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外泌体可介导CRISPR/Cas9系统靶向切割乙型肝炎病毒基因组功能的细胞间传递

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中华肝脏病杂志 2019年第8期27卷 610-614页

作者：王杰陈然鲁凤民北京大学基础医学院病原生物学系暨感染病中心 100191

目的明确转染了规律间隔成簇短回文重复序列及其相关蛋白9(CRISPR/Cas9)表达质粒的细胞所分泌的外泌体中是否存在单链向导RNA(gRNA)和Cas9蛋白,并探索CRISPR/Cas9系统能否通过外泌体的细胞间传递,实现对周围细胞靶基因的编辑。方法(1)将... 详细信息

目的明确转染了规律间隔成簇短回文重复序列及其相关蛋白9(CRISPR/Cas9)表达质粒的细胞所分泌的外泌体中是否存在单链向导RNA(gRNA)和Cas9蛋白,并探索CRISPR/Cas9系统能否通过外泌体的细胞间传递,实现对周围细胞靶基因的编辑。方法(1)将CRISPR/Cas9表达质粒转染至HuH7细胞中,收集细胞培养上清液,差速离心法浓缩和纯化外泌体,通过电镜和马尔文激光散射粒度测定仪分别测定外泌体的形态和粒径,并利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法分别检测gRNA和Cas9蛋白水平。(2)将分别转染1.2×乙型肝炎病毒(HBV)表达质粒和HBV特异性CRISPR/Cas9表达质粒的HuH7细胞进行共培养。2d后提取细胞内HBVDNA,经PCR扩增后测序。结果转染CRISPR/Cas9表达质粒的HuH7细胞所产生的外泌体中不仅存在全长gRNA和Cas9蛋白,并可在细胞间传递其基因编辑功能,实现对周围细胞HBV基因组的破坏。结论作为一种潜在的递送系统,外泌体可通过携带有功能的gRNA和Cas9蛋白在细胞间传递CRISPR/Cas9系统的基因编辑功能。这一现象也提示我们,在利用CRISPR/Cas9系统进行基因治疗的过程中,也需要考虑携带有gRNA和Cas9蛋白的外泌体对周围及远端组织细胞的潜在影响。

关键词：肝炎病毒,乙型 CRISPR/Cas9 基因治疗外泌体递送系统

抗乙型肝炎新药临床试验终点及抗病毒疗效评判指标的选择

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中华肝脏病杂志 2022年第4期30卷 429-438页

作者：中华医学会肝病学分会肝病基础医学与实验诊断协作组鲁凤民庄辉郭巨涛不详北京大学基础医学院病原生物学系暨北京大学感染病研究中心北京100191 北京大学人民医院肝病研究所北京100044 北京大学基础医学院病原生物学系暨感染病中心北京100191 美国巴鲁克布隆伯格研究所多伊尔斯敦18902

乙型肝炎病毒(HBV)感染仍是我国慢性肝病的主要病因。现有的核苷(酸)类似物和聚乙二醇干扰素均不直接作用于肝细胞核内的HBV共价闭合环状DNA(cccDNA),难以实现HBV的彻底清除和慢性乙型肝炎(CHB)的临床治愈。因此,亟需研发靶向HBV生命周... 详细信息

乙型肝炎病毒(HBV)感染仍是我国慢性肝病的主要病因。现有的核苷(酸)类似物和聚乙二醇干扰素均不直接作用于肝细胞核内的HBV共价闭合环状DNA(cccDNA),难以实现HBV的彻底清除和慢性乙型肝炎(CHB)的临床治愈。因此,亟需研发靶向HBV生命周期各阶段及促进宿主抗HBV免疫的新型抗病毒药物。现汇总了目前处于临床试验不同阶段的抗HBV新药,并提出在临床试验中应根据在研药物的不同作用靶点与机制,确定最适的用于疗效评价和临床试验终点选择的病毒学和免疫学指标,从而有助于新药研发。此外,由于CHB疾病进程复杂,不同的在研药物可能有其最大获益的患者亚群,在临床试验中也应予以考虑。

关键词：慢性乙型肝炎治疗抗病毒药物临床试验血清学标志物

髓样分化蛋白88在炎症感染相关原发性肝癌发生中的作用

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中华肝脏病杂志 2010年第3期18卷 232-234页

