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FOXO1基因调控牛前体脂肪细胞增殖和分化的功能研究

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中国农业大学学报 2024年第4期29卷 226-238页

作者：宋雅萍张久盘魏大为杨东梅赵毅昂姜超宋小雨吴昊宁夏大学动物科技学院/宁夏反刍动物分子细胞育种重点实验室银川750021 宁夏农林科学院动物科学研究所银川750021

为探究干扰叉头转录因子O1(Forkhead box protein O1, FOXO1)对牛前体脂肪细胞增殖和分化的作用,本研究以固原黄牛的前体脂肪细胞为研究对象,采用组织块法分离牛前体脂肪细胞,并利用表型鉴定和标志基因表达谱2种方法鉴定所分离细胞的纯... 详细信息

为探究干扰叉头转录因子O1(Forkhead box protein O1, FOXO1)对牛前体脂肪细胞增殖和分化的作用,本研究以固原黄牛的前体脂肪细胞为研究对象,采用组织块法分离牛前体脂肪细胞,并利用表型鉴定和标志基因表达谱2种方法鉴定所分离细胞的纯度和分化潜能。筛选并包装牛FOXO1干扰慢病毒,利用EdU染色、流式细胞术、油红O染色和qPCR方法探究干扰FOXO1对牛脂肪细胞增殖和分化的作用。结果表明:1)成功分离了牛前体脂肪细胞,且其具有较高的纯度和分化潜能。2)EdU染色结果表示,侵染Lv-FOXO1极显著增加了牛脂肪细胞的增殖率(P<0.01)。3)流式周期结果显示,干扰FOXO1显著增加了牛脂肪细胞S期阳性细胞的比例,促进了G1/S期的转化,进而促进了牛脂肪细胞增殖。4)干扰FOXO1后,增殖标志基因PCNA、CDK1和CDK2的表达量均极显著上调(P<0.01)。5)干扰FOXO1后牛前体脂肪细胞脂滴生成明显减少,且成脂标志基因PPARG的表达极显著下调(P<0.01),CEBPB和LPL的表达显著下调(P<0.05)。综上,干扰FOXO1可通过上调增殖标志基因PCNA、CDK1和CDK2的表达促进牛脂肪细胞G1/S期的转化,进而促进牛脂肪细胞增殖,且其可通过降低成脂标志基因PPARG、CEBPB和LPL的表达减少牛脂肪细胞脂滴形成,进而影响脂肪沉积。本研究可为中国地方黄牛的肉质遗传改良提供理论依据。

关键词： FOXO1 固原黄牛前体脂肪细胞增殖分化

食管胃结合部癌术后肺部感染多因素logistic回归分析

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中文科技期刊数据库（引文版）医药卫生 2024年第4期 64-68页

作者：王小林魏大为郭宇建张文平时加伦长治医学院附属和平医院胸外科山西长治046000

分析食管胃结合部癌术后肺部感染的因素。方法:在选取2019年1月至2021年12月的三年间内,共有227名接受食管胃结合部癌根治手术的患者参与了研究。根据手术后是否发生肺部感染,将这些患者分成两组,其中感染组包括68人,非感染组包括159人... 详细信息

分析食管胃结合部癌术后肺部感染的因素。方法:在选取2019年1月至2021年12月的三年间内,共有227名接受食管胃结合部癌根治手术的患者参与了研究。根据手术后是否发生肺部感染,将这些患者分成两组,其中感染组包括68人,非感染组包括159人。我们比较了这两组患者的一般信息,并分析了与术后肺部感染相关的因素。结果:在这227例接受食管胃结合部癌根治手术的患者中,有68例发生了术后感染,感染率为29.96%。单因素分析显示,感染组和非感染组在年龄、吸烟史、手术时间、手术方式等方面存在统计学上的显著差异(p0.05)。这一结果提示,术后肺部感染与年龄、吸烟史、手术时间和手术方式等因素相关。多因素logistic回归分析结果显示,年龄≥60岁、吸烟史、手术时间≥3H、剖胸食管胃结合部癌根治术是食管胃结合部癌患者术后发生肺部感染的独立危险因素(P<0.05)。结论食管胃结合部癌根治术后肺部感染的影响因素主要包括:年龄≥60岁,吸烟史,手术时间≥3小时,术式(剖胸食管胃结合部癌根治术)。

