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CD630_27900基因缺失显著降低艰难拟梭菌自溶速率、毒力及对酸和抗生素的耐受性

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微生物学报 2023年第6期63卷 2440-2455页

作者：杨君仪鲍江舰邵瑞瑞张婷廖健程玉梅官志忠齐晓岚陈峥宏崔古贞洪伟贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550001 贵州医科大学基础医学院贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550004 省部共建地方病及民族区域性疾病防控协同创新中心贵州贵阳550001 贵州医科大学口腔医学院/附属口腔医院贵州贵阳550001 贵州医科大学附属医院综合ICU 贵州贵阳550001

艰难拟梭菌(Clostridioidesdifficile)CD630_27900基因位于slpA-cwp66基因座上,CD630_27900基因属于假定的Lmbe家族的酶,但基因功能尚未明确。【目的】本研究通过构建艰难拟梭菌CD630_27900基因敲除菌株,比较野生型菌株(CD630)与突变株... 详细信息

艰难拟梭菌(Clostridioidesdifficile)CD630_27900基因位于slpA-cwp66基因座上,CD630_27900基因属于假定的Lmbe家族的酶,但基因功能尚未明确。【目的】本研究通过构建艰难拟梭菌CD630_27900基因敲除菌株,比较野生型菌株(CD630)与突变株表型差异,探讨CD630_27900基因对艰难拟梭菌感染的影响。【方法】用非等长同源臂偶联等位交换(allele-coupled exchange, ACE)构建CD630_27900基因缺失菌株与回补菌株。比较它们在生长曲线、自溶素(cwp19,Acd)基因表达、细胞毒力、主要毒素基因表达、抗生素及pH敏感性差异,以研究CD630_27900基因的功能。【结果】成功构建△CD630_27900突变菌株和::CD630_27900回补菌株。菌株△CD630_27900在衰亡期自溶速率显著低于菌株CD630,::CD630_27900自溶速率恢复。实时荧光定量聚合酶链反应(real-timefluorescencequantitative polymerasechainreaction,RT-qPCR)结果显示,缺失CD630_27900基因,自溶素cwp19、Acd基因表达量降低,::CD630_27900自溶素基因表达增强。相较于CD630,△CD630_27900菌株细胞毒力、毒素基因tcdA、tcdB表达量降低。相较于CD630,△CD630_27900对氨苄青霉素、甲硝唑、阿莫西林、万古霉素、诺氟沙星、头孢西丁、卡那霉素更加敏感,::CD630_27900对以上抗生素敏感性恢复。此外,△CD630_27900对酸比CD630敏感,对碱敏感性未发生变化。::CD630_27900对酸敏感性恢复至野生型水平。【结论】敲除CD630_27900基因,艰难拟梭菌自溶速率变慢、自溶素cwp19、Acd基因表达量降低、细胞毒力、毒素基因tcd A和tcd B降低,说明CD630_27900基因影响菌株自溶以及毒力释放。菌株△CD630_27900对临床上常见的抗生素及酸性环境更加敏感,且这些变化均可通过基因回补恢复。提示该基因可作为联合抗生素治疗艰难梭菌感染(Clostridioides difficile infection, CDI)的潜在靶点。

关键词：艰难拟梭菌 CD630_27900基因肽聚糖脱乙酰化非等长同源臂偶联等位交换突变表型

解纤维梭菌脱水四环素诱导的ClosTron基因打靶系统构建

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微生物学通报 2021年第9期48卷 2982-2990页

作者：崔古贞花登雄管玉祝鲍江舰张馨月谷俊莹陈峥宏洪伟贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵州贵阳550025 地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学医学检验学院贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院贵州贵阳550004

【背景】解纤维梭菌是发酵木质纤维素生产乙醇的中温模式菌株,构建可控诱导的基因打靶技术是研究解纤维梭菌遗传调控的重要手段。【目的】在解纤维梭菌中构建脱水四环素诱导的ClosTron基因打靶系统。【方法】首先,分析解纤维梭菌对脱水... 详细信息

【背景】解纤维梭菌是发酵木质纤维素生产乙醇的中温模式菌株,构建可控诱导的基因打靶技术是研究解纤维梭菌遗传调控的重要手段。【目的】在解纤维梭菌中构建脱水四环素诱导的ClosTron基因打靶系统。【方法】首先,分析解纤维梭菌对脱水四环素的敏感性,筛选合适的诱导剂浓度,并以β-葡萄糖苷酶为报告基因,检测其在解纤维梭菌中的诱导效果。然后,将脱水四环素诱导型操纵子与II型内含子元件组合,构建脱水四环素诱导的ClosTron质粒。最后,以解纤维梭菌mspI、ldh和ack为例,检测其在解纤维梭菌中的打靶效率。【结果】脱水四环素诱导系统在解纤维梭菌中能够诱导ClosTron元件表达,在mspI、ldh和ack这3个基因位点的打靶效率分别为29.48%±15.51%、23.61%±7.08%和28.09%±6.97%。【结论】在解纤维梭菌中成功构建脱水四环素诱导的ClosTron基因打靶系统,为梭菌基因工程改造奠定了基础。

