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1型HIV感染多重PCR检测方法的建立及临床应用

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首都医科大学学报 2010年第6期31卷 687-694页

作者：代丽丽陈德喜石英魏飞力刘志英张洪海吴亚松梁连春吴昊张彤首都医科大学附属北京佑安医院感染中心

目的建立检测人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的多重巢式PCR(nPCR)和多重反转录PCR(RT-PCR)方法。将其与已经上市的NASBA法试剂盒进行检测敏感性比较;探讨血浆RNA水平对PCR检测敏感性的影响;评价该方法用于我国HIV-1感染者诊断的价值。方法针... 详细信息

目的建立检测人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的多重巢式PCR(nPCR)和多重反转录PCR(RT-PCR)方法。将其与已经上市的NASBA法试剂盒进行检测敏感性比较;探讨血浆RNA水平对PCR检测敏感性的影响;评价该方法用于我国HIV-1感染者诊断的价值。方法针对HIV-1的gag、pol和gp41区设计3套引物,建立检测HIV DNA的多重nPCR和检测HIVRNA的多重RT-PCR方法;分别以建立的PCR方法和NASBA法对119例HIV阳性患者进行检测,比较2者的检测敏感性;将患者分为不同的病毒载量组,比较PCR方法在各组患者中的检测敏感性差异;使用建立的PCR方法对10例可疑急性感染者进行检测;扩增HIV-1膜区C2-C3段,对nPCR检测阳性的43例DNA样本进行亚型鉴定。结果多重nPCR的检测敏感度为97.5%(116/119),多重RT-PCR的敏感度为78.2%(93/119),2者的特异度均为100%(50/50),多重nPCR和多重RT-PCR的阳性预测值分别为97.5%(116/119)和78.2%(93/119),阴性预测值均为100%(50/50),准确性分别为98.2%和84.6%。经比较,多重nPCR和多重RT-PCR的检测敏感度都高于NASBA法。在病毒载量<103copy/mL的患者,nPCR的检测敏感性高于RT-PCR,在病毒载量在(103～104)copy/mL的患者及病毒载量≥104copy/mL的患者,2者的敏感性比较相近,均接近100%;检测的10例可疑急性感染者中,有5例患者的nPCR和RT-PCR检测结果阳性,抗体在随访过程中阳转,证实为HIV急性感染者;检测的43例DNA样本分属于B’亚型(37例),AE亚型(5例)和BC亚型(1例)。结论本课题组建立的PCR检测方法可以对我国主要流行的B’、AE和BC亚型病毒株得到很好的扩增效果;nPCR的检测敏感性受血浆RNA水平的影响相对较小,RT-PCR的检测敏感性受血浆RNA水平的影响相对较大;PCR方法可以用于HIV急性感染者的早期诊断。

关键词：人类免疫缺陷病毒核酸检测聚合酶链式反应诊断

HIV-1 B'/C亚型毒株辅助受体的利用

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传染病信息 2010年第6期23卷 337-339,359页

作者：王蕊孙伟焦艳梅计云霞魏飞力吴昊首都医科大学附属北京佑安医院感染科 100069

目的分析疾病进展不同阶段分离的B'/C亚型毒株辅助受体的利用情况。方法从长期不进展者和AIDS期患者体内分离病毒株,将获得的B'/C毒株进行体外培养,用病毒株感染U87.CD4、GHOST细胞系并进行培养,通过检测、比较培养基上清液中核衣壳蛋白... 详细信息

目的分析疾病进展不同阶段分离的B'/C亚型毒株辅助受体的利用情况。方法从长期不进展者和AIDS期患者体内分离病毒株,将获得的B'/C毒株进行体外培养,用病毒株感染U87.CD4、GHOST细胞系并进行培养,通过检测、比较培养基上清液中核衣壳蛋白p24量的差异来确定某一毒株利用的辅助受体。再利用辅助受体抑制剂TAK-799、AMD-3100验证从细胞系实验中得到的结论。结果从AIDS期患者体内分离的毒株大部分利用C-C家族趋化因子受体(C-C chemokine receptor,CCR)5辅助受体,部分利用C-X-C家族趋化因子受体(C-X-C chemokine receptor,CXCR)4和CCR5辅助受体。从长期不进展者体内分离的毒株利用CCR5辅助受体。结论从长期不进展者体内分离的病毒主要利用CCR5辅助受体。从AIDS期患者体内分离的病毒主要利用CCR5辅助受体,也有同时利用CCR5和CXCR4辅助受体的现象。