关键词：食管胃结合部癌肺部感染食管胃结合部癌术后剖胸食管胃结合部癌根治术

染色质开放状态对食管癌相关通路影响及关键基因分析

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长治医学院学报 2024年第2期38卷 81-86页

作者：申展铭李向东魏大为张文平长治医学院山西长治046000 长治医学院附属和平医院胸外科

目的:探讨染色质开放状态对食管癌相关通路的影响及对关键基因进行分析。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载食管癌染色质开放性高通量测序(ATAC-seq)数据,使用R4.2.1对2组数据分别进行基因注释,并进行KEGG通路富集分析与GO功能富... 详细信息

目的:探讨染色质开放状态对食管癌相关通路的影响及对关键基因进行分析。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载食管癌染色质开放性高通量测序(ATAC-seq)数据,使用R4.2.1对2组数据分别进行基因注释,并进行KEGG通路富集分析与GO功能富集分析;对食管癌RNA-seq数据进行差异分析,筛选出与染色质开放状态相关性较高的2个基因ARL5B和RUNX1,并绘制KM生存曲线;对ARL5B、RUNX1进行单因素与多因素COX分析。结果:食管癌中ATAC-seq数据的峰值距离转录起始位点≤1 kb、1~2 kb、2~3 kb所占百分比分别为32.59%、6%、4.41%,位于远端基因间区的峰值占27.15%,这种现象和染色质开放区域的分布相一致。染色质开放区峰值绝大多数存在于转录起始位点附近,符合染色质开放性的特点。KEGG和GO功能分析结果显示,注释基因在Rap1信号通路、Hippo信号通路、ErbB信号通路、mTOR信号通路等明显富集。ARL5B高表达的食管癌患者预后较差(P<0.05),RUNX1高表达的食管癌患者预后较好(P<0.05)。结论:染色质开放状态在调节食管癌的发生和发展方面发挥重要作用,ARL5B、RUNX1基因可能成为食管癌的治疗靶点和预后指标。

关键词：食管癌 TCGA数据库 ATAC-seq 染色体可及性

维生素A对哺乳期滩羔羊生长性能、抗氧化能力、血清脂质代谢指标及肌内脂肪沉积相关基因表达的影响

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动物营养学报 2022年第8期34卷 5234-5243页

作者：李海海张腱皓魏大为寇启芳张桂杰宁夏大学农学院动物科学系银川750021 红寺堡区天源良种羊繁育养殖有限公司吴忠751900

本试验旨在探究肌内脂肪生成关键窗口期补饲维生素A对哺乳期滩羔羊生长性能、抗氧化能力、血清脂质代谢指标及肌内脂肪沉积相关基因表达的影响。选用健康、胎次和体重[(46.83±1.30)kg]相近的经产滩羊母羊60只,进行同期发情和人工授精... 详细信息

本试验旨在探究肌内脂肪生成关键窗口期补饲维生素A对哺乳期滩羔羊生长性能、抗氧化能力、血清脂质代谢指标及肌内脂肪沉积相关基因表达的影响。选用健康、胎次和体重[(46.83±1.30)kg]相近的经产滩羊母羊60只,进行同期发情和人工授精处理。分娩后选择出生日期、体重[(4.38±0.23)kg]相近的健康滩羔羊45只,随机分为3个组,每组3个重复(圈),每个重复5只羔羊。在正常哺乳的基础上,3组羔羊在1日龄和1月龄分别灌服0(CON组)、30000(LVA组)和60000 IU/只(HVA组)维生素A。试验期70 d。结果表明,与CON组相比:1)LVA组和HVA组羔羊断奶重显著提高(P<0.05);2)LVA组和HVA组血清视黄酸含量显著提高(P<0.05),HVA组血清视黄醇含量显著降低(P<0.05);3)LVA组背最长肌锌指蛋白423(ZFP423)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)mRNA相对表达量显著提高(P<0.05),HVA组背最长肌ZFP423 mRNA相对表达量显著提高(P<0.05);4)LVA组和HVA组血清总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白含量显著提高(P<0.05);5)LVA组和HVA组血清总抗氧化能力和超氧化物歧化酶活性显著提高(P<0.05)、血清丙二醛含量显著降低(P<0.05),LVA组血清谷胱甘肽过氧化物酶活性显著提高(P<0.05)。综上所述,维生素A能够提高哺乳期滩羔羊生长性能及抗氧化能力,提高背最长肌脂肪沉积相关基因表达,并对血清脂质代谢指标有一定的影响,建议添加量为30000 IU。

