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视黄酸影响大鼠肝星状细胞周期素依赖激酶抑制剂的表达

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中华肝脏病杂志 2001年第5期9卷 306-308页

作者：黄光存张锦生张月娥上海市复旦大学基础医学院病理学教研室 200032

目的研究视黄酸影响培养大鼠肝星状细胞周期素依赖激酶抑制剂的表达。方法分离、培养正常大鼠肝星状细胞，传代细胞经1ng/ml转化生长因子β1刺激后再以1nmol/ml视黄酸处理，然后采用MTT法、免疫细胞化学法、原位杂交技术并结合图像... 详细信息

目的研究视黄酸影响培养大鼠肝星状细胞周期素依赖激酶抑制剂的表达。方法分离、培养正常大鼠肝星状细胞，传代细胞经1ng/ml转化生长因子β1刺激后再以1nmol/ml视黄酸处理，然后采用MTT法、免疫细胞化学法、原位杂交技术并结合图像定量分析观察细胞增殖、α-平滑肌肌动蛋白、视黄酸受体β2及p16、p21与p27等基因的表达情况。结果视黄酸明显抑制星状细胞增殖（41.50%, P＜0.05）、降低α-平滑肌肌动蛋白水平（55.09%, P＜0.05），并诱导视黄酸受体β2基因的表达。同时，视黄酸增高p16蛋白水平（218.75%, P＜0.05），促进p21蛋白表达；而两组细胞均未能以免疫细胞化学法检出p27。此外，视黄酸对p16、p21与p27 mRNA水平均无影响。结论视黄酸抑制由转化生长因子β1介导的大鼠肝星状细胞激活与其上调p16、p21基因转录后表达有关。

关键词：视黄酸肝星状细胞转化生长因子β1 肝纤维化细胞周期素依赖激酶抑制剂大鼠

维甲酸核内受体β基因转染对大鼠肝星状细胞增殖和表型的影响

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中华肝脏病杂志 2002年第4期10卷 297-301页

作者：李华张锦生黄光存张农陈琦张秀荣复旦大学上海医学院病理学系上海200032

目的研究维甲酸核内受体β（RAR β）转染血小板衍生生长因子（PDGF）激活的HSC后给予相应配体全反式维甲酸（ATRA）对细胞增殖、表型的影响。方法质粒pCMV-script-RARβ转染经PDGF激活的大鼠HSC, western blot鉴定转染成功后,MTT法、... 详细信息

目的研究维甲酸核内受体β（RAR β）转染血小板衍生生长因子（PDGF）激活的HSC后给予相应配体全反式维甲酸（ATRA）对细胞增殖、表型的影响。方法质粒pCMV-script-RARβ转染经PDGF激活的大鼠HSC, western blot鉴定转染成功后,MTT法、BrdU掺入检测细胞生长情况,免疫细胞化学法检测α-SMA、肌间线蛋白的表达,western blot检测RARβ蛋白表达。结果受体转染后再给予相应配体可使PDGF激活后HSC的RARβ受体表达升高至少维持144 h,并使其增殖减慢,α-SMA、肌问线蛋白表达减弱,较空载组、PDGF组、未给予配体组、无关配体组差别均有显著性意义。结论 RAR β受体基因转染并给予ATRA可使激活的HSC增殖减慢、表型逆转。

关键词：细胞增殖肝纤维化大维维甲酸核内受体β 基因转染肝星状细胞血小板衍生生长因子

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电击死心肌肌红蛋白的免疫组化研究

法医学杂志 1997年第1期13卷 12-13页

作者：陈忆九赵子琴顾云菊黄光存上海医科大学法医学系上海200032

作者应用ABC法对电击致死组与对照组心肌肌红蛋白（Myoglobin，Mb）进行免疫组化研究，同时以常规H．E染色作比较．结果发现：ABC法染色时，对照组心肌Mb呈小灶性脱失，电击致死组心肌Mb是片状脱失伴Mb颗粒弥散至心肌间质。表明电击致... 详细信息

作者应用ABC法对电击致死组与对照组心肌肌红蛋白（Myoglobin，Mb）进行免疫组化研究，同时以常规H．E染色作比较．结果发现：ABC法染色时，对照组心肌Mb呈小灶性脱失，电击致死组心肌Mb是片状脱失伴Mb颗粒弥散至心肌间质。表明电击致死者心肌友生缺血性损伤。此结果可为电击致死者的法医学检验提供辅助诊断依据。

关键词：免疫组织化学法电击致死肌红蛋白法医学鉴定

C/EBPα基因在大鼠肝星状细胞内的表达及意义

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中华肝脏病杂志 2004年第5期12卷 259-262页

