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FK1706对神经源性膀胱大鼠膀胱形态恢复的作用

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中华实验外科杂志 2024年第2期41卷 276-278页

作者：李云龙何翔飞高宛生郑州大学第一附属医院泌尿外科郑州450052

目的探讨FK1706对神经吻合后神经源性膀胱(NB)大鼠膀胱形态恢复的影响。方法 40只健康成年雄性SD大鼠(河南省实验动物中心提供)按照随机数字表法分为FK1706+神经端侧吻合组(FK1706+ECG, 15只)、神经端侧吻合组(ECG, 15只)和手术对照组(S... 详细信息

目的探讨FK1706对神经吻合后神经源性膀胱(NB)大鼠膀胱形态恢复的影响。方法 40只健康成年雄性SD大鼠(河南省实验动物中心提供)按照随机数字表法分为FK1706+神经端侧吻合组(FK1706+ECG, 15只)、神经端侧吻合组(ECG, 15只)和手术对照组(SCG, 10只)。FK1706+ECG大鼠先离断左侧腰6(L6)和骶1(S1)脊神经前后根, 然后将左侧L6前根端侧吻合到左侧L4前根上, 术后连续8周给予皮下注射FK1706溶液(0.32 mg/kg);ECG大鼠手术方法同FK1706+ECG大鼠, 术后连续8周注射相同剂量的30%的二甲基亚砜(DMSO);SCG大鼠离断左侧L6后根和S1前后根, 作为手术对照组, 术后连续8周注射相同剂量的30%的DMSO。术后4个月, 麻醉3组大鼠, 打开下腹部, 暴露膀胱, 取出膀胱并称重, 剪开膀胱并测量膀胱壁厚度, 比较3组大鼠膀胱湿重及膀胱壁厚度。之后将膀胱标本置于10%的福马林中, 并放在4 ℃冰箱保存, 将膀胱标本制作成石蜡切片, 然后行苏木精-伊红(HE)和苦味酸-酸性品红(VG)染色, 显微镜下观察并拍照, 进行图像分析, 计算并比较3组大鼠膀胱纤维化面积。两样本均数比较采用t检验。结果 FK1706+ECG组大鼠膀胱湿重[(0.291±0.023) g]和膀胱壁厚度[(1.613±0.051) mm]明显高于SCG组[(0.122±0.017) g和(1.169±0.035) mm, t=19.463、23.537, P<0.01], 但低于ECG组[(0.415±0.032) g和(2.005±0.075) mm, t=11.345、15.583, P<0.01]。HE染色显示:SCG组大鼠膀胱组织形态正常, 上皮扁平, 肌束排列整齐, 肌束间结缔组织紧密;FK1706+ECG组和ECG组大鼠膀胱肌层排列不规则, 并且有水肿, 但FK1706+ECG组大鼠的肌层排列不规则和水肿程度较ECG组轻。VG染色显示:FK1706+ECG大鼠和ECG大鼠膀胱纤维化面积[(16.99±2.45)%比(19.99±2.55)%]明显大于SCG大鼠膀胱纤维化面积[(11.10±1.38)%, t=6.796、9.928, P<0.01], 但是FK1706+ECG大鼠膀胱纤维化程度较ECG大鼠轻(t=3.059, P<0.01)。结论 FK1706能够促进神经吻合后NB大鼠膀胱形态的恢复。

关键词： FK1706 纤维化膀胱形态大鼠

去泛素化酶USP36通过调控线粒体裂变与融合减轻缺血再灌注损伤-肾纤维化

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中华实验外科杂志 2024年第6期41卷 1163-1167页

作者：张建伟高宛生李书强师磊王焱刘浩郑州大学第一附属医院泌尿外科郑州

目的探究去泛素化酶USP36在缺血再灌注-肾纤维化过程的作用及机制。方法建立体内外缺血再灌注损伤肾纤维化模型, 利用蛋白免疫印迹检测USP36、线粒体融合蛋白2(MFN2)及纤维化相关蛋白表达, 利用马松(Masson)染色和天狼猩红(Sirius Red)... 详细信息

