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圆头精子症患者的致病基因变异分析4例

中华医学遗传学杂志 2023年第3期40卷 301-307页

作者：唐珍珍李清琴陈国勇黄吴键王宇林叶宇谢鹏兰风华张朵联勤保障部队第九〇〇医院基础医学实验室福州350025 福建医科大学福总临床医学院福州350108 联勤保障部队第九〇〇医院生殖医学中心福州350025 福建中医药大学福总教学医院福州350122

目的对4例圆头精子症患者的致病基因进行分析,明确其遗传学病因。方法选取2017年6月至2020年9月在中国人民解放军联勤保障部队第九〇〇医院被确诊为圆头精子症的4例患者作为研究对象,采集其精液和血液样本,进行精子浓度、活力、存活率... 详细信息

目的对4例圆头精子症患者的致病基因进行分析,明确其遗传学病因。方法选取2017年6月至2020年9月在中国人民解放军联勤保障部队第九〇〇医院被确诊为圆头精子症的4例患者作为研究对象,采集其精液和血液样本,进行精子浓度、活力、存活率、形态等常规检测以及精子顶体抗原CD46免疫荧光检测,提取外周血样基因组DNA进行全外显子组测序(WES),对疑似致病变异通过Sanger测序进行验证。结果WES检测显示4例患者均携带DPY19L2基因变异,其中患者1~3携带DPY19L2基因纯合缺失,Sanger测序显示患者3在重组断裂点区域BP2存在断裂,通过非等位基因同源重组造成DPY19L2基因完全缺失。患者1存在第2~22外显子纯合缺失,患者2存在第14~15外显子纯合缺失,患者1和2的缺失既往未见文献报道,患者4为DPY19L2基因杂合缺失,且3′UTR区存在罕见的纯合缺失。结论DPY19L2基因变异可能导致的圆头精子症的发生,其方式符合常染色体隐性遗传,同时也符合基因组病的特点。

关键词：圆头精子症基因检测 DPY19L2基因

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小鼠精子核内转染技术的建立及其机理的研究

小鼠精子核内转染技术的建立及其机理的研究

作者：黄吴键第一军医大学

学位级别：硕士

转基因动物的制作方法有五大类,十几种方案,但是长久以来一直不甚理想,目前仍然以显微注射法为主。由于显微注射法劳动强度大、效率低、周期长、耗费多,科学界一直在寻找替代方案。精子载体法就是以精子为载体,利用精子与卵子结合的过... 详细信息

转基因动物的制作方法有五大类,十几种方案,但是长久以来一直不甚理想,目前仍然以显微注射法为主。由于显微注射法劳动强度大、效率低、周期长、耗费多,科学界一直在寻找替代方案。精子载体法就是以精子为载体,利用精子与卵子结合的过程将外源基因带入受精卵中形成转基因动物的方法,由于方法学上的简捷、便利、又适合几乎所有物种,从1989年Lavitrano用该法建立转基因小鼠以来,备受关注。经过十几年的发展,理论上已经逐渐阐明了精子载体法建立转基因动物的原因和特点,实践上方案有近十种之多。但是除了1999年Perry使用的胞浆内单精子注射的方法,其余方案稳定性、可重复性及转基因动物的形成效率依然不甚理想。我们总结了精子载体法发展的规律,指出核内转染是精子载体法发展的方向。围绕这一方向,我们在缺少同行工作借鉴的情况下,自己探索小鼠精子的核内转染技术。我们的实验设计主要建立在目前针对原代细胞和难转染细胞最常用的两种方法上,一种是方波分组电穿孔技术;一种是阳离子多聚物聚乙烯亚胺(Polyethylenimine,PEI)转染技术。通过三个串联的实验:(1) 小鼠精子的电穿孔液的研究,(2) 小鼠精子电穿孔条件的研究;(3) 阳离子多聚物PEI结合电穿孔实现小鼠精子的核内转染的研究;我们实现了小鼠精子的核内转染,解决了精子载体法建立转基因动物的关键问题,为以后进行大动物精子载体法的研究提供一个新的模式。各部分实验摘要介绍如下:

关键词：精子载体法电转缓冲液方波电穿孔电穿孔参数碘化丙啶荧光素标记的寡核苷酸探针阳离子多聚物 JetPEI-FluoF 核内转染激光共聚焦精子活力

芳香化酶抑制剂在卵巢低反应者超促排卵中的作用

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南方医科大学学报 2009年第3期29卷 559-561页

