检索结果-南通市图书馆

蛋白编码基因中四倍简并位点碱基转换与颠换的规律研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Acta Genetica Sinica 1996年第5期23卷 403-408页

作者：卢柏松黄培堂中国军事医学科学院生物工程研究所

以同源性在７０％以上的６组同源蛋白为材料，从系统发生的角度研究发生在四倍简并位点上的转换和颠换的关系。考虑碱基组成对碱基替换的影响后，转换对颠换的优势在四倍简并位点也存在，但不如线粒体ＤＮＡ中显著。比较不同转换或颠换... 详细信息

以同源性在７０％以上的６组同源蛋白为材料，从系统发生的角度研究发生在四倍简并位点上的转换和颠换的关系。考虑碱基组成对碱基替换的影响后，转换对颠换的优势在四倍简并位点也存在，但不如线粒体ＤＮＡ中显著。比较不同转换或颠换之间的关系发现，不同转换或颠换以十分接近的比率发生，Ａ－Ｇ转换与Ｃ－Ｔ转换的比率为０．９９：１，各种颠换相对于Ｔ－Ｃ转换的比率在０．６５－０．７３之间。进一步讨论了转换对颠换存在优势的原因，推测它可能与体内存在的诱变剂有关。

关键词：蛋白编码基因碱基四倍简并位点颠换

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

单质粒模式诱导表达载体系统的建立

生物化学与生物物理进展 2003年第5期30卷 824-825页

作者：刘定燮周晓巍黄培堂军事医学科学院生物工程研究所北京100071

在Invitrogen公司T Rex诱导表达系统的基础上,将目的基因与调控蛋白基因克隆于同一载体上,并在CV1细胞中观察了四环素对该单质粒模式载体报告基因表达的诱导效应.载体在瞬时转染CV1细胞并以四环素诱导 2 4h后目的基因的表达水平提高了 ... 详细信息

在Invitrogen公司T Rex诱导表达系统的基础上,将目的基因与调控蛋白基因克隆于同一载体上,并在CV1细胞中观察了四环素对该单质粒模式载体报告基因表达的诱导效应.载体在瞬时转染CV1细胞并以四环素诱导 2 4h后目的基因的表达水平提高了 8 9倍。

关键词：单质粒模式诱导表达载体系统四环素

脑药物转运载体——抗转铁蛋白受体单链抗体的克隆表达及鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物化学与分子生物学报 2002年第3期18卷 303-307页

作者：颜冰黄培堂军事医学科学院生物工程研究所北京100071

为构建特异性的脑药物转运载体 ,分段合成了抗大鼠转铁蛋白受体的单链抗体基因 (Ox2 6 scfv) .经重叠PCR拼接成完整片段 ,克隆入pUC19载体中 ,测序正确后克隆到大肠杆菌表达载体pET 15b E .tag上 .IPTG诱导 ,表达产物分子量为 2 9kD ,... 详细信息

为构建特异性的脑药物转运载体 ,分段合成了抗大鼠转铁蛋白受体的单链抗体基因 (Ox2 6 scfv) .经重叠PCR拼接成完整片段 ,克隆入pUC19载体中 ,测序正确后克隆到大肠杆菌表达载体pET 15b E .tag上 .IPTG诱导 ,表达产物分子量为 2 9kD ,约占菌体总蛋白量的 4 0 % .包涵体经 6mol L盐酸胍变性后 ,过SephacrylS 30 0HR分子筛柱复性蛋白 .免疫酶染色实验表明 ,该单链抗体能与转铁蛋白受体特异性结合。

关键词：药物转运载体抗转铁蛋白受体克隆表达鉴定单链抗体血脑屏障

抗转铁蛋白受体单链抗体的可溶性表达及其对脑的靶向性研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物工程学报 2004年第3期20卷 342-347页

作者：颜冰朱恒奇黄培堂军事医学科学院生物工程研究所北京100071

分段合成大鼠抗转铁蛋白受体单链抗体基因 (ox2 6_scFv) ,经三轮PCR拼接成 794bp的完整片段。测序后构建pTIG_Trx ox2 6_scFv表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中获得了可溶性表达 ,经Ni_NTA金属鏊合层析柱纯化 ,在2 9kD处可见单一条带。... 详细信息

