检索结果-南通市图书馆

抗人白细胞间素—2McAb亲和力排列及亲和指数的测定

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单克隆抗体通讯 1990年第1期6卷 11-14页

作者：王小宁高基民马筠李文简马贤凯汪美先第一军医大学免疫学教研室北京第二传染病医院肝炎研究所军事医学科学院基础所分子遗传室第四军医大学微生物学教研室

利用蛋白浓度校正的ELISA稀释曲线快速确定了抗人白细胞间素-2(IL-2)单克隆抗体(McAb)的亲和力排列。该排列与用竞争ELISA测定的亲和常数(K_D值)相一致。为了更实际地确定McAb的用途,又用十二烷基磺酸钠(SDS)等解离因素,建立了反映 McA... 详细信息

利用蛋白浓度校正的ELISA稀释曲线快速确定了抗人白细胞间素-2(IL-2)单克隆抗体(McAb)的亲和力排列。该排列与用竞争ELISA测定的亲和常数(K_D值)相一致。为了更实际地确定McAb的用途,又用十二烷基磺酸钠(SDS)等解离因素,建立了反映 McAb在实际应用时亲和力变化强度的吸附-解离ELISA,测定McAb的亲和指数(ID)。根据亲和力排列和亲和指数可更准确地取舍McAb,供检测或亲和色谱使用。

关键词：白细胞介素亲和力单克隆抗体

人冠状病毒NL63受体结合区蛋白的原核表达纯化与鉴定

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病毒学报 2013年第2期29卷 106-111页

作者：常慧伊瑶赵敏周为民赵国霞王慧娟毕胜利高基民刘冰谭文杰吉林大学白求恩医学院遗传学系长春130021 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 温州医学院医学病毒学研究所温州325000

人冠状病毒NL63受体结合区蛋白是其免疫学诊断和疫苗研究的主要靶点,在受体吸附、病毒进入细胞及膜融合中起关键作用。本研究在***系统中进行人冠状病毒NL63受体结合区(RBD)大、小蛋白的表达纯化,并对其进行免疫学鉴定。首先密码子优化... 详细信息

人冠状病毒NL63受体结合区蛋白是其免疫学诊断和疫苗研究的主要靶点,在受体吸附、病毒进入细胞及膜融合中起关键作用。本研究在***系统中进行人冠状病毒NL63受体结合区(RBD)大、小蛋白的表达纯化,并对其进行免疫学鉴定。首先密码子优化设计合成了HCoV-NL63的RBD大片段(RL:232-684aa)与小片段(RS:476-616aa)的编码基因,并将其克隆进硫氧还蛋白表达载体pM48,构建了人冠状病毒NL63的受体结合区蛋白(RBD)大(RL)、小(RS)片段与硫氧还蛋白的融合表达质粒;转化*** BL21pLys S,利用IPTG进行诱导表达,用镍亲和层析对蛋白进行纯化,并以表达HCoV-NL63RL与RS蛋白的重组痘苗病毒免疫小鼠血清对重组蛋白进行免疫印迹鉴定。结果表明在37℃,0.8mM IPTG诱导4h时,蛋白表达量达到最高,融合蛋白主要以包涵体形式表达,纯化后纯度可达95%以上。Western blot显示,两个融合蛋白均与痘苗病毒(天坛株)表达的HCoV-NL63RL与RS蛋白免疫的小鼠血清发生特异性反应。本研究首次在国内用原核系统表达纯化并鉴定了人冠状病毒NL63受体结合区大小蛋白(RL和RS),为人冠状病毒NL63感染的免疫学检测与疫苗研究提供了基础。

关键词： HCoV NL63 受体结合区蛋白重组蛋白表达大肠杆菌

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二聚体化对转录的调节作用

国外医学（分子生物学分册） 1991年第4期13卷 190-192页

作者： Jones N 高基民

基因转录的调控涉及蛋白质因子与特异的DNA序列的元件(elements)的相互作用。这些“元件”在基因的启动子内的排列状况确定了该基因的转录方式。近年来,对这种能与特异的DNA序列结合的蛋白质因子的发现、鉴定和克隆方面已有长足的发展... 详细信息

基因转录的调控涉及蛋白质因子与特异的DNA序列的元件(elements)的相互作用。这些“元件”在基因的启动子内的排列状况确定了该基因的转录方式。近年来,对这种能与特异的DNA序列结合的蛋白质因子的发现、鉴定和克隆方面已有长足的发展。许多已鉴定的启动子元件不但能与一种特异的结合蛋白质相互作用。

