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外泌体MicroRNA在抗病毒免疫中的功能分析

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生物技术通报 2024年第5期40卷 48-57页

作者：窦金萍高维崧韦双高新桃李轶女中国农业科学院生物技术研究所北京100081

外泌体是一种细胞外囊泡,内含有多种蛋白质和细胞调节因子,参与细胞间的信息传递并调控细胞的生长和生理过程。由于外泌体的功能差异性与分泌其细胞的类型和状态密切相关,因此在细胞水平的免疫研究中,外泌体可在一定程度上反映细胞的基... 详细信息

外泌体是一种细胞外囊泡,内含有多种蛋白质和细胞调节因子,参与细胞间的信息传递并调控细胞的生长和生理过程。由于外泌体的功能差异性与分泌其细胞的类型和状态密切相关,因此在细胞水平的免疫研究中,外泌体可在一定程度上反映细胞的基因表达水平。病毒个体微小、结构简单,在感染宿主细胞,完成自身复制以及逃逸宿主免疫等过程中涉及到复杂的免疫调控网络,其中外泌体作为信息交流的新兴关注点,在这一免疫调控网络中的“使者”作用值得关注。MicroRNA在细胞间信息交流中也具有重要的调控作用,作为外泌体装载的货物,被选择性的分选到外泌体后,外泌体microRNA能够更加稳定的靶向调节生物功能,参与调控病毒免疫。本文介绍了外泌体的组成、发生机制以及内容物的成分,并以其中研究范围较广,研究内容较多的外泌体miRNA为出发点,重点阐述其在病毒免疫中的双重作用,通过了解外泌体miRNA在同种病毒或不同病毒中的调控作用,对进一步解析病毒入侵宿主的机理具有重要意义。

关键词：外泌体细胞外囊泡 microRNA 病毒免疫

IP-10与IL-17A作为牛结核病诊断的分子标识的初步验证

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IP-10与IL-17A作为牛结核病诊断的分子标识的初步验证

检测牛IFN-γ双抗体夹心ELISA的建立及在牛结核病诊断上的初步应用

第五届全国人畜共患病学术研讨会

作者：隋修锟高新桃鑫婷贾红朱鸿飞中国农业科学院北京畜牧兽医研究所兽医研究室 Molecular and Cellular Biology Gembloux Agro-Bio TechUniversity of Liège

本研究以临床结核病阳性牛和人工感染牛为试验对象,收集外周血淋巴细胞,经牛结核菌素(PPD-B)或重组CE蛋白刺激后,用荧光定量PCR和夹心ELISA方法检测外周血淋巴细胞中IL-6、IL-12A、IL-17A、IP-10和TNF-α的转录、表达水平,分析各细胞因...

本研究以临床结核病阳性牛和人工感染牛为试验对象,收集外周血淋巴细胞,经牛结核菌素(PPD-B)或重组CE蛋白刺激后,用荧光定量PCR和夹心ELISA方法检测外周血淋巴细胞中IL-6、IL-12A、IL-17A、IP-10和TNF-α的转录、表达水平,分析各细胞因子与IFN-γ转录、表达水平之间的相关性,初步探讨其与牛分枝杆菌感染之间的关系。结果显示,经PPD-B或CE刺激后,临床结核病阳性牛和人工感染牛外周血淋巴细胞IP-10与IL-17A的mRNA

关键词：

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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畜牧兽医学报 2014年第10期45卷 1693-1698页

作者：张改梅贾红侯绍华鑫婷郭晓宇袁维峰刘淑清吴竞高新桃李明董瑞凯朱鸿飞中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 中国农业科学院研究生院北京100081

本研究旨在建立牛IFN-γ体外释放法,为牛结核病的免疫学诊断提供一种快速、有效的新检测技术。分别以获得的牛IFN-γ单克隆抗体Bo-mAb1作为捕获抗体,以Bo-mAb2H作为检测抗体,建立了基于双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)的牛IFN-γ体外释放法... 详细信息