关键词：维生素A 哺乳期滩羔羊脂肪沉积关键窗口期血清脂质代谢

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牛LATS2基因启动子克隆及转录调控分析

江苏农业学报 2023年第3期39卷 753-761页

作者：张久盘宋雅萍姜超王锦魏大为宁夏农林科学院动物科学研究所宁夏银川750002 宁夏大学农学院宁夏银川750021

本研究旨在探究牛LATS2基因组织表达规律,利用相对荧光素酶活性数值确定其启动子核心区域并初步鉴定其核心区域关键转录因子,以阐明牛LATS2基因的转录调控机制。利用RT-qPCR检测牛LATS2基因在心、脾、肝、肾、肺、背最长肌、皮下脂肪、... 详细信息

本研究旨在探究牛LATS2基因组织表达规律,利用相对荧光素酶活性数值确定其启动子核心区域并初步鉴定其核心区域关键转录因子,以阐明牛LATS2基因的转录调控机制。利用RT-qPCR检测牛LATS2基因在心、脾、肝、肾、肺、背最长肌、皮下脂肪、皱胃、大肠及睾丸等中的相对表达量,构建LATS2蛋白进化树。克隆LATS2基因5′端非翻译区上游1.7 kb序列,利用逐段缺失引物,巢式扩增其7个启动子区不同截断体缺失片段(-1792~+179、-1475~+179、-1098~+179、-727~+179、-515~+179、-248~+179和-56~+179),并将不同截断体构建至双荧光素酶报告载体pGL3-Basic上。重组的LATS2基因启动子双荧光素载体分别转染小鼠成肌细胞(C2C12)和小鼠脂肪细胞(3T3-L1)细胞系,鉴定其启动子核心区域。进一步借助在线软件JASPAR(http://***/)和Genomatix(http://www.***.de/cgi-bin//mat-inspector)分析启动子核心区域序列特征,并预测关键转录因子结合位点。结果显示,LATS2基因在肝和背最长肌中表达量极显著高于脾(P<0.01);LATS2蛋白构建的进化树显示反刍动物单独聚为1支,表明LATS2基因在反刍动物进化过程中保守性较高;蛋白质互作分析筛选出的与LATS2蛋白互作紧密的前10种蛋白质均为Hippo信号通路中的关键蛋白质。LATS2基因启动子核心区域位于-248~-56,预测其启动子核心区域有与肌肉发育相关的转录因子TEAD1、MEF2A、FOSL1、MyoG和Myod1的结合位点,表明LATS2基因在牛肌肉生长发育中扮演重要角色。以上结果为探究牛LATS2基因在肌肉生长发育中转录调控机制奠定基础。

关键词：牛 LATS2基因组织表达启动子转录调控

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临床监测——数值是身体时间是生命

中华危重病急救医学 2024年第1期36卷 1-5页

作者：刘大为中国医学科学院、北京协和医学院、北京协和医院重症医学科北京100730

监测是目前重症治疗中常见的临床行为,具有与诊断明显不同的特点和临床应用方式。监测指标通常针对性地指向某个具体的生理位点,用定量的数值表示这个位点的即时情况;连续对这个位点进行测量,指标数值的改变可以反映出生理变化或病情发... 详细信息

监测是目前重症治疗中常见的临床行为,具有与诊断明显不同的特点和临床应用方式。监测指标通常针对性地指向某个具体的生理位点,用定量的数值表示这个位点的即时情况;连续对这个位点进行测量,指标数值的改变可以反映出生理变化或病情发展。如果临床采用针对性作用于这个位点的干预方法进行治疗,那么,监测指标的数值就代表了干预的强度,数值的变化则代表了干预作用的方向,从而构成对干预方法实施的反馈性调节。只有保证干预方法的精准实施,才有可能发挥出最佳的治疗效应。但是,监测本身不是治疗,只有医务人员理解监测指标的特点,掌握临床监测的应用,监测才有临床应用的价值,才具有生命的意义。

