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PWM/PFM双模式开关电源芯片设计

PWM/PFM双模式开关电源芯片设计

作者：甄真西安电子科技大学

学位级别：硕士

电源管理芯片将电源电压转换为不受外部干扰的稳定电压/电流,为设备中其它模块供电。随着电子设备小型化和高效化的发展趋势,电源管理芯片作为电子设备的核心组成部分,对其设计需求也日益复杂。目前开关电源芯片的研发生产主要来自于美... 详细信息

电源管理芯片将电源电压转换为不受外部干扰的稳定电压/电流,为设备中其它模块供电。随着电子设备小型化和高效化的发展趋势,电源管理芯片作为电子设备的核心组成部分,对其设计需求也日益复杂。目前开关电源芯片的研发生产主要来自于美国德州仪器TI(Texas Instruments)和芯源系统MPS(Monolithic Power Systems),国内厂商虽有生产但性能与世界一流水平相比仍有一定差距。研究并设计开关电源芯片,对于实现开关电源芯片的国产化自主研发,具有重要的工程意义。美国TI公司生产的TPS62095降压型DC-DC开关电源芯片(降压变换器),综合性能指标良好,满足于多种场合的应用需求,本文以该芯片为设计工作的对比分析对象,深入探究了该芯片的工作原理,对芯片的集成度和输出电压纹波等性能进行优化,设计了一款双模式自动切换的高频、高效和高集成度DC-DC降压变换器。芯片设计工作主要包括电路设计与仿真以及版图设计与仿真,本文目前完成了芯片设计的主要工作,即电路设计与仿真验证,版图设计工作将在后续逐步完善。本文主要研究内容如下:(1)经典调制模式中PWM(脉冲宽度调制)模式重载下转换效率高但轻载下效率低,PFM(脉冲频率调制)模式轻载下转换效率高但电压纹波大,本文结合两种调制模式的优势,采用PWM/PFM双模式调制使变换器在宽负载范围内均保持较高的转换效率,并利用连续电流和非连续电流两种工作模式的临界条件设计自动切换电路,实现变换器的双模式自动切换。(2)针对PFM模式下固定导通时间因输入电压变化影响变换器电压纹波的问题,本文采用导通时间随输入电压自适应变化的PFM电路,在该PFM电路中引入检测电容,形成电路导通时间与输入电压间的反馈闭环,并利用临界条件对电路进行参数优化设计。与TPS62095芯片相比,本文变换器有效控制了PFM模式下的输出电压纹波。(3)针对高转换效率的设计需求,本文变换器采用了同步整流技术,针对同步整流型降压变换器存在电流倒灌现象以及巨大额外损耗的问题,变换器设计了过零检测电路,有效控制了电感电流过零现象,减小其对变换器转换效率的影响。过零检测电路不需要外加电阻、三极管以及高压耐压管等,使电路易于集成。同时变换器还采用了一带有死区时间控制的驱动电路,避免开关管同时导通造成的巨大额外损耗,进一步提高变换器转换效率。(4)针对芯片高集成度的设计需求,本文采用片内集成的数字软启动电路,相比TPS62095芯片采用传统外接大电容的软启动方式,本文软启动电路省去片外软启动引脚,有效提高了芯片集成度。并且本文采用的欠压保护电路,不需外接基准电压、电阻和三极管,使得电路具有功耗低及易集成等优点,且该电路可产生范围较大的欠压迟滞,对输入电压的恢复裕度高。本文以TPS62095芯片为对比研究对象,通过研究变换器各性能参数的影响因素,设计模块电路,对芯片的输出电压纹波和集成度进行优化,经过仿真验证和对比分析,本文变换器对TPS62095芯片具有一定的替换作用,对国产化开关电源芯片的设计具有一定的参考价值和工程意义。

关键词：降压变换器 PWM/PFM 高效率高频率自动切换高集成度

丁酸/烟酸对断奶仔猪生长性能、肠道能量代谢及微生物菌群的影响

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丁酸/烟酸对断奶仔猪生长性能、肠道能量代谢及微生物菌群的影响

