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人C-反应蛋白的分离纯化及初步应用

人C-反应蛋白的分离纯化及初步应用

作者：黄国团广西师范大学

学位级别：硕士

C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)是人类最重要的急性时相反应蛋白之一,主要在肝脏中合成。CRP的正常合成速度为1～10mg/d,循环中的半衰期为19h,在正常人群中的浓度较低,新生儿为0.1～0.6mg/L,成年人为0.4～5.2mg/L。CRP在炎症、感... 详细信息

C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)是人类最重要的急性时相反应蛋白之一,主要在肝脏中合成。CRP的正常合成速度为1～10mg/d,循环中的半衰期为19h,在正常人群中的浓度较低,新生儿为0.1～0.6mg/L,成年人为0.4～5.2mg/L。CRP在炎症、感染、组织损伤或恶性肿瘤等发生后的6～8h迅速升高,24～48h达到峰值,急性期浓度甚至可以升高成百上千倍,其升高的幅度与病情的严重程度呈正相关,且不会受到放疗、化疗、药物等因素的影响。CRP虽然不具有病种专属特异性,但是比WBC、IL-6等传统的检测项目更加灵敏可靠。CRP已经作为临床检测的常规项目之一,检测血清CRP含量对许多疾病的早期诊断、辅助诊断、疗效观察及判断预后具有重要意义。CRP的测定方法主要有胶乳凝集法,放射免疫法,免疫扩散法,免疫电泳法,金标法,酶联免疫法,免疫比浊法等。其中,免疫透射比浊法发展十分迅速,能够在全自动生化分析仪上实现自动检测分析,应用越来越广泛。目前,国内检测CRP所使用的免疫透射比浊试剂盒以进口为主,价格昂贵,检测成本高,在一定程度上限制了其推广应用。自主开发一种经济实用、性能可靠的CRP免疫透射比浊定量检测试剂盒,具有十分重要的意义。与单克隆抗体相比,多克隆抗体的亲和力更高,成本更低,制备方法更加简单,缺点是制备时对抗原纯度要求非常高。兼顾试剂成本、试剂性能及技术要求,所以免疫比浊试剂中的抗体多使用多克隆抗体。如果使用单克隆抗体则需要进行配对及胶乳增敏,技术要求更加高。商品抗原通常具有很好的性能,但是价格十分昂贵。鉴于CRP的重要性,为了满足研究与生产的需要,本研究拟建立一种从临床血清样本中分离纯化人CRP的方法。自提CRP初步应用于制备多克隆抗体,运用制备的抗体建立CRP免疫透射比浊定量检测方法。方法:1.对CRP单克隆抗体进行蛋白含量测定,效价测定,相对纯度分析和特异性测定。2.从医院收集CRP高浓度(>100mg/L)的临床血清样本,运用饱和硫酸铵沉淀总蛋白、运用DEAE离子交换层析初步分离、运用制备的单克隆抗体亲和层析柱进一步精制纯化目的蛋白,并进行鉴定。3.以自提高纯度CRP作为抗原免疫山羊制备多克隆抗体,采用正辛酸-硫酸铵法进行纯化,并进行鉴定。4.运用制备的CRP多克隆抗体,建立CRP免疫透射比浊定量检测方法,并进行方法学评价试验。5.从医院收集临床血清样本,运用研制的试剂进行测定。结果:***单克隆抗体的检测结果如下:蛋白浓度为0.5mg/mL,ELISA效价为1:2560,SDS-PAGE电泳后凝胶扫描显示其相对纯度为96.2%,能够与商品CRP抗原发生特异性结合。2.从2mL临床血清样本能够分离纯化获得0.1mgCRP。SDS-PAGE电泳结果显示产物中出现相对分子质量为23kD的条带,凝胶扫描显示其相对纯度为93.1%,能够与CRP单克隆抗体发生特异性结合,与商品抗原有很好的可比性。3.运用自提CRP成功制备出CRP多克隆抗体,纯化后抗体的总蛋白含量为36.3mg/mL,ELISA效价为1:256000,SDS-PAGE电泳后凝胶扫描显示其相对纯度为91.4%,能够与CRP抗原发生特异性结合。4.运用制备的CRP多克隆抗体初步建立起免疫透射比浊定量检测CRP的方法。CRP浓度在3.1～150.0mg/L范围内线性良好,检测限为0.4mg/L,重复性、稳定性及抗干扰能力均比较好,与进口试剂有很好的可比性。5.临床测定结果如下:健康体检组(n=50)CRP浓度为6.7±1.3mg/L,风湿疾病组(n=113)CRP浓度为81.4±41.9mg/L,两组结果存在显著差异。结论:1.成功建立了一种从临床血清样本中分离纯化人CRP的方法。2.自提CRP可以用于制备抗体,成功制备出效价高、特异性强的羊抗人CRP多克隆抗体。3.制备的CRP多克隆抗体可以用于建立CRP免疫透射比浊定量检测方法,评价结果显示各项性能指标均比较好,可用于临床测定。

