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人类精浆免疫抑制因子的研究——Ⅰ.分离和免疫活性测定

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生殖与避孕 1990年第3期10卷 11-15页

作者：高惠宝江鱼王益鑫王一飞朱炳法洪金秧上海第二医科大学男子计划生育研究室上海第二医科大学微生物教研室

本文介绍了人类精浆免疫抑制因子分离及免疫活性测定的全过程。通过低温高速离心,SephadexG-100凝胶过滤,DEAE离子交换层析等步骤从人精浆中分离出两种免疫抑制因子——DF_1和DF_2。DF_2达到聚丙烯酰胺凝胶电泳纯,呈单一蛋白带,DF_1呈... 详细信息

本文介绍了人类精浆免疫抑制因子分离及免疫活性测定的全过程。通过低温高速离心,SephadexG-100凝胶过滤,DEAE离子交换层析等步骤从人精浆中分离出两种免疫抑制因子——DF_1和DF_2。DF_2达到聚丙烯酰胺凝胶电泳纯,呈单一蛋白带,DF_1呈二条蛋白带。二者对PHA诱导的人外周血淋巴细胞转化和人外周血NK细胞活性均有抑制作用。100μg/ml培养液的DF_1和DF_2对PHA诱导的淋转抑制率分别为41.7%和68.2%;对NK细胞活性的抑制率分别为30.4%和81.5%。在PHA诱导的淋转中同时加入DF_1和DF_2,抑制率为80.7%。比较不同浓度的DF_1,DF_2对PHA诱导的淋转抑制作用结果表明:100μg/ml具有相对高的抑制活性。不同浓度的DF_2对NK活性抑制作用也表现出类似结果。

关键词：人精浆免疫抑制因子分离

人精浆免疫抑制因子对B淋巴细胞产生抗体的影响

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生殖与避孕 1991年第4期11卷 19-22页

作者：程丽萍倪培华朱云凤高惠宝王一飞上海第二医科大学

本文采用体内实验的方法,观察正常人精浆经sephadex G-100分离而得的第一组份(SF_1)对Balb/c小鼠B淋巴细胞的影响。实验采用SF_1腹腔注射为实验组,以生理盐水作对照组,四天后给予同量抗原绵羊红细胞(SRBC)刺激,在SRBC免疫后第三天、第四... 详细信息

本文采用体内实验的方法,观察正常人精浆经sephadex G-100分离而得的第一组份(SF_1)对Balb/c小鼠B淋巴细胞的影响。实验采用SF_1腹腔注射为实验组,以生理盐水作对照组,四天后给予同量抗原绵羊红细胞(SRBC)刺激,在SRBC免疫后第三天、第四天,第五天、第六天分别测定这二组小鼠的溶血空斑数和血清中的抗SRBC抗体的凝集效价。实验结果发现:实验组小鼠的溶血空斑数均明显低于对照组(P<0.01),实验组小鼠血清中的特异抗SRBC抗体的凝集效价也均低于对照组(P<0.05)。结果表明:正常人精浆提取物SF_1在异种小鼠体内有明显抑制B淋巴细胞对于抗原刺激转化为浆细胞的功能,同时也抑制了特异性抗体的产生。

关键词：人精浆免疫抑制因子 B细胞抗体

皮质酮诱导大鼠Leydig细胞凋亡是一经caspase-3激活的过程

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中国男科学杂志 2004年第6期18卷 7-11页

作者：游海燕高惠宝上海第二医科大学生化与分子生物学教研室上海200025

目的超生理剂量的皮质酮(大鼠体内的糖皮质激素)能诱导大鼠Leydig细胞凋亡。但有关皮质酮诱导Leydig细胞凋亡的细胞内机制尚不清楚。本研究旨在观察皮质酮是否经caspase-3激活的途径诱导大鼠Leydig细胞凋亡。方法采用WesternBlot方法检... 详细信息

目的超生理剂量的皮质酮(大鼠体内的糖皮质激素)能诱导大鼠Leydig细胞凋亡。但有关皮质酮诱导Leydig细胞凋亡的细胞内机制尚不清楚。本研究旨在观察皮质酮是否经caspase-3激活的途径诱导大鼠Leydig细胞凋亡。方法采用WesternBlot方法检测不同时间点上经皮质酮处理的大鼠Leydig细胞中caspase-3酶原及裂解的caspase-3酶表达情况。运用荧光发光法检测不同时间点上经皮质酮处理的大鼠Leydig细胞中caspase-3酶活性。结果caspase-3酶原表达水平在皮质酮处理6h时开始上升,12h及24h时表达量下降,而具生物活性的、裂解的caspase-3酶于12h时开始出现,24h时的表达水平最为显著。caspase-3酶活性在皮质酮处理12h时明显升高,以24h时最为显著。Caspase-3抑制剂DEVD-CHO对经皮质酮处理12、24及48h的Leydig细胞中的caspase-3酶活性均具有明显的抑制作用,加caspase-3抑制剂的处理组其细胞基因组DNA电泳未见有凋亡特征性的梯状条带。结论皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞凋亡是一经caspase-3激活的过程。