关键词：二聚体基因转录调节

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新型隐球菌检测方法的比较及临床应用

中国卫生检验杂志 2013年第5期23卷 1180-1182,1195页

作者：王欣张伦理郭彦杨裔于虹高基民寇志华周育森温州医学院检验与生命科学院温州325035 北京微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 南昌大学第一附属医院传染科南昌330006

目的:比较IMMY检测多糖荚膜抗原的乳胶凝集(LA)和胶体金方法的敏感度和特异性,以指导临床新型隐球菌感染的诊断。方法:以墨汁染色方法作为诊断标准,采用胶体金和乳胶凝集方法对40例脑膜炎脑脊液标本进行检测,比较两种血清学方法的敏感... 详细信息

目的:比较IMMY检测多糖荚膜抗原的乳胶凝集(LA)和胶体金方法的敏感度和特异性,以指导临床新型隐球菌感染的诊断。方法:以墨汁染色方法作为诊断标准,采用胶体金和乳胶凝集方法对40例脑膜炎脑脊液标本进行检测,比较两种血清学方法的敏感度和特异性。结果:当检测标本为原液不进行稀释处理而直接检测时,两种检测方法均具有较高的假阳性;当标本按1/20稀释后进行检测,其特异性显著提高,从而有效地降低了假阳性。结论:新型隐球菌胶体金检测方法是一种更简便快速的检测新型隐球菌的方法,样品1:20稀释后进行检测可显著提高检测的特异性。

关键词：新型隐球菌胶体金乳胶凝集

髓源抑制性细胞在苯并芘诱导的肺慢性炎症至肺癌发生发展中的变化

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浙江农业科学 2020年第1期61卷 190-195页

作者：刘婉玉宁春红高基民温州医科大学检验医学院生命科学学院

构建苯并芘诱导小鼠肺慢性炎症至肺癌模型,选取6~8周龄雄性昆明小鼠,随机分成2组,经右侧胸壁穿刺肺内注射,对照组给予50μL玉米油,处理组给予50μL苯并芘-玉米油溶液(苯并芘浓度为20 mg·mL^-1),每周处理1次,共4次,分别在处理后30、90、... 详细信息

构建苯并芘诱导小鼠肺慢性炎症至肺癌模型,选取6~8周龄雄性昆明小鼠,随机分成2组,经右侧胸壁穿刺肺内注射,对照组给予50μL玉米油,处理组给予50μL苯并芘-玉米油溶液(苯并芘浓度为20 mg·mL^-1),每周处理1次,共4次,分别在处理后30、90、180 d处死小鼠,采取小鼠肺、脾脏组织检测髓源抑制性细胞(MDSCs)。结果表明,处理组小鼠肺组织均出现不同程度的炎症变化,晚期出现肺癌症状。与对照组相比,处理组小鼠肺组织中MDSCs表达标志蛋白Gr-1表达量升高,且肺和脾脏中的MDSCs随着暴露时间的延长显著增多。结合临床肺组织标本免疫组化结果,表明相比正常组织和癌旁组织肺癌组织中MDSCs出现不同程度的表达,提示MDSCs可能在肺癌的发生发展中起着关键作用。本研究成功构建了苯并芘诱导小鼠肺慢性炎症至肺癌模型,探究了MDSCs在该发展过程中的变化作用,有助于临床上针对MDSCs及其相关促炎因子为靶点,通过改善肺慢性炎症组织内免疫抑制微环境,为肺癌的早期诊断和免疫治疗提供新的策略,且为临床采用其拮抗剂对肺慢性炎症的治疗和肺癌的预防提供了适宜的动物模型和理论基础。

关键词：苯并芘肺慢性炎症肺癌髓源抑制性细胞

腺病毒载体介导的重组蛋白sTNFRII-gAD快速表达和制备

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生物工程学报 2011年第8期27卷 1239-1246页

作者：陆月刘丹张孝任刘雪荣沈炜郑刚柳云帆董小岩吴小兵高基民温州医学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室温州325035 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室北京100052 北京五加和分子医学研究有限公司北京100176