关键词： C-反应蛋白离子交换层析亲和层析多克隆抗体免疫透射比浊法

中美战略博弈背景下美澳同盟转型的特征、动因及影响

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太平洋学报 2024年第2期32卷 17-28页

作者：宁团辉中国国际问题研究院北京100005

美澳同盟是美国亚太联盟体系的重要一环,是美国实施地区战略的重要工具。随着美国对华战略竞争的加剧,美澳同盟的转型进程加快。从同盟针对的目标来看,美澳同盟将围绕遏制中国的战略需求进行全面转型;从同盟内部关系来看,澳大利亚对美... 详细信息

美澳同盟是美国亚太联盟体系的重要一环,是美国实施地区战略的重要工具。随着美国对华战略竞争的加剧,美澳同盟的转型进程加快。从同盟针对的目标来看,美澳同盟将围绕遏制中国的战略需求进行全面转型;从同盟内部关系来看,澳大利亚对美澳同盟的引导和塑造能力明显增强;从同盟性质来看,美澳同盟将从防御性同盟转型为进攻性同盟,进攻能力和威慑能力成为双方合作的重点;从同盟合作范围来看,美澳同盟的综合性特征更加明显。美澳同盟转型是美国调动盟友资源、推进“印太战略”部署和强化对华战略竞争的重要措施,同时也适应了澳大利亚缓解战略焦虑和制衡中国影响力的现实需求。这不仅使得两国在战略上深度捆绑,增强了美国对华战略竞争的力量优势,也使得澳大利亚处理对华关系难度加大,并冲击地区和平与合作的进程。

关键词：中美战略博弈美澳同盟联盟转型 “印太战略”

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命题视角下一道高考选择题的深度探秘

物理教师 2024年第5期45卷 91-92,96页

作者：蒋金团云南省保山市第八中学云南保山678000

从命题的角度对2023年高考理综甲卷第20题进行深度解读,针对文献[1]对该题解法提出了更简洁的分析方法,最后把真题涉及的“粒子入筒”模型与黑体模型的共性之处进行比较,从中寻找新的命题启示.

关键词：洛伦兹力圆形边界命题视角周期性规律黑体迁移

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脱碳系统半贫液离心泵的腐蚀与防护

腐蚀与防护 2003年第6期24卷 254-256,259页

作者：袁荣华黄世钊韦友龙徐伟海刘桂海黄国团广西大学化学化工学院南宁530004 广西河池化工股份有限公司河池547004

脱碳系统中的半贫液离心泵投用一年多后 ,由于受腐蚀严重 ,不能正常工作 .本文从离心泵本身的结构及操作条件等因素出发 ,分析了产生湍流腐蚀、空泡腐蚀、缝隙腐蚀的原因 ,针对产生腐蚀的原因 ,改善输送介质的条件 ,改造离心泵的结构 ,... 详细信息

脱碳系统中的半贫液离心泵投用一年多后 ,由于受腐蚀严重 ,不能正常工作 .本文从离心泵本身的结构及操作条件等因素出发 ,分析了产生湍流腐蚀、空泡腐蚀、缝隙腐蚀的原因 ,针对产生腐蚀的原因 ,改善输送介质的条件 ,改造离心泵的结构 ,经实际运行二年多。

关键词：离心泵腐蚀防护脱碳系统

基于云-TOPSIS法的应急物流供应商综合评价

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中国安全科学学报 2024年第2期34卷 217-224页

作者：黄国平雷皓翔湖南工业大学商学院湖南株洲412007

为实现应急物流降本增效的目标,从供应商层面出发,运用云-逼近理想解排序法(TOPSIS)评价应急物流供应商综合能力;根据应急物流特点,从应急响应能力、物资质量、成本控制、应急响应柔性、企业内外部条件等5方面,构建应急物流供应商综合... 详细信息