关键词：皮质酮 Leydig细胞凋亡caspase-3

皮质酮诱导的Leydig细胞凋亡中Egr的表达及其作用

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中国男科学杂志 2007年第4期21卷 31-35页

作者：冯星高惠宝上海交通大学医学院生化与分子生物学教研室上海200025

目的评价皮质酮是否通过活化钙调神经磷酸酶(CaN)来诱导Leydig细胞中转录因子Egr-2及Egr-3的表达及两种Egr对皮质酮诱导的Leydig细胞凋亡的影响。方法采用RT-PCR方法检测CaN的抑制剂环孢菌素A(CsA)对经皮质酮处理的Leydig细胞中Egr-2及E... 详细信息

目的评价皮质酮是否通过活化钙调神经磷酸酶(CaN)来诱导Leydig细胞中转录因子Egr-2及Egr-3的表达及两种Egr对皮质酮诱导的Leydig细胞凋亡的影响。方法采用RT-PCR方法检测CaN的抑制剂环孢菌素A(CsA)对经皮质酮处理的Leydig细胞中Egr-2及Egr-3的mRNA表达水平;用Annexin-Ⅴ-FITC和PI双标法评价Egr-2和Egr-3的表达载体对Leydig细胞凋亡率的影响。结果皮质酮能诱导Leydig细胞中Egr-2及Egr-3的表达,且该诱导作用可被CsA抑制;过量表达的Egr-2及Egr-3均可使经皮质酮诱导的Leydig细胞凋亡率增加,并以Egr-3的作用较为显著。结论高浓度的皮质酮可通过活化CaN诱导Leydig细胞中Egr-2和Egr-3的表达,两种Egr对经皮质酮诱导的Leydig细胞的凋亡均具有促进作用。

关键词：皮质酮莱迪希细胞细胞凋亡 Egr

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中国人附睾功能指标—精浆肉毒碱研究

生殖与避孕 1989年第2期9卷 12-15页

作者：吴明章董赛珍高惠宝秦石晓潘碧霞杨琦王一飞上海第二医科大学

精浆肉毒碱90%左右来源于附睾,是附睾的功能性指标。有关实验证明附睾分泌的肉毒碱是精子在附睾中成熟的重要因素,因此是精子在附睾中成熟的重要功能性指标。本文测定了156例中国正常生育力男子精浆中的肉毒碱,并研讨了精浆肉毒碱与精... 详细信息

精浆肉毒碱90%左右来源于附睾,是附睾的功能性指标。有关实验证明附睾分泌的肉毒碱是精子在附睾中成熟的重要因素,因此是精子在附睾中成熟的重要功能性指标。本文测定了156例中国正常生育力男子精浆中的肉毒碱,并研讨了精浆肉毒碱与精液其他指标的关系。156例精液的几个主要指标: 精子存活率63.36±18.18%;精子密度111.06±90.83×10~6/ml;精子活动度:均在Ⅱ级及Ⅲ级以上;精液体积3.239±0.532ml; 精浆肉毒碱含量: 每毫升精浆肉毒碱量:239.56±105.59nmol/ml 精浆中肉毒碱总量:757.34±471.72nmol 精浆肉毒碱与精子存活率,精子密度及活动度均有相关性。

关键词：附睾附睾功能精浆肉毒碱

人类精浆免疫抑制因子的研究——Ⅱ.理化性质分析

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生殖与避孕 1990年第3期10卷 16-19页

作者：高惠宝江鱼王益鑫王一飞朱炳法洪金秧上海第二医科大学男子计划生育研究室上海第二医科大学微生物教研室

作者对人精浆中分离出的两种具有免疫抑制活性的因子——DF_1和DF_2进行理化性质分析,发现DF_2分子量为52,000,DF_1分子量77,000和88,000。前者PI范围为3.8～4.2,后者4.0～5.8。氨基酸组成和含量测定发现,DF_2富含酸性氨基酸。DF_1,DF_... 详细信息

作者对人精浆中分离出的两种具有免疫抑制活性的因子——DF_1和DF_2进行理化性质分析,发现DF_2分子量为52,000,DF_1分子量77,000和88,000。前者PI范围为3.8～4.2,后者4.0～5.8。氨基酸组成和含量测定发现,DF_2富含酸性氨基酸。DF_1,DF_2经甲苯胺兰染色显示出糖蛋白特征区带。Zn、多胺及果糖测定发现DF_2富含Zn,两者多胺及果糖含量均为零。

关键词：人精浆免疫抑制因子

Ca^(2+)和CaN凋亡信号通路参与皮质酮诱导的Leydig细胞凋亡中FasL的表达

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中国男科学杂志 2006年第2期20卷 4-9页

作者：陈亮王骞高惠宝上海交通大学医学院生化与分子生物学教研室上海200025

目的观察在皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞凋亡中,Ca2+和钙调神经磷酸酶(CaN)依赖的信号通路是否参与FasL表达的调控。方法利用钙定性探针Fluo-3/AM检测皮质酮作用下的Leydig细胞中Ca2+浓度变化。通过酶底物法测定CaN活性。以Westernblot检... 详细信息

