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从鼠粪中分离纯化微小隐孢子虫卵囊方法的研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2006年第3期24卷 219-222页

作者：陈甫黄克和南京农业大学动物医学院南京210095

目的探索一种实用、纯度和回收率高且卵囊活力强的分离纯化微小隐孢子虫卵囊的方法。方法分别采用经典的不连续蔗糖密度梯度离心法、改良饱和盐水漂浮法、氯化铯(CsCl)密度梯度离心法和Percoll密度梯度离心法分离纯化C57BL/6小鼠粪中隐... 详细信息

目的探索一种实用、纯度和回收率高且卵囊活力强的分离纯化微小隐孢子虫卵囊的方法。方法分别采用经典的不连续蔗糖密度梯度离心法、改良饱和盐水漂浮法、氯化铯(CsCl)密度梯度离心法和Percoll密度梯度离心法分离纯化C57BL/6小鼠粪中隐孢子虫卵囊。并将4种方法分离纯化获得的卵囊各105体外感染牛输卵管上皮细胞(BFTE),48h和72h后油镜下观察各分离法卵囊的发育情况,以比较卵囊的纯度和活性。结果经典的不连续蔗糖密度梯度离心法分离获得的卵囊数[(2.86±0.08)×107]与改良饱和盐水漂浮法[(2.88±0.15)×107]无明显差异(P>0.05),但高于Percoll密度梯度离心法[(1.52±0.08)×107](P0.05)。但CsCl密度梯度离心法纯化的隐孢子虫卵囊纯度明显高于不连续蔗糖密度梯度离心法。结论改良饱和盐水漂浮法较经典的不连续蔗糖密度梯度离心法操作简单、快速;CsCl密度梯度离心法分离的隐孢子虫卵囊纯度较高。

关键词：微小隐孢子虫卵囊改良饱和盐水漂浮法 Percoll密度梯度离心法不连续蔗糖密度梯度离心法氯化铯密度梯度离JD法牛输卵管上皮细胞

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禽流感的病理学进展

中国人兽共患病杂志 2001年第2期17卷 83-86页

作者：王幼明黄克和南京农业大学动物医学院南京210095

禽流感(Avian Influenza，AI)是由A型流感病毒(Avian Influenza iruses，AIV)引起的一种禽类的感染和/或疾病的综合征。几乎所有家禽及野生鸟类均可感染此病，并已证明可引起从亚临床到轻度上呼吸道疾病，到产蛋率降低，到急性全身致死... 详细信息

禽流感(Avian Influenza，AI)是由A型流感病毒(Avian Influenza iruses，AIV)引起的一种禽类的感染和/或疾病的综合征。几乎所有家禽及野生鸟类均可感染此病，并已证明可引起从亚临床到轻度上呼吸道疾病，到产蛋率降低，到急性全身致死性疾病综合征。禽流感可引起巨大的经济损失，1983至1984年，美国政府为了扑灭在宾夕法尼亚、弗吉里亚、新泽西等州暴发的禽的H5N2病毒引起的禽流感。此外，禽流感病毒还可导致人的流感的流行，1997年8月，香港卫生署宣布从一3岁的男孩的气管分泌物内分离到AIV(H5N1)，至12月底，共发生19例感染，其中4人死亡。

关键词：禽流感病理学 AI AIV 病理解剖学病理组织学

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犊牛隐孢子虫卵囊的分离与鉴定

中国人兽共患病杂志 2001年第6期17卷 62-63,136页

作者：梁俊文黄克和南京农业大学动物医学院南京210095

采集南京地区三个奶牛场 2～ 4周龄犊牛新鲜粪便 ,应用不连续蔗糖密度梯度离心法分离纯化隐孢子虫卵囊 ,然后通过用光学显微镜观察 ,单克隆抗体间接免疫荧光试验和小鼠感染试验进行鉴定。结果显示 ,该地区犊牛感染的隐孢子虫主要为小型... 详细信息

采集南京地区三个奶牛场 2～ 4周龄犊牛新鲜粪便 ,应用不连续蔗糖密度梯度离心法分离纯化隐孢子虫卵囊 ,然后通过用光学显微镜观察 ,单克隆抗体间接免疫荧光试验和小鼠感染试验进行鉴定。结果显示 ,该地区犊牛感染的隐孢子虫主要为小型隐孢子虫 (Cryptosporidiumparvum) ,这一结果为该地区隐孢子虫病的防治提供了科学依据 ,同时为开展隐孢子虫病的研究提供了新的分离株。