作者：甄锐广西大学

学位级别：硕士

仔猪断奶后由于肠道能量匮乏,微生物菌群代谢紊乱等因素经常导致严重腹泻、生长阻滞。丁酸是结肠的主要供能物质,烟酸是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)的重要前体物质。丁酸和烟酸作为仔猪肠道的重要能量代谢产物,可改善微生物菌群结构、调... 详细信息

仔猪断奶后由于肠道能量匮乏,微生物菌群代谢紊乱等因素经常导致严重腹泻、生长阻滞。丁酸是结肠的主要供能物质,烟酸是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)的重要前体物质。丁酸和烟酸作为仔猪肠道的重要能量代谢产物,可改善微生物菌群结构、调控能量代谢稳态进而介导肠道各生理过程。本文旨在探究不同比例丁酸-烟酸联合添加对断奶仔猪生长性能、能量代谢、肠道菌群及其代谢产物的影响。主要研究结果如下:1、研究不同比例丁酸-烟酸对断奶仔猪生长性能、腹泻指数、血清生化指标的影响。试验选择72头断奶仔猪,随机分成6组,每组6重复,每重复2头仔猪。1～6组处理分别为基础饲粮、基础饲粮+丁酸钠2000 mg/kg+烟酸20mg/kg、基础饲粮+丁酸钠2000 mg/kg+烟酸40 mg/kg、基础饲粮+丁酸钠2000mg/kg+烟酸80 mg/kg、基础饲粮+丁酸钠2000 mg/kg+烟酸160 mg/kg、基础饲粮+丁酸钠2000 mg/kg+烟酸320 mg/kg。自由采食和饮水,试验第14天称重,随后屠宰采样。结果显示:丁酸和烟酸可以促进仔猪生长,当添加比例为100:2时效果最佳,平均日采食量提高19.45%(P<0.05),料重比降低9.09%(P<0.05)。此外,添加丁酸-烟酸对仔猪血清Ig M和血糖浓度有显著影响(P<0.05),但对总蛋白和谷草转氨酶等无显著影响。2、研究不同比例丁酸-烟酸对仔猪结肠肠道形态、能量代谢及其介导巨噬细胞分型的可能机制。结果显示,饲粮添加丁酸-烟酸对仔猪结肠肠道形态无明显影响。添加2000 mg/kg丁酸钠+40 mg/kg烟酸会提高NADH和NAD含量,降低NADH/NAD的比值,促进糖酵解和三羧酸循环,进而诱导巨噬细胞从促炎M1型转变为抗炎M2型。但添加2000 mg/kg丁酸钠+160 mg/kg烟酸会使NADH和NAD含量降低及其比值升高,反而抑制糖酵解和三羧酸循环,进而使ATP浓度降低,不影响巨噬细胞分型。3、研究不同比例丁酸-烟酸对仔猪肠道微生物菌群及其代谢产物的影响。结果显示:1)饲粮丁酸-烟酸浓度影响粪便菌群alpha多样性,改变了菌群结构。门水平上,厚壁菌门/拟杆菌门的比值随着丁酸-烟酸逐步添加呈先升高后降低的趋势。科、属水平上,乳酸杆菌的相对丰度随着饲粮丁酸-烟酸的添加而升高。此外,饲粮添加丁酸-烟酸降低粪便中烟酰胺和维生素B的浓度;升高烟酸、维生素B、维生素B和维生素B的浓度。2)饲粮添加丁酸-烟酸总体上升高乙酸、丁酸和丙酸的浓度,降低己酸的浓度。添加2000 mg/kg丁酸钠+40 mg/kg烟酸,结肠内容物代谢产物如氨基酸、丁酸、B族维生素等有益代谢产物比高浓度组更加富集。KEGG分析显示对维生素和丁酸代谢等重要途径显著富集。综上所述,饲料添加2000 mg/kg丁酸钠+40 mg/kg烟酸是丁酸-烟酸联合添加的最佳比例,可提高断奶仔猪生产性能,促进肠道能量代谢进而可能诱导巨噬细胞从促炎M1型转化为M2抗炎型,改善肠道微生物菌群及其代谢,可作为能量补充添加剂应用于畜牧生产中。

