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BCG诱导形成的NETs在膀胱癌治疗中作用机制的相关研究

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BCG诱导形成的NETs在膀胱癌治疗中作用机制的相关研究

作者：高靖达天津医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨中性粒细胞胞外捕获网(neutrophil extracelluar traps,NETs)对膀胱癌T24细胞迁移、侵袭的影响及NETs对外周血单个核细胞(PBMCs)增殖、细胞因子表达的影响;探讨NETs对小鼠膀胱肿瘤生长及膀胱肿瘤中CD3表达的影响。方法:将卡介... 详细信息

目的:探讨中性粒细胞胞外捕获网(neutrophil extracelluar traps,NETs)对膀胱癌T24细胞迁移、侵袭的影响及NETs对外周血单个核细胞(PBMCs)增殖、细胞因子表达的影响;探讨NETs对小鼠膀胱肿瘤生长及膀胱肿瘤中CD3表达的影响。方法:将卡介苗(BCG)与中性粒细胞共同培养4小时诱导NETs形成,制备NETs悬液;取不同浓度NETs与膀胱癌T24细胞共同培养,通过划痕实验、Transwell实验方法,分析NETs对膀胱癌T24细胞迁移、侵袭的影响;取不同浓度NETs与PBMCs共同培养,通过CCK-8、流式细胞术及ELISA法,分析NETs对PBMCs增殖、PBMCs细胞表面CD4、CD8的表达和PBMCs分泌Th1型细胞因子TNF-α及IFN-γ的水平。建立Balb/c小鼠皮下膀胱肿瘤模型,将BCG诱导形成的NETs悬液皮下注射,同时设立阴性对照组,观察小鼠的一般状况和肿瘤生长情况;摘取肿瘤,对肿瘤组织标本行HE染色,观察肿瘤病理情况;进行CD3免疫组织化学染色,检测膀胱肿瘤中免疫细胞的分布情况。结果:1.划痕实验和Transwell迁移实验结果显示:不同浓度NETs与膀胱癌T24细胞共同培养后,实验组(1×NETs组和2×NETs组)与对照组相比,膀胱癌T24细胞迁移能力明显减弱,差异有统计学意义(P达量与对照组相比明显增加,差异有统计学意义(P达量各组之间均无明显差异。5.不同浓度NETs与PBMCs共同培养后,PBMCs细胞在不同时间点(24h、48h、72h)分泌TNF-α及IFN-γ的水平与对照组相比明显增加,随着NETs浓度增加,PBMCs细胞分泌TNF-α及IFN-γ的水平逐渐降低,差异有统计学意义(P达和Th1型细胞因子表达的上调,从而通过发挥免疫调节作用,促进NETs的抗肿瘤作用。3.在小鼠皮下膀胱肿瘤模型中,NETs能够抑制肿瘤生长,并能够活化肿瘤组织中淋巴细胞,发挥免疫活化作用。

关键词：卡介苗膀胱癌 NETs PBMCs 细胞免疫

腹腔镜下保留精索淋巴管技术治疗青少年精索静脉曲张

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中国微创外科杂志 2018年第10期18卷 899-901页

作者：胡岩靳红霞齐灿高靖达高栩郭付臣河北省儿童医院泌尿外科石家庄050031

目的探讨腹腔镜下保留淋巴管技术治疗青少年精索静脉曲张的效果。方法 2015年1月～2016年9月,我院收治青少年Ⅲ度原发性精索静脉曲张12例,年龄11～14岁,平均12.5岁,均为左侧。患侧睾丸明显小于健侧,其中4例运动后阴囊有明显坠胀不适。... 详细信息

目的探讨腹腔镜下保留淋巴管技术治疗青少年精索静脉曲张的效果。方法 2015年1月～2016年9月,我院收治青少年Ⅲ度原发性精索静脉曲张12例,年龄11～14岁,平均12.5岁,均为左侧。患侧睾丸明显小于健侧,其中4例运动后阴囊有明显坠胀不适。术中睾丸鞘膜注射1%亚甲蓝,腹腔镜下保留精索淋巴管行选择性精索静脉高位结扎术。观察术后鞘膜积液、睾丸萎缩、复发等情况。结果 12例睾丸鞘膜内注射亚甲蓝后均在腹腔镜下观察到蓝染的精索淋巴管,行保留淋巴管的选择性精索静脉高位结扎术,手术时间36～50 min,平均45 min。术后随访8～18个月,中位数12个月,术后患侧未出现鞘膜积液、精索静脉曲张复发、睾丸坏死萎缩等并发症。结论腹腔镜下保留精索淋巴管的选择性精索静脉高位结扎术效果良好。