关键词：隐孢子虫卵囊间接免疫荧光试验单克隆抗体犊牛分离鉴定

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从感染小鼠获得微小隐孢子虫卵囊方法的改进

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2001年第6期19卷 360-362页

作者：黄克和杨世广唐建霞南京农业大学动物医学院南京210095 Department of Animal

目的　建立从感染C5 7BL/ 6N小鼠获得大量微小隐孢子虫卵囊的方法。方法　在饮水中添加不同浓度的地塞米松对人工感染小鼠进行免疫抑制 ,探讨获得最多卵囊数的药物添加量 ;比较不同纯化方法得到的卵囊回收率和纯度 ;探讨来自不同动物、... 详细信息

目的　建立从感染C5 7BL/ 6N小鼠获得大量微小隐孢子虫卵囊的方法。方法　在饮水中添加不同浓度的地塞米松对人工感染小鼠进行免疫抑制 ,探讨获得最多卵囊数的药物添加量 ;比较不同纯化方法得到的卵囊回收率和纯度 ;探讨来自不同动物、不同纯化方法的卵囊在牛输卵管上皮细胞培养系统的感染情况。结果　地塞米松加入量为 2 0 μg/ml的第 3组获得的卵囊量高达 4 .16× 10 9/ 30个小鼠 ;用饱和盐水漂浮法与用蔗糖密度梯度离心法纯化得到的卵囊具有相同的回收率和纯度 ;从感染小鼠与犊牛中获得的卵囊在感染性上差异不显著。结论　成功地建立了从感染小鼠获得大量微小隐孢子虫卵囊的方法 ,具有简单、方便、快速等优点 ,并且不影响活力。

关键词：微小隐孢子虫卵囊饱和盐水漂浮法蔗糖密度梯度离心法细胞培养隐孢子虫病

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硒的生物学特性与奶牛营养需要的研究进展

黑龙江畜牧兽医 2010年第6期 47-48页

作者：黄静黄克和南京农业大学江苏南京210095

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建立微小隐孢子虫感染小鼠模型方法的研究

中国人兽共患病学报 2007年第2期23卷 195-198页

作者：陈甫黄克和南京农业大学动物医学院南京210095

目的探索微小隐孢子虫传代和扩增模型小鼠的最佳性别、日龄、免疫抑制时间和免疫抑制剂地塞米松磷酸钠(DEXp)的最佳剂量。方法25、50、75日龄雌性和雄性BALB/c小鼠各3组,免疫抑制3 d后接种卵囊;各剂量组小鼠1 L饮水中含DEXp分别为1 mg、... 详细信息

目的探索微小隐孢子虫传代和扩增模型小鼠的最佳性别、日龄、免疫抑制时间和免疫抑制剂地塞米松磷酸钠(DEXp)的最佳剂量。方法25、50、75日龄雌性和雄性BALB/c小鼠各3组,免疫抑制3 d后接种卵囊;各剂量组小鼠1 L饮水中含DEXp分别为1 mg、5 mg、10 mg、15 mg、20 mg、25 mg;各免疫抑制时间组小鼠分别在免疫抑制前6 d、3 d和免疫抑制后0 d、3 d、6 d、9 d感染卵囊。以上各组小鼠经口感染保存时间和方法相同的微小隐孢子虫卵囊的剂量均为2.0×105个,感染后逐日收集鼠粪,用饱和蔗糖漂浮法分离纯化卵囊。结果雌性小鼠排卵囊强度均较同日龄雄性小鼠大,而不同日龄小鼠中又以50日龄(26 g-28g)小鼠排卵囊量最多;各剂量组小鼠中,15 mg/L组排卵囊强度较其他各组大;免疫抑制时间组中,免疫抑制3 d感染组排卵囊强度最大。结论适合于卵囊扩增和传代的最佳鼠模型是50日龄(26-28g)雌性小鼠;DEXp的最佳剂量是15 mg/L;最佳免疫抑制时间是感染前3 d。

关键词：微小隐孢子虫卵囊饱和蔗糖漂浮法免疫抑制

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南京地区畜禽隐孢子虫感染情况调查

畜牧与兽医 2012年第12期44卷 67-69页

作者：陈甫黄克和青岛农业大学动物科技学院山东青岛266109 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