作者：李雅娟鲁凤民庄辉北京大学医学部病原生物学系 100191

原发性肝癌是常见的恶性肿瘤之一，其中90％为肝细胞癌（HCC）。近年来，人们对HBV、HCV慢性感染等所致肝脏持续炎症反应中Toll样受体（TLR）髓样分化蛋白88（MyD88）在肝癌发生中作用机制的研究取得了较大进展，增加了对肝癌发生的性... 详细信息

原发性肝癌是常见的恶性肿瘤之一，其中90％为肝细胞癌（HCC）。近年来，人们对HBV、HCV慢性感染等所致肝脏持续炎症反应中Toll样受体（TLR）髓样分化蛋白88（MyD88）在肝癌发生中作用机制的研究取得了较大进展，增加了对肝癌发生的性别差异分子基础的认识。现就HCC这一炎症相关肿瘤的发病机制及与之相关的宿主遗传因素在HCC发生中的作用的最新研究进展作一综述。

关键词：癌,肝细胞前C区性别因素

尽早启动抗病毒治疗降低慢性HBV感染者肝细胞癌发生风险

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临床肝胆病杂志 2023年第1期39卷 31-36页

作者：周召阿卜杜热西提·阿卜来提顾智强常靖刘新鲁凤民北京大学基础医学院病原生物学系暨感染病研究中心北京100191 北京大学人民医院肝病研究所北京100044

慢性HBV感染是病毒性肝炎、肝硬化和肝细胞癌(HCC)的主要致病原因。从慢性HBV感染到HCC发生,多数患者会经过慢性肝炎-肝硬化-HCC等不同阶段。在这一漫长的过程中,HBV不断将自身DNA整合入宿主DNA,起到促癌的效果;而持续的肝脏炎症所致肝... 详细信息

慢性HBV感染是病毒性肝炎、肝硬化和肝细胞癌(HCC)的主要致病原因。从慢性HBV感染到HCC发生,多数患者会经过慢性肝炎-肝硬化-HCC等不同阶段。在这一漫长的过程中,HBV不断将自身DNA整合入宿主DNA,起到促癌的效果;而持续的肝脏炎症所致肝细胞的死亡与代偿性增殖更会带来突变的积累,并最终导致肝细胞的恶性转化。目前临床上广泛应用的抗HBV药物,即核苷(酸)类似物,通过抑制HBV复制来控制感染,可有效减缓疾病进程和终末期肝病发生,但由于目前抗HBV治疗启动较晚,治疗率较低,HBV相关HCC发生率仍呈上升趋势。如何改善现行的抗病毒治疗策略,以进一步降低包括HCC在内的HBV相关终末期肝病的发生风险,已成为临床关注的热点问题之一。因此,本文在回顾和总结既往支持扩大抗病毒治疗的研究和观点的基础上,建议应尽早启动抗病毒治疗,从而抑制病毒复制,减少整合事件发生,并最终降低慢性HBV感染者HCC发生风险。

关键词：乙型肝炎病毒癌,肝细胞核苷(酸)类似物治疗学

2种实时荧光定量聚合酶链式反应法检测HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者血清HBV RNA的一致性分析

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临床肝胆病杂志 2022年第5期38卷 1035-1040页

作者：王扬廖昊邓中平卞丹丹任艳蒋莹莹刘霜陈煜鲁凤民段钟平郑素军首都医科大学附属北京佑安医院疑难肝病与人工肝中心北京100069 北京大学基础医学院病原生物学系暨感染病中心北京100191 北京大学前沿交叉学科研究院北京100871 基因诊断技术湖南省重点实验室长沙410205 首都医科大学电力教学医院感染性疾病科北京100073

目的评价S(Shengxiang)公司、X(Xinbo)公司两种实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)方法定量检测HBV RNA结果的一致性。方法从2007年7月—2008年8月组建的108例慢性乙型肝炎(CHB)前瞻性随访患者队列中,选取HBeAg血清学转换患者2... 详细信息