关键词：腹腔镜精索静脉曲张淋巴管青少年

一期输尿管双J管置入联合体外冲击波碎石治疗婴儿上尿路多发结石

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中国微创外科杂志 2017年第10期17卷 916-918页

作者：胡岩齐灿高靖达安洋郭付臣赵学强李佳玉河北省儿童医院泌尿外科石家庄050031 河北省石家庄市第三医院超声医学科石家庄050000 首都医科大学基础医学院北京100069

目的探讨一期输尿管双J管置入联合体外冲击波碎石(extracorporeal shock wave lithotripsy,ESWL)治疗婴儿上尿路多发结石的安全性及有效性。方法 2013年1月~2015年6月我科对22例婴儿上尿路多发结石行一期输尿管双J管置入联合ESWL,全麻下... 详细信息

目的探讨一期输尿管双J管置入联合体外冲击波碎石(extracorporeal shock wave lithotripsy,ESWL)治疗婴儿上尿路多发结石的安全性及有效性。方法 2013年1月~2015年6月我科对22例婴儿上尿路多发结石行一期输尿管双J管置入联合ESWL,全麻下经F6或F8膀胱镜置入输尿管双J管(F3或F4.6)后转运至碎石室,麻醉状态下行ESWL(电压7.5~10 k V,冲击波频率70次/min)。结果 22例手术均一期顺利完成,术中无输尿管穿孔、输尿管黏膜撕脱发生,术后未发生泌尿系感染、尿源性脓毒血症、肾被膜下血肿、输尿管狭窄等严重并发症。术后2~4周结石均完全排出(平均排石时间3.5周),排石率100%。术后随访观察12个月,1例患儿术后1年复查发现肾结石复发,行ESWL清除结石,其余无结石复发,泌尿系超声或CT未见肾脏及输尿管形态改变,肾功能无异常。结论一期留置输尿管双J管联合ESWL治疗婴儿上尿路多发结石,可有效减少手术次数,减少腔内侵入性有创操作,安全有效,值得临床推广。

关键词：婴儿上尿路结石一期手术输尿管双J管体外冲击波碎石术

经尿道等离子前列腺剜除术治疗经直肠穿刺后良性前列腺增生患者的临床研究

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中华老年医学杂志 2016年第9期35卷 971-974页

作者：王晓明刘春雨高靖达孙光徐勇天津医科大学第二医院泌尿外科天津市泌尿外科研究所 300010

目的研究经尿道等离子前列腺剜除术（PKEP）治疗经直肠前列腺穿刺活检（TRPB）后良性前列腺增生（BPH）患者的有效性和安全性。方法回顾性分析2012年1月至2015年5月在天津医科大学第二医院行PKEP手术治疗的BPH患者88例，并进行随访。TRP... 详细信息

目的研究经尿道等离子前列腺剜除术（PKEP）治疗经直肠前列腺穿刺活检（TRPB）后良性前列腺增生（BPH）患者的有效性和安全性。方法回顾性分析2012年1月至2015年5月在天津医科大学第二医院行PKEP手术治疗的BPH患者88例，并进行随访。TRPB组38例患者术前均行TRPB，随机选取同期PKEP术前未行TRPB的50例BPH患者为NTRPB组。比较两组患者的基线资料，围术期相关参数及术后随访资料。结果88例患者平均年龄69．7岁。与NTRPB组比较，TRPB组患者年龄较小（t=2．62，P〈0．05），血前列腺特异抗原（PSA）水平较高（t=13．64，P〈0．01）。TRPB组较NTRPB组手术时间延长，（93．6±31．0）min比（77．9±17．3）min（t=2．64，P〈0．05），两组术中出血量、术后持续膀胱冲洗时间及留置尿管时间比较差异无统计学意义（均P〉0．05）。TRPB与PKEP间隔〉4周可缩短手术时间（P〈0．01），但术中出血量差异无统计学意义（P〉0．05）。两组均无输血、经尿道电切综合征、膀胱损伤、直肠损伤等情况。术后3、6、12个月随访结果均提示两组患者最大尿流率（Qmax）、国际前列腺症状评分（IPSS）评分及生活质量评分（QOL）评分差异无统计学意义（均P〉0．05）。结论PKEP治疗TRPB后BPH患者具有可行性及安全性，TRPB后4周以上再行PKEP手术可降低手术操作难度，提高安全性。