关键词：断奶仔猪丁酸烟酸能量代谢肠道菌群代谢产物

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复合词项语义韵研究再探

外语教学与研究 2023年第1期55卷 41-52,159页

作者：甄凤超上海交通大学外国语学院上海市200240

语义韵是语料库语言学研究中的一个重要概念,用来表达语言的功能。学界对语义韵的讨论一直没有停止过,多数研究者倾向于接受Sinclair(2004)的分析路径,将语义韵分析严格限定在复合词项内部,根据复合词项中的搭配、语义倾向等元素对语义... 详细信息

语义韵是语料库语言学研究中的一个重要概念,用来表达语言的功能。学界对语义韵的讨论一直没有停止过,多数研究者倾向于接受Sinclair(2004)的分析路径,将语义韵分析严格限定在复合词项内部,根据复合词项中的搭配、语义倾向等元素对语义韵作出判断。这在某种程度上弱化了复合词项与其共文语境之间的动态互动。本文以Sinclair分析复合词项语义韵的经典案例naked eye为研究对象,增加汉语“肉眼”以及其他案例,从双语对比的视角重新审视复合词项的语义韵特征,指出Sinclair的分析中可能存在的问题,提出解决问题的思路与方法,并在此基础上进一步完善语义韵的理论框架。

关键词：复合词项语义韵语料库语言学短语学

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人工局域表面等离激元传导模杂化特性研究

人工局域表面等离激元传导模杂化特性研究

作者：甄姝中国矿业大学

学位级别：硕士

表面等离激元(Surface Plasmon,SP)是指在金属结构表面的自由电子与入射光子之间发生相互作用产生的电磁振荡模式,表面等离激元包括传播型的表面等离极化激元(Surface Plasmon Polaritons,SPPs)和局域表面等离激元(Localized Surface Pl... 详细信息

表面等离激元(Surface Plasmon,SP)是指在金属结构表面的自由电子与入射光子之间发生相互作用产生的电磁振荡模式,表面等离激元包括传播型的表面等离极化激元(Surface Plasmon Polaritons,SPPs)和局域表面等离激元(Localized Surface Plasmon,LSP)两大类。前者是电磁波在金属和介质间的界面上被激发并沿着金属层进行长距离传播的模式;后者是金属纳米颗粒中的自由电子的振荡并受到结构尺寸大小、几何形状的限制,电磁波被束缚在很小的结构尺寸之内的模式。随着加工制备、测试表征等技术的发展,对传播型表面等离极化激元以及局域型表面等离激元的研究逐渐深入,并且在高密度集成光路、生物传感、新能源等领域得到了广泛的应用。然而,在太赫兹、微波波段金属的性质趋近于完美电导体(PEC),不支持表面等离激元的传输。为了克服这一缺陷,人们利用刻槽、凿孔等结构来实现类SP的电磁特性,进而提出人工表面等离激元(Spoof Surface Plasmon)的概念。人工表面等离激元在光通信、信号处理等领域有广泛的应用。电荷传导模(Charge Transfer Mode,CTM)是两个通过导电结连接在一起的二聚体中出现的不同于单个粒子电偶极子和磁偶极子的新的模式。作为高度可调谐的模式,电荷传导模的性质依赖于导电结的物理尺寸、结构性质等因素,电荷传导模在纳米电机、传感器等领域有很广泛的应用前景。基于时域有限差分法的电磁仿真软件CST,设计了结构化金属粒子二聚体,通过电磁仿真和耦合理论相结合的方法,研究了结构化粒子二聚体中电荷传导模的横向和纵向杂化,以及电荷传导模沿周期性金属粒子链的传输特性。本文工作主要分为三个部分:(1)研究了结构化金属粒子单元上的局域表面等离激元谐振以及二聚体结构中的电荷传导模谐振特性。单个结构化金属螺旋粒子支持人工局域表面等离激元中电、磁偶极子、多极子等谐振模式,两个通过导电结连接在一起的螺旋结构粒子构成的二聚体结构能够很好地支持电荷传导模振荡。仿真发现通过外臂直接连接在一起的螺旋粒子构成的二聚体在平面波的激发下能够实现电荷传导模式谐振,当导电结电导率增加时,电荷传导模的频率增大,发生蓝移;导电结长度增加,频率减小,发生红移;导电结宽度增加,频率增大,发生蓝移。通过改变连接导电结的参数来控制电荷传导模的谐振模式,这为在红外波长实现可控的可调谐的等离激元模式提供新的、独特的方法。(2)研究了结构化粒子传导模的横向和纵向杂化,并用耦合理论分析了二聚体间的分离距离和角度对杂化的影响。随着两个螺旋二聚体分离间距的增加,电荷传导模的谐振峰劈裂成两个谐振模式,随着间距的增加频率的劈裂Δω减小,对应频率分移量Δω/ω和分离间距呈指数相关衰减。电荷传导模的杂化也存在对称和反对称两种模式,对于反对称模式而言其辐射损耗能降低,谐振频谱表现出较窄的线宽和较大的品质因数;对于对称模式而言,其辐射损耗能增加,从而谐振频谱表现出较宽的线宽和较小的品质因数。在杂化体系中引入偏转角,通过两次旋转操作可以实现横向和纵向杂化间的转换,Δω/ω和角度呈余弦函数式相关。研究了基于电荷传导模横向和纵向杂化设计的单极天线作为激励源的周期性粒子链的传输特性,并结合耦合模理论进行了分析。基于耦合模理论,计算横向和纵向传输的周期性粒子链的色散关系,仿真得到的谐振频谱对应带宽和计算得到的色散曲线基本一致且能够很好地支持人工局域表面等离激元模式,对于横向粒子链结构上电磁波沿着“正向”传输,而对于纵向粒子链结构上电磁波沿着“反向”传输。(3)研究了电介质衬底对结构化金属螺旋粒子本征模式顺序性的影响。电介质衬底对结构化金属粒子的谐振模式有较大影响,研究发现,螺旋粒子的多级谐振模式在改变衬底的情况下可以实现正序向逆序的转化,而结构化金属直槽粒子的谐振模式顺序不受电介质衬底改变的影响。该论文有图43幅,参考文献129篇。