关键词： HIV-1 细胞嗜性

甲型H1N1流感超敏感诊断方法的建立及优化

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科学技术与工程 2010年第24期10卷 5856-5859页

作者：计云霞刘宁石英魏飞力魏征陈德喜首都医科大学北京100019 首都医科大学附属北京佑安医院性病艾滋病实验室北京100069

利用几种助沉剂和核酸纯化方法富集病毒RNA,建立甲型H1N1流感超敏感诊断方法。收集31份甲型H1N1流感确诊病人提取的病毒RNA,稀释至1000分之一倍后分别应用酵母tRNA、糖原、AcrylCarrier助沉剂和磁珠、硅胶颗粒和离心柱的9种组合进行病毒... 详细信息

利用几种助沉剂和核酸纯化方法富集病毒RNA,建立甲型H1N1流感超敏感诊断方法。收集31份甲型H1N1流感确诊病人提取的病毒RNA,稀释至1000分之一倍后分别应用酵母tRNA、糖原、AcrylCarrier助沉剂和磁珠、硅胶颗粒和离心柱的9种组合进行病毒RNA的富集,富集后分别进行RealtimePCR检测。并对检测结果进行统计学分析。利用几种助沉剂和核酸纯化方法的组合时,发现磁珠+AcrylCarrier助沉剂方法是最佳的核酸富集方法,能够大大提高病毒核酸的检出效率。建立了甲型H1N1流感超敏感诊断方法,该方法能够大大提高甲型H1N1流感的检出率。

关键词：甲型H1N1流感核酸富集超敏感诊断方法

HBsAg+/HBsAb+慢性乙型肝炎患者S区基因突变分析

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中国医药导报 2019年第5期16卷 118-121页

作者：孙玉张洪海陈德喜魏飞力郭向华石英首都医科大学附属北京佑安医院肿瘤微创介入中心北京100069 北京市肝病研究所北京100069

目的研究乙肝表面抗原(HBsAg)+/乙肝表面抗体(HBsAb)+慢性乙型肝炎(CHB)患者S区基因突变情况。方法选取2012年6月～2017年10月首都医科大学附属北京佑安医院(以下简称"我院")HBsAg和HBsAb双阳性的CHB患者32例为研究对象(HBsAg+/HBsAb+... 详细信息

目的研究乙肝表面抗原(HBsAg)+/乙肝表面抗体(HBsAb)+慢性乙型肝炎(CHB)患者S区基因突变情况。方法选取2012年6月～2017年10月首都医科大学附属北京佑安医院(以下简称"我院")HBsAg和HBsAb双阳性的CHB患者32例为研究对象(HBsAg+/HBsAb+组),随机选取在同一时期我院诊断为HBsAg+和HBsAb-的CHB患者79例作为对照(HBsAg+/HBsAb-组)。分离其血浆病毒DNA,PCR扩增S区基因,测序分析其突变情况。结果 HBsAg+/HBsAb+组患者全部存在S区突变(100%),其频率显著高于HBsAg+/HBsAb-组(84.81%)(P <0.05),而且突变多集中在S区亚单位1和3区域;HBsAg+/HBsAb+组S区多重位点突变的比例显著高于HBsAg+/HBsAb-组(P <0.01)。结论 S区基因突变频率的增加以及多重突变的存在与CHB患者S抗原抗体的变化密切相关,而这一突变的累积预示着不良的疾病进程。

关键词：慢性乙型肝炎乙肝表面抗原乙肝表面抗体 S基因突变

小型集合HIV RT-PCR方法的建立及其在MSM人群窗口期检测中的应用

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小型集合HIV RT-PCR方法的建立及其在MSM人群窗口期检测中的应用

北京市部分男男同性恋人群中HIV-1分子流行病学研究

中华医学会第四次全国艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全国热带病学术会议

作者：刘志英陈德喜焦艳梅魏飞力徐萌张彤黄晓婕徐小宁吴昊首都医科大学附属北京佑安医院

目的建立的小型集合艾滋病病毒(HIV)RNA逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),并将其应用于男男同性恋及其他高危人群窗口期的检测。方法将10份待测标本混合组成一个集合,高速离心富集病毒,提取病毒RNA;设计针对覆盖我国主要HIV流行株的4对特异...

