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应用体外基因放大法检测宫颈癌组织中...

中华医学杂志 1991年第7期71卷 391-393页

作者：高基民徐铃 510515，广州，第一军医大学生化教研室

我们建立了肉眼观察电泳结果以检测HPy DNA的体外基因放大法。并应用斑点杂交法和体外基因放大法检测30例人子宫颈癌活检组织中HPV-16 DNA,两者检测结果相符,均检出17例(57%)为HPV-16 DNA阳性,且显示出体外基因放大法优于斑点杂交法。

关键词：宫颈癌子宫肿瘤人乳头瘤病毒

ICOS在健康人外周血调节性T细胞上的生物学特征初探

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中国免疫学杂志 2016年第12期32卷 1753-1757页

作者：程莎高基民浙江省立同德医院杭州310012

目的:研究ICOS在健康人外周血Treg离体培养中的作用,了解m TOR对离体培养Treg ICOS表达的调控。方法:MACS分选Treg后经anti-CD3+anti-CD28磁珠刺激后第3、7天流式检测Treg表面ICOS表达情况;anti-CD3+anti-CD28抗体或anti-CD3+ICOSL-Fc刺激3 d,流式检测Treg ICOS表达情况;雷帕霉素处理离体培养Treg,流式分析其对Treg ICOS表达作用。CFSE标记人PBMC细胞,并与离体培养Treg混合培养,流式检测Treg的接触抑制活性。结果:anti-CD3+anti-CD28磁珠刺激Treg 3 d,ICOS+Treg中活、死细胞的比例分别为(92.00±2.69)%和(2.20±0.56)%,在ICOS-Treg中比例为(90.30±3.53)%和(1.77±0.78)%,两者无显著差异;培养第7天,ICOS+Treg细胞比例从第3天(40.20±1.83)%降至(11.60±1.10)%;anti-CD3+ICOSL-FC刺激Treg 3 d后,ICOS MFI为(403.30±74.42),anti-CD3+anti-CD28刺激组为(2 410.0±746.4),anti-CD3+ICOSL-FC刺激后Treg ICOS表达相比anti-CD3+anti-CD28组显著下降;雷帕霉素处理离体培养Treg细胞3 d后,ICOS表达下调。此外,雷帕霉素处理的离体培养Treg均能有效抑制PBMC中Tcon的分裂增殖。结论:ICOS表达高低对人外周血Treg存活率影响无显著差异,m TOR信号并非调控人Treg离体培养ICOS表达的唯一因素,CD28协同信号对调控离体培养人Treg。表达比ICOSL信号更为重要,雷帕霉素处理的离体培养人Treg仍具有细胞接触抑制活性。

关键词：人调节性T细胞雷帕霉素可诱导共刺激分子可诱导共刺激分子配体

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紫杉类化疗药物抗肿瘤免疫调节的作用

中华肿瘤防治杂志 2010年第1期17卷 75-78页

作者：何秋山易铁男高基民华中科技大学同济医学院附属襄樊医院肿瘤科湖北襄樊441000 南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所广东广州510515

总结国内外关于紫杉类化疗药物对肿瘤免疫调节作用的研究进展。方法:应用Medline和CHKD期刊全文数据库检索系统,以"紫杉醇/多西紫杉醇,免疫调节,免疫治疗,化疗,肿瘤"为关键词,检索1999-01-2009-04紫杉类化疗药与免疫及肿瘤免疫治疗相关... 详细信息

总结国内外关于紫杉类化疗药物对肿瘤免疫调节作用的研究进展。方法:应用Medline和CHKD期刊全文数据库检索系统,以"紫杉醇/多西紫杉醇,免疫调节,免疫治疗,化疗,肿瘤"为关键词,检索1999-01-2009-04紫杉类化疗药与免疫及肿瘤免疫治疗相关的文献,其中英文146篇,中文11篇,根据研究内容为紫杉醇或多西紫杉醇的免疫影响以及在肿瘤免疫治疗中的作用对文献进行筛选,最后纳入20篇。结果:紫杉类化疗药物具有明显的免疫调节作用,其抗肿瘤免疫调节作用与剂量和细胞亚群及作用时间相关。当紫杉类化疗药物与疫苗合理联合应用时可产生明显的抗肿瘤协同效果,紫杉类化疗药物具体的作用机制尚未完全明确。结论:化疗联合免疫疗法为肿瘤治疗带来了新的思路及希望,但目前紫杉类药物联合免疫治疗的研究尚处于初期,具体的机制及理想的联合方式仍需进一步研究。

关键词：抗肿瘤药/治疗应用药物疗法紫杉醇/免疫学

早期反应基因Egr-1参与高糖诱导β细胞凋亡的初步研究

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中国细胞生物学学报 2013年第7期35卷 916-921页

