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杂交三倍体泥鳅细胞遗传学研究

杂交三倍体泥鳅细胞遗传学研究

作者：高养春大连海洋大学

学位级别：硕士

泥鳅(Misgrunus anguillicaudatus)是我国常见的一种小型经济鱼类，因其具有较高的营养价值而受到消费者的喜爱，但由于泥鳅所栖息自然环境的破坏及人为的过度捕捞，野生泥鳅的产量及品质逐年下降，已难以满足市场的需求。因此，泥鳅良... 详细信息

泥鳅(Misgrunus anguillicaudatus)是我国常见的一种小型经济鱼类，因其具有较高的营养价值而受到消费者的喜爱，但由于泥鳅所栖息自然环境的破坏及人为的过度捕捞，野生泥鳅的产量及品质逐年下降，已难以满足市场的需求。因此，泥鳅良种选育及对其细胞遗传研究就显得十分重要。泥鳅存在多倍体现象，三倍体鱼类因其育性差、生长快等特性而成为鱼类育种研究的热点，对三倍体泥鳅的研究多集中在体细胞方面的研究，而对与其育性相关的生殖细胞的研究，尤其是染色体行为及带型方面的研究尚未见报道。本研究利用二倍体泥鳅与天然四倍体泥鳅杂交所获得的杂交三倍体泥鳅为研究对象，通过制备其生殖细胞减数分裂染色体来研究减数分裂过程中染色体的行为特征，并利用Ag-NORs、CMA3/DA/DAPI、荧光原位杂交(FISH)技术探讨生殖细胞染色体的带型特征，最后利用C带技术研究了二倍体及杂交三倍体泥鳅胚胎染色体的带型特征，所获得的研究结果如下：1、无论四倍体泥鳅与二倍体泥鳅正交还是反交后代生殖细胞染色体减数分裂中不但发现有单价体及二价体的存在，也发现了不同配对形式的三价体;而且也发现了染色体加倍现象;正反交的精母细胞中均包括超二倍体细胞至亚三倍体细胞（23.3%，17.2%），三倍体细胞（26.0%，50.9%），超三倍体细胞至亚四倍体细胞（37.6%，26.4%），除此之外也包括少量的四倍体细胞至超超六倍体细胞（3%，5.5%）;它们的卵母细胞中也均包括部分亚三倍体细胞（12%，5.9%），整三倍体细胞（80%，86.3%），及少量的超三倍体细胞至亚四倍体细胞（8%，7.8%）。2、在杂交三倍体后代精母细胞减数分裂MI期染色体上的银染点的数目具有多态性，既有两个银染点的，位于一个二价体的两端或者一个二价体及一个单价体的一端，也有三个银染点的，分别位于一个二价体的两端及一个单价体的一端，强度是一强两弱，还有只有一个明显银染点的，位于一个二价体的一端，另一端无银染点;CMA3/DA/DAPI结果显示杂交三倍体泥鳅的减数分裂染色体上具有两个CMA3阳性部位，有的位于一个二价体的一端，一个单价体的一端，有的位于一个二价体的两端，但在单价体上缺少一个CMA3阳性部位;FISH结果显示有的精母细胞中存在两个FISH信号，分别位于一个二价体及一个单价体的一端，但有的存在三个FISH信号，并位于三个不同的单价体上。3、二倍体泥鳅及杂交三倍体泥鳅胚胎