本研究旨在建立牛IFN-γ体外释放法,为牛结核病的免疫学诊断提供一种快速、有效的新检测技术。分别以获得的牛IFN-γ单克隆抗体Bo-mAb1作为捕获抗体,以Bo-mAb2H作为检测抗体,建立了基于双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)的牛IFN-γ体外释放法。该方法的最低检出限为3.12ng·mL-1,可特异性检测出重组牛IFN-γ(Bac-BoIFN-γ)及天然BoIFN-γ,而与猪、犬、鸡的天然IFN-γ无交叉反应。批内、批间变异系数小于5.11%。临床检测结果显示,与结核菌素皮内变态试验(TST)、进口BovigamTM试剂盒检测的符合率分别为88.7%和95.3%。结果表明,DAS-ELISA法具有良好的敏感性、特异性及精确度,可用于临床样品的检测,为监测牛结核病特别是其早期感染提供了强有力的检测技术手段。

关键词：牛结核病 IFN-γ 双抗体夹心ELISA 临床诊断

LC-MS法同时检测甲磺酸伊马替尼中3个磺酸酯基因毒杂质

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药物分析杂志 2014年第12期34卷 2202-2206页

作者：冯慧敏杭太俊高新桃崔浩龚心实张斐肖柏明中国药科大学南京210009 江苏先声药业有限公司南京210042

目的：建立LC-MS法对甲磺酸伊马替尼原料中的3个磺酸酯基因毒杂质—甲磺酸甲酯（MMS）、甲磺酸乙酯（EMS）、甲磺酸异丙酯（IPMS）进行定量检测。方法：选用Agilent Poroshell 120 SB-C18色谱柱（2.7μm,4.6 mm×100 mm）,以10mmol·L^-... 详细信息

目的：建立LC-MS法对甲磺酸伊马替尼原料中的3个磺酸酯基因毒杂质—甲磺酸甲酯（MMS）、甲磺酸乙酯（EMS）、甲磺酸异丙酯（IPMS）进行定量检测。方法：选用Agilent Poroshell 120 SB-C18色谱柱（2.7μm,4.6 mm×100 mm）,以10mmol·L^-1甲酸铵（含0.1%甲酸）为流动相A,甲醇为流动相B,梯度洗脱[0 min（80%A-20%B）→5 min（10%A-90%B）→10 min（10%A-90%B）→10.5 min（80%A-20%B）→18.5 min（80%A-20%B）],流速为0.4 m L·min^-1。ESI正离子化SIM模式下对3种磺酸酯进行同时检测,雾化氮气压力0.3 MPa、温度300℃、流速10 L·min^-1,毛细管电压3 k V,传输电压30 V。结果：MMS在10-100 ng·m L^-1内线性关系良好（r=0.9988）,定量限为10 ng·m L^-1;EMS在5-50 ng·m L^-1内线性关系良好（r=0.9992）,定量限为5 ng·m L^-1;IPMS在10-100 ng·m L^-1内线性关系良好（r=0.9993）,定量限为10 ng·m L^-1。MMS、EMS、IPMS的回收率分别为99.86%、101.7%、103.8%。结论：经方法学验证,该法可用于甲磺酸伊马替尼中3个磺酸酯基因毒杂质的同时检测,能为质量控制提供参考。

关键词：甲磺酸伊马替尼甲磺酸甲酯(MMS) 甲磺酸乙酯(EMS) 甲磺酸异丙酯(IPMS) 酪氨酸激酶抑制剂基因毒杂质液相色谱-质谱联用

口蹄疫疫苗非抗原蛋白对146S抗原免疫效果的影响

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中国畜牧兽医 2019年第3期46卷 905-912页

作者：李明张雅娜郭晓宇高新桃李金祥朱鸿飞中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 北京信和翔科技有限责任公司北京100085 中国农业科学院生物技术研究所北京100081

为探究非抗原蛋白对口蹄疫病毒A型(FMDV-A) 146S抗原免疫效果的影响,本研究以小鼠和猪为试验动物,分别制备5组小鼠注射用样品:A组(3μg 146S抗原)、B组(3μg 146S抗原+25μg非抗原蛋白)、C组(3μg 146S抗原+50μg非抗原蛋白)、D组(3μg ... 详细信息