关键词：结构化金属螺旋粒子电荷传导模杂化金属粒子链本征模式

回归量刑基准:区域性常态不法的常态量刑——以司法大数据辅助量刑为背景

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新疆社会科学 2023年第5期 127-136,175,176页

作者：甄航西南政法大学法学院重庆401120

量刑基准的确立要在明确其宏观定位的基础上进行微观构造的探索。在宏观定位层面,量刑基准是责任刑之基准,其体现着消极责任主义原则对量刑活动的制约。在微观构造层面,量刑基准的确立分为确立根据和确立算法,前者明确何种情节影响着量... 详细信息

量刑基准的确立要在明确其宏观定位的基础上进行微观构造的探索。在宏观定位层面,量刑基准是责任刑之基准,其体现着消极责任主义原则对量刑活动的制约。在微观构造层面,量刑基准的确立分为确立根据和确立算法,前者明确何种情节影响着量刑基准的确立,后者探究从个案事实(存在)到量刑基准刑罚量(应当)之危险跳跃的具体算法。量刑基准的确立根据是排除预防刑情节的区域性常态不法事实;量刑基准的确立算法是区域性常态不法的常态量刑(量刑众数),而非传统的量刑基准实证研究中容易受极端值影响且无法解决不同刑种之间量纲化问题的裸刑均值。

关键词：量刑基准量刑规范化量刑起点基准刑

依托咪酯对脊髓腹角神经元中GABA电流和甘氨酸电流作用的比较分析

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依托咪酯对脊髓腹角神经元中GABA电流和甘氨酸电流作用的比较分析

作者：甄骋皖南医学院

学位级别：硕士

目的:研究依托咪酯对新生大鼠脊髓腹角神经元上γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）电流和甘氨酸（glycine,Gly）电流的作用,并进行比较分析。方法:选取7～12日龄的新生SD大鼠进行实验,使用乙醚混合冰浴麻醉后,分离出含有腰骶膨... 详细信息