目的探究去泛素化酶USP36在缺血再灌注-肾纤维化过程的作用及机制。方法建立体内外缺血再灌注损伤肾纤维化模型, 利用蛋白免疫印迹检测USP36、线粒体融合蛋白2(MFN2)及纤维化相关蛋白表达, 利用马松(Masson)染色和天狼猩红(Sirius Red)染色评估肾组织间质纤维化, 透射扫描电镜观察肾组织中线粒体形态, Mito-Tracker染色观察线粒体裂变与融合, 蛋白免疫共沉淀检测MFN2蛋白泛素化修饰。两组间差异比较采用t检验, 多组间差异比较采用方差分析(ANOVA)。结果小鼠和细胞实验中USP36蛋白表达(1.001±0.125、0.994±0.113)均高于模型组(0.269±0.071、0.195±0.054), 差异有统计学意义(t=11.42、14.23, P<0.01);动物实验对照组Collagen Ⅰ和α-SMA蛋白表达(1.012±0.070、1.008±0.067)低于模型组(2.899±0.187、2.265±0.209), 差异有统计学意义(t=21.16、17.66, P<0.01);细胞实验对照组Collagen Ⅰ和α-SMA蛋白表达(1.039±0.081、0.997±0.096)低于模型组(3.067±0.311、2.619±0.116), 差异有统计学意义(t=16.36、18.58, P<0.01);Massion染色和Sirious Red染色显示缺血再灌注损伤引起细胞外基质沉积;动物实验IRI+Vector组Collagen Ⅰ和α-SMA蛋白表达(3.689±0.460、2.257±0.197)高于IRI+OE-USP36组(1.889±0.314、1.525±0.103), 差异有统计学意义(t=7.22、7.36, P<0.01);细胞实验H/R+Vector组Collagen Ⅰ和α-SMA蛋白表达(3.298±0.168、4.309±0.283)高于H/R+OE-USP36组(1.409±0.127、1.530±0.176), 差异有统计学意义(t=20.06、18.67, P<0.01);过表达USP36减少缺血再灌注损伤引起的细胞外基质沉积;IRI+Vector组和H/R+Vector组MFN2蛋白(0.276±0.063、0.247±0.105)低于IRI+ OE-USP36组和H/R+OE-USP36组MFN2蛋白表达(0.789±0.201、0.746±0.105), 差异有统计学意义(t=8.45、9.27, P<0.01)。在细胞缺氧复氧过程, 过表达USP36抑制肾小管上皮细胞线粒体裂变, 促进线粒体融合;USP36通过去泛素化MFN2, 抑制MFN2蛋白-酶体降解, 从而促进线粒体融合。结论缺血再灌注损伤-肾纤维化过程去泛素化酶USP36通过去泛素化MFN2蛋白修饰, 抑制MFN2蛋白-酶体降解从而稳定MFN2蛋白, 促进线粒体融合, 最终减轻肾纤维化。

关键词：缺血再灌注损伤肾纤维化线粒体融合蛋白2 线粒体裂变

微小RNA-29a通过第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因-磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白信号通路调节人神经母细胞瘤细胞的增殖和轴突生长

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中华实验外科杂志 2024年第2期41卷 272-275页

作者：高宛生杨晗兰昌达谢宗蕃李东升杨彦峰郑州大学第一附属医院泌尿外科郑州450052 信阳市中心医院泌尿外科信阳464000

目的通过体外培养人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)观察微小RNA(miRNA)-29a与第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)的调节对神经细胞增殖和轴突生长的作用。方法通过上海中科院细胞库购买的SH-SY5Y细胞经过体外培养(4×10^... 详细信息

目的通过体外培养人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)观察微小RNA(miRNA)-29a与第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)的调节对神经细胞增殖和轴突生长的作用。方法通过上海中科院细胞库购买的SH-SY5Y细胞经过体外培养(4×10^(4)/ml)分别转染miRNA-29a的激动剂和抑制剂(40 nmol/L),构建miRNA-29a不同表达水平的细胞。通过实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测细胞转染效果(转染24 h)和人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因表达水平(转染48 h)。转染72 h后通过蛋白免疫印迹(Western blot)检测不同细胞中PTEN、Akt和mTOR蛋白的表达和磷酸化水平,通过神经形态学和二苯基四氮唑溴盐比色法(MTT)检测细胞的增殖和轴突长度。通过单因素方差分析及LSD-t法检验比较各组数据。结果转染miRNA-29a激动剂组的miRNA-29a表达水平明显高于miRNA-29a抑制组(9.03±0.12比0.31±0.03,t=241.70,P<0.05),而激动组PTEN基因和蛋白的表达水平明显低于抑制组(0.31±0.02比3.26±0.23、0.30±0.06比3.36±0.15,t=45.09、58.79,P<0.05)。miRNA-29a激动组中Akt、mTOR蛋白的磷酸化水平明显高于抑制组(3.26±0.13比0.42±0.03、2.57±0.13比0.31±0.04,t=71.45、51.55,P<0.05)。在miRNA-29a激动组中,SH-SY5Y细胞增殖活性和轴突长度明显高于miRNA-29a抑制组[0.86±0.07比0.44±0.03、(157.56±11.13)μm比(43.48±4.92)μm,t=13.89、31.11,P<0.05]。结论miRNA-29a可以通过干预PTEN表达,调节磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt/mTOR信号通路中Akt和mTOR蛋白的磷酸化水平,促进SH-SY5Y细胞增殖和轴突生长。

