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血管内皮生长因子-B对形觉剥夺性近视豚鼠视网膜中多巴胺水平的影响

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山东大学学报(医学版) 2024年

作者：姜俊高洪莲孙瑞婷孙昕彭庆生张守宽张磊滨州医学院附属医院眼科

目的研究玻璃体腔注射血管内皮生长因子-B（vascular endothelial growth factor-B，VEGF-B）对形觉剥夺性近视（form-deprivation myopia，FDM）豚鼠视网膜中多巴胺（dopamine，DA）水平的影响。方法于2023年4月至2024年2月，随机选... 详细信息

目的研究玻璃体腔注射血管内皮生长因子-B（vascular endothelial growth factor-B，VEGF-B）对形觉剥夺性近视（form-deprivation myopia，FDM）豚鼠视网膜中多巴胺（dopamine，DA）水平的影响。方法于2023年4月至2024年2月，随机选取健康的3周龄豚鼠147只，雌雄不限，随机分为7个组，每组21只。空白组双眼不予干预，其余6组使用半透明乳胶气球套头遮盖右眼14 d建立FDM模型。造模前对PBS组、0.25 ng组、2.5 ng组、25 ng组、50 ng组右眼玻璃体腔注射PBS缓冲液2.5 μL、VEGF-B 0.25 ng、2.5 ng、25 ng、50 ng。遮盖前后分别测量造模眼屈光度与眼轴长度，14 d后采用免疫荧光法检测酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase，TH）阳性细胞数量、免疫印记法检测视网膜TH的蛋白表达情况、HE染色观察视网膜血管内皮细胞核数、高效液相色谱法测定DA与3，4-二羟基苯乙酸（3，4-dihydroxyphenylacetic acid，DOPAC）的含量及 DA 代谢率。结果造模前，7组豚鼠右眼屈光度与眼轴长度均无显著差异（P＞0.05）。造模完成后与空白组相比，FDM组、PBS组屈光不正向近视侧偏移，眼轴增长，TH、DA、DOPAC含量均降低（P＜0.05）；与FDM组相比，0.25 ng组、2.5 ng组、25 ng组、50 ng组豚鼠遮盖眼近视程度均降低，眼轴增长趋势被抑制，TH、DA、DOPAC表达量均增加（均P＜0.05），随着VEGF-B浓度的升高，眼轴增长所受抑制程度逐渐增加，近视程度逐渐减轻，TH等检测指标的表达水平均逐渐升高。7组豚鼠视网膜DA代谢率、视网膜内血管内皮细胞核数差异均无统计学意义(P＞0.05)。结论璃体腔注射VEGF-B可使FDM豚鼠视网膜中的DA含量升高、眼轴增长程度减轻，从而抑制FDM豚鼠的近视发展，且不会诱导新生血管生成。其中50 ng组VEGF-B对DA的促进作用更明显。

关键词：血管内皮生长因子-B 形觉剥夺性近视多巴胺视网膜酪氨酸羟化酶

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胆管癌细胞外泌体对自然杀伤细胞功能影响

中华肿瘤防治杂志 2024年第11期31卷 670-676页

作者：王新月王蔚琛张帆曹璋任乐彬王楠胡凤爱刘乃国高洪莲周洁柏雪莲滨州医学院附属医院医学研究中心山东滨州256603 滨州医学院附属医院检验科山东滨州256603 滨州医学院附属医院肝胆外科山东滨州256603 滨州医学院附属医院病理科山东滨州256603 滨州医学院附属医院产前诊断中心山东滨州256603

目的探究胆管癌细胞来源的外泌体(RBE-Exos)对自然杀伤(NK)细胞功能的影响及其内在机制。方法采用免疫组化染色对比分析NK细胞在胆管癌组织和癌旁组织中的浸润数量;通过超速离心法从胆管癌细胞中分离出外泌体,透射电镜(TEM)观察RBE-Exo... 详细信息

