式 /多重PCR鉴定间日疟原虫基因型的方法 ,简化了试验步骤 ,节省了试剂耗材 ,消除了PCR噪音 ,提高了检出间日疟原虫混合感染和低度感染的敏感性 ;

关键词：间日疟原虫血标本多重聚合酶链反应套式PCR 多重PCR 患者基因型 NCBI PCR) 引物设计

标签引物-套式/多重PCR检测恶性疟原虫和间日疟原虫的研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2005年第3期23卷 140-142页

作者：黄天谊王世海黎学铭郭传坤徐建军唐丽娜卢丽丹贵州省疾病预防控制中心贵阳550001 广西壮族自治区疾病预防控制中心南宁530021

目的建立简便、灵敏、低本底、可同时检测恶性疟原虫和间日疟原虫的套式/多重聚合酶链反应(PCR)系统。方法应用标签引物扩增技术、PrimerPremier5.0软件、美国生物信息中心(NCBI-BLAST)网络资源和矩阵试验法优化套式/多重PCR,检测疟疾... 详细信息

目的建立简便、灵敏、低本底、可同时检测恶性疟原虫和间日疟原虫的套式/多重聚合酶链反应(PCR)系统。方法应用标签引物扩增技术、PrimerPremier5.0软件、美国生物信息中心(NCBI-BLAST)网络资源和矩阵试验法优化套式/多重PCR,检测疟疾患者滤纸血样并与镜检结果进行比较。结果新建立的标签引物套式/多重PCR,检测模拟现场滤纸血样的敏感性为恶性疟原虫1～2个虫/μl血,间日疟原虫5～10个虫/μl血。检测71份现场采集的镜检疟原虫阳性滤纸血样(恶性疟24份和间日疟47份)的结果与镜检结果的符合率分别为87.5%和100%。结论通过标签引物扩增技术优化的套式/多重PCR系统,适用于检测现场采集的滤纸血样,其检出低原虫血症的敏感性和鉴定虫种的准确性均优于镜检法,是很有潜力的疟疾诊断技术。

关键词：恶性疟原虫间只疟原虫聚合酶链反应标签引物疟疾诊断

贵州省县级和省级疟疾诊断实验室检测结果比较分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2015年第4期33卷 307-308页

作者：黄雨婷卢丽丹佘丹娅张念恒黄天谊贵州省疾病预防控制中心贵阳550004

贵州省省级疟疾诊断实验室通过PCR法和镜检法对各县级疟疾诊断实验室上报的疟疾网报病例进行复核,以PCR和镜检一致的结果作为判定依据,对县级疟疾诊断实验室镜检结果进行评价。共对89份血样进行复核,PCR检出24份阳性,15份为恶性疟原虫,... 详细信息

贵州省省级疟疾诊断实验室通过PCR法和镜检法对各县级疟疾诊断实验室上报的疟疾网报病例进行复核,以PCR和镜检一致的结果作为判定依据,对县级疟疾诊断实验室镜检结果进行评价。共对89份血样进行复核,PCR检出24份阳性,15份为恶性疟原虫,7份为间日疟原虫,2份为卵形疟原虫,均为输入性病例;省级镜检和PCR结果一致的有21份。县级与省级检测结果的总符合率为79.8%(67/84),县级漏检率为9.5%(2/21),误检率为23.8%(15/63),两级实验室检测的Kappa值为0.6,属于中、高度一致。

关键词：疟疾诊断 PCR 显微镜检查

套式／多重PCR方法应用于疟疾诊断与监测的初步评价

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2008年第4期26卷 277-280页

作者：郭传坤黎学铭林珍王光泽杨亚明李锦辉蒋智华黄天谊广西壮族自治区疾病预防控制中心南宁530002 海南省疾病预防控制中心海口570203 云南省寄生虫病防治研究所普洱665000 贵州省疾病预防控制中心贵阳550004

目的与镜检法比较评价标签引物-套式/多重PCR(UT-PCR)在疟疾监测中的应用价值。方法在海南、云南省恶性疟和间日疟混合流行区和广西疟疾控制区的疟疾监测中,采集初诊为疟疾或疑似疟疾的发热患者的血片与滤纸血样400份,在双盲条件下比较... 详细信息

