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一种新型流感病毒亚单位疫苗的表达、纯化及其初步免疫学效应的研究

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一种新型流感病毒亚单位疫苗的表达、纯化及其初步免疫学效应的研...

作者：魏义举中国协和医科大学

学位级别：硕士

流感是一种流感病毒引起的严重性呼吸道疾病。流感病毒(Influenza virus，Ⅳ)具有高度传染性，能在短期内突然发生，迅速蔓延，造成不同程度的流行，甚至世界大流行，导致全球人力资源和物力资源的重大损失。流感病毒的主要表面抗原之... 详细信息

流感是一种流感病毒引起的严重性呼吸道疾病。流感病毒(Influenza virus，Ⅳ)具有高度传染性，能在短期内突然发生，迅速蔓延，造成不同程度的流行，甚至世界大流行，导致全球人力资源和物力资源的重大损失。流感病毒的主要表面抗原之一—血凝素(HA)，具有高度变异性，致使流感病毒疫苗一般每年都要更换，给疫苗的制备和生产造成了诸多不便。而流感病毒的跨膜蛋白—基质蛋白2(M2蛋白)，含有高度保守的抗原表位，是病毒亚型间交叉保护性疫苗的候选抗原。流感病毒变异速度非常快，尤其是当前禽流感病毒逐渐蔓延到人群中，对人类危害越来越大，因此研制出一种新颖的具有广泛保护作用的疫苗对于控制流感病毒流行具有极其重要的意义。本研究选择了A型流感病毒的缺失跨膜区M2以及H1N1和H3N2亚型流感病毒HA的7个保守的B细胞表位和T细胞表位。采用大肠杆菌偏爱的密码子对M2外膜区基因和HA多表位基因进行了优化设计。通过合成引物，利用重叠延伸PCR(OE-PCR)和搭桥式PCR方法分别扩增得到A型流感病毒M2蛋白缺失跨膜区基因和HA多表位基因，依次克隆到表达载体中，构建重组质粒pET28a+-M2d-HA，经测序表明，插入表达载体中的外源基因的序列与理论设计的基因序列完全一致。将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，筛选获得了高效表达重组融合蛋白的工程菌，表达重组蛋白约占菌体总蛋白总量的45％左右。表达产物以包涵体形式存在，经包涵体处理，亲和层析纯化后，重组蛋白稀释复性，再经阴离子交换层析纯化得到纯度在90％以上的目的蛋白。Western blot结果显示纯化的重组蛋白具有较好的抗原性和特异性。重组蛋白免疫小鼠后，利用ELISA实验检测重组蛋白在小鼠体内获得了很高的抗体免疫水平;利用免疫荧光实验观察，重组蛋白抗血清对MDCK细胞上的流感病毒能够产生很好的抗原性。本研究成功构建了流感病毒M2d-HA抗原多表位重组蛋白表达载体，在大肠杆菌中获得了高效表达;通过基因工程获取较高纯度的M2d-HA重组蛋白，同时对蛋白表达、纯化复性等实验条件进行了初步的探索;在昆明小鼠体内，对该重组蛋白的免疫学效应作了初步的研究，为进一步研究广谱型流感病毒亚单位疫苗提供了很好的理论依据和实验资料，也为流感病毒亚单位疫苗的开发及基础研究奠定了一定的实验基础。

关键词：缺失跨膜区基质蛋白2(M2d) 血凝素(HA)多表位重组蛋白原核表达与纯化昆明小鼠 ELISA实验免疫荧光

一种新型广谱流感病毒亚单位疫苗的表达与纯化

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中国生物工程杂志 2007年第5期27卷 90-95页

作者：魏义举龙海亭杨旭李建芳毕研伟李健峰徐维明中国协和医科大学/中国医学科学院医学生物研究所昆明650118

通过引物设计,利用重叠延伸PCR(OE-PCR)和搭桥PCR方法扩增得到A型流感病毒M2蛋白缺失跨膜区基因以及HA多表位基因,分别克隆测序后以pET28a+为表达载体构建重组质粒pET28a+-M2d-HA。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选获得了高效表达... 详细信息