作者：黄瑾张锦生黄光存汤其群陈晨张秀荣陈琦复旦大学上海医学院病理学系 200032 复旦大学上海医学院分子遗传学教研室 200032

目的初步探讨CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)在肝星状细胞(HSC)激活过程中的作用。方法采用免疫细胞化学、western blot及RT-PCR检测原代培养不同时间段HSC内C/EBPα蛋白和mRNA的表达,以及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结蛋白、基质... 详细信息

目的初步探讨CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)在肝星状细胞(HSC)激活过程中的作用。方法采用免疫细胞化学、western blot及RT-PCR检测原代培养不同时间段HSC内C/EBPα蛋白和mRNA的表达,以及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结蛋白、基质金属蛋白酶-2(MMP2)mRNA、Ⅰ型前胶原(α1)mRNA的表达;Lipofect AMINE2000介导的瞬时转染方法将pcDNA3.1(-)-C/EBPα真核表达质粒转染入激活的HSC内,采用免疫细胞化学方法鉴定转染成功及转染后HSC内增殖细胞核抗原(PCNA)的表达;在相差显微镜下观察HSC在原代培养过程中形态的改变。结果原代正常HSC中可以检测到C/EBPα mRNA和蛋白的表达,蛋白位于细胞质和细胞核内,但主要位于细胞质内,且除新鲜分离(0d)组以外,随着HSC培养至2、4、7、10d,C/EBPα蛋白和mRNA的表达呈逐步下降的趋势,而α-SMA、MMP2和Ⅰ型前胶原(α1)的表达则逐步增强;转染后24 h,目的基因转染组HSC内C/EBPα的表达明显强于空载体对照组,而PCNA的阳性细胞数较空载体对照组明显减少;转染后36 h,目的基因转染组细胞几乎全部死亡,残存的细胞形态变细,体积缩小,而空载体对照组细胞仍存活。结论 C/EBPα基因可能参与HSC的激活调控机制,且C/EBPα过表达对HSC的增殖存在抑制作用。

关键词：肝星状细胞 DNA结合蛋白 C/EBPα基因大鼠 HSC 免疫细胞化学调控机制增殖抑制

金隆铜业2#转炉主减速机断轴原因分析与对策

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安徽科技 2014年第4期 45-47页

作者：黄光存金隆铜业有限公司

金隆铜业有限公司年产高纯阴极铜45万吨,铜冶炼转炉是火法冶炼过程中的重要设备。该设备的工况不太稳定,经常出现炉体严重偏重、炉体频繁正反转现象,在改造后的使用中多次发生副减速机损坏和主减速机二档齿轴断裂。本文从机械传动与受... 详细信息

金隆铜业有限公司年产高纯阴极铜45万吨,铜冶炼转炉是火法冶炼过程中的重要设备。该设备的工况不太稳定,经常出现炉体严重偏重、炉体频繁正反转现象,在改造后的使用中多次发生副减速机损坏和主减速机二档齿轴断裂。本文从机械传动与受力分析的角度对铜冶炼转炉主传动减速机断轴事故进行深入剖析,找出事故原因并提出整改措施。

关键词：铜冶炼转炉轴力矩强度

Effect of retinoid X receptor alpha (RXRα) transfection on the proliferation and phenotype of rat hepatic stellate cells in vitro

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Chinese Medical Journal 2002年第6期115卷 928-932页

作者：李华张锦生黄光存张农陈琦张秀荣复旦大学医学院病理学教研室上海200032

Objective To study the effect of retinoid X receptor alpha (RXRα) transfection plus treatment with the RXRα ligand, 9-cis-RA, on the proliferation and phenotype of platelet-derived growth factor (PDGF)-activated hepatic stellate cells (HSCs). Methods PDGF activated rat hepatic stellate cells were transfected with eukaryotic expression vector pcDNA3.1- human RXRα, and confirmed by Western blot. Proliferation of transfected HSC was assayed by bromodeoxyuridine (BrdU) incorporation as well as MTT, and the phenotype (α-smooth muscle actin, desmin) was observed by immunocytochemistry with image analysis. Results Transfection of the RXRα gene and treatment with ligand 9-cis-RA of PDGF-activated HSCs extended the increased expression of RXRα protein for at least 168 hours. Cell proliferation and expressions of alpha-smooth muscle actin (α-SMA) and desmin were blocked, compared with groups of sham-transfected, PDGF-activated, no transfection, no ligand treatment, and irrelevant ligand treated HSCs. Conclusion Transfection with the RXRα gene followed by 9-cis-RA ligand treatment will inhibit the proliferation and reverse the phenotype of activated HSC.