作者：刘芸邢福祺何凌云黄吴键南方医科大学南方医院生殖医学中心广东广州510515 南京军区福州总医院生殖医学中心福建福州350025

目的研究芳香化酶抑制剂来曲唑对卵巢低反应者超促排卵效果的影响,并探讨其作用机制。方法至少接受过1次超促排卵治疗,卵巢反应低下者45例,分为研究组24例,周期第1～3天口服来曲唑2.5mg,1次/d,周期第4天开始应用醋酸曲普瑞林及基因重组... 详细信息

目的研究芳香化酶抑制剂来曲唑对卵巢低反应者超促排卵效果的影响,并探讨其作用机制。方法至少接受过1次超促排卵治疗,卵巢反应低下者45例,分为研究组24例,周期第1～3天口服来曲唑2.5mg,1次/d,周期第4天开始应用醋酸曲普瑞林及基因重组促卵泡激素超促排卵,按体外受精程序进行治疗;对照组21例不使用来曲唑,周期第4天开始治疗同研究组。两组均于第4天、注射绒毛膜促性腺激素(hCG)日抽取静脉血,检测促卵泡激素(FSH)、促黄体生成激素、雌二醇、总睾酮、抗苗勒氏管激素(AMH)、抑制素B,收集卵泡液,检测雌二醇、总睾酮、AMH、抑制素B,比较两组FSH使用总剂量、hCG日内膜厚度、获卵数、受精率、可移植胚胎数、胚胎种植率、临床妊娠率。结果与对照组比较,研究组注射FSH总剂量减少,但差异无统计学意义(P>0.05),hCG日内膜厚度无明显降低,受精率、胚胎种植率、临床妊娠率无显著差异,但获卵数、可移植胚胎数显著增加(P<0.05)。研究组第4天血清雌二醇水平显著降低(P<0.05),总睾酮、AMH、抑制素B水平显著升高(P<0.05),血清FSH、促黄体生成激素无显著差异。hCG日血清总睾酮升高(P<0.05),其余指标均无显著差异。研究组取卵日卵泡液总睾酮、抑制素B水平较对照组显著升高(P<0.05),雌二醇及AMH水平无显著差异。结论对于卵巢低反应者,超促排卵前短期低剂量应用芳香化酶抑制剂,通过提高血清或卵泡液内雄激素、AMH、抑制素B水平募集更多卵泡,可以使获卵数和可移植胚胎数增多,不改变内膜厚度和形态,对提高妊娠率起到有利作用。

关键词：芳香化酶抑制剂来曲唑卵巢低反应体外受精

KSOM培养基营养成分调整对小鼠植入前期胚体外发育的影响

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第一军医大学学报 2005年第3期25卷 256-261页

作者：黄吴键袁进邓星安靓南方医科大学组胚教研室广东广州510515 南方医科大学病理教研室广东广州510515

目的囊胚发育率低和发育迟缓是继“2-细胞阻滞”解决后小鼠胚胎体外培养中面临的两大问题。本实验通过对KSOM培养基营养成分的调整,观察对胚胎发育的影响,优化培养基的构成。方法采用微滴培养法培养昆明小鼠单细胞胚胎,以胚胎发育到囊... 详细信息

目的囊胚发育率低和发育迟缓是继“2-细胞阻滞”解决后小鼠胚胎体外培养中面临的两大问题。本实验通过对KSOM培养基营养成分的调整,观察对胚胎发育的影响,优化培养基的构成。方法采用微滴培养法培养昆明小鼠单细胞胚胎,以胚胎发育到囊胚的比例、孵出比例以及注射hCG后120 h囊胚全细胞数作为判断培养效果的标准,比较KSOM在葡萄糖、牛血清白蛋白、氨基酸3种营养物质不同浓度下对小鼠植入前胚体外培养的效果。结果在未加氨基酸时葡萄糖、牛血清白蛋白的变化对注射hCG后120 h囊胚形成率、囊胚全细胞数影响不大,添加氨基酸后,囊胚发育速度提高,部分孵出和全部孵出比例提高,囊胚全细胞数增大明显,且葡萄糖、牛血清白蛋白与氨基酸对囊胚的发育有共同促进的作用。结论通过添加适量的氨基酸、葡萄糖、BSA改良KSOM培养基能很好的促进小鼠植入前胚体外发育。

关键词：植入前胚胎 KSOM 营养成分

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三角梅红色素的稳定性

现代食品科技 2024年

作者：李丽罗李秀邱然王祥余邵淑娟吴键航宗绪岩四川轻化工大学生物工程学院酿酒生物技术及应用四川省重点实验室华润啤酒(控股)有限公司广东溢多利生物科技股份有限公司菏泽市行政审批服务局菏泽市食品药品检验检测研究院