关键词：解纤维梭菌脱水四环素诱导系统 ClosTron Ⅱ型内含子

fliL基因显著影响艰难拟梭菌运动功能及产孢能力

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生物工程学报 2023年第4期39卷 1578-1595页

作者：鲍江舰杨君仪邵瑞瑞张婷廖健程玉梅官志忠齐晓岚陈峥宏洪伟崔古贞贵州医科大学基础医学院贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550001 省部共建地方病及民族区域性疾病防控协同创新中心贵州贵阳550001 贵州医科大学口腔医学院附属口腔医院贵州贵阳550001 贵州医科大学附属医院综合ICU 贵州贵阳550001 贵州医科大学病理科贵州医科大学附属医院贵州贵阳550001

鞭毛基底体相关FliL家族蛋白(flagellar basal body-associated FliL family protein,fliL)基因编码FliL蛋白,FliL是一种与鞭毛基体相结合的单跨膜蛋白。为研究艰难拟梭菌fliL基因功能,使用非等长同源臂偶联等位交换(allele-coupled exchange,ACE)方法成功构建了fliL基因缺失(ΔfliL)和回补(::fliL)突变株,研究突变菌株与野生型菌株(CD630)生长曲线、抗生素敏感性、pH耐受性、运动能力及产孢能力等表型的差异。结果显示,菌株ΔfliL生长速率及最大生物量均小于菌株CD630,::fliL回补菌株生长情况回复至野生型。与CD630菌株相比,ΔfliL对阿莫西林、氨苄青霉素、诺氟沙星的敏感性提高,对卡那霉素、四环素敏感性降低,::fliL抗生素敏感性部分回复至野生型水平。与CD630菌株相比,ΔfliL游泳运动能力显著降低,::fliL运动能力超越野生型菌株CD630。相比菌株CD630,菌株ΔfliL在pH值为5时耐受能力显著提高,在pH值为9时,耐受能力显著降低。除此之外,ΔfliL产孢能力较CD630显著降低,::fliL产孢能力部分恢复。以上结果表明,艰难拟梭菌fliL基因与其运动能力、抗生素敏感性、环境耐受能力和产孢能力密切相关,可能进一步影响艰难拟梭菌菌株的致病力。

关键词：艰难拟梭菌非等长同源臂偶联等位交换鞭毛 fliL 突变株表型

基于sacB负筛选标记的Targetron质粒分析系统构建

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中国病原生物学杂志 2022年第9期17卷 1010-1014页

作者：崔古贞花登雄鲍江舰张馨月洪伟吴道艳向松谷俊莹陈峥宏贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵州贵阳550025 贵州省病原生物学特色重点实验室贵州医科大学医学检验学院省部共建地方病与少数民族性疾病重点实验室贵州医科大学附属医院

目的构建基于sacB负筛选标记的Targetron质粒分析系统。方法构建sacB毒蛋白诱导表达受体质粒pACYC-sacB(携带p15A复制子),分析sacB毒蛋白对大肠埃希菌的毒性。设计sacB基因打靶位点,构建脱水四环素诱导的Targetron供体质粒pSY11-sacB(携... 详细信息

目的构建基于sacB负筛选标记的Targetron质粒分析系统。方法构建sacB毒蛋白诱导表达受体质粒pACYC-sacB(携带p15A复制子),分析sacB毒蛋白对大肠埃希菌的毒性。设计sacB基因打靶位点,构建脱水四环素诱导的Targetron供体质粒pSY11-sacB(携带colE1复制子和sacB405a打靶位点)。双质粒共转化大肠埃希菌BL21(DE3),脱水四环素诱导Targetron表达并对sacB基因进行打靶。涂布含有5%蔗糖和0.1 mmol/L IPTG的选择培养基,筛选sacB基因失活的阳性菌落,利用菌落PCR进一步验证Ⅱ型内含子在靶位点的插入情况。结果sacB基因表达的大肠埃希菌不能在含有5%蔗糖的平板中生长;双质粒共转化后,脱水四环素诱导Targetron表达能够插入到sacB405a靶位点;sacB基因失活后,大肠埃希菌能够在含有5%蔗糖的平板上生长,菌落PCR验证内含子插入到DNA靶位点。结论建立了基于sacB负筛选标记的Targetron质粒分析系统,为Ⅱ型内含子功能鉴定、迁移规律分析等奠定了基础。