关键词： retinoid X receptor alpha · gene transfection · hepatic stellate cell · phenotype · proliferation

褪黑素对经H2O2刺激大鼠肝星状细胞激活状态的抑制作用

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褪黑素对经H2O2刺激大鼠肝星状细胞激活状态的抑制作用

中华医学会病理学分会2006年学术年会

作者：顾靖庄丽黄光存复旦大学上海医学院医学神经生物学国家重点实验室复旦大学上海医学院病理学系复旦大学上海医学院病理学系

目的研究褪黑素对经H2O2刺激的大鼠肝星状细胞（HSCs）激活状态的影响及其作用机制。方法分离、培养正常大鼠HSCs。观察1μM褪黑素预处理对经100μM H2O2刺激的 HSCs Ⅰ型胶原合成的影响,并对细胞培养上清中的TGF-β1和细胞内C／EBP-α... 详细信息

目的研究褪黑素对经H2O2刺激的大鼠肝星状细胞（HSCs）激活状态的影响及其作用机制。方法分离、培养正常大鼠HSCs。观察1μM褪黑素预处理对经100μM H2O2刺激的 HSCs Ⅰ型胶原合成的影响,并对细胞培养上清中的TGF-β1和细胞内C／EBP-α基因的表达情况进行检测。结果预先给予褪黑素不仅可以抑制 H2O2促进HSCs合成Ⅰ型胶原的作用,还可以降低HSCs自分泌TGF-β1,并导致细胞内C／EBP-α基因表达水平（mRNA、蛋白）的升高。结论褪黑素可以通过调节HSCs自分泌TGF-β1以及 C／EBP-α基因的表达而抑制Ⅰ型胶原的合成。

关键词： C/EBP-α H2O2 TGF-β1 肝星状细胞褪黑素

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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肝星状细胞激活的细胞内信号转导

世界华人消化杂志 2001年第9期9卷 1056-1060页

作者：黄光存张锦生复旦大学基础医学院病理学教研室上海市200032

肝星状细胞(HSC)在肝纤维化形成过程中具有重要意义,当肝受到各种损伤时,HSC 可被激活并向肌纤维母细胞样细胞转化,主要表现为细胞增殖、游动、收缩能力增强及生长因子、细胞因子和细胞外基质(ECM)的大量合成.参与 IBC 激活过程的因素... 详细信息

肝星状细胞(HSC)在肝纤维化形成过程中具有重要意义,当肝受到各种损伤时,HSC 可被激活并向肌纤维母细胞样细胞转化,主要表现为细胞增殖、游动、收缩能力增强及生长因子、细胞因子和细胞外基质(ECM)的大量合成.参与 IBC 激活过程的因素主要有 ECM 成分和结构的变化、生长因子、细胞因子、趋化因子、氧化性应激产物及其他可溶性化学物质。它们需通过细胞内与细胞增殖及 ECM 合成与降解、细胞内 ECM 与血管活性物质等的信号转导才能发挥作用.

关键词：肝细胞学星形细胞信号传递 HSC 肝纤维化

肝素对大鼠肝星状细胞生长、细胞外基质和基质金属蛋白酶基因表达的影响

维普期刊数据库评论

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中华肝脏病杂志 2000年第4期8卷 200-202页

作者：李文才张锦生黄光存朱虹光张秀荣张月娥上海医科大学基础医学院病理学教研室 200032

目的探讨肝素对ＨＳＣ生长、细胞外基质和基质金属蛋白酶基因表达的影响。方法用肝素和不用肝素对活化的ＨＳＣ进行处理。以直接细胞计数和ＢｒｄＵ标记免疫细胞化学染色检测细胞的生长情况，用免疫细胞化学染色和细胞原位核酸分子杂交... 详细信息

目的探讨肝素对ＨＳＣ生长、细胞外基质和基质金属蛋白酶基因表达的影响。方法用肝素和不用肝素对活化的ＨＳＣ进行处理。以直接细胞计数和ＢｒｄＵ标记免疫细胞化学染色检测细胞的生长情况，用免疫细胞化学染色和细胞原位核酸分子杂交分别检测Ⅰ、Ⅳ型前胶原蛋白、纤连蛋白和Ⅰ、Ⅳ型胶原、纤连蛋白、基质金属蛋白酶－２及膜型基质金属蛋白酶基因的表达，并用酶图法检测基质金属蛋白酶－２的活性。结果肝素使血清所致的ＨＳＣ生长速度减慢；肝素抑制ＨＳＣⅠ型前胶原、纤连蛋白的合成和Ⅰ型前胶原、纤连蛋白、膜型基质金属蛋白酶基因的表达，但对Ⅳ型胶原、基质金属蛋白酶－２ｍＲＮＡ水平和基质金属蛋白酶－２活性无影响。结论肝素明显抑制血清所致的ＨＳＣ的生长；下调ＨＳＣ间质型胶原和ＦＮ的合成，并抑制膜型基质金属蛋白酶基因的表达。

关键词：肝星状细胞肝素细胞外基质 MMP-2 肝纤维化