该文研究了三角梅花瓣中红色素的稳定性，由于该色素在提取、保存和应用中无法避免加热、调节p H值以实现酶、微生物的灭活和水分的去除，在整个过程中三角梅色素的稳定性易受这些条件影响，为解决此问题，采用分光光度法对三角梅红色... 详细信息

该文研究了三角梅花瓣中红色素的稳定性，由于该色素在提取、保存和应用中无法避免加热、调节p H值以实现酶、微生物的灭活和水分的去除，在整个过程中三角梅色素的稳定性易受这些条件影响，为解决此问题，采用分光光度法对三角梅红色素的稳定性进行研究。结果表明：三角梅色素在p H值为7，温度为60℃，避光保存下最稳定；相较于还原剂（Na2SO3），氧化剂（H2O2）对三角梅色素稳定性影响大，加入稳定剂可以缓解氧化剂对三角梅色素稳定性的影响；苯甲酸钠、碳酸氢钠、柠檬酸、维生素C和山梨酸钾浓度为0.4 mol/L可以延缓三角梅色素的分解；金属离子Pb2+、Al3+、Na+对色素稳定性的影响不显著；Ag+、Bi2+会使色素吸光值变大，且颜色变成玫红色，Cu2+会使色素变成橙红色，在没有稳定剂的条件下Fe3+使色素变成血红色，因此在实验过程中应该避免与这几种金属离子接触。该研究结果为三角梅红色素的应用提供重要参考和指导。

关键词：三角梅红色素提取稳定性

卵泡液中sRAGE、Vit D和TNF-α的含量与卵母细胞质量的相关性研究

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生殖医学杂志 2023年第9期32卷 1387-1392页

作者：许嘉绵毛丽华林春丽熊萍黄吴键刘芸福建医科大学福总临床医学院福州350025 中国人民解放军联勤保障部队第九〇〇医院生殖医学中心福州350025

目的探讨卵泡液(FF)中可溶性晚期糖基化终产物受体(sRAGE)、维生素D(Vit D)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平对卵母细胞质量的影响。方法纳入2021年6月至2022年8月于联勤保障部队第九○○医院生殖中心就诊行IVF-ET治疗的不孕女性(12例)的8... 详细信息

目的探讨卵泡液(FF)中可溶性晚期糖基化终产物受体(sRAGE)、维生素D(Vit D)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平对卵母细胞质量的影响。方法纳入2021年6月至2022年8月于联勤保障部队第九○○医院生殖中心就诊行IVF-ET治疗的不孕女性(12例)的81个卵母细胞的FF样本,通过ELISA法检测单个FF中sRAGE、Vit D和TNF-α的含量。根据卵母细胞成熟情况、D3胚胎发育情况、囊胚发育情况进行分组,分析各组间卵泡直径、卵泡体积、FF中的sRAGE、Vit D和TNF-α的含量差异;进一步分析sRAGE、Vit D和TNF-α三者之间的相关性及其与临床指标的相关性。结果成熟卵母细胞组中卵泡的直径、体积、FF的sRAGE和Vit D水平显著高于不成熟卵母细胞组(P均<0.05),优质胚胎组、优质囊胚组中FF的sRAGE、Vit D水平均显著高于非优质胚胎组(P均<0.05);FF中sRAGE、Vit D水平与卵母细胞成熟度、胚胎发育情况等指标均存在正相关关系(P均<0.05)。成熟卵母细胞组、优质胚胎组和优质囊胚组中FF的TNF-α水平显著低于不成熟卵母细胞组、非优质胚胎组和非优质囊胚组(P均<0.05),FF中TNF-α水平与卵母细胞成熟度、胚胎发育情况、囊胚发育情况等指标均有负相关关系(P均<0.05)。FF中sRAGE与Vit D水平显著正相关(P<0.001);FF中sRAGE、Vit D水平与TNF-α水平显著负相关(P<0.001)。结论不孕患者FF中sRAGE、Vit D及TNF-α水平可能影响卵母细胞质量,将其作为胚胎筛选指标,并结合胚胎形态学评分,可能提高对胚胎着床能力判断的准确性,为临床不孕患者的诊疗提供新思路。

关键词：可溶性晚期糖基化终产物受体肿瘤坏死因子-α 维生素D 卵泡液卵母细胞质量

孕8～12周终止妊娠后服用屈螺酮炔雌醇避孕效果观察

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中国妇幼保健 2010年第29期25卷 4266-4268页

作者：林丽莎黄吴键林永霞宋岩峰福建医科大学临床医学院南京军区福州总医院 350025

目的:观察孕8～12周妊娠终止后服用屈螺酮炔雌醇避孕药(商品名:优思明)的疗效。方法:将90例终止妊娠患者分为观察组(60例)和对照组(30例),观察组自胚胎排出清宫术或钳刮术后当晚开始每日睡前服用优思明1片,21天后停药;对照组术后未服用... 详细信息