通过引物设计,利用重叠延伸PCR(OE-PCR)和搭桥PCR方法扩增得到A型流感病毒M2蛋白缺失跨膜区基因以及HA多表位基因,分别克隆测序后以pET28a+为表达载体构建重组质粒pET28a+-M2d-HA。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选获得了高效表达流感病毒缺失跨膜区M2蛋白和HA多表位蛋白片段重组融合蛋白的工程菌,表达的重组蛋白约占菌体总蛋白的45%左右。表达的蛋白以包涵体形式存在,包涵体经亲和层析和阴离子交换层析纯化后复性,得到纯度在90%以上的目的蛋白。Westernblot结果显示纯化的重组蛋白具有较好的抗原性和特异性。为进一步研究广谱型流感病毒亚单位疫苗奠定了基础。

关键词：流感病毒亚单位疫苗多表位表达纯化抗原性

腺病毒介导人FL与GM-CSF联合抗肿瘤免疫基因治疗实验研究

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中国免疫学杂志 2006年第7期22卷 623-628页

作者：张艳丽魏义举王亚栋邓艳春苏林刘长征杨克恭陈松森中国医学科学院医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院北京100005

目的:研究腺病毒介导人F lt3 ligand(hFL)与GM-CSF在体内外的表达、体外生物学活性,体内扩增小鼠脾脏DCs及抑制小鼠EL-4淋巴瘤的效应。方法:应用AdEasy系统,将hFL和hGM-CSF DNA重组到穿梭质粒的两个独立转录单位上,得到重组腺病毒Ad-hFL... 详细信息

目的:研究腺病毒介导人F lt3 ligand(hFL)与GM-CSF在体内外的表达、体外生物学活性,体内扩增小鼠脾脏DCs及抑制小鼠EL-4淋巴瘤的效应。方法:应用AdEasy系统,将hFL和hGM-CSF DNA重组到穿梭质粒的两个独立转录单位上,得到重组腺病毒Ad-hFL-hGM-CSF。采用ELISA、W estern b lot法测定重组腺病毒介导的hFL和hGM-CSF在体内外的表达情况。MTT法测定hFL和hGM-CSF刺激细胞增殖的生物学活性。利用流式细胞分析技术研究重组腺病毒对小鼠脾脏树突状细胞(DCs)的扩增情况。在移植EL-4淋巴瘤的小鼠皮下注射4次重组腺病毒(每次5×109pfu),研究其抑制肿瘤生长的功能。结果:构建得到含有双基因的重组腺病毒Ad-hFL-hGM-CSF,并在体内、外高效共表达hFL和hGM-CSF。hFL对小鼠骨髓有核细胞,hGM-CSF对TF1细胞,均有明显的刺激增殖作用。Ad-hFL-hGM-CSF显著扩增小鼠脾脏DCs至正常值的50倍。抑瘤实验中,Ad-hFL-hGM-CSF使小鼠EL-4淋巴瘤生长延慢,瘤体比对照组明显减小,抑瘤率为30%,P<0.05。病理切片显示,Ad-hFL-hGM-CSF治疗组肿瘤细胞间隙有大量淋巴细胞浸润。结论:腺病毒介导hFL和hGM-CSF在小鼠体内显著扩增脾脏DCs,并可抑制EL-4淋巴瘤的生长。

关键词： hFL 树突状细胞(DC) 腺病毒免疫基因治疗

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康有为视界中的二程

孔子研究 2024年第1期 148-156,160页

作者：魏义霞黑龙江大学哲学学院哈尔滨150080

关于康有为视界中的二程,可从以下四个方面加以分析:审视维度、学术归属、思想解读和态度评价。就审视维度而言,康有为是最早将二程纳入近代哲学视野的哲学家。二程在他那里的境遇与大多数国学人物的情况类似,集中出现在其戊戌维新之前... 详细信息

关于康有为视界中的二程,可从以下四个方面加以分析:审视维度、学术归属、思想解读和态度评价。就审视维度而言,康有为是最早将二程纳入近代哲学视野的哲学家。二程在他那里的境遇与大多数国学人物的情况类似,集中出现在其戊戌维新之前的早期思想中。就学术归属而言,康有为对二程的思想来源和身份归属津津乐道,与其热衷于考辨中国文化的“学术源流”密不可分。就思想解读而言,康有为注意到了二程的义理、中庸和变化气质方面的内容。就态度评价而言,康有为对待二程的态度取决于他的孔教立场,给予二程的评价褒贬参半。康有为的二程观信息量丰富,对于体悟康有为的国学观以及宋明理学观提供了有益资源。