目的探究胆管癌细胞来源的外泌体(RBE-Exos)对自然杀伤(NK)细胞功能的影响及其内在机制。方法采用免疫组化染色对比分析NK细胞在胆管癌组织和癌旁组织中的浸润数量;通过超速离心法从胆管癌细胞中分离出外泌体,透射电镜(TEM)观察RBE-Exos的形态特征,蛋白质印迹实验鉴定RBE-Exos的蛋白标志物;纳米颗粒跟踪分析仪(NTA)检测RBE-Exos粒径分布。NK-92细胞与RBE-Exos共培养后,荧光染色示踪RBE-Exos进入细胞;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹实验检测黏附分子的表达水平。LDH法检测NK-92细胞的杀伤功能变化。结果免疫组化染色显示,与癌旁组织相比,表达CD56(t=2.977,P=0.008)和NKp46(t=4.530,P<0.001)特异性标志分子的NK细胞在癌组织中的浸润数量减少。RBE-Exos电镜下呈酒窝或杯状,特异性表达CD63和HSP70。NTA结果显示RBE-Exos平均直径为(102.90±7.00)nm。荧光染色显示,培养24 h后RBE-Exos进入NK-92细胞。RBE-Exos处理后,NK-92细胞失去了正常的聚团现象而呈现分散的状态。qRT-PCR结果显示,RBE-Exos处理组黏附分子CD11a(t=4.999,P=0.038)、CD18(t=9.225,P=0.012)和CD54(t=12.050,P=0.007)在转录水平上的表达较PBS组均降低。蛋白质印迹实验结果表明,RBE-Exos处理组较PBS组黏附分子CD11a(t=5.140,P=0.007)、CD18(t=7.177,P=0.002)和CD54(t=8.713,P<0.001)蛋白表达均减少。LDH检测显示,RBE-Exos减弱NK-92细胞对靶细胞的杀伤功能(20∶1,t=3.975,P=0.017;10∶1,t=5.776,P=0.005)。结论胆管癌可能通过释放外泌体抑制NK细胞黏附分子表达从而抑制其在肿瘤部位的浸润。

关键词：胆管癌外泌体自然杀伤细胞肿瘤微环境免疫逃逸黏附分子

雷帕霉素对兔眼准分子激光角膜切削术后haze的影响

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国际眼科杂志 2022年第3期22卷 366-372页

作者：于睿高洪莲李欣蒙刘奇奇张磊滨州医学院附属医院眼科中国山东省滨州市256600

目的:探究调节自噬活性对兔眼准分子激光角膜切削术(PRK)术后角膜上皮下雾状混浊(haze)的影响。方法:新西兰大白兔64只行右眼PRK手术后,根据术后局部用药不同,随机分为4组:单纯手术组、14μmol/L二甲基亚砜组(DMSO)、50μmol/L雷帕霉素... 详细信息

目的:探究调节自噬活性对兔眼准分子激光角膜切削术(PRK)术后角膜上皮下雾状混浊(haze)的影响。方法:新西兰大白兔64只行右眼PRK手术后,根据术后局部用药不同,随机分为4组:单纯手术组、14μmol/L二甲基亚砜组(DMSO)、50μmol/L雷帕霉素组、100μmol/L雷帕霉素组,每组16只。根据分组情况,术后2h开始给予上述滴眼液治疗,每天3次,1次1滴,持续7d,另选取16只兔为正常对照组。术后每天用手持裂隙灯显微镜照相系统,观察兔眼术后炎症反应及角膜上皮愈合情况。裂隙灯显微镜照相系统采集PRK术后1、4wk时各组兔眼haze的形成情况。各组分别于术后1、4wk采用空气栓塞法处死8只兔子,摘取角膜组织,冻存备用。免疫组化检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达水平。Real Time-PCR技术检测自噬因子-5(ATG5)、自噬因子-12(ATG12)、B淋巴细胞瘤基因-2(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase3)基因的相对表达量。结果:PRK术后兔眼角膜上皮均在3~4d完全愈合,各组兔眼术后角膜上皮愈合时间比较无差异(F=0.745,P=0.530)。在观察期间,各组术后haze均于4wk时最明显,单纯手术组和14μmol/L DMSO组haze症状均较严重,其次为50μmol/L雷帕霉素组,100μmol/L雷帕霉素组haze症状较其他组明显减轻,各组兔眼术后不同时间点haze分级比较有差异(均P<0.05)。免疫组化显示,术后1、4wk,单纯手术组和14μmol/L DMSO组TGF-β1、MMP-2和α-SMA的表达均较强,其次为50μmol/L雷帕霉素组,100μmol/L雷帕霉素组较其他组表达明显减弱(均P<0.05)。PCR法检测显示,术后1、4wk,50、100μmol/L雷帕霉素组ATG5、ATG12和Bcl-2 mRNA相对表达量较单纯手术组和14μmol/L DMSO组明显升高(均P<0.05);50、100μmol/L雷帕霉素组Caspase3 mRNA相对表达量较单纯手术组和14μmol/L DMSO组明显降低(均P<0.05)。结论:雷帕霉素可以增强自噬水平,抑制凋亡水平,从而减轻兔眼PRK术后haze的形成。