目的:观察孕8～12周妊娠终止后服用屈螺酮炔雌醇避孕药(商品名:优思明)的疗效。方法:将90例终止妊娠患者分为观察组(60例)和对照组(30例),观察组自胚胎排出清宫术或钳刮术后当晚开始每日睡前服用优思明1片,21天后停药;对照组术后未服用该药,两组患者均于术后14天及月经来潮干净后随访2次,观察术后阴道流血时间、流血量及流产后初次月经恢复情况;观察优思明服用期间的不良反应及患者接受程度等。结果:观察组术后阴道出血时间(6.20±4.40)天,对照组(10.30±6.40)天,两组比较差异有统计学意义(P<0.001);将以往月经量视为1,观察组出血量为(0.48±0.27),对照组为(0.97±0.42),两组比较差异有统计学意义(P<0.001);术后初次月经恢复情况:观察组月经恢复时间可预测,停优思明3～4天后行经,平均(24.50±3.50)天,行经时间(4.70±1.60)天,经量(0.57±0.30);对照组停优思明后平均(33.50±4.50)天行经,行经时间(5.70±1.30)天,经量(1.03±0.32),两组比较差异有统计学意义(P<0.005);服用优思明期间出现不良反应4例,占5.71%,愿意继续使用优思明避孕占14.33%,不愿意者占85.67%。结论:妊娠终止后及时服用优思明可以减少阴道出血量,缩短出血时间,促进月经恢复,可靠避孕,避免重复流产,月经量多者可减少月经量,缓解痛经,不良反应少,但大多数观察者对继续服用激素类药仍不能接受。

关键词：流产屈螺酮炔雌醇口服避孕药临床效果

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利用雄性生殖细胞建立转基因动物

中国生物工程杂志 2004年第3期24卷 17-21页

作者：黄吴键安靓中国人民解放军第一军医大学组胚教研室广州510515

追溯了用雄性生殖细胞建立转基因动物的发展历程 ,系统阐述了本领域理论和实践的最新进展 ,围绕方法学逐渐改进和完善的过程 ,从利用精子和精原干细胞携带外源DNA两个方向展开 ,分析和评价了DNA转移方法与精子载体法结合、胞浆内单精子... 详细信息

追溯了用雄性生殖细胞建立转基因动物的发展历程 ,系统阐述了本领域理论和实践的最新进展 ,围绕方法学逐渐改进和完善的过程 ,从利用精子和精原干细胞携带外源DNA两个方向展开 ,分析和评价了DNA转移方法与精子载体法结合、胞浆内单精子注射、蛋白连接的精子介导的基因转移、输精管注射法以及曲细精管显微注射法和精原干细胞移植法 6种实验设计方法。

关键词：雄性生殖细胞转基因动物精子载体法曲细精管显微注射法基因转移

基于分数阶混沌的反激变换器辐射EMI主动抑制

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电源学报 2024年第2期22卷 438-447页

作者：吴键澄杨汝张宇帆钟振业刘佐濂广州大学电子与通信工程学院广州510006 广州大学机械与电气工程学院广州510006 广州大学物理与材料科学学院广州510006

快速通断的开关信号是造成开关电源电磁干扰EMI(electromagnetic interference)的主要原因。目前,关于混沌抑制EMI技术的研究主要集中在利用整数阶混沌抑制传导EMI。在此基础上,本文对分数阶混沌在辐射EMI上的抑制以及最优阶次的选取问... 详细信息

快速通断的开关信号是造成开关电源电磁干扰EMI(electromagnetic interference)的主要原因。目前,关于混沌抑制EMI技术的研究主要集中在利用整数阶混沌抑制传导EMI。在此基础上,本文对分数阶混沌在辐射EMI上的抑制以及最优阶次的选取问题展开研究。首先,通过分数阶Lorenz的频谱特性及Lyapunov指数谱分析,优选出1.8阶Lorenz信号为最佳扩频序列;其次,基于变开关频率抑制EMI技术的基本原理,在STM32单片机中分别实现了定频、整数阶、2.7阶、1.8阶Lorenz混沌扩频PWM信号,在一台5 W反激变换器中进行近场辐射实验,证明了1.8阶Lorenz信号对近场磁场辐射抑制作用最强;最后,测得分数阶Lorenz混沌与定频PWM控制下,样机的整机效率相差2%左右,验证了分数阶混沌PWM在辐射EMI抑制性能上的优越性。

关键词：反激变换器分数阶混沌近场辐射电磁干扰