为探究非抗原蛋白对口蹄疫病毒A型(FMDV-A) 146S抗原免疫效果的影响,本研究以小鼠和猪为试验动物,分别制备5组小鼠注射用样品:A组(3μg 146S抗原)、B组(3μg 146S抗原+25μg非抗原蛋白)、C组(3μg 146S抗原+50μg非抗原蛋白)、D组(3μg 146S抗原+100μg非抗原蛋白)及E组(空白对照,PBS);同时制备4组猪注射用样品:A组(18μg 146S抗原)、B组(18μg 146S抗原+400μg非抗原蛋白)、C(18μg 146S抗原+4 000μg非抗原蛋白)及D组(空白对照,PBS)。免疫接种试验动物后,通过淋巴细胞增殖试验及实时荧光定量PCR评价比较不同疫苗样品组小鼠产生的细胞免疫应答水平,同时通过液相阻断ELISA方法检测、评价各试验组动物(小鼠和猪)产生的体液免疫应答水平。小鼠试验结果显示,在免疫后3个检测时间点内,4个试验组中C组的平均抗体水平最高,平均抗体效价分别为4.13、5.83和5.50,而D组的抗体水平最低,平均抗体效价分别为3.46、5.16和4.46;C组细胞增殖能力及Th-1型细胞因子IL-6、IFN-β和TNF-αmRNA表达量均高于其他组。猪试验结果显示,A组和B组间平均抗体水平差异不显著(P>0.05),但A组和B组的平均抗体效价均极显著高于C组(P<0.01)。综合上述结果表明,一定范围内少量非抗原蛋白对FMDV-A 146S抗原的免疫效果没有影响,而高浓度的非抗原蛋白则抑制FMDV-A 146S抗原的免疫效果。

关键词：非抗原蛋白口蹄疫 146S抗原免疫效果

牛分枝杆菌重组蛋白TB27.4的表达、纯化及活性鉴定

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中国畜牧兽医 2014年第8期41卷 61-65页

作者：高新桃李平俊鑫婷贾红郭晓宇张改梅李明刘淑清朱鸿飞许雷中国农业科学院研究生院北京100081 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

为探索TB27.4蛋白在牛结核病鉴别诊断中的作用,本试验以牛分枝杆菌ValleeⅢ株基因组DNA为模板,PCR扩增tb27.4全长基因片段,将其定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组质粒pET-TB27.4,优化原核表达条件,并用AKTA Purifier对蛋白... 详细信息

为探索TB27.4蛋白在牛结核病鉴别诊断中的作用,本试验以牛分枝杆菌ValleeⅢ株基因组DNA为模板,PCR扩增tb27.4全长基因片段,将其定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组质粒pET-TB27.4,优化原核表达条件,并用AKTA Purifier对蛋白的纯化条件进行优化。SDS-PAGE结果显示重组蛋白为可溶性表达,且大小与理论值相符,用牛分枝杆菌阳性血清进行Western blotting检测有特异性条带,且可特异性地刺激牛分枝杆菌感染牛外周血淋巴细胞释放大量IFN-γ。结果表明,重组蛋白TB27.4具有良好的B细胞活性和T细胞刺激活性,为进一步研究其在牛结核病诊断中的作用奠定了基础。

关键词：牛分枝杆菌 TB27 4 表达纯化活性鉴定

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2株猪繁殖与呼吸综合征病毒的致病性分析

中国畜牧兽医 2017年第5期44卷 1477-1483页

作者：李志隋修锟吴竞鑫婷李明高新桃姜一曈侯绍华天津市畜牧总站天津300402 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 比利时列日大学让布鲁农学院分子生物学实验室列日4000

为追踪猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)分离株的变异特点,本研究于2016年从河北和福建疑似猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)发病猪场采集病料,接种Marc-145细胞,产生合胞体样细胞病变,... 详细信息