目的评价S(Shengxiang)公司、X(Xinbo)公司两种实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)方法定量检测HBV RNA结果的一致性。方法从2007年7月—2008年8月组建的108例慢性乙型肝炎(CHB)前瞻性随访患者队列中,选取HBeAg血清学转换患者20例进行1∶1倾向性评分匹配未转换患者20例,采用S公司和X公司两种real-time PCR定量检测方法,回顾性检测基线、12周、24周及48周血清样本HBV RNA。符合正态分布的计量资料组间比较采用配对t检验;不符合正态分布的计量资料组间比较采用Mann-Whitney U检验。计数资料采用χ^(2)检验。通过Pearson相关系数、组内相关系数(ICC)和Bland-Altman法评价检测结果的一致性。结果S试剂检测132份血清样本,X试剂检测154份血清样本,两种试剂对送检样本中HBV RNA检出率均为100%。两种试剂共同检测血清样本131份,在基线、随访12周、24周及48周分别检测34、29、35及33份血清,X试剂检测HBV RNA定量数据分别为(5.75±1.64、5.43±1.73、5.13±1.54、4.76±1.55)log_(10)拷贝/mL,均高于S试剂(4.80±1.48、4.52±1.53、4.10±1.50、3.92±1.43)log_(10)拷贝/mL,差异均有统计学意义(t=8.348、t=5.341、Z=-5.086、Z=-4.762,P值均<0.001)。两种方法相关性分析中,r及ICC值分别为0.915(95%CI:0.836~0.957)与0.771(95%CI:-0.021~0.931)、0.849(95%CI:0.701~0.927)与0.733(95%CI:0.138~0.902)、0.951(95%CI:0.905~0.975)与0.776(95%CI:-0.058~0.942)、0.933(95%CI:0.867~0.967)与0.804(95%CI:-0.014~0.944)(P值均<0.05)。Bland-Altman分析表明,两种方法检测结果中96.18%(126/131)的样本差异位于平均差±1.96标准差之间。结论X试剂的HBV RNA定量结果高于S试剂定量结果,但两种real-time PCR定量检测HBeAg血清学转换和未转换CHB患者HBV RNA结果的一致性良好。

关键词：乙型肝炎,慢性 RNA 聚合酶链反应

核苷(酸)类似物经治慢性乙型肝炎患者加用聚乙二醇干扰素α治疗的临床治愈效果研究

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中华肝脏病杂志 2023年第12期31卷 1297-1305页

作者：梁晗王晨朱鹏飞曾庆磊黄向博潘延凤潘亚杰胡秋月罗霞陈慧余祖江鲁凤民吕君郑州大学第一附属医院感染病科郑州450052 郑州大学第一附属医院检验科郑州450052 北京大学基础医学院病原生物学系暨感染病学中心北京100191

目的探讨核苷(酸)类似物经治慢性乙型肝炎患者加用聚乙二醇干扰素α治疗后乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)清除情况及其预测因素。方法前瞻性纳入2018至2019年在郑州大学第一附属医院就诊、HBsAg≤1500 IU/ml、乙... 详细信息

目的探讨核苷(酸)类似物经治慢性乙型肝炎患者加用聚乙二醇干扰素α治疗后乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)清除情况及其预测因素。方法前瞻性纳入2018至2019年在郑州大学第一附属医院就诊、HBsAg≤1500 IU/ml、乙型肝炎e抗原阴性、HBV DNA不可测且接受核苷(酸)类似物抗病毒治疗至少1年的慢性乙型肝炎患者,给予加用聚乙二醇干扰素α治疗48周,主要研究终点是72周时HBsAg清除的比例,同时分析HBsAg清除的预测因素。用t检验或非参数检验分析定量数据,Fisher精确检验分析定性数据。结果研究共纳入38例患者,其中13例患者在治疗48周时获得了HBsAg清除,另有6例患者在疗程延长至72周治疗期间获得了HBsAg清除,占全部入组患者的50.00%。比较HBsAg清除组和未清除组间的HBsAg动力学整体上差异有统计学意义(P<0.05)。单因素logistic回归分析结果显示,患者年龄及基线、12周、24周时HBsAg水平和治疗早期HBsAg下降幅度是治疗72周时HBsAg清除的预测因素;多因素logistic回归分析结果显示:年龄(OR值=1.311;P=0.016;95%置信区间:1.051~1.635)和治疗24周时HBsAg水平(OR值=4.481,P=0.004;95%置信区间:1.634~12.290)是HBsAg清除的独立预测因素。结论对核苷(酸)类似物经治、HBsAg≤1500 IU/ml、HBV DNA不可测的乙型肝炎e抗原阴性慢性乙型肝炎患者,加用Peg-IFNα治疗48周可促进HBsAg清除;在48周时未获得HBsAg清除的16例患者,将疗程延至72周后,其中6例患者(37.50%)也获得了HBsAg清除,因此需要根据预测指标定制最佳个体化治疗策略,而并非48周固定疗程;年龄(≤38岁)、基线HBsAg水平(≤2.86 log_(10)IU/ml)、24周时HBsAg水平(≤0.92 log_(10)IU/ml)和12周HBsAg自基线下降幅度(≥0.67 log_(10)IU/ml)提示患者很大可能在联合治疗72周时获得HBsAg清除,其中基于24周时HBsAg水平≤0.92 log_(10) IU/ml的联合指标将识别出85%~100%可能获得HBsAg清除的患者。