关键词：微小RNA 细胞增殖轴突生长

长链非编码RNA CCAT1对膀胱癌细胞增殖、迁移和耐药的影响及其机制

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中华实验外科杂志 2022年第6期39卷 1050-1053页

作者：张慧明高宛生葛玉坤乔庆东新乡市中心医院新乡医学院第四临床学院泌尿外科453000 郑州大学第一附属医院泌尿外科 450000

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA) CCAT1对膀胱癌细胞增殖、迁移和耐药的影响及其机制。方法选取2019年6月到2021年6月新乡市中心医院收治的71例膀胱癌标本作为研究对象, 采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析肿瘤组织和癌旁组织lncRNA CCAT... 详细信息

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA) CCAT1对膀胱癌细胞增殖、迁移和耐药的影响及其机制。方法选取2019年6月到2021年6月新乡市中心医院收治的71例膀胱癌标本作为研究对象, 采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析肿瘤组织和癌旁组织lncRNA CCAT1表达水平。采用浓度梯度递增法建立顺铂耐药细胞株T24/顺铂(DDP), 分别采用对照lncRNA和lncRNA CCAT1敲降慢病毒感染T24和T24/DDP细胞系, 分别为T24/对照组, T24/CCAT1 KD组, T24/DDP对照组和T24/DDP CCAT1 KD组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)分析细胞的增殖能力;采用划痕实验和Transwell实验分析细胞的迁移能力;采用流式细胞术分析细胞的耐药能力。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析lncRNA CCAT1靶基因, 采用荧光定量PCR分析靶基因表达水平, 组间比较采用t检验。结果癌旁组织中lncRNA CCAT1表达水平(1.03±0.18)明显低于膀胱癌组织(2.78±0.48), 差异有统计学意义(t=28.341, P<0.05)。T24-对照组细胞24、48、72 h吸光度值(0.92±0.03、1.49±0.06、2.00±0.03)明显高于T24-CCAT1 KD组(0.70±0.06、1.17±0.04、1.56±0.10), 差异均有统计学意义(F=3.108, P<0.05)。T24-对照组细胞划痕愈合率[(87.75±3.50)%]明显高于T24-CCAT1 KD组[(1.03±0.18)%], 差异均有统计学意义(t=8.555, P<0.05)。T24-对照组细胞迁移数量[(123.25±17.08)个]明显高于T24-CCAT1 KD组[(90.75±11.32)个], 差异均有统计学意义(t=3.172, P<0.05)。T24/DDP对照组经顺铂处理后24、48、72 h吸光度值(0.73±0.09、1.27±0.10、1.84±0.12)明显高于T24/DDP CCAT1 KD组细胞(0.52±0.03、0.91±0.03、1.36±0.04), 差异均有统计学意义(F=4.094, P<0.05)。双荧光素酶报告基因显示lncRNA CCAT1是微小RNA(miR)-490-3p的海绵。T24/对照组细胞miR-490-3p表达水平(1.21±0.10)明显低于T24/CCAT1 KD组细胞(2.30±0.20), 差异有统计学意义(t=9.699, P<0.05)。结论 lncRNA CCAT1在膀胱癌中呈高表达, 通过miR-490-3p调节着膀胱癌细胞的增殖、迁移和耐药等过程。

关键词：长链非编码RNA 微小RNA 膀胱癌增殖迁移耐药

FK1706对神经源性膀胱大鼠膀胱功能恢复的研究

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中华实验外科杂志 2023年第3期40卷 498-500页

作者：李云龙何翔飞高宛生文建国郑州大学第一附属医院泌尿外科郑州450052

目的探讨FK1706对神经吻合后神经源性膀胱(NB)大鼠膀胱功能恢复的研究。方法40只健康成年雄性SD大鼠(河南省实验动物中心提供)按照随机数字表法分为FK1706+神经端侧吻合组(FK1706+ECG)15只、神经端侧吻合组(ECG)15只和手术对照组(SCG)1... 详细信息