为追踪猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)分离株的变异特点,本研究于2016年从河北和福建疑似猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)发病猪场采集病料,接种Marc-145细胞,产生合胞体样细胞病变,RT-PCR和间接免疫荧光试验鉴定为HP-PRRSV,将其分别命名为PRRSV CZ16A和NP16A。为研究PRRSV分离株CZ16A和NP16A对猪的致病性,将分离毒株经噬斑纯化后分别接种PRRSV抗原、抗体双阴性的60日龄健康仔猪,通过临床观察、解剖病理变化及病毒血症检测等指标初步探讨两株PRRSV的致病性。结果表明,分离株CZ16A和NP16A感染猪后均能够在动物体内复制,并引起体温升高,但两株PRRSV分离株均未引起试验动物的发病和死亡,剖检结果显示NP16A分离株能引起动物肺部实变、淋巴结肿大,其毒力比CZ16A分离株稍强。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒分离鉴定致病性分析

牛分枝杆菌TB9.8蛋白的表达及其诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞因子的分泌

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中国预防兽医学报 2014年第9期36卷 735-739页

作者：刘淑清贾红侯绍华鑫婷袁维峰郭晓宇张改梅高新桃李明吴竞董瑞凯朱鸿飞中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 中国农业科学院研究生院北京100081

为研究牛分枝杆菌TB9.8蛋白对小鼠巨噬细胞RAW264.7的生长及分泌细胞因子的影响,本研究将编码牛分枝杆菌TB9.8蛋白的基因克隆于pET-30a质粒中并在***中进行表达。经SDS-PAGE电泳和western blot分析表明,表达的重组蛋白(rTB9.8)约9.8 ku... 详细信息

为研究牛分枝杆菌TB9.8蛋白对小鼠巨噬细胞RAW264.7的生长及分泌细胞因子的影响,本研究将编码牛分枝杆菌TB9.8蛋白的基因克隆于pET-30a质粒中并在***中进行表达。经SDS-PAGE电泳和western blot分析表明,表达的重组蛋白(rTB9.8)约9.8 ku,具有良好抗原性。以不同剂量的纯化rTB9.8刺激巨噬细胞RAW264.7,采用动态实时细胞检测技术分析rTB9.8对RAW264.7生长影响的最佳时间点和最佳剂量,结果表明rTB9.8可以在8 h^24 h对RAW264.7细胞的增殖产生明显的抑制作用。此外,rTB9.8能够显著诱导RAW264.7细胞表达TNF-α、IL-6和IL-12。本实验为进一步研究牛分枝杆菌rTB9.8与宿主细胞相互作用提供了实验依据。

关键词：牛分枝杆菌 TB9.8 实时动态检测技术细胞因子

牛分枝杆菌Mb1230基因的表达纯化及其活性评价

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中国畜牧兽医 2015年第10期42卷 2544-2550页

作者：李明贾红鑫婷郭晓宇袁维锋侯邵华侯强高新桃吴竞董瑞凯杨宏军刘来兴朱鸿飞中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 山东省农业科学院奶牛研究中心济南250183

为了探究牛分枝杆菌Mb1230蛋白在牛结核病诊断中的应用价值,本试验利用PCR方法扩增出Mb1230基因,构建重组质粒pET-22b-Mb1230,经IPTG诱导表达后用亲和层析纯化重组蛋白,通过结核菌素皮内变态反应试验(TST试验)、IFN-γ释放试验(IGRA试验... 详细信息

为了探究牛分枝杆菌Mb1230蛋白在牛结核病诊断中的应用价值,本试验利用PCR方法扩增出Mb1230基因,构建重组质粒pET-22b-Mb1230,经IPTG诱导表达后用亲和层析纯化重组蛋白,通过结核菌素皮内变态反应试验(TST试验)、IFN-γ释放试验(IGRA试验)和间接ELISA对重组蛋白的活性进行评价。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,重组蛋白大小与理论值相符,且能与鼠抗His的抗体反应有特异性条带;在TST试验、IGRA试验和间接ELISA中也表现出抗原活性。结果表明,重组Mb1230蛋白具有良好的B细胞活性和T细胞活性,在牛结核病诊断中具有应用潜力。

关键词：牛分枝杆菌 Mb1230 原核表达牛结核病诊断