作者：李聪姜珊沈宁高基民李朝军温州医学院检验与生命科学院温州325035 南京大学模式动物研究所南京210093

糖尿病是一种慢性代谢性疾病,胰岛β细胞功能损伤或数量减少都会导致其发生。该研究主要探讨早期反应基因-1(early growth responsive gene-1,Egr-1)参与高糖诱导β细胞凋亡的过程。利用永生化NIT-1胰岛β细胞株为实验模型,分成正常对... 详细信息

糖尿病是一种慢性代谢性疾病,胰岛β细胞功能损伤或数量减少都会导致其发生。该研究主要探讨早期反应基因-1(early growth responsive gene-1,Egr-1)参与高糖诱导β细胞凋亡的过程。利用永生化NIT-1胰岛β细胞株为实验模型,分成正常对照组和高糖组;通过MTT、DAPI染色和DNA Ladder以及流式细胞术等手段检测持续性高糖刺激对细胞活力和凋亡的影响;采用Real-time PCR和Western blot法检测Egr-1转录和蛋白表达水平;竞争性抑制Egr-1活性后检测细胞活力和凋亡的变化。研究发现,与对照组相比持续性高糖刺激后细胞活力下降,凋亡明显增加(48 h,P<0.05;72 h,P<0.01);Egr-1转录和蛋白表达水平均显著上调(P<0.01),抑制其表达活性可以明显改善细胞活力和降低凋亡水平(48 h,P<0.05)。提示Egr-1的确参与到高糖诱导β细胞凋亡的过程中。

关键词：糖毒性胰岛β细胞细胞凋亡 Egr-1

一种经microRNA敲低PD-1的新型慢病毒载体在CAR-T细胞中的应用

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生物工程学报 2020年第7期36卷 1395-1404页

作者：陈辉金熙张校曼高基民温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江温州325035 温州医科大学浙江启新生物技术有限公司浙江温州325035

本研究将microRNA插入EF1α启动子的内含子中,构建携带沉默PD-1基因的miRNA的新型慢病毒载体,并将其应用于CAR-T细胞。通过流式细胞术检测慢病毒载体转导效率和PD-1沉默效率;Westernblotting检测PD-1蛋白表达差异;荧光定量PCR检测micro... 详细信息

本研究将microRNA插入EF1α启动子的内含子中,构建携带沉默PD-1基因的miRNA的新型慢病毒载体,并将其应用于CAR-T细胞。通过流式细胞术检测慢病毒载体转导效率和PD-1沉默效率;Westernblotting检测PD-1蛋白表达差异;荧光定量PCR检测microRNA相对表达情况;荧光素酶生物发光法和流式细胞术检测CAR-T细胞的能力。结果显示与U6转录microRNA的载体相比较,将microRNA插入到EF1-α内含子中的病毒载体转导效率更显著,对PD-1的敲低效率均达90%以上,且Westernblotting结果验证了PD-1的敲低效果。另外通过荧光定量PCR,可显示出转导该新型慢病毒载体的Jurkat细胞内microRNA的相对表达量。荧光素酶生物发光法证实了CAR-T细胞针对靶细胞的特异杀伤性,流式细胞术结果表明沉默PD-1的CAR-T细胞相较于正常CAR-T细胞显示出更强的特异性杀伤能力。本研究成功构建了经microRNA敲低PD-1的新型慢病毒载体并验证了其转导效率的优越性,以及基于此载体表达的microRNA可高效地沉默PD-1;且应用此载体的CAR-T细胞能发挥更强的杀伤活性,从而为后续该CAR-T细胞治疗表达PD-L1的肿瘤奠定基础。

关键词：程序性死亡受体1 microRNA 新型慢病毒载体嵌合抗原受体T细胞

环境致癌物诱导慢性炎症致肺癌发生发展的研究进展

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生物化学与生物物理进展 2014年第1期41卷 41-51页

作者：吕建祎张敏金红蕾竹俊兰危金龙代佳黄海山高基民温州医科大学检验医学院/生命科学学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室温州325035

近年来,由于工业发展负面影响造成的环境污染及吸烟等不良嗜好导致吸入人体肺部的致癌物急剧增加,致使肺癌的发病率及死亡率逐年升高,已跃居各癌症之首.研究表明,环境致癌物诱导肺部慢性炎症与肺癌的发生发展之间存在着紧密联系,环境致... 详细信息

近年来,由于工业发展负面影响造成的环境污染及吸烟等不良嗜好导致吸入人体肺部的致癌物急剧增加,致使肺癌的发病率及死亡率逐年升高,已跃居各癌症之首.研究表明,环境致癌物诱导肺部慢性炎症与肺癌的发生发展之间存在着紧密联系,环境致癌物如砷、镍及苯并芘等暴露可激活NFAT、NF-κB、AP-1等转录因子,调控炎症因子如TNFα及COX-2等的表达,且这些炎性因子的释放又可正反馈激活转录因子,促进更多的炎性因子产生,进而形成炎性因子产生回路,维持肺部炎性微环境,从而促进肺癌的发生发展.本文就环境致癌物诱导肺部炎症导致肺癌发生发展的分子机制及其相关信号通路进行了综述.