关键词：前列腺增生经尿道前列腺切除术活组织检查针吸

小儿重度肾积水穿刺造瘘术后肾功能可恢复性的临床研究

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中华泌尿外科杂志 2017年第8期38卷 624-627页

作者：胡岩齐灿安洋高靖达郭付臣赵学强河北省儿童医院泌尿外科石家庄050000 石家庄市第三医院超声科

目的探讨小儿重度肾积水穿刺造瘘术后肾功能可恢复性的临床意义。方法回顾性分析2013年1月至2016年1月河北省儿童医院50例先天性肾盂输尿管连接处狭窄导致的重度肾积水患儿的临床资料。男25例，女25例。年龄2个月～9岁7个月，平均（3.... 详细信息

目的探讨小儿重度肾积水穿刺造瘘术后肾功能可恢复性的临床意义。方法回顾性分析2013年1月至2016年1月河北省儿童医院50例先天性肾盂输尿管连接处狭窄导致的重度肾积水患儿的临床资料。男25例，女25例。年龄2个月～9岁7个月，平均（3.0±0.3）岁。病变位于左侧40例，右侧10例。所有患儿一期均行经皮肾穿刺造瘘术，术后根据患肾功能恢复情况二期行肾盂成形术或肾切除术。收集穿刺造瘘术前和术后分肾功能、造瘘管尿渗透压、尿pH、尿β2－微球蛋白（β2－microglobulin，β2－MG）等指标，术后行放射性核素肾扫描评估肾功能恢复情况及超微血流成像（superb micro－vascular imaging, SMI）技术测定肾血管阻力指数，对比造瘘术前后的指标，从而分析小儿重度肾积水实施保肾手术的可行性。结果本组50例患儿中49例一期肾造瘘术后患肾皮质厚度及生化指标有所恢复，行二期肾盂成形术；余1例患儿一期造瘘术后肾功能恢复不良，术后造瘘管尿量极少，考虑瘢痕萎缩肾，待行肾切除术。50例患儿术后肾皮质厚度较术前明显增厚[（5.9±1.0） mm与（2.9±0.9）mm, P＝0.03]，患肾分肾功能较术前明显提高[（25.7%±7.9%）与（13.5%±5.2 %） , P＝0.007]。SMI技术检测肾血管阻力指数术后较术前明显降低[（0.72±0.03）与（0.79±0.04），P＝0.021]，患儿术后尿渗透压较术前明显增加[（518.0±240.0）mmol/L与（126.5±100.5）mmol/L, P〈0.001]。术后尿pH值和尿β2－MG[（6.18±0.21）mg/L和（562.16±49.78）mg/L]较术前均明显降低[（7.38±0.32）mg/L和（954.28±69.45）mg/L]，差异均有统计学意义（P＝0.039和P〈0.001）。结论小儿重度肾积水经姑息肾穿刺造瘘术肾功能可有不同程度恢复，术前评估肾功能极差的患肾多数是可以保留的；超声SMI技术可对肾功能评估提供可靠的量化依据。

关键词：肾积水,重度肾盂成形术肾功能小儿

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肾盏造瘘技术在小婴儿重度肾积水腹腔镜肾盂成形术中的应用

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中国微创外科杂志 2018年第12期18卷 1133-1136页

作者：胡岩李佳玉高洁齐灿高栩高靖达郭付臣刘侠河北省儿童医院泌尿外科石家庄050031 首都医科大学附属北京友谊医院心内科北京100050

目的探讨小婴儿重度肾积水行腹腔镜肾盂成形术中输尿管双J管置入失败,应用肾盏造瘘替代输尿管双J管引流的效果。方法 2016年4月～2017年6月6例小婴儿重度肾积水肾盂成形术中放置输尿管双J管失败,经肾盏留置吻合口支架管和肾盂造瘘管,替... 详细信息