分段合成大鼠抗转铁蛋白受体单链抗体基因 (ox2 6_scFv) ,经三轮PCR拼接成 794bp的完整片段。测序后构建pTIG_Trx ox2 6_scFv表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中获得了可溶性表达 ,经Ni_NTA金属鏊合层析柱纯化 ,在2 9kD处可见单一条带。大鼠GH3细胞免疫组化显示 ,该单链抗体能识别并与转铁蛋白受体结合。将单链抗体尾静脉注射大鼠 ,于鼠脑组织切片上可见阳性染色 ,尤其是脑血管处着色明显 ,说明该单链抗体对脑血管具有较好的靶向作用 ,并在受体的介导下通过了血脑屏障。

关键词：转铁蛋白受体单链抗体血脑屏障可溶性表达药物转运

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

蛋白质剪接与一类新的可移动遗传因子

生物化学与生物物理进展 1994年第6期21卷 491-494页

作者：卢柏松黄培堂北京军事医学科学院生物工程研究所

最近在几种生物体中连续发现了蛋白质剪接现象，由于它与通常所说的ＲＮＡ剪接的区别，人们称这些在蛋白质水平被剪切掉的部分为“蛋白质内含子”。有些蛋白质内含子具有核酸内切酶功能，编码蛋白质内含子的ＤＮＡ片段是一类新的可移动... 详细信息

最近在几种生物体中连续发现了蛋白质剪接现象，由于它与通常所说的ＲＮＡ剪接的区别，人们称这些在蛋白质水平被剪切掉的部分为“蛋白质内含子”。有些蛋白质内含子具有核酸内切酶功能，编码蛋白质内含子的ＤＮＡ片段是一类新的可移动遗传因子。文中介绍了目前发现的几例蛋白质剪接现象，讨论了蛋白质剪接的可能机理，分析了蛋白质内含子的进化及其生物学意义。

关键词：蛋白质剪接蛋白质内含子可移动遗传因子

t-PAS165W突变体的分子设计及其生物活性的初步分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2000年第4期32卷 421-424页

作者：周红王国力黄培堂黄翠芬军事医学科学院生物工程研究所北京100071军事医学科学院生物工程研究所!北京100071军事医学科学院生物工程研究所!北京100071军事医学科学院生物工程研究所!北京100071 第三军医大学西南医院烧伤研究所!重庆400038

为得到对纤维蛋白的亲和力提高的t PA突变体 ,采用计算机分子设计技术提出对纤维蛋白亲和力提高的t PA结构改造方案 (t PAS16 5W ) ,并将其在CHO细胞中进行表达 ,对表达产物进行生物活性及与纤维蛋白亲和力的分析表明 ,t PAS16 5W突变... 详细信息

为得到对纤维蛋白的亲和力提高的t PA突变体 ,采用计算机分子设计技术提出对纤维蛋白亲和力提高的t PA结构改造方案 (t PAS16 5W ) ,并将其在CHO细胞中进行表达 ,对表达产物进行生物活性及与纤维蛋白亲和力的分析表明 ,t PAS16 5W突变体与野生型t PA对纤维蛋白的亲和力没有明显的变化 ,说明单一的S16 5W的点突变并不能导致t PA对纤维蛋白亲和力的提高。

关键词：分子设计 t-PAS165W 纤维蛋白亲和力

中国仓鼠卵巢细胞集落的简易原位贴壁冻存方法

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

军事医学科学院院刊 1998年第1期22卷 58-60,80页

作者：卢柏松黄培堂军事医学科学院生物工程研究所

目的：目前通用的细胞冻存方法是将细胞在保护剂的作用下悬浮冻存，这样细胞自然相互混合，复苏后不能保持原来的位置关系。本工作探索在需要时将中国仓鼠卵巢细胞（ＣＨＯ）在贴壁状态下原位冻存的可能性。方法：将转染促红细胞生成素... 详细信息