目的:研究依托咪酯对新生大鼠脊髓腹角神经元上γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）电流和甘氨酸（glycine,Gly）电流的作用,并进行比较分析。方法:选取7～12日龄的新生SD大鼠进行实验,使用乙醚混合冰浴麻醉后,分离出含有腰骶膨大部分的脊髓节段,清除残留的神经根后,使用震荡切片机制备3～5片厚度为400～500μm的脊髓腰骶膨大部分的切片。将脊髓切片置于33℃的木瓜蛋白酶溶液（Papain,0.18 g/30 m L人工脑脊液）中,消化切片大约20 min,再将切片移入室温的人工脑脊液中缓冲40～60 min。使用手术刀片经中央孔分离出脊髓切片的腹侧部分,分别放入直径35 mm培养皿中,并使用不同口径的巴斯德吸管对切片进行吹打,得到游离的单个细胞。吹打完成后静置约20 min,待细胞贴壁后,移动培养皿至显微镜下,选取贴壁的状态良好的神经元进行穿孔膜片钳记录。结果:（1）使用脊髓急性分离方法得到的神经元状态良好,胞体透亮,突起完整。（2）脊髓腹角神经元的自发放电连续且稳定,几乎都有超射,表明细胞状态良好。（3）单独给予3.0μmol/L的ET无法在脊髓腹角神经元上诱发电流,而3.0μmol/L的ET预处理2 min后,GABA峰电流增大并稳定至对照电流的147.67±25.26%,稳态电流增大并稳定至对照电流的171.26±23.27%（n=5,P＜0.01）。（4）使用3.0μmol/L的ET预处理2 min,Gly（30.0μmol/L）峰电流幅度增大并稳定至对照电流的128.37±6.93%,稳态电流增大并稳定至对照电流的119.41±4.82%（n=4,P＜0.01）。（5）使用3.0μmol/L的ET预处理2 min后,使GABA电流的上升时间减小至对照电流的58.35±6.10%（n=5,P＜0.01）,而衰减时间增大至对照电流的162.26±14.58%（n=5,P＜0.01）。（6）使用3.0μmol/L的ET预处理2 min后,使得Gly电流的上升时间减小至对照电流的72.53±6.19%（n=5,P＜0.01）,而衰减时间则增大至对照电流的113.68±7.47%（n=5,P＜0.01）。（7）不同浓度的ET对脊髓腹角神经元上GABA峰电流的作用具有差异性,1.0μmol/L、3.0μmol/L、10.0μmol/L的ET分别将GABA峰电流增大至对照电流的141.02±11.30%（n=4,P＜0.01）,147.67±25.26%（n=5,P＜0.01）,112.16±5.67%（n=4,P＜0.01）,而30.0μmol/L的ET将GABA峰电流减小至对照电流的68.72±7.92%（n=6,P＜0.01）。（8）不同浓度的ET对脊髓腹角神经元上Gly峰电流的作用具有差异性,1.0μmol/L、3.0μmol/L的ET分别将Gly峰电流增大至对照电流的115.44±5.89%（n=4,P＜0.01）,130.37±10.98%（n=5,P＜0.01）,而10.0μmol/L和30.0μmol/L的ET将Gly峰电流分别减小至对照电流的84.90±5.30%（n=4,P＜0.01）和62.82±8.69%（n=4,P＜0.01）。结论:（1）使用酶消化结合急性机械分离方法得到的脊髓腹角神经元胞体透亮,突起完整,细胞状态良好,适用于进行穿孔膜片钳记录。（2）临床浓度ET对脊髓腹角神经元上GABA受体和Gly受体介导的峰电流和稳态电流的幅度具有不同程度的增大作用。（3）临床浓度ET差异性的缩短脊髓腹角神经元GABA和Gly受体介导电流的上升时间,延长其衰减时间。（4）ET对脊髓腹角神经元上GABA电流和Gly电流幅度的作用具有浓度相关性。