目的探讨小婴儿重度肾积水行腹腔镜肾盂成形术中输尿管双J管置入失败,应用肾盏造瘘替代输尿管双J管引流的效果。方法 2016年4月～2017年6月6例小婴儿重度肾积水肾盂成形术中放置输尿管双J管失败,经肾盏留置吻合口支架管和肾盂造瘘管,替代输尿管双J管的引流作用。术后2～3周拔除吻合口支架管,夹闭肾盂造瘘管行亚甲蓝排泄试验阴性后拔除肾盂造瘘管。结果 6例患儿术中行肾盏造瘘,顺利留置吻合口支架管和肾盂造瘘管,术后肾盂造瘘管引流通畅。拔除吻合口支架管,夹闭肾盂造瘘管和拔管后患儿均无发热、呕吐及哭闹不适。4例术后1、3、6、12个月随访,超声或CT示肾积水明显减轻(肾盂前后径<1 cm,肾盏扩张<0. 5 cm),肾皮质逐渐增厚至0. 5～1. 0 cm(术前肾皮质最薄处仅1mm),肾脏形态接近正常; 2例患儿术后6个月复查肾核素扫描示分肾功能接近正常,分别为47. 3%、48. 2%(分肾功能50%为正常)。结论肾盏造瘘技术在小婴儿重度肾积水腹腔镜肾盂成形术中的辅助作用确切,效果良好。

关键词：腹腔镜肾盏造瘘肾积水小婴儿

经尿道输尿管置入术和肾造瘘术在小婴儿重度肾积水治疗中的临床观察

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中华医学杂志 2020年第28期100卷 2207-2210页

作者：张铁军贾鹏宇高靖达许鹏高瑞峰陈文彬河北省儿童医院泌尿外科石家庄050031 河北省中医院石家庄050017

目的对比经尿道输尿管支架管置入术和肾造瘘术两种不同肾脏尿液引流方式用于缓解小婴儿重度肾积水的临床疗效。方法选取2014年12月至2018年5月间河北省儿童医院泌尿外科0.05)。而两组平均手术时间、术中平均出血量、平均住院时间以及术... 详细信息

目的对比经尿道输尿管支架管置入术和肾造瘘术两种不同肾脏尿液引流方式用于缓解小婴儿重度肾积水的临床疗效。方法选取2014年12月至2018年5月间河北省儿童医院泌尿外科0.05)。而两组平均手术时间、术中平均出血量、平均住院时间以及术后3个月时肾盂前后径,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论两种术式均可有效缓解尿路梗阻,可作为小婴儿重度肾积水Ⅰ期治疗的选择方案,其中经尿道输尿管支架管置入术手术操作简单、创伤小、耗时短,术后患儿恢复快,体表无创伤便于护理以及有概率免除后期离断成形手术可能,相较而言更有一定的临床应用价值。

关键词：肾造口术,经皮输尿管支架管小婴儿重度肾积水

检测前列腺癌细胞PC3溶酶体膜通透化模型的构建

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中华实验外科杂志 2016年第6期33卷 1497-1500页

作者：邢晨孙岩王文龙高靖达沙楠徐浩吴长利胡海龙天津医科大学第二医院泌尿外科国家临床重点专科天津市泌尿外科研究所天津市泌尿外科基础医学重点实验室 300211

目的利用串联红绿荧光蛋白报告基因的溶酶体膜蛋白来检测前列腺癌细胞溶酶体的变化，构建靶向溶酶体膜通透化（LMP）的筛选模型，为后续靶向溶酶体膜通透化的药物筛选奠定基础。方法（1）设计构建串联红绿荧光报告基因标记溶酶体膜蛋白... 详细信息