目的探讨FK1706对神经吻合后神经源性膀胱(NB)大鼠膀胱功能恢复的研究。方法40只健康成年雄性SD大鼠(河南省实验动物中心提供)按照随机数字表法分为FK1706+神经端侧吻合组(FK1706+ECG)15只、神经端侧吻合组(ECG)15只和手术对照组(SCG)10只。FK1706+ECG大鼠先离断左侧腰6(L6)和骶1(S1)脊神经前后根,然后将左侧L6前根端侧吻合到左侧L4前根上,术后连续8周给予皮下注射FK1706溶液(0.32 mg/kg);ECG大鼠手术方法同FK1706+ECG大鼠,术后连续8周注射相同剂量的30%的二甲基亚砜(DMSO);SCG大鼠离断左侧L6后根和S1前后根,作为手术对照组,术后连续8周注射相同剂量的30%的DMSO。术后4个月,3组大鼠行尿动力学测定和神经根电刺激膀胱压力测定,比较不同组大鼠的膀胱功能。两组间比较采用t检验,3组间比较采用单因素方差分析。结果电刺激SCG组大鼠左侧L6VR膀胱压力升高为(34.7±3.9)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),电刺激FK1706+ECG组和ECG组大鼠吻合口近端L4VR膀胱压力升高值分别为[(22.5±2.8)、(17.9±3.2)mmHg],电刺激FK1706+ECG组大鼠膀胱压力升高值低于SCG组(t=9.104,P0.05)。结论FK1706能促进神经吻合后NB大鼠膀胱功能的恢复。

关键词： FK1706 尿动力学膀胱功能大鼠

围手术期快速康复护理对腹腔镜前列腺癌根治术患者免疫功能的影响

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肿瘤基础与临床 2023年第4期36卷 361-363页

作者：赵会平张道秀高宛生王航郑州大学第一附属医院泌尿外科河南郑州450053

目的探讨围手术期加速康复外科护理对腹腔镜前列腺癌根治术患者免疫功能的影响。方法选择2020年6月至2021年6月郑州大学第一附属医院收治的腹腔镜前列腺癌根治术患者60例,采用随机数学表法将患者均分为2组,每组30例。对照组患者给予... 详细信息

目的探讨围手术期加速康复外科护理对腹腔镜前列腺癌根治术患者免疫功能的影响。方法选择2020年6月至2021年6月郑州大学第一附属医院收治的腹腔镜前列腺癌根治术患者60例,采用随机数学表法将患者均分为2组,每组30例。对照组患者给予常规护理,观察组患者给予围手术期加速康复外科护理,比较2组患者手术前后疼痛情况、手术后并发症发生情况及手术后细胞免疫指标。结果观察组患者手术后疼痛值为(2.14±1.15)分,低于对照组的(3.33±1.84)分(t=3.004,P=0.004)。观察组患者手术后并发症总发生率为3.33%,低于对照组的16.67%(χ^(2)=9.886,P=0.002)。观察组患者手术后CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)分别为(59.52±8.21)%、(38.91±5.15)%、(1.26±0.27),均高于对照组的(53.78±7.93)%、(33.33±5.14)%、1.13±0.22(t=2.754,P=0.008;t=4.200,P=0.001;t=2.044,P=0.046)。结论腹腔镜前列腺癌根治术患者应用围手术期加速康复外科护理后,并发症发生风险低,术后疼痛感更轻,免疫功能恢复较理想,建议临床推广应用。

关键词：围手术期加速康复外科护理腹腔镜前列腺癌根治术免疫功能

内脏神经-体神经端侧吻合后神经纤维再生研究

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中华实验外科杂志 2010年第5期27卷 629-630页

作者：高宛生李兵华中科技大学同济医学院附属协和医院泌尿外科武汉430022

目的观察大鼠内脏神经-体神经端侧吻合后神经纤维的再生。方法24只成年SD大鼠随机分为实验组（n=12）和正常对照组（n=12），实验组大鼠通过内脏神经-体神经端侧吻合建立人工体神经-内脏神经反射弧6个月后，在吻合口近端和远端分别截取1... 详细信息