利用腺病毒载体高效感染哺乳动物细胞及表达外源基因的特性,建立一种快速高效表达及制备重组蛋白的方法,并用该方法获得sTNFRII-gAD（可溶性肿瘤坏死因子受体II-脂联素球部融合蛋白）蛋白纯品。首先用携带EGFP基因的腺病毒载体rAd5-EGF... 详细信息

利用腺病毒载体高效感染哺乳动物细胞及表达外源基因的特性,建立一种快速高效表达及制备重组蛋白的方法,并用该方法获得sTNFRII-gAD（可溶性肿瘤坏死因子受体II-脂联素球部融合蛋白）蛋白纯品。首先用携带EGFP基因的腺病毒载体rAd5-EGFP以不同的腺病毒用量（MOI）（0-1 000）感染BHK21c022细胞,观察比较其转导效率和细胞毒性。用AdMax腺病毒载体系统制备携带融合基因sTNFRII-gAD的重组复制缺陷型5型腺病毒rAd5-sTNFRII-gAD。用rAd5-sTNFRII-gAD以不同的MOI（0~1 000）感染BHK21c022细胞,收取上清进行Western blotting分析,比较上清中sTNFRII-gAD蛋白的表达量。在此基础上,用rAd5-sTNFRII-gAD以MOI 100感染大量培养的BHK21c022细胞,在无血清培养条件下反复多次收取培养上清,经过硫酸铵浓缩、分子筛柱层析、透析等步骤浓缩和纯化sTNFRII-gAD融合蛋白,并体外测定该融合蛋白拮抗TNFα的活性。结果获得了携带sTNFRII-gAD融合基因的重组腺病毒rAd5-sTNFRII-gAD;用rAd5-EGFP感染BHK21c022细胞结果表明,随着腺病毒用量的增高,表达EGFP蛋白的BHK21c022细胞数量和亮度明显增加;MOI在0~100之间被感染的BHK21c022细胞未表现出明显的细胞毒性,MOI为1 000时可观察到细胞变圆和少量死亡现象。Western blotting分析结果表明,随着腺病毒用量的增高,培养上清中sTNFRII-gAD融合蛋白表达量明显增加,以MOI为1 000时最高。在此基础上,我们用MOI为100的rAd5-sTNFRII-gAD感染5个转瓶培养的BHK21c022细胞以制备sTNFRII-gAD融合蛋白。每个转瓶加无血清培养液100 mL,每48 h收获上清1次并换液,反复6次收取培养上清共约3 L,经过纯化获得了约11 mg的sTNFRII-gAD融合蛋白。体外活性测定实验表明,获得的sTNFRII-gAD融合蛋白能有效拮抗TNFα对L929细胞的杀伤作用。腺病毒载体/BHK21细胞表达系统是一个简便、高效、通用的表达系统,利用该系统成功制备了有生物学活性的sTNFRII-gAD融合蛋白。该表达系统的特点是生产规模易于放大,适应无血清培养,可以反复多次收获目标蛋白。

关键词：腺病毒重组蛋白 BHK21细胞哺乳动物细胞 sTNFRII-gAD

景宁畲族自治县2～5岁儿童五种疫苗免疫效果分析

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预防医学 2017年第4期29卷 411-413页

作者：占伟海毛建英高基民温州医科大学浙江温州325035 景宁畲族自治县人民医院

目的了解景宁畲族自治县接受免疫规划五种疫苗接种的2~5岁畲、汉族健康儿童的免疫效果,为优化预防接种策略提供依据。方法 2014年9—10月从景宁畲族自治县完整接种五种疫苗的4 490名儿童中,按照1∶10的比例随机抽取449名儿童,采用酶联... 详细信息

目的了解景宁畲族自治县接受免疫规划五种疫苗接种的2~5岁畲、汉族健康儿童的免疫效果,为优化预防接种策略提供依据。方法 2014年9—10月从景宁畲族自治县完整接种五种疫苗的4 490名儿童中,按照1∶10的比例随机抽取449名儿童,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清乙型肝炎病毒表面抗体和甲型肝炎病毒、麻疹病毒、流行性腮腺炎病毒、风疹病毒Ig G抗体。结果畲、汉族儿童的乙型肝炎病毒表面抗体和甲型肝炎病毒、麻疹病毒、流行性腮腺炎病毒、风疹病毒Ig G抗体阳性率分别为81.92%、71.89%、99.78%、99.11%和98.66%。不同性别、民族、年龄儿童抗体阳性率比较,差异均无统计学意义(P>0.05),不同免疫与调查间隔时间抗体阳性率比较,发现仅甲型肝炎病毒Ig G抗体阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。结论景宁畲族自治县2~5岁儿童乙型肝炎病毒表面抗体和甲型肝炎病毒Ig G抗体阳性率稍低,需加强这两种疫苗接种效果的常规监测。