关键词：环境致癌物炎症恶性转化肺癌

靶向GPC3的第四代嵌合抗原受体T细胞(分泌IL-7和CCL19)的构建以及功能

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生物工程学报 2020年第5期36卷 979-991页

作者：黄婉莉刘宇胡耀狄高基民温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江温州325035

基于嵌合抗原受体修饰的T细胞(CAR-T)的过继免疫疗法已被证明是治疗恶性肿瘤最有希望的策略之一,但是目前其在实体瘤中的应用依然有限。研究表明磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)对肝细胞癌来说是一种有意义的诊断、治疗和预后生物标志物,且... 详细信息

基于嵌合抗原受体修饰的T细胞(CAR-T)的过继免疫疗法已被证明是治疗恶性肿瘤最有希望的策略之一,但是目前其在实体瘤中的应用依然有限。研究表明磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)对肝细胞癌来说是一种有意义的诊断、治疗和预后生物标志物,且已有利用第二代/第三代GPC3靶向的CAR-T细胞治疗肝细胞癌的研究报道。为了进一步提高治疗效果,构建同时表达GPC3 CAR、人源IL-7和CCL19细胞因子的第四代慢病毒载体,转染293T细胞包装慢病毒并感染人T淋巴细胞制备靶向GPC3的第四代CAR-T细胞(GPC3-BBZ-7×19)。利用细胞计数、趋化小室、荧光素酶生物发光法以及流式细胞术等比较其与第二代GPC3 CAR-T细胞(GPC3-BBZ)在增殖、迁移、杀伤以及亚型分布方面的区别,评估GPC3-BBZ-7×19 CAR-T细胞对免疫缺陷小鼠体内GPC3阳性的肝细胞癌腹腔移植瘤生长的作用。结果表明与GPC3-BBZ CAR-T细胞相比,GPC3-BBZ-7×19 CAR-T细胞具备更强的增殖能力、趋化能力以及记忆干细胞(Stem memory T cell,Tscm)组成比(P值均<0.05),而在体外特异性杀伤GPC3阳性的肝细胞癌细胞以及细胞因子分泌水平方面无显著差异。此外,GPC3-BBZ-7×19 CAR-T细胞能够明显抑制免疫缺陷小鼠体内的GPC3阳性肝细胞癌移植瘤模型。因此靶向GPC3的第四代CAR-T细胞(分泌IL-7和CCL19)有望比第二代GPC3靶向的CAR-T细胞更持久有效地对抗肿瘤,并产生针对肿瘤的记忆功能,为以后的临床试验提供了临床前研究基础。

关键词：磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 肝细胞癌嵌合抗原受体修饰的T 细胞增殖迁移记忆干细胞

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重组人IL-11的原核表达、纯化和鉴定

生物医学工程学杂志 2012年第3期29卷 530-533页

作者：唐佳许晓玲聂小霞茅奇峰高基民温州医学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室温州325035

以本实验室构建的pET24a-hrIL-11表达载体为模板,PCR扩增重组人白细胞介素11(hrIL-11)的基因,克隆入pET21a表达载体,转化BL-21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生hrIL-11/His融合蛋白,并经Western blot实验确认。原核表达... 详细信息

以本实验室构建的pET24a-hrIL-11表达载体为模板,PCR扩增重组人白细胞介素11(hrIL-11)的基因,克隆入pET21a表达载体,转化BL-21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生hrIL-11/His融合蛋白,并经Western blot实验确认。原核表达的hrIL-11/His融合蛋白经变性后,利用亲和层析纯化,目的蛋白纯度达95%以上。纯化后蛋白经尿素梯度复性后,比活达到1×106 IU/mg。研究结果为进一步研究该蛋白在促进血小板增殖等方面的作用奠定了基础。

关键词：重组人白细胞介素11 原核表达纯化生物学活性

人乳头瘤病毒第16型DNA在宫颈癌中的检测

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第一军医大学学报 1990年第1期10卷 17-21页

作者：高基民徐钤陈碧魂第一军医大学生物化学教研室南方医院妇产科

我们利用尼龙膜和^(35)S标记的HPV-16探针(比活性为2-3×10~7cpm/μg),采取简单易行的斑点杂交技术,建立了消除HPV各型间交叉反应的最适杂交、漂洗和放射自显影条件,并在该条件下在30例取自天津的人宫颈鳞状上皮癌组织DNA中,检出17例(5... 详细信息

我们利用尼龙膜和^(35)S标记的HPV-16探针(比活性为2-3×10~7cpm/μg),采取简单易行的斑点杂交技术,建立了消除HPV各型间交叉反应的最适杂交、漂洗和放射自显影条件,并在该条件下在30例取自天津的人宫颈鳞状上皮癌组织DNA中,检出17例(56.7％)为HPV-16DNA阳性。

关键词：人乳头瘤病毒宫颈癌 DNA探针