关键词：准分子激光角膜切削术角膜上皮下雾状混浊(haze) 雷帕霉素自噬

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体育游戏在高职体育教学中的运用研究

天津职业院校联合学报 2022年第3期24卷 26-30页

作者：高洪莲天津国土资源和房屋职业学院天津300270

建设体育强国的发展理念深入人心,我国对于体育教学的关注度也越来越高,高职院校提高了对体育教学的重视程度,而体育游戏教学法也逐渐显露出重要作用。本文围绕体育游戏的特点展开论述,分析体育游戏对于高职体育教学的积极作用,以及在... 详细信息

建设体育强国的发展理念深入人心,我国对于体育教学的关注度也越来越高,高职院校提高了对体育教学的重视程度,而体育游戏教学法也逐渐显露出重要作用。本文围绕体育游戏的特点展开论述,分析体育游戏对于高职体育教学的积极作用,以及在体育教学中的实际运用,探讨了体育游戏在高职体育教学中的运用策略。

关键词：体育游戏高职体育教学运用

血管内皮生长因子-A_(165)对形觉剥夺性近视豚鼠视网膜中多巴胺水平的影响

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眼科新进展 2023年第10期43卷 775-780页

作者：孙瑞婷高洪莲张凤一彭庆生王磊张磊滨州医学院附属医院(第一临床医学院)眼科山东省滨州市256600 滨州医学院附属医院(第一临床医学院)医学研究中心山东省滨州市256600

目的研究玻璃体内注射血管内皮生长因子-A_(165)(VEGF-A_(165))对形觉剥夺性近视(FDM)豚鼠视网膜中多巴胺(DA)水平的影响。方法选取健康3周龄三色豚鼠90只,随机分为6组,分别为空白组、FDM组、PBS组、10 ng组、5 ng组、1 ng组,每组15只... 详细信息

目的研究玻璃体内注射血管内皮生长因子-A_(165)(VEGF-A_(165))对形觉剥夺性近视(FDM)豚鼠视网膜中多巴胺(DA)水平的影响。方法选取健康3周龄三色豚鼠90只,随机分为6组,分别为空白组、FDM组、PBS组、10 ng组、5 ng组、1 ng组,每组15只。空白组豚鼠双眼不做任何处理,其他组豚鼠用半透明乳胶气球套头连续遮盖右眼14 d建立FDM模型,左眼不做处理。PBS组、10 ng组、5 ng组、1 ng组豚鼠于遮盖前右眼玻璃体内分别注射PBS缓冲液和10 ng、5 ng、1 ng VEGF-A_(165)。在造模前1 d和造模后14 d测量豚鼠右眼屈光度和眼轴长度。造模后14 d,采用免疫荧光法检测各组豚鼠视网膜中酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数,高效液相色谱法测定DA、DOPAC的含量及DA代谢率,HE染色观察视网膜中血管内皮细胞核数。结果造模前,6组豚鼠右眼屈光度和眼轴长度差异均无统计学意义(均为P>0.05)。造模后14 d,与空白组相比,FDM组豚鼠近视度数升高,眼轴长度增加,TH阳性细胞数降低,DA、DOPAC含量降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与FDM组相比,10 ng组、5 ng组、1 ng组豚鼠右眼近视度数均降低,眼轴长度均变短,TH阳性细胞数均增加,DA、DOPAC含量均增多,血管内皮细胞核数均增加,其中5 ng组豚鼠近视度数及眼轴长度均低于10 ng组,TH阳性细胞数及DA、DOPAC含量均高于10 ng组,1 ng组豚鼠近视度数及眼轴长度均低于5 ng组,TH阳性细胞数及DA、DOPAC含量均高于5 ng组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);10 ng组豚鼠视网膜血管内皮细胞核数最多,5 ng组次之,1 ng组较少,但与空白组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05);6组豚鼠间视网膜DA代谢率差异无统计学意义(P=0.574)。结论玻璃体内注射VEGF-A_(165)可以使FDM豚鼠视网膜中DA含量升高,从而抑制豚鼠近视的发展。