应用改良抗酸染色法对南京地区猪、奶牛、兔、犬、蛋鸡和鹅粪便样品进行隐孢子虫卵囊检测,调查隐孢子虫的感染情况。结果显示:南京地区奶牛、猪、兔和犬粪样品的阳性率分别为17.80%(34/191)、12.29%(29/236)、14.10%(22/156)和21.05%(20... 详细信息

应用改良抗酸染色法对南京地区猪、奶牛、兔、犬、蛋鸡和鹅粪便样品进行隐孢子虫卵囊检测,调查隐孢子虫的感染情况。结果显示:南京地区奶牛、猪、兔和犬粪样品的阳性率分别为17.80%(34/191)、12.29%(29/236)、14.10%(22/156)和21.05%(20/105),差异均不显著(χ20.05);产仔母畜与仔畜的感染率之间差异不显著(P>0.05);鹅隐孢子虫感染率(16.67%,17/102)显著高于蛋鸡(7.74%,13/168)(χ2=5.12,P<0.05)。说明南京地区动物隐孢子虫感染率较高,母畜在仔畜隐孢子虫感染中发挥着重要作用。

关键词：隐孢子虫病流行改良抗酸染色卵囊

细胞外高钙致鸡肾小管上皮原代培养细胞损伤的试验研究

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中国农业科学 2004年第6期37卷 917-922页

作者：唐建霞黄克和郭小权南京农业大学畜禽营养代谢病研究室南京农业大学畜禽营养代谢病研究室南京210095

建立了鸡原代肾小管上皮细胞的培养方法,作为高钙对肾小管损害的体外研究模型。在此模型上应用不同浓度的钙进行处理,通过MTT比色法和乳酸脱氢酶(LDH)活性测定法观察对细胞活性和细胞膜的损伤情况。结果表明,分别用 2.5(试验组Ⅰ)、4.0... 详细信息

建立了鸡原代肾小管上皮细胞的培养方法,作为高钙对肾小管损害的体外研究模型。在此模型上应用不同浓度的钙进行处理,通过MTT比色法和乳酸脱氢酶(LDH)活性测定法观察对细胞活性和细胞膜的损伤情况。结果表明,分别用 2.5(试验组Ⅰ)、4.0(试验组Ⅱ)、5.5(试验组Ⅲ)、7.0(试验组Ⅳ)、8.5(试验组Ⅴ)和10.0mmol·L-1(试验组Ⅵ)Ca2+处理细胞,各组的细胞活性与对照组相比均显著降低(P<0.01),且细胞外钙浓度越高,细胞活性降低越明显。但用不同浓度的Ca2+处理细胞,对培养液中LDH的活性影响不明显。这些结果说明,细胞外高钙能够直接损害肾小管上皮细胞,但不是通过损伤细胞膜的方式来实现的。

关键词：痛风肾小管上皮高钙细胞培养鸡

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猪源隐孢子虫卵囊的分离及基因型鉴定

中国兽医学报 2011年第2期31卷 213-216,221页

作者：陈甫黄克和南京农业大学动物医学院江苏南京210095 青岛农业大学动物科技学院山东青岛266109

应用RT-PCR方法对南京、上海和合肥猪源隐孢子虫卵囊SSU rRNA部分序列进行扩增,产物测序后提交GenBank,收录号为DQ855266、DQ855267;用BLAST和DNAStar软件与GenBank参考序列进行比较,分析其同源性,绘制系统发育进化树,结合卵囊形态学观... 详细信息

应用RT-PCR方法对南京、上海和合肥猪源隐孢子虫卵囊SSU rRNA部分序列进行扩增,产物测序后提交GenBank,收录号为DQ855266、DQ855267;用BLAST和DNAStar软件与GenBank参考序列进行比较,分析其同源性,绘制系统发育进化树,结合卵囊形态学观察和对小鼠、大鼠、兔、山羊和鸡的传染性试验确定隐孢子虫种类或基因型。结果表明,3地区猪源隐孢子虫分离株与微小隐孢子虫（***）同源性达94%~100%,与***＂mouse＂型有99.8%~100%的同源性,并处于进化树的同一分支。因此,3地区猪源隐孢子虫是***＂mouse＂型,提示猪和鼠之间存在交叉传播的可能。

关键词：隐孢子虫 RT-PCR SSU rRNA 同源性系统发育进化树