关键词： Targetron sacB Ⅱ型内含子打靶平台

嗜热基因打靶系统Thermotargetron构建及其打靶效率检测

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生物技术 2022年第3期32卷 276-283页

作者：花登雄管玉祝鲍江舰洪伟陈峥宏张馨月王鑫鑫郑建国谷俊莹崔古贞贵州医科大学医学检验学院贵州贵阳550004 贵州医科大学基础医学院病原生物学重点实验室贵州贵阳550025 地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院贵州贵阳550004

[目的]在大肠杆菌中构建基于嗜热Ⅱ型内含子的高效Thermotargetron基因打靶系统,并验证其温度敏感性及打靶效率,为嗜热Ⅱ型内含子功能分析建立快速遗传检测平台。[方法]首先,以大肠杆菌lacZ基因为靶基因,根据嗜热Ⅱ型内含子碱基识别规... 详细信息

[目的]在大肠杆菌中构建基于嗜热Ⅱ型内含子的高效Thermotargetron基因打靶系统,并验证其温度敏感性及打靶效率,为嗜热Ⅱ型内含子功能分析建立快速遗传检测平台。[方法]首先,以大肠杆菌lacZ基因为靶基因,根据嗜热Ⅱ型内含子碱基识别规律设计基因打靶引物,构建IPTG诱导型Thermotargetron打靶载体。然后,利用蓝白斑筛选及菌落PCR方法检测其打靶效率,并通过优化温度、IPTG浓度及诱导时间,确定Thermotargetron在大肠杆菌中的最佳打靶条件。[结果]在大肠杆菌正常生理条件下,Thermotargetron不具有基因打靶功能,而在45℃及以上条件下可获得较好的打靶效率,且在48℃、1.0 mmol/L IPTG诱导5 h时在lacZ-369a、lacZ-60a、lacZ-515a三个位点的打靶效率分别达到98.05%±1.67%、91.76%±7.08%和69.77%±5.86%。[结论]在短暂耐高温的大肠杆菌中建立了IPTG诱导的Thermotargetron基因打靶系统,该系统在任意选择的3个靶位点的打靶效率平均为86.5%±12.1%,为嗜热Ⅱ型内含子的功能机制研究奠定了平台基础。

关键词：大肠杆菌 Thermotargetron 嗜热Ⅱ型内含子 lacZ基因遗传检测平台

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安全支持提供者接口在网络安全通信中的应用

华南理工大学学报（自然科学版） 2002年第6期30卷 61-64页

作者：鲍江宏华南理工大学应用数学系广东广州510640

通过对网络安全通信的详细分析 ,提出了应用安全支持提供者接口技术 ,透明地实现各种认证手段 ,从而在公众网络上建立起一个安全数据通道。

关键词：安全支持提供者接口消息鉴别码传输控制/互联网协议句柄上下文

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西方人类学电影史述评

民族研究 2001年第2期 86-96页

作者：鲍江中央民族大学民族学系

在人类学理论史和纪录电影史背景下，本文对西方人类学电影的历史作了梳理。着重评价自活动摄影机诞生以来出现的人类学电影主要潮流及其代表性人物和作品，并且对摄影机技术的发展对影片制作和作品风格的影响给予关注。

关键词：西方人类学电影史述评人类学理论代表性人物作品风格影片制作摄影机

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娲皇宫志探索一种人类学写文化体裁 1

丛书名：中国社会科学院社会学研究所博士后文集

2013年

作者：鲍江

本书是一本人类学本土化的创新专著。主要内容包括：神鬼门、萨满门、现代门、文化冲突、文化圆融、我与影片中人物及蜗皇宫本地人等。

ISBN: (纸本)9787509740392

本书是一本人类学本土化的创新专著。主要内容包括：神鬼门、萨满门、现代门、文化冲突、文化圆融、我与影片中人物及蜗皇宫本地人等。

关键词：文化人类学研究中国

来源：畅想之星图书光盘版（南... 评论

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生活世界影视人类学理论

电影艺术 2020年第1期 56-60页

作者：鲍江中国社会科学院社会学研究所国际人类学与民族学联合会影视人类学委员会

本文提出生活世界影视人类学的理论框架。理路如下:借鉴哲学家胡塞尔的悬搁方法,通过悬搁"文化""社会""民族"概念,重新把握人类学的历史和逻辑起点,即一门以发现和发明人类多样性统一为职志的学问;从宏观和微观两种视角梳理人类学史,评... 详细信息

本文提出生活世界影视人类学的理论框架。理路如下:借鉴哲学家胡塞尔的悬搁方法,通过悬搁"文化""社会""民族"概念,重新把握人类学的历史和逻辑起点,即一门以发现和发明人类多样性统一为职志的学问;从宏观和微观两种视角梳理人类学史,评议"民族""社会""文化"研究进路的成就和局限;将胡塞尔"生活世界"概念引入人类学;提出微型社区研究的一种生活世界影视人类学实践进路。

关键词：胡塞尔人类学生活世界影视21世纪