关键词：依托咪酯 GABA电流甘氨酸电流脊髓腹角神经元膜片钳记录

基于财务战略矩阵的大商集团财务战略优化研究

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基于财务战略矩阵的大商集团财务战略优化研究

作者：甄石沈阳工业大学

学位级别：硕士

财务战略是企业经营发展的核心,影响企业的运作状况、资金水平、资本发挥效率,受内外部环境、财务状况的影响。对我国传统零售业来说,互联网+、大数据迅猛发展、电子商务兴起、宏观环境巨变,加之消费者逐渐倾向网购的购买方式,严重冲击... 详细信息

财务战略是企业经营发展的核心,影响企业的运作状况、资金水平、资本发挥效率,受内外部环境、财务状况的影响。对我国传统零售业来说,互联网+、大数据迅猛发展、电子商务兴起、宏观环境巨变,加之消费者逐渐倾向网购的购买方式,严重冲击其发展。研究零售企业如何优化财务战略以应对市场中严峻的挑战、持续发展以及保持自身竞争力具有重要意义。论文以大商集团为研究对象,根据价值创造理论和可持续发展理论,构建财务战略矩阵。根据所处象限的位置结合其财务现状,深入研究大商集团财务战略,分析出财务战略存在一些问题:债务筹资规模较小、长短期借款比例不合理;对外投资规模小且项目质量不佳、未充分利用冗余资金对内投资;营运能力不佳成长性差、营运资产周转缓慢;高额现金股利与战略不符、固定股利支付率使股利分配不稳定不合理。进而提出针对性优化对策:筹资战略方面,对百货业态扩大长期借款筹资以降低总投资成本,物业业态采用售后回租以提高筹资效率,采用应收账款保理筹资以降低筹资成本并加快资金周转;投资战略方面,加大并购整合和自主开发力度以利用冗余资金,加大投资发展大商天狗网以利用冗余资金,加大投资开发大商城市乐园以利用冗余资金,对不同地区亏损门店整改或关停以提高投资回报率;营运战略方面,减少营运资金以提高营运资产周转率,清理库存及剥离资产以提高资产周转率;股利分配方面,采用低正常股利加额外股利政策以保证分配连续稳定,增加员工持股计划作为激励机制。论文旨在对大商集团财务战略进行优化,帮助大商集团平稳应对当前发展不利的困境,实现更好的发展,并对其他实体零售企业提供借鉴。

关键词：财务战略矩阵大商集团财务战略价值创造可持续增长

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生态环境损害救济的衔接机制研究

生态环境损害救济的衔接机制研究

作者：甄欢欢西南政法大学

学位级别：硕士

高温胁迫下中间球海胆甲基化驱动基因筛选及调控通路解析

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高温胁迫下中间球海胆甲基化驱动基因筛选及调控通路解析

作者：甄昊大连海洋大学

学位级别：硕士

中间球海胆(Strongylocentrotus intermedius)原产于日本,现为我国北方重要的海水养殖种类,在辽东半岛和山东半岛广泛养殖。近几年来,全球变暖加剧,夏季高温天气频发,中间球海胆在高温期常出现大批量死亡现象,温度成为制约其存活的重要... 详细信息