目的与镜检法比较评价标签引物-套式/多重PCR(UT-PCR)在疟疾监测中的应用价值。方法在海南、云南省恶性疟和间日疟混合流行区和广西疟疾控制区的疟疾监测中,采集初诊为疟疾或疑似疟疾的发热患者的血片与滤纸血样400份,在双盲条件下比较镜检法与UT-PCR的初检结果,对结果不一致的血片再次镜检复查,同时对其滤纸血样重复PCR2～3次;评估UT-PCR与镜检法的敏感性和特异性。结果400例发热患者血样中,镜检法初检检出疟原虫阳性234例,其中恶性疟125例,间日疟109例;UT-PCR检出疟原虫阳性235例,其中恶性疟124例,间日疟109例;恶性疟和间日疟混合感染2例。两法初检结果一致的血样占92.5%(370/400),其中阴性154例,阳性216例(间日疟117例,恶性疟99例)。复查25份初检结果不一致的血样,包括镜检阴性PCR阳性11例,镜检阳性PCR阴性10例,镜检为恶性疟PCR为间日疟3例,镜检为间日疟而PCR为混合感染1例,其中15份与UT-PCR的初检结果一致,7份"假阳性"原因不明,仅3份为PCR的假阴性。根据复查结果评估PCR的敏感性为99.6%,特异性为98.8%。结论采用更敏感的UT-PCR疟疾诊断方法有助于解决疟疾诊断与鉴别诊断中的疑难问题,提高疟疾监测的质量和效率。

关键词：疟疾诊断间日疟恶性疟套式,多重PCR

基于线粒体细胞色素氧化酶亚单位3基因鉴定贵州省首例输入性卵形疟病例

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2019年第3期37卷 368-371页

作者：黄雨婷黄天谊卢丽丹佘丹娅李世军贵州省疾病预防控制中心

提取贵州省首例镜检诊断为输入性卵形疟病例的血样DNA,以疟原虫的核糖体RNA小亚基(SSU r RNA)和线粒体细胞色素氧化酶亚单位3基因(cox3)为靶标,分别设计属、种特异性引物及种特异性引物, PCR扩增、测序,比较2种引物对疟原虫种类PCR鉴定... 详细信息

提取贵州省首例镜检诊断为输入性卵形疟病例的血样DNA,以疟原虫的核糖体RNA小亚基(SSU r RNA)和线粒体细胞色素氧化酶亚单位3基因(cox3)为靶标,分别设计属、种特异性引物及种特异性引物, PCR扩增、测序,比较2种引物对疟原虫种类PCR鉴定的特异性。以卵形疟原虫wallikeri亚种参考序列(GenBank登录号:HQ712053.1)和curtisi亚种参考序列(GenBank登录号:HQ712052.1)为模板,应用DNAMAN V6软件对扩增序列进行Blast比对。利用Mega 7.0.26软件,采用邻接法,基于疟原虫线粒体cox3基因DNA序列构建系统进化树。PCR结果显示,基于疟原虫SSU r RNA属、种特异性引物扩增,仅获得1 200 bp的属特异性条带,未出现种特异性条带。基于疟原虫cox3种特异性引物扩增,可获得880 bp的目的条带。Blast比对结果显示,PCR扩增获得的cox3基因序列与卵形疟原虫wallikeri亚种和curtisi亚种的序列一致度为99.4%和97.4%。

关键词：输入性卵形疟 wallikeri亚种 PCR鉴定

广西间日疟原虫环子孢子蛋白基因型的初步研究

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中国寄生虫病防治杂志 2002年第6期15卷 336-338页

作者：郭传坤黎学铭林睿林珍李锦辉黄亚铭黄天谊许洪波广西壮族自治区疾病预防控制中心广西南宁530021 贵州省寄生虫病研究所

目的　了解广西间日疟原虫种群的基因型组成及其地理分布。　方法　用滤纸法采集经镜检确诊的间日疟原虫阳性病人血样 31份 ,Chelex- 10 0离子交换法用于提取滤纸血样中的 DNA,改进的套式 -等位特异 - PCR和琼脂糖凝胶电泳用于鉴别性片... 详细信息

目的　了解广西间日疟原虫种群的基因型组成及其地理分布。　方法　用滤纸法采集经镜检确诊的间日疟原虫阳性病人血样 31份 ,Chelex- 10 0离子交换法用于提取滤纸血样中的 DNA,改进的套式 -等位特异 - PCR和琼脂糖凝胶电泳用于鉴别性片段的扩增、分析和鉴定。　结果　在 19份广西当地间日疟病例血样中 17份鉴定为温带族虫株(89.5 % ) ,2份为热带族虫株 (10 .5 % ) ;12份输入病例血样中 ,温带族 8份 (6 6 .7% ) ,热带型 3份 (2 5 .0 % ) ,PV- 2型 1份(8.3% )。　结论　目前广西当地流行的间日疟以温带族虫株为主 ,少数热带族病例出现在环江和防城县 ;但输入间日疟病例中热带族虫株感染占较大比例。

关键词：广西间日疟原虫基因型环子孢子蛋白