关键词：康有为二程近代哲学

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基于深度学习的遥感图像描述研究

基于深度学习的遥感图像描述研究

作者：魏义超青海师范大学

学位级别：硕士

基本公共服务由常住地供给的总体进展、制约因素与政策建议

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宏观经济研究 2024年第4期 118-127页

作者：魏义方邢伟黎珍羽中国宏观经济研究院社会发展研究所中国人民大学公共管理学院

健全常住地提供基本公共服务制度，百姓期盼、中央力推，关键在于健全体制机制并充分调动地方政府积极性。现阶段，大部分基本公共服务项目基本实现了由常住地供给，但非户籍人口在常住地享有基本公共服务还存在“铁门”、“玻璃门”、... 详细信息

健全常住地提供基本公共服务制度，百姓期盼、中央力推，关键在于健全体制机制并充分调动地方政府积极性。现阶段，大部分基本公共服务项目基本实现了由常住地供给，但非户籍人口在常住地享有基本公共服务还存在“铁门”、“玻璃门”、“弹簧门”等现象，同时不同城市的服务开放度差异明显。出于成本收益权衡、要素瓶颈制约、大城市服务供给悖论考量，常住地政府推进基本公共服务全覆盖意愿不足。需统筹激励与有效约束，推进基本公共服务由常住地供给。

关键词：常住人口基本公共服务新型城镇化

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基于对比学习的多模态推荐方法研究

基于对比学习的多模态推荐方法研究

作者：魏义彪山东师范大学

学位级别：硕士

随着移动互联网和自媒体的快速发展,网络数据量呈现爆发式增长,造成了严重的“信息过载”问题。推荐系统作为解决这一问题的重要手段,已经成了各大互联网应用平台的核心技术。基于协同过滤的方法通过挖掘用户和产品之间的历史交互记录... 详细信息

随着移动互联网和自媒体的快速发展,网络数据量呈现爆发式增长,造成了严重的“信息过载”问题。推荐系统作为解决这一问题的重要手段,已经成了各大互联网应用平台的核心技术。基于协同过滤的方法通过挖掘用户和产品之间的历史交互记录来学习用户对产品的偏好。然而,相比于庞大的产品数量,用户与产品的交互数据往往非常稀疏。因此,仅依赖单一模态数据来建模用户和产品特征的推荐方法往往难以取得理想的推荐性能。另外,交互过程中产生的多模态协作信号以及产品的多模态特征包含着丰富的语义信息,充分利用这些多模态信息来增强推荐性能具有广泛的研究前景。在深度学习技术的发展过程中,深度自监督学习技术在多种任务中表现出了强大的性能。特别地,在推荐系统研究领域,对比学习作为一种有效的自监督学习技术,在解决推荐场景下数据稀疏和长尾分布等问题上表现出了优秀的性能,并受到了学术界和工业界的广泛关注。然而,当前基于对比学习技术的多模态推荐方法仍然存在一些亟待解决的问题:首先,用户-产品交互过程中会产生大量多模态协作信号,例如用户评论中的文本和图像等信息。如何有效建模交互过程中产生的多模态协作信号,并利用对比学习强大的自监督能力捕获其中信息是需要解决的问题之一。其次,产品的多模态数据(例如文本描述和图像等)蕴含丰富的语义信息,但也伴随着大量的多模态噪音。如何有效避免多模态噪音的影响,有效提取用户和产品的多模态细粒度特征,并捕获其中的自监督信号以建模细粒度的用户偏好是需要解决的问题之二。针对上述问题,本文对基于对比学习的多模态推荐方法进行了研究,主要研究内容和贡献如下:(1)多级对比学习的多模态推荐框架。本文提出了一种基于评论感知的多级跨模态对比学习推荐框架(Multi-level Cross-modal Contrastive Learning for review-aware recommendation,MCCL),旨在构建多级对比学习,以自监督方式充分训练模态内和模态间的语义特征。具体来说,我们创新性地将用户交互和语义评论视为两种不同的语义模态,并设计了两种模态内特定的对比学习策略来增强模态内特征的学习。此外,我们还利用模态间的语义一致性构建了跨模态对比学习。最后,采用多任务学习方法来协同优化多个任务。我们在三个真实数据集上进行了全面实验,实验结果验证了MCCL的有效性。(2)基于动量蒸馏的多模态推荐方法。本文提出一个细粒度自监督动量蒸馏多模态推荐框架。在该工作中,我们设计了一个基于Transformer的细粒度特征提取器(Transformer-based Fine-grained Feature Extractor,TFFE)和一个包含模态内和模态间对比学习的动量蒸馏结构(Momentum Distillation,MoD),以完全预训练TFFE进行细粒度特征提取。此外,我们设计了一个结构感知的细粒度对比学习模块,对细粒度特征设计了三种特征增强方式:随机丢弃,随机遮蔽和产品共现结构增强,从而充分捕获细粒度特征之间的自监督信号。通过在三个真实数据集上进行的大量实验证明了我们所提方法优于最先进的多模态推荐方法。进一步的实验证实,我们提出的细粒度特征提取器TFFE可以作为一个预训练模型,通过预训练学习产品的细粒度特征表示,有效地增强推荐方法的性能。