中间球海胆(Strongylocentrotus intermedius)原产于日本,现为我国北方重要的海水养殖种类,在辽东半岛和山东半岛广泛养殖。近几年来,全球变暖加剧,夏季高温天气频发,中间球海胆在高温期常出现大批量死亡现象,温度成为制约其存活的重要因素。然而,目前关于中间球海胆应对高温分子层面的响应调控机制研究报道较为匮乏。为此,本研究利用转录组和DNA甲基化测序技术,筛选热应激相关的响应基因及调控通路,构建简化基因组甲基化图谱,查明高温胁迫下基因的甲基化修饰模式,筛选DNA甲基化调控温度的关键候选基因,寻找响应高温基因甲基化和基因表达间的相关性,以期为中间球海胆耐高温良种培育提供一定的理论基础。主要研究内容及结论如下:1)为探明温度对中间球海胆生长的影响,本文基于不同温度下不同壳径中间球海胆生长监测数据,利用多项式拟合和响应曲面法,建立不同温度下中间球海胆生长预测模型,并查出不同壳径中间球海胆生长最适温度和极限温度。结果显示,在实验设定的温度范围内,中间球海胆增重率随温度的升高而上升;超过最适温度后,海胆增重率下降;当水温超出海胆耐热极限后,中间球海胆体重减轻直至死亡。温度影响中间球海胆生长预测模型为抛物线状,模型R值均大于0.94,模型构建合理有效。模型计算得出,壳径2 cm、4 cm和6 cm中间球海胆生长最适温度分别为16.1℃、15.4℃和13.6℃;生长极限温度分别为25.1℃、24.5℃和21.0℃。2)利用RNA-seq测序技术对高温胁迫下中间球海胆肠道组织进行转录组测序,共得到41.68G的clean reads,每个样本有效数据量为6.49～7.07G,Q30碱基分布在95.87～96.1%,平均GC含量为42.65%,将得到的clean reads比对到参考基因组上,比对率为99.9～99.92%。通过比较得到差异基因数为1968个,其中上调813个,下调1155个。发现Amy、HK2、HSP70、CRYAB、PGK1、PKM、FDFT1、DHCR24、IDH1、Aco1、mdh1、RDH8、GGT1、CYP等基因在中间球海胆应对高温中起到重要作用。GO富集分析显示,差异基因功能主要富集在视黄醇代谢、谷胱甘肽代谢、胆固醇合成。基于KEGG数据库共注释到328条代谢通路,差异基因主要富集在糖酵解、细胞色素P450对外来因子的代谢、类固醇的合成、谷胱甘肽代谢等信号通路。差异表达基因大多显著富集在能量代谢、免疫、维持细胞稳态等通路中,高温影响了中间球海胆生长与免疫功能。选取10个差异表达基因进行RT-q PCR验证,结果与RNA-Seq结果相似,表明测序结果准确可靠。3)利用Methyl RAD测序技术开展高温胁迫下中间球海胆肠道组织DNA甲基化差异分析,对照组海胆CG甲基化位点平均684527个,高温胁迫处理组海胆CG甲基化位点平均680788个;对照组海胆CWG甲基化位点平均60908个,高温胁迫处理组海胆CWG甲基化位点平均61157个。高温并没有导致中间球海胆甲基化位点数目发生显著差异,也没有改变中间球海胆甲基化模式。甲基化位点在基因组不同功能元件上的分布结果显示,除Splice Site Acceptor区域外,CWG位点少于CG位点,且CG甲基化位点集中在基因区间,CWG甲基化位点集中在基因区间和外显子区间。两组间CG差异甲基化位点共12129个,其中上调6034个,下调6095个,CWG差异甲基化位点共966个,其中上调412个,下调454个。对甲基化差异位点进行GO富集分析显示,CG、CWG差异甲基化位点主要富集在蛋白质磷酸化、膜融合、轴突、组蛋白乙酰化等。KEGG富集分析结果表明,差异甲基化位点基因功能主要富集在内吞作用、PI3K-Akt信号通路、Erb B信号通路、AMPK信号通路、肌动蛋白细胞骨架调节等通路上。研究表明,中间球海胆的甲基化类型主要为CG型,高温没有改变中间球海胆的甲基化类型。差异甲基化基因大多显著富集在能量和细胞分裂、免疫、神经损伤等通路中,推测海胆响应高温机制过程中有DNA甲基化修饰的参与。4)对转录组与甲基化数据进行Pearson检验,计算基因甲基化水平与转录的相关性,筛选到23个基因其甲基化与基因表达同时存在差异,分别为PLXNA4、ft、Cox7a2、cah-3、Slc5a3、MKX、Orct、Moap1、pats1、HPSE、SULT1B1、bbs5、FAXDC2、Ids、GGT1、tll1、Kansl1、RBM34、SMCHD1、RDH8、PRADC1、Ighmbp2、Hint2。Ids、HPSE在两种模式中同时被筛选到。其中,在CG位点筛选到15个基因,正相关基因有8个,负相关基因有7个;负相关基因分别为PLXNA4、ft、Cox7a2、MKX、pats1、HPSE、FAXDC2。在CWG位点筛选到10个基因,其中正相关基因有8个,负相关基因有2个

关键词：中间球海胆 DNA甲基化 RNA-Seq 联合分析