目的建立的小型集合艾滋病病毒(HIV)RNA逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),并将其应用于男男同性恋及其他高危人群窗口期的检测。方法将10份待测标本混合组成一个集合,高速离心富集病毒,提取病毒RNA;设计针对覆盖我国主要HIV流行株的4对特异性引物,采用单管多引物一步

关键词：

来源： cnki会议评论

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首都医科大学学报 2009年第5期30卷 616-620页

作者：刘志英李海英张彤黄晓婕魏飞力徐萌焦艳梅徐小宁陈德喜吴昊首都医科大学附属北京佑安医院性病艾滋病实验室首都医科大学附属北京佑安医院感染科

目的了解北京市部分男男同性恋(men who have sex with men,MSM)人群HIV-1的分子流行情况,监测该地区人群HIV毒株的最新流行情况。方法提取17例男男同性恋者HIV-1抗体阳性样本全血基因组DNA,直接进行巢式PCR扩增HIVenv基因C2-V5区及gag... 详细信息

目的了解北京市部分男男同性恋(men who have sex with men,MSM)人群HIV-1的分子流行情况,监测该地区人群HIV毒株的最新流行情况。方法提取17例男男同性恋者HIV-1抗体阳性样本全血基因组DNA,直接进行巢式PCR扩增HIVenv基因C2-V5区及gag基因P17-P24区,对PCR产物进行核苷酸序列测定和分析,确定基因亚型。结果17例患者中,共存在CRF01-AE、B亚型和CRF07-BC3种亚型,其中CRF01-AE9例(52.94%),B亚型5例(29.41%),CRF07-BC3例(17.65%)。结论小样本量的流行病学调查显示,北京地区部分男男同性恋人群中主要存在CRF01-AE、B和CRF07-BC3种亚型;CRF01-AE已取代B亚型而成为北京市MSM人群中HIV主要流行亚型,CRF07-BC重组亚型在北京市MSM人群中增长迅速。

关键词：男男同性恋人类免疫缺陷病毒1型亚型系统进化树分析

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HIV-1假病毒包装方法的探讨

中华实验和临床感染病杂志（电子版） 2014年第1期8卷 10-13页

作者：徐树莹乔录新史宣玲徐萌魏飞力袁霖石英陈德喜首都医科大学附属北京佑安医院感染科北京100069 首都医科大学附属北京佑安医院北京市肝病研究所清华大学医学部艾滋病综合研究中心

目的通过不同方案包装HIV-1假病毒,确定获得高重复性、高稳定性和高滴度假病毒的方法。方法从转染效率影响因素出发,通过不同的转染方案,利用pNL4-3 LucR-E-质粒与VSV-G质粒共转染293细胞包装病毒,分别于48 h和72 h收取假病毒并重新感染... 详细信息

目的通过不同方案包装HIV-1假病毒,确定获得高重复性、高稳定性和高滴度假病毒的方法。方法从转染效率影响因素出发,通过不同的转染方案,利用pNL4-3 LucR-E-质粒与VSV-G质粒共转染293细胞包装病毒,分别于48 h和72 h收取假病毒并重新感染293细胞,48 h后测荧光素酶报告基因。结果成功包装出HIV-1假病毒,不同包装方案的病毒滴度不同,测得报告基因最高接近107 RLUs。结论应用PEI转染试剂、大提质粒pNL4-3︰VSV-G为4︰1时,转染效率最高,包装的假病毒滴度最高。

关键词：人类免疫缺陷病毒Ⅰ型假病毒包装方法 Human immunodeifciency virus typeⅠ

多引物小型集合HIV核酸检测技术的建立及在男男性接触者急性感染检测中应用

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中华检验医学杂志 2010年第9期33卷 862-866页

作者：吴亚松刘志英焦艳梅魏飞力徐萌张彤黄晓婕张福杰陈德喜徐小宁吴昊中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心 102206 首都医科大学附属北京佑安医院性病艾滋病诊疗中心