目的观察大鼠内脏神经-体神经端侧吻合后神经纤维的再生。方法24只成年SD大鼠随机分为实验组（n=12）和正常对照组（n=12），实验组大鼠通过内脏神经-体神经端侧吻合建立人工体神经-内脏神经反射弧6个月后，在吻合口近端和远端分别截取10mm的供体神经（L。VR）和受体神经（kVR），在kVR延续的盆副交感神经（PPN）和阴部神经（PN）分别截取10mm的神经。正常对照组大鼠分别取相应节段的L4VR、L6VR、PPN和PN神经。标本经石蜡包埋切片并行甲苯胺蓝染色，比较实验组和对照组大鼠L。VR、PPN、PN神经纤维数量。结果实验组大鼠横断面可见新生的有髓神经纤维，L6VR、L6VR、PPN和PN的神经纤维数量分别为1602．2±75．7、1037．9±123．6、817．0±52．2、510．4±29．1，吻合口远近端神经纤维通过率为64．8％，实验组和对照组大鼠相应的kVR、PPN、PN神经纤维数目比率分别为70．2％、68．9％和62．2％。结论大鼠内脏神经．体神经端侧吻合后体神经能够长入并替代内脏神经。

关键词：端侧吻合神经再生体神经自主神经

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滇西斑岩铜钼矿带的地质特征及成矿控制因素

云南地质 1982年第3期 224-233页

作者：高宛生云南省地质局

本文在区划资料的基础上,综述滇西中——酸性斑岩的成岩差异性和成矿控制的共同性。论述三个方面的主要内容:1、依据区域成矿地质背景如斑岩体时空分布的特点,划分出喜山、印支两个主要的成矿期;其大地构造环境分属于岛弧区和大陆边缘区... 详细信息

本文在区划资料的基础上,综述滇西中——酸性斑岩的成岩差异性和成矿控制的共同性。论述三个方面的主要内容:1、依据区域成矿地质背景如斑岩体时空分布的特点,划分出喜山、印支两个主要的成矿期;其大地构造环境分属于岛弧区和大陆边缘区,因而出现斑岩型和似斑岩型矿床。2、与中——酸性斑岩有关的铜、钼复合矿床初步归纳了矿化岩体的主要地质特征,并划分了不同的矿化类型。3、初步阐明了岩浆岩、构造、围岩三种因素,对斑岩矿床的成矿控制作用。矿床主要受三种地质因素综合作用的结果,所不同的仅是各矿化岩体中有主、次关系的差别而已。

关键词：成矿控制因素地质特征滇西酸性斑岩矿化无机化花岗斑岩矿带矿化富集共生组合岩石化学性质岩石性质铜矿点斑岩矿床斑岩型矿床

肾上腺静脉采血和CT在原醛分型诊断一致性研究

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临床泌尿外科杂志 2023年第8期38卷 609-612页

作者：张慧明黄文波葛玉坤高宛生新乡市中心医院新乡医学院第四临床学院泌尿外科河南新乡453000 九江学院第二附属医院泌尿外科郑州大学第一附属医院泌尿外科

目的探讨肾上腺静脉采血(adrenal venous sampling,AVS)和计算机断层扫描(CT)在原发性醛固酮增多症(原醛)患者中分型诊断的一致性。方法分析2018年1月—2022年6月郑州大学第一附属医院收治的120例原醛患者的临床资料,其中男61例,女59例... 详细信息

目的探讨肾上腺静脉采血(adrenal venous sampling,AVS)和计算机断层扫描(CT)在原发性醛固酮增多症(原醛)患者中分型诊断的一致性。方法分析2018年1月—2022年6月郑州大学第一附属医院收治的120例原醛患者的临床资料,其中男61例,女59例;中位年龄49.5岁。依据年龄将患者分为年轻组35例(年龄<40岁),中老年组85例(年龄≥40岁)。使用独立样本t检验、χ^(2)检验及Kappa值分析组间差异,分析CT和AVS在原醛患者术前评估中的诊断价值,探讨不同方法在不同年龄原醛患者中术前诊断的一致性。结果CT和AVS对原醛分型诊断一致性中等,Kappa值为0.600,P<0.05;年轻组(<40岁)原醛患者CT分型诊断同AVS一致率为77.1%(27/35),中老年组(≥40岁)CT分型诊断同AVS一致率为72.9%(62/85),2组比较差异无统计学意义(χ^(2)=0.228,P=0.633)。结论AVS和CT在原醛患者术前分型诊断中的一致性中等,年轻组和中老年组CT分型诊断同AVS一致率方面无明显差异。

关键词：肾上腺静脉采血计算机断层扫描原发性醛固酮增多症诊断一致性