为实现应急物流降本增效的目标,从供应商层面出发,运用云-逼近理想解排序法(TOPSIS)评价应急物流供应商综合能力;根据应急物流特点,从应急响应能力、物资质量、成本控制、应急响应柔性、企业内外部条件等5方面,构建应急物流供应商综合评价指标体系;借鉴博弈论思想,将用改进熵权法求得的客观权重和用层次分析法(AHP)求得的主观权重作为博弈对手,确定最优组合权重;运用云模型量化指标决策云和加权云对供应商的模糊定性评价语义;采用TOPSIS法构建正负理想解集合,计算备选方案与正负理想解的距离确定相对贴近度,确定最优备选方案。研究结果表明:指标决策云能准确地将评价语言量化,云-TOPSIS法的评价结果更合理;在供应商相对贴近度排序中,采用云-TOPSIS法计算的最优与最劣者差值为0.3315,而TOPSIS法为0.0882,两者相差0.2433,表明云-TOPSIS法的评价结果区分度更大,能更直观地辅助决策者做出最优选择。

关键词：云模型逼近理想解排序法(TOPSIS) 应急物流供应商综合评价

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先天性心脏病的早期发现、诊断和治疗原则

中华儿科杂志 2024年第2期62卷 190-192页

作者：赵趣鸣黄国英复旦大学附属儿科医院心血管中心、上海市出生缺陷防治重点实验室上海201102

先天性心脏病(简称先心病)是导致婴幼儿死亡和残疾的重要原因,早期诊治有助于提高患儿的预后。本文简要介绍了先心病的分类、临床症状体征、新生儿先心病筛查方法、常用辅助检查和治疗原则,旨在帮助临床医生增加对先心病的认识,提高对... 详细信息

先天性心脏病(简称先心病)是导致婴幼儿死亡和残疾的重要原因,早期诊治有助于提高患儿的预后。本文简要介绍了先心病的分类、临床症状体征、新生儿先心病筛查方法、常用辅助检查和治疗原则,旨在帮助临床医生增加对先心病的认识,提高对先心病的识别和处理能力。

关键词：先天性心脏病筛查方法先心病临床医生临床症状体征早期诊治婴幼儿死亡检查和治疗

Mn(acac)_(3)诱导1-异腈基-2-[1-(三氟甲基)乙烯基]苯自由基环化合成4-三氟甲基喹啉衍生物

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高等学校化学学报 2024年第3期45卷 84-93页

作者：姚团利汪珂朱双李涛陕西科技大学化学与化工学院中国轻工业轻化工助剂重点实验室西安710021

开发了一种新的由锰[Mn(Ⅲ)/Mn(Ⅱ)]催化1-异腈基-2-[1-(三氟甲基)乙烯基]苯与芳基硼酸的自由基6-endo-trig环化反应.该反应条件温和,可在没有任何外部氧化剂、配体或添加剂的情况下,得到各种高区域选择性和化学选择性的4-三氟甲基-2-... 详细信息

开发了一种新的由锰[Mn(Ⅲ)/Mn(Ⅱ)]催化1-异腈基-2-[1-(三氟甲基)乙烯基]苯与芳基硼酸的自由基6-endo-trig环化反应.该反应条件温和,可在没有任何外部氧化剂、配体或添加剂的情况下,得到各种高区域选择性和化学选择性的4-三氟甲基-2-芳基喹啉衍生物.

关键词：三乙酰丙酮锰诱导异腈苯硼酸 4-三氟甲基喹啉

高铁列车荷载作用下桩-土复合地基及近接地铁隧道的动力响应模拟研究

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城市轨道交通研究 2024年第6期27卷 100-104,110页

作者：李团社中铁第一勘察设计院集团有限公司西安710043

[目的]作为典型的振动荷载,高铁列车运行引起的振动荷载会诱发桩-土地基及附近结构产生动力响应,有必要对桩-土复合地基及近接隧道的动力响应特性进行研究。[方法]基于西安地铁14号线下穿大西高速铁路特大桥工程,采用模型试验和数值模... 详细信息