关键词：对比学习图神经网络 Transformer 多模态特征

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基于知情构造理论的单材料柔性机构拓扑优化

中国机械工程 2024年

作者：苏珂王颖梁腾腾魏义礼张楠楠齐鲁工业大学(山东省科学院)艺术设计学院威海广泰空港设备有限公司

基于柔性机构在拓扑优化过程中设计子域数会增加从而使设计域外径与内径的子域交接点产生材料分布，进而导致拓扑结构设计子域内优化空间过少影响结构的整体性能。因此，基于知情构造理论（Informed Tectonics Theory，ITT）提出单材料... 详细信息

基于柔性机构在拓扑优化过程中设计子域数会增加从而使设计域外径与内径的子域交接点产生材料分布，进而导致拓扑结构设计子域内优化空间过少影响结构的整体性能。因此，基于知情构造理论（Informed Tectonics Theory，ITT）提出单材料柔性机构拓扑优化模型，该模型通过材料属性的描述以及属性参数计算，使设计子域数的取值在适应材料特征与分布的基础上进行，保证结构具有足够的优化空间。以机构的几何增益最大为目标，建立基于无网格伽辽金法(Element-free galerkin，EFG)的单材料柔性机构拓扑优化模型。在拓扑优化过程中引入无网格伽辽金法进行EFG相对密度场的构造，利用设计域中的EFG节点来构造变形函数，在预先完成材料属性有效描述的情况下节点能够灵活布局，避免出现造成数值不稳定的现象从而影响性能优化效果。通过典型算例对其应力分布进行分析，验证了提出方法的有效性。

关键词：知情构造柔性机构拓扑优化材料属性描述

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顾及时空特征的参考作物蒸散量集成学习估算

排灌机械工程学报 2024年第2期42卷 179-186,193页

作者：刘傲赵东保魏义长肖炼华北水利水电大学测绘与地理信息学院河南郑州450046 自然资源部四川基础地理信息中心四川成都610041

为提升参考作物蒸散量(ET_(0))的估算精度,以四川省为研究区域,发现全省ET_(0)的数据变化具有明显的时间和空间自相关性,继而在气象特征基础上引入时空特征构建以XGBoost, LightGBM,GBDT、随机森林和极限树为基模型的Stacking模型.将顾... 详细信息

为提升参考作物蒸散量(ET_(0))的估算精度,以四川省为研究区域,发现全省ET_(0)的数据变化具有明显的时间和空间自相关性,继而在气象特征基础上引入时空特征构建以XGBoost, LightGBM,GBDT、随机森林和极限树为基模型的Stacking模型.将顾及时空特征的Stacking模型与其各个基模型以及经验模型彭曼公式(FAO 56 Penman-Monteith)的决定系数、平均绝对值误差和均方误差等多项指标进行了全面的精度对比验证.试验结果表明:在顾及空间特征的情况下,Stacking模型在测试集上决定系数精度提升了3%,平均绝对值误差和均方误差分别降低了51%和76%;在顾及时序特征的情况下,Stacking模型在测试集上的决定系数精度提升了4%,均方误差和平均绝对值误差分别降低了92%和72%.这表明时空特征的引入可有效提升模型估算ET_(0)性能.在同时顾及时空特征的情况下,Stacking模型相较于彭曼公式,决定系数提升了39%,均方误差、平均绝对值误差分别降低了95%和77%,并且,在2006—2010年逐年精度验证中,Stacking模型精度始终优于其每年最优基模型精度.因此,顾及时空特征的Stacking模型可有效提升四川省ET_(0)估算精度.

关键词：参考作物蒸散量 Stacking模型时空特征集成学习