关键词：血管内皮生长因子形觉剥夺性近视多巴胺豚鼠视网膜血管内皮细胞

3~6岁学龄前儿童各屈光参数情况及其与等效球镜的相关分析

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国际眼科杂志 2023年第7期23卷 1189-1195页

作者：李童于睿张凤一王亚彤许昊高洪莲张磊滨州医学院附属医院眼科中国山东省滨州市256600 浙江大学医学院附属儿童医院眼科中国浙江省杭州市310000 山东中医药大学附属眼科医院中国山东省济南市250000

目的:探讨3~6岁学龄前儿童各屈光参数的分布情况及其与等效球镜(SE)的关系,并评估各筛查指标在诊断屈光不正方面的准确性。方法:横断面研究。选取同意完成散瞳验光的3~6岁学龄前儿童,共计791名。测量眼轴长度(AL)、角膜屈光力(K),小瞳... 详细信息

目的:探讨3~6岁学龄前儿童各屈光参数的分布情况及其与等效球镜(SE)的关系,并评估各筛查指标在诊断屈光不正方面的准确性。方法:横断面研究。选取同意完成散瞳验光的3~6岁学龄前儿童,共计791名。测量眼轴长度(AL)、角膜屈光力(K),小瞳孔下电脑验光和散瞳验光后SE,然后计算角膜曲率半径(CR)及眼轴长度/角膜曲率半径(AL/CR)比值。结果:共纳入791名学生,其中男生400人(50.6%),女生391人(49.4%)。AL、CR、AL/CR及SE平均值分别为22.62±0.94mm、7.81±0.29mm、2.90±0.09、+1.95±1.31D。AL、CR及AL/CR随年龄的增大而增大;男生AL及CR显著大于女生(均P<0.001),男生与女生AL/CR及SE均无差异(P=0.82、0.19)。SE与AL/CR、AL、CR的相关系数分别为-0.86、-0.50、0.16。多元线性回归表明:AL/CR每增加1个单位,SE向近视转变10.91个单位。AL/CR筛查近视的灵敏度为94.44%,特异度为90.46%,约登指数为0.84;小瞳孔下电脑验光筛查近视的灵敏度为100%,特异度为66.09%,约登指数为0.66;以AL/CR及AL作为筛查近视的指标绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线),曲线下面积分别为0.967、0.809。结论:在难以进行散瞳验光的大规模群体筛查活动中,AL/CR相对于AL和小瞳孔下电脑验光来说,可以更好地评估屈光状态,且其筛查近视及发现远视储备小于同年龄段儿童的效能也相对更好。

关键词：学龄前儿童眼轴长度眼轴长度/角膜曲率半径比值(AL/CR) 远视储备屈光不正近视等效球镜

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不同固定液固定豚鼠视网膜效果的比较

滨州医学院学报 2022年第2期45卷 158-160页

作者：邱宇高洪莲张磊滨州医学院附属医院眼科山东滨州256603 滨州医学院附属医院临床医学实验中心山东滨州256603

近视是常见的眼科疾病[1],高度近视眼底病变是致盲的主要原因,随着近视屈光度的增加和眼轴的增长,眼底病发生率升高,如后巩膜葡萄肿、黄斑劈裂、黄斑出血、豹纹状眼底等[2]。因此近视防控是社会关注的焦点,也是研究的热点。而豚鼠是建... 详细信息

近视是常见的眼科疾病[1],高度近视眼底病变是致盲的主要原因,随着近视屈光度的增加和眼轴的增长,眼底病发生率升高,如后巩膜葡萄肿、黄斑劈裂、黄斑出血、豹纹状眼底等[2]。因此近视防控是社会关注的焦点,也是研究的热点。而豚鼠是建立近视模型中最常用的实验动物,其视网膜组织的病理切片在实验中有着重要作用,但因视网膜结构复杂,在制作视网膜组织病理切片时,易出现视网膜断裂折叠、细胞固缩、胞核不清等问题,影响实验研究.