[目的]作为典型的振动荷载,高铁列车运行引起的振动荷载会诱发桩-土地基及附近结构产生动力响应,有必要对桩-土复合地基及近接隧道的动力响应特性进行研究。[方法]基于西安地铁14号线下穿大西高速铁路特大桥工程,采用模型试验和数值模拟相结合的方法,以峰值振动加速度、峰值振动速度和峰值振动位移作为动力响应评价指标,研究了列车移动荷载作用下桩-土复合地基及近接隧道的动力响应特性。[结果及结论]研究结果表明,当施加列车荷载时,地基内部的动力响应指标均随着埋深的增加而衰减,但存在近接隧道时,动力响应指标值显著增加,且在隧道埋深处衰减明显。随着距桩基中心距离的增加,隧道埋深处的桩-隧之间地基的各动力响应指标从“波浪形”分布变为单调递减分布。根据峰值振动速度的控制阈值,近接隧道埋深处距桩基础中心水平3.6 m范围内的地基处于危险影响区,必须采用减振措施;3.6~11.4 m范围内的地基处于强影响区,建议采取减振措施;11.4 m以外的地基处于弱影响区,视结构的重要性决定是否需要采取减振措施。

关键词：地铁隧道高铁列车荷载动力响应控制阈值

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电针“夹脊”穴对软骨终板Modic改变模型兔软骨细胞外基质和炎性反应的影响

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中国针灸 2024年

作者：汪敏邹璟黄国付湖北中医药大学针灸骨伤学院武汉市中西医结合医院针灸科深圳市龙岗区妇幼保健院/汕头大学医学院龙岗妇幼临床学院

目的：观察电针“夹脊”穴对软骨终板Modic改变（MC）模型兔软骨细胞外基质（ECM）和炎性反应的影响，探讨电针治疗软骨终板MC的作用机制。方法：将18只雄性新西兰大白兔随机分为假手术组、模型组和电针组，每组6只。模型组和电针组实... 详细信息

目的：观察电针“夹脊”穴对软骨终板Modic改变（MC）模型兔软骨细胞外基质（ECM）和炎性反应的影响，探讨电针治疗软骨终板MC的作用机制。方法：将18只雄性新西兰大白兔随机分为假手术组、模型组和电针组，每组6只。模型组和电针组实验兔基于自身免疫学说采用髓核填充法制备MC模型。造模成功后电针组实验兔予电针双侧L5、L6“夹脊”穴干预，疏密波，频率2 Hz/15 Hz，电流强度1 mA，每次20 min，每天1次，连续干预6 d后休息1 d，共干预4周。于造模前后及干预前后观察各组实验兔综合反应评分；于造模后和干预后采用磁共振成像（MRI）观察实验兔椎间盘及软骨终板信号强度；干预后，采用HE染色观察实验兔软骨终板的软骨细胞形态，免疫组化法观察实验兔软骨终板血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5（ADAMTS5）和聚集蛋白聚糖（Aggrecan）阳性表达，ELISA法检测实验兔软骨终板炎性因子[白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）]含量；Western blot法检测实验兔软骨终板ADAMTS5、Aggrecan、基质金属蛋白酶-13（MMP-13）、IL-1β和TNF-α蛋白表达。结果：与假手术组比较，模型组实验兔综合反应评分降低（P<0.01）；L5/L6椎间盘及软骨终板下椎体松质骨出现低信号，分界不清；软骨终板的软骨细胞明显增多，细胞肿大而肥厚，细胞核皱缩，聚集排列；软骨终板ADAMTS5阳性表达升高、Aggrecan阳性表达降低（P<0.01），IL-1β和TNF-α含量升高（P<0.01）；软骨终板Aggrecan蛋白表达降低（P<0.01），ADAMTS5、MMP-13、IL-1β和TNF-α蛋白表达升高（P<0.01）。与模型组比较，电针组实验兔综合反应评分升高（P<0.01）；L5/L6椎间盘及终板椎体下松质骨信号增强；软骨终板的软骨细胞减少，细胞核轻度皱缩，形态稍不规则，散在分布；软骨终板ADAMTS5阳性表达降低、Aggrecan阳性表达升高（P<0.01），IL-1β和TNF-α含量降低（P<0.01）；软骨终板Aggrecan蛋白表达增多（P<0.05），ADAMTS5、MMP-13、IL-1β和TNF-α蛋白表达降低（P<0.05，P<0.01）。结论：电针“夹脊”穴能延缓软骨终板MC，其机制可能与抑制软骨细胞ECM降解和炎性因子分泌，修复变性的软骨终板有关。

关键词： Modic改变电针椎间盘退变软骨终板