关键词：预防接种免疫规划儿童 Ig G抗体

SA-hGM-CSF/TNFa膜表面双重修饰的前列腺癌治疗性疫苗之疗效研究

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SA-hGM-CSF/TNFa膜表面双重修饰的前列腺癌治疗性疫苗之疗效研究

第九届全国免疫学学术大会

作者：来守花郭云婷高基民温州医科大学

研究背景:前列腺癌常常容易发展为雄激素非依赖,而目前对此类前列腺癌尚无有效的治疗方法。粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)是目前常用的重要免疫佐剂之一,而肿瘤坏死因子α(TNFα)与GM-CSF具有免疫协同效应。因此,将GM-CSF和TNF... 详细信息

研究背景:前列腺癌常常容易发展为雄激素非依赖,而目前对此类前列腺癌尚无有效的治疗方法。粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)是目前常用的重要免疫佐剂之一,而肿瘤坏死因子α(TNFα)与GM-CSF具有免疫协同效应。因此,将GM-CSF和TNFα共同锚定修饰在肿瘤细胞表面,可有效增强肿瘤的免疫原性、进而诱导机体的主动抗肿瘤免疫反应。目的:制备GM-CSF/TNFα双重膜修饰的前列腺癌治疗性疫苗,并用人前列腺癌-外周血淋巴细胞-重度联合免疫缺陷小鼠嵌合体模型(hu-PBL-NOD/SCID)来鉴定该疫苗的疗效。方法:首先,将PC-3前列腺癌细胞酒精固定、生物素化,将带SA的hGM-CSF和TNFα双功能融合蛋白共同锚定在PC-3前列腺癌细胞表面,制备成SA-hGM-CSF/SA-FNFα双重膜修饰的前列腺癌治疗性疫苗,经流式细胞仪分析确证GM-CSF和TNFα已锚定在细胞表面、且数量已达饱和,在测定GM-CSF和TNFα生物活性后,液氮内储存备用。然后,将PC-3前列腺癌细胞肋胁部皮下植入hu-PBL-NOD/SCID小鼠。根据事先分组,在植入后第0,7,14天分别用SA-hGM-CSF/SA-hTNFα双重锚定PC-3疫苗、SA-hGM-CSF单锚定PC-3疫苗、SA-hTNFα单锚定PC-3疫苗、Fixed PC-3、PBS,(i-p.),治疗荷瘤hu-PBL-NOD/SCID小鼠,观察肿瘤生长情况、小鼠的存活期以及通过免疫组织化学检测肿瘤组织,脾脏、肝脏内CD4、CD8T淋巴细胞浸润情况。结果:成功制备了GM-CSF/TNFα双重膜表面修饰的前列腺癌治疗性疫苗,且锚定修饰率达97%以上。对于荷hu-PBL-NOD/SCID小鼠,GM-CSF/TNFα双重锚定治疗组与SA-hGM-CSF单锚定组(P<0.05)和SATNFα单锚定组(P<0.05)相比,有更多的CD4,CD8T淋巴细胞浸润到肿瘤组织,从而能更好地抑制肿瘤生长,延长荷瘤小鼠(hu-PBL-NOD/SCID)的生存期。结论:在人前列腺癌-外周血淋巴细胞-重度联合免疫缺陷小鼠嵌合体模型中,GM-CSF和TNFα共同锚定修饰的肿瘤细胞疫苗,与GM-CSF或TNFα单独锚定修饰的肿瘤细胞疫苗相比,能更好地抑制前列腺癌细胞的生长。

关键词：前列腺癌治疗性肿瘤疫苗人外周血淋巴细胞-重度联合免疫缺陷小鼠嵌合体

来源： cnki会议评论

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Wnt基因的类别及功能

生命的化学 2007年第2期27卷 138-141页

作者：向阳高基民胡志明周明乾南方医科大学生物技术学院广州510515

Wnt是一类癌基因,在动物发育过程中具有广泛的作用。该文介绍哺乳动物基因组中19个Wnt基因的功能。

关键词： Wnt基因癌基因