关键词：临床监测准确性时间性干预性

单细胞转录组测序技术及其在肌内脂肪细胞研究中的应用

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中国畜牧兽医 2023年第2期50卷 479-489页

作者：张久盘马青王锦马丽娜魏大为梁小军宁夏农林科学院动物科学研究所银川750002 宁夏大学农学院银川750021

单细胞转录组测序(single-cell RNA sequencing,scRNA-seq)技术在单细胞水平对转录组进行测序,可从表达量、细胞量及细胞组成等多种角度描述样本,主要包括单细胞分离、mRNA反转录、文库构建、转录组测序和数据分析等步骤。单细胞分离是s... 详细信息

单细胞转录组测序(single-cell RNA sequencing,scRNA-seq)技术在单细胞水平对转录组进行测序,可从表达量、细胞量及细胞组成等多种角度描述样本,主要包括单细胞分离、mRNA反转录、文库构建、转录组测序和数据分析等步骤。单细胞分离是scRNA-seq技术操作的第一步,常用的细胞分离方法有连续稀释法、显微操作法、荧光激活流式细胞术、激光捕获显微切割术和微流控技术。基于不同细胞捕获、cDNA扩增和文库构建开发了许多scRNA-seq方法,如CEL-seq2、Drop-seq、MARS-seq、SCRB-seq、Smart-seq、Smart-seq2等。与传统测序方法相比,scRNA-seq可识别单个细胞的基因表达信息、记录细胞的空间位置、跟踪不同细胞谱系在分化过程中的轨迹,这为研究难以大量提取的肌内脂肪细胞分子特异性和发生分化过程带来极大便利。作者简要介绍了scRNA-seq技术的关键步骤,比较分析了单细胞分离和转录组测序方法的优缺点,综述了肌内脂肪细胞的起源以及scRNA-seq在肌内脂肪细胞的亚群和标记基因鉴定以及细胞分化轨迹追踪中的应用,以期为肌内脂肪细胞的深入研究提供参考依据。

关键词：单细胞转录组测序肌内脂肪细胞细胞异质性

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第二语言ERP研究的新进展

解放军外国语学院学报 2012年第5期35卷 48-52,128页

作者：魏大为武和平兰州交通大学外国语学院甘肃兰州730070 西北师范大学国际文化交流学院甘肃兰州730070

本文对近年来ERP技术在二语的语义、句法、语音和双语转换等方面的研究进展做了梳理后,得出如下结论:习得年龄、二语水平和语言结构相似度等是影响二语实时加工的3大因素;儿童二语语音的习得受到学习方式和语言水平等因素的制约;语言转... 详细信息

本文对近年来ERP技术在二语的语义、句法、语音和双语转换等方面的研究进展做了梳理后,得出如下结论:习得年龄、二语水平和语言结构相似度等是影响二语实时加工的3大因素;儿童二语语音的习得受到学习方式和语言水平等因素的制约;语言转换存在非对称效应,句子语境中的转换代价发生在决策阶段而非语义整合阶段。最后,指出了二语ERP研究存在的不足以及今后发展的新路径。

关键词：事件相关电位技术语义句法语音双语转换

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奶牛乳腺上皮细胞增殖与凋亡的分子调控机制

农业生物技术学报 2022年第2期30卷 356-369页

作者：任倩倩罗仍卓么王兴平杨箭魏大为马云宁夏大学农学院宁夏回族自治区反刍动物分子细胞育种重点实验室

奶牛(Bos taurus)乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells, b MECs)是乳腺组织的主要细胞类型,除了发挥着泌乳功能外,还参与调节乳腺固有免疫应答。b MECs的增殖和凋亡受到酶、激素和细胞因子等多种分子的调节,是乳腺组织在特定... 详细信息

奶牛(Bos taurus)乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells, b MECs)是乳腺组织的主要细胞类型,除了发挥着泌乳功能外,还参与调节乳腺固有免疫应答。b MECs的增殖和凋亡受到酶、激素和细胞因子等多种分子的调节,是乳腺组织在特定生理环境下的细胞代谢过程,影响着乳腺的发育与功能。为探讨奶牛乳腺的机能,近年来学者们就bMECs的增殖与凋亡进行了大量研究,并取得了较好的成果。本文主要介绍了与细胞增殖凋亡相关的信号通路,并重点综述了编码基因和非编码基因(miRNA,lncRNA和circRNA)调控bMECs增殖与凋亡的最新研究进展,为高产和抗乳腺炎奶牛分子育种的深入研究提供参考。

关键词：奶牛奶牛乳腺上皮细胞(bMECs) 细胞增殖与凋亡信号通路乳腺炎