关键词：固定液视网膜石蜡切片 HE染色免疫荧光

血管内皮生长因子-A_(165)对形觉剥夺性近视豚鼠巩膜重塑的影响

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国际眼科杂志 2023年第9期23卷 1454-1460页

作者：彭庆生高洪莲孙瑞婷张凤一王磊李童张磊滨州医学院附属医院眼科中国山东省滨州市256600 滨州医学院附属医院医学研究中心中国山东省滨州市256600

目的:探讨玻璃体腔内注射血管内皮生长因子-A_(165)(VEGF-A_(165))对形觉剥夺性近视(FDM)豚鼠巩膜重塑的影响。方法:健康3周龄三色豚鼠120只随机分为6组,每组20只,其中空白组不做任何干预,FDM组仅建立FDM模型,PBS组建立FDM模型前玻璃体... 详细信息

目的:探讨玻璃体腔内注射血管内皮生长因子-A_(165)(VEGF-A_(165))对形觉剥夺性近视(FDM)豚鼠巩膜重塑的影响。方法:健康3周龄三色豚鼠120只随机分为6组,每组20只,其中空白组不做任何干预,FDM组仅建立FDM模型,PBS组建立FDM模型前玻璃体腔内注射PBS缓冲液2.5μL,1ng组、5ng组、10ng组建立FDM模型前玻璃体腔内分别注射VEGF-A_(165)1、5、10ng。用半透明气球遮盖豚鼠右眼14d建立FDM模型,造模前后测量豚鼠右眼屈光度和眼轴长度,造模14d后采用高效液相色谱法检测视网膜中多巴胺(DA)含量,用RT-PCR、Western blot法检测巩膜中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)、转化生长因子(TGF)-β1、TGF-β2、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA和蛋白表达情况。结果:造模前,各组豚鼠右眼屈光度和眼轴长度均无显著差异(P>0.05)。造模14d后,与空白组相比,FDM组豚鼠右眼近视度数升高,眼轴增长,视网膜中DA含量减少,巩膜中MMP-2、TGF-β2、α-SMA表达量均增加,TIMP-2、TGF-β1表达量均减少(P<0.01);与FDM组相比,1ng组、5ng组、10ng组豚鼠右眼近视度数均降低,眼轴增长趋势均减缓,视网膜中DA含量均增加,巩膜中MMP-2、TGF-β2、α-SMA表达量均减少,TIMP-2、TGF-β1表达量均增加(P<0.01),且随着玻璃体腔注射VEGF-A_(165)浓度的升高,豚鼠右眼近视度数逐渐升高,眼轴逐渐延长,视网膜中DA含量逐渐减少,巩膜中MMP-2、TGF-β2、α-SMA表达量均逐渐增加,TIMP-2、TGF-β1表达量均逐渐减少。结论:玻璃体腔内注射VEGF-A_(165)可以增加FDM豚鼠视网膜中DA含量,影响巩膜中MMP-2、TIMP-2、TGF-β1、TGF-β2、α-SMA的表达,抑制巩膜重塑,其中1ng VEGF-A_(165)效果最明显。

关键词：血管内皮生长因子形觉剥夺性近视巩膜重塑多巴胺基质金属蛋白酶-2 基质金属蛋白酶抑制剂-2 转化生长因子-β α-平滑肌肌动蛋白

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绝经对女性干眼的影响

国际眼科纵览 2023年第1期47卷 58-61页

作者：王亚彤张磊高洪莲滨州医学院附属医院眼科，山东滨州　256603 滨州医学院附属医院医学研究中心，山东滨州　256603

干眼是一种多因素眼表疾病，引起眼部疼痛、不适和视力下降，严重影响患者的生活质量。女性是干眼发生的重要危险因素，尤其是绝经过渡期和绝经后女性，提示性激素水平改变在干眼的发病中起着重要作用。性激素，包括雌激素、孕激素和雄... 详细信息

干眼是一种多因素眼表疾病，引起眼部疼痛、不适和视力下降，严重影响患者的生活质量。女性是干眼发生的重要危险因素，尤其是绝经过渡期和绝经后女性，提示性激素水平改变在干眼的发病中起着重要作用。性激素，包括雌激素、孕激素和雄激素，影响泪液所有成分的产生，包括水液、脂质和黏蛋白。各种机制如性激素水平的降低、反馈机制的改变，以及受体接受性的变化相互作用，改变眼表稳态，从而导致干眼。一些研究已经表明绝经激素治疗在绝经过渡期和绝经后干眼中的潜在作用。 (国际眼科纵览，2023, 47：58－61)

关键词：绝经干眼绝经激素治疗