目的：目前通用的细胞冻存方法是将细胞在保护剂的作用下悬浮冻存，这样细胞自然相互混合，复苏后不能保持原来的位置关系。本工作探索在需要时将中国仓鼠卵巢细胞（ＣＨＯ）在贴壁状态下原位冻存的可能性。方法：将转染促红细胞生成素（ＥＰＯ）表达质粒后形成的ＣＨＯ集落细胞在贴壁状态下加上１０％的二甲亚砜保护剂，然后分阶段降温并保存在－７０℃冰箱，两个月后复苏检测细胞的存活情况及其目的产物的表达情况。结果：集落至少可以保存两个月而绝大多数存活，而且从中能够得到表达外源目的基因的克隆。结论：将外源基因转染ＣＨＯ细胞后形成的克隆可以采用这种原位贴壁的方法冻存，这种冻存细胞的方法在需要保持细胞原来的位置关系时显然有用。

关键词： CHO细胞细胞存活贴壁低温冻存低温保存

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

利用分子进化树计算蛋白质的特异进化速率

Acta Genetica Sinica 1996年第2期23卷 85-90页

作者：卢柏松黄培堂北京军事医学科学院生物工程研究所

本文提出了一种计算蛋白质绝对进化距离和进化速率的方法，它根据现有同源蛋白质的序列构建分子进化树，并推断进化过程中各结点处的共同祖先序列，根据某成员与某结点处共同祖先序列的氨基酸差异百分率，计算该蛋白质序列的特异进化距... 详细信息

本文提出了一种计算蛋白质绝对进化距离和进化速率的方法，它根据现有同源蛋白质的序列构建分子进化树，并推断进化过程中各结点处的共同祖先序列，根据某成员与某结点处共同祖先序列的氨基酸差异百分率，计算该蛋白质序列的特异进化距离和进化速率。比较我们的算法和Ｄａｙｈｏｆｆ等的模拟统计方法表明，我们的算法在一定范围内是正确的。结合计算哺乳动物红细胞生成素的进化速率，讨论了本算法在分子进化研究中的应用。

关键词：蛋白分子进化树进化速率

弓形虫GRA6蛋白和P30蛋白的融合表达、纯化及抗原性分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物工程学报 2003年第6期19卷 674-679页

作者：李越希张锦海陶开华黄培堂南京军区军事医学研究所南京210002 军事医学科学院北京100071

利用基因工程技术制备抗原性好的弓形虫GRA6蛋白和P30蛋白的融合蛋白 ,并用作抗原检测弓形虫抗体。根据弓形虫GRA6蛋白和P30蛋白的氨基酸序列 ,通过计算机分析 ,筛选出其中较强的抗原决定簇。用PCR方法分别扩增含抗原决定簇的基因片段... 详细信息

利用基因工程技术制备抗原性好的弓形虫GRA6蛋白和P30蛋白的融合蛋白 ,并用作抗原检测弓形虫抗体。根据弓形虫GRA6蛋白和P30蛋白的氨基酸序列 ,通过计算机分析 ,筛选出其中较强的抗原决定簇。用PCR方法分别扩增含抗原决定簇的基因片段。将这两个基因片段克隆至同一质粒pET2 8a(+)内 ,表达一个融合蛋白。将重组质粒转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,筛选表达该融合蛋白的工程菌。纯化表达的融合蛋白 ,用已知的 6份抗弓形虫IgM阳性血清和大量正常人血清 ,ELISA法检测纯化融合蛋白的抗原性和特异性。获得了高效表达含弓形虫GRA6蛋白和P30蛋白抗原表位的工程菌 ,表达的融合蛋白约占菌体蛋白总量的 2 5 %。纯化获得了表达的融合蛋白 ,该蛋白有较好的抗原性和特异性。表达的弓形虫GRA6和P30融合蛋白可用做抗原检测弓形虫抗体 ,用于临床及孕妇检测 ,对优生优育有较大意义。

关键词：弓形虫 GRA6 P30 融合蛋白基因表达