关键词：慢性乙型肝炎经治核苷(酸)类似物乙型肝炎表面抗原清除聚乙二醇干扰素α

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关注猴痘病毒感染

生物学通报 2022年第10期57卷 12-16页

作者：何启瑜王麟鲁凤民北京大学基础医学院病原生物学系北京100191

近期,全球各地相继出现了猴痘疫情。截至2022年7月31日,猴痘疫情已涉及全球超过78个国家或地区,共报道超过23000例病例,其中包括8例死亡病例。与既往疫情最大不同的是,本次疫情病例蔓延到了欧洲和美国等猴痘的非流行区,出现人际间传播,... 详细信息

近期,全球各地相继出现了猴痘疫情。截至2022年7月31日,猴痘疫情已涉及全球超过78个国家或地区,共报道超过23000例病例,其中包括8例死亡病例。与既往疫情最大不同的是,本次疫情病例蔓延到了欧洲和美国等猴痘的非流行区,出现人际间传播,并且以密切接触传播为主,其中通过男男性行为传播不容忽视,被世界卫生组织(world health organization,WHO)列为“国际关注的突发公共卫生事件”。本文结合2022年猴痘疫情探讨猴痘病毒感染,对猴痘的流行病学、病原学、临床表现、诊断以及防治措施进行综述。

关键词：猴痘猴痘病毒正痘病毒

新时代背景下医学微生物学课程思政的建设与应用探索

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中国继续医学教育 2023年第8期15卷 166-169页

作者：邹清华鲁凤民沈弢北京大学基础医学院病原生物学系北京100191

近年来,高等教育已经步入了课程思政全面建设的新时期,积极有效地落实课程思政已经成为高校教学的重点。医学微生物学是医学各专业学生均需要学习的专业必修课。目前,各种新发传染病不断出现,给社会带来巨大威胁。在同传染病做斗争的过... 详细信息

近年来,高等教育已经步入了课程思政全面建设的新时期,积极有效地落实课程思政已经成为高校教学的重点。医学微生物学是医学各专业学生均需要学习的专业必修课。目前,各种新发传染病不断出现,给社会带来巨大威胁。在同传染病做斗争的过程中,一线医务工作者和科研人员表现出了极大的勇气和担当,为我国各种传染病的有效控制做出了突出贡献,因此在医学微生物学教学过程中进行课程思政具有极强的必要性。但目前对医学微生物学课程思政的探索尚非常有限,为此,本研究对医学微生物学课程思政进行了建设,设计了多种可执行的模式并进行了探索,收到了良好的效果。本研究可以为医学微生物学的课程思政提供参考。

关键词：课程思政医学微生物学教学探索案例库建设

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核酸疫苗研究进展

中华预防医学杂志 1995年第5期29卷 303-304页

作者：鲁凤民庄辉北京医科大学流行病学教研室北京医科大学第三临床医学院临床病毒实验室

核酸疫苗研究进展鲁凤民，庄辉传统用于传染病预防的疫苗有减毒活疫苗和灭活疫苗。减毒活疫苗如未充分减毒，可使接种者发生临床型感染；而过分减毒则不能引发宿主完整的免疫反应。１９９０年，Ｗｏｌｆｆ等在实验中意外地发现，可通过... 详细信息

核酸疫苗研究进展鲁凤民，庄辉传统用于传染病预防的疫苗有减毒活疫苗和灭活疫苗。减毒活疫苗如未充分减毒，可使接种者发生临床型感染；而过分减毒则不能引发宿主完整的免疫反应。１９９０年，Ｗｏｌｆｆ等在实验中意外地发现，可通过直接给动物注射裸ＤＮＡ质粒的方法在...

关键词：核酸疫苗抗原基因庄辉病原体减毒活疫苗免疫应答病原物基因疫苗遗传免疫基因免疫