目的利用串联红绿荧光蛋白报告基因的溶酶体膜蛋白来检测前列腺癌细胞溶酶体的变化，构建靶向溶酶体膜通透化（LMP）的筛选模型，为后续靶向溶酶体膜通透化的药物筛选奠定基础。方法（1）设计构建串联红绿荧光报告基因标记溶酶体膜蛋白（Lamp2c）的真核表达载体pLamp2C．红色荧光蛋白（mRFP）-增强型绿色荧光蛋白（EGFP）；（2）荧光显微镜观察pLamp2C—mRFP-EGFP质粒转染人PC3细胞表达情况；（3）用LysoTrackerBlue浓度为55nmol／L的培养基孵育转染后的PC3细胞，共聚焦显微镜下观察pLamp2C-mRFP—EGFP与溶酶体共定位；（4）用40Ixmol／L鞘氨醇的培养基处理转染pLamp2C—mRFP—EGFP的PC3细胞，共聚焦显微镜观察加入鞘氨醇前后红绿荧光的变化。利用ImageJ软件定量分析共定位和红绿荧光变化。结果（1）pLamp2C—mRFP-EGFP真核表达载体构建成功；（2）***—EGFP瞬时转染至PC3细胞，EGFP及mRFP均正常表达；（3）***与溶酶体共定位结果：Pearson’s相关系数为0．8362±0．0518；（4）经鞘氨醇处理前后，PC3细胞绿色荧光强度为0．1190±0．0223比0．06394-0．0156，明显减弱，差异有统计学意义（t=14．66，P〈0．05），红色荧光强度为0．1049±0．0101比0．1038±0．0109，差异无统计学意义（t=1．136，P〉0．05）。结论成功转染pLamp2C—mRFP—EGFP至PC3细胞溶酶体，鞘氨醇处理后绿色荧光明显减弱，红色荧光无明显变化，指示PC3细胞溶酶体膜通透化。

关键词：溶酶体膜通透化串联红绿荧光报告基因前列腺癌细胞鞘氨醇凋亡

经膀胱镜置入输尿管支架管治疗小于3个月婴儿重度肾积水

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中华小儿外科杂志 2020年第10期41卷 895-899页

作者：贾鹏宇张铁军高靖达许鹏高瑞峰陈文彬河北省儿童医院泌尿外科石家庄050031 河北省中医院泌尿外科石家庄050031

目的对单纯通过经膀胱镜置入输尿管支架管治疗<3个月婴儿的原发性肾积水的疗效和其相应的并发症进行研究,评价其临床疗效。方法收集河北省儿童医院泌尿外科自2014年12月至2018年5月收治的<3个月重度肾积水患儿20例。其中,男19例,女1例;... 详细信息

目的对单纯通过经膀胱镜置入输尿管支架管治疗<3个月婴儿的原发性肾积水的疗效和其相应的并发症进行研究,评价其临床疗效。方法收集河北省儿童医院泌尿外科自2014年12月至2018年5月收治的<3个月重度肾积水患儿20例。其中,男19例,女1例;年龄为(1.95±0.56)个月;患侧为左侧14例,右侧6例。所有患儿均接受经膀胱镜输尿管支架置入术一期治疗重度肾积水,于术前、输尿管支架管置入后及取出后对患儿进行B型超声检查,并对临床表现进行观察,记录相应的治疗结果和手术并发症。结果所有患儿中有2例置管失败(左、右侧各1例),予更换为肾造瘘术以缓解肾积水,另外18例均顺利置入输尿管支架管,术中操作时间短,为(15.22±5.75)min,出血量极微,为(0.50±0.42)ml,术后观察到的并发症主要表现有泌尿系统感染、血尿和支架管的梗阻。患儿住院天数为(4.72±1.81)d,治疗前肾盂前后径及肾皮质厚度分别为(34.28±7.00)mm和(1.86±0.66)mm,置管后6个月变化为(11.00±4.56)mm和(4.47±1.32)mm,可观察到肾积水程度的明显缓解和肾皮质的增厚。而在取出输尿管支架管后,有8例患儿的肾积水无再次加重表现,观察至今无特殊处理。结论经膀胱镜输尿管支架管置入术是一种微创术式,可作为临床治疗小婴儿(<3个月)重度肾积水的一种选择方法,术后可明确缓解肾积水程度,并且在取出支架管后存在治愈此年龄段原发性肾积水的可能,使患儿免受于较大手术创伤,值得进一步临床应用研究。

关键词：婴儿肾盂积水输尿管支架