目的建立结合多重反转录巢式PCR技术检测HIV RNA的小型集合NAT,用于MSM人群急性感染的筛查诊断.方法利用2008年10月至2009年3月期间从3名HIV窗口期感染者、30名HIV慢性感染者、97名健康人采集冻存的EDTA抗凝血浆建立小型集合NAT.将10... 详细信息

目的建立结合多重反转录巢式PCR技术检测HIV RNA的小型集合NAT,用于MSM人群急性感染的筛查诊断.方法利用2008年10月至2009年3月期间从3名HIV窗口期感染者、30名HIV慢性感染者、97名健康人采集冻存的EDTA抗凝血浆建立小型集合NAT.将10份待测标本混合组成1个集合,离心富集病毒,提取RNA 针对HXB2的nt5783-nt6228和nt1235-nt2012区分别设计2对引物采用多重RT-PCR、巢式PCR扩增2个目标区的核酸片段,对结果阳性的集合中标本进一步分别检测.确定小型集合NAT的灵敏度,并进行验证.应用建立的方法对1 005份与上述标本同一时期收集的MSM人群的HIV抗体阴性血浆进行检测.结果（1）成功扩增出目标区的2条特异性片段,灵敏度为162拷贝/ml （2）对3份HIV窗口期感染者标本用小型集合NAT方法盲法验证的结果和预期一致（3）用多重RT-PCR和巢式PCR对30份HIV抗体阳性标本检测,阳性率100%（30/30）（4）发现1 005份血浆标本中有1份为HIV RNA阳性,追踪随访发现HIV-1抗体转阳.结论本研究中建立多引物小型集合RT-PCR、巢式PCR结合的小型集合NAT的敏感性好,可用于MSM人群HIVG感染窗口期筛查检测.

关键词： HIV感染同性恋,男性 HIV-1 核酸扩增技术

不同核苷(酸)类似物抗病毒治疗方案治疗失代偿期乙肝肝硬化的临床研究

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北京医学 2014年第12期36卷 1017-1021页

作者：李磊刘伟陈玉涵李鹏魏飞力范春蕾董培玲李冰陈德喜丁惠国首都医科大学附属北京佑安医院肝病消化中心乙型肝炎与肝癌转化医学研究北京市重点实验室 100069 首都医科大学附属北京佑安医院肝病研究所

目的探讨核苷(酸)类似物初始联合治疗失代偿期乙型肝炎肝硬化的疗效及安全性。方法回顾性分析2008年1月至2011年10月收治的116例乙型肝炎肝硬化患者的临床资料。按不同抗病毒方案分为恩替卡韦(ETV)组(n=38),拉米夫定(LAM)+阿德福韦酯(A... 详细信息

目的探讨核苷(酸)类似物初始联合治疗失代偿期乙型肝炎肝硬化的疗效及安全性。方法回顾性分析2008年1月至2011年10月收治的116例乙型肝炎肝硬化患者的临床资料。按不同抗病毒方案分为恩替卡韦(ETV)组(n=38),拉米夫定(LAM)+阿德福韦酯(ADV)组(n=23),替比夫定(LDT)+ADV组(n=16),未抗病毒治疗者作为对照组(n=39)。患者每3个月随访并收集其临床数据,分析各组Child-Pugh评分、病毒学指标、肝癌发生率、生存率及安全性。结果各抗病毒治疗组在1年、2年时Child-Pugh评分较基线均显著下降(P<0.05);LDT+ADV组在2年时e抗原(HBe Ag)阴转率(72.7%)高于ETV组(30.4%,P<0.05);ETV组(0.0%)、LAM+ADV组(8.7%)、LDT+ADV组(0.0%)的2年累积肝衰竭发生率均明显低于对照组(28.2%);各抗病毒治疗组、对照组的2年累积耐药率、肝癌发生率、生存率的差异无统计学意义;各抗病毒治疗组在2年随访中均未出现严重肌病和肾功能损害。结论 LAM+ADV及LDT+ADV可改善失代偿期乙型肝炎肝硬化患者肝功能,LAM+ADV及LDT+ADV的2年疗效和安全性与ETV相似。

关键词：慢性乙型肝炎失代偿期肝硬化核苷(酸)类似物肝癌耐药