目的观察在皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞凋亡中,Ca2+和钙调神经磷酸酶(CaN)依赖的信号通路是否参与FasL表达的调控。方法利用钙定性探针Fluo-3/AM检测皮质酮作用下的Leydig细胞中Ca2+浓度变化。通过酶底物法测定CaN活性。以Westernblot检测FasL表达。用Annexin-Ⅴ-FITC和PI双标评价Leydig细胞凋亡率。结果经超生理剂量皮质酮处理的Leydig细胞中出现Ca2+浓度升高,CaN活性增加及FasL表达增加。环孢菌素A可抑制CaN活性,使FasL表达下调,细胞凋亡率下降。结论Ca2+和CaN依赖的信号通路参与了皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞凋亡;CaN介导了由Ca2+引发的FasL表达,Ca2+和CaN在大鼠Leydig细胞凋亡过程中起重要作用。

关键词：钙皮质酮 Leydig细胞凋亡

FasL启动子调控的报告基因表达质粒的构建及活性分析

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中国男科学杂志 2006年第4期20卷 4-6,10页

作者：柴蔚然高惠宝上海交通大学医学院生物化学与分子生物学教研室上海200025

目的扩增FasL启动子并构建带有FasL启动子的荧光素酶报告质粒,并评价在皮质酮(啮齿类动物体内的糖皮质激素)作用的睾丸Leydig细胞中,由FasL启动子调控的荧光素酶的表达活性。本研究将为进一步分析Leydig细胞中FasL启动子转录调控的作用... 详细信息

目的扩增FasL启动子并构建带有FasL启动子的荧光素酶报告质粒,并评价在皮质酮(啮齿类动物体内的糖皮质激素)作用的睾丸Leydig细胞中,由FasL启动子调控的荧光素酶的表达活性。本研究将为进一步分析Leydig细胞中FasL启动子转录调控的作用机制奠定基础。方法采用DNA重组技术构建由FasL启动子调控的荧光素酶报告基因的表达质粒。此重组质粒经阳离子脂质体LipofectAMINE介导,瞬时转染入Leydig细胞中,36h后细胞经皮质酮处理,并于48h时收集细胞。测定荧光素酶的相对表达活性。结果(1)酶切及测序证实成功扩增FasL基因启动子并构建了带有FasL基因启动子的报告基因表达质粒；(2)皮质酮处理的Leydig细胞中FasL启动子调控的荧光素酶表达质粒的表达活性显著增高。结论构建成功的带有FasL启动子的荧光素酶报告质粒可准确地评价FasL启动子在凋亡过程中的作用。

关键词： FasL启动子报告基因表达载体 Leydig细胞皮质酮

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大鼠内源性糖皮质激素对间质细胞功能的影响

男性学杂志 1997年第2期11卷 65-70页

作者：高惠宝 GE Renshan M.P.Hardy 上海第二医科大学生殖生物学实验室人口委员会生物医学研究中心（美国）

本文旨在评价大鼠体内糖皮质激素（大鼠体内是皮质酮）对间质细胞中睾酮合成和１１－β羟类固醇脱氢酶（１１β－ＨＳＤ）活性的影响。为观察内源性皮质酮对间质细胞中睾酮合成的影响，本文测定了切除肾上腺雄性大鼠（４５天龄）血清皮... 详细信息

本文旨在评价大鼠体内糖皮质激素（大鼠体内是皮质酮）对间质细胞中睾酮合成和１１－β羟类固醇脱氢酶（１１β－ＨＳＤ）活性的影响。为观察内源性皮质酮对间质细胞中睾酮合成的影响，本文测定了切除肾上腺雄性大鼠（４５天龄）血清皮质酮、睾酮，ＬＨ含量和经ＬＨ刺激的纯化间质细胞中睾酮生成量及纯化间质细胞中１１β－ＨＳＤ活性水平。结果表明，切除肾上腺后大鼠血清睾酮水平高于手术对照组及切除后补充皮质酮大鼠。切除肾上腺后大鼠和切除后补充皮质酮大鼠血清ＬＨ水平均无明显变化，表明在上述二实验组中，由于内源性皮质酮变化而导致的间质细胞中睾酮生成的变化不依赖ＬＨ的存在。切除肾上腺后大鼠其纯化的间质细胞睾酮生成量比对照组增加一倍。但经补充皮质酮后睾酮生成量被抑制到对照组水平以下，表明给切除肾上腺后大鼠补充皮质酮能明显地抑制睾酮生成。切除肾上腺后大鼠间质细胞中１１β－ＨＳＤ活性降低，并且这一降低可经补充皮质酮得到恢复。上述结果表明生理性浓度皮质酮对间质细胞中睾酮合成行使直接的负性控制，同时诱导细胞内１１β－ＨＳＤ活性，由此保护间质细胞中睾酮合成免于受到糖皮质激素的过度抑制。

关键词：糖皮质激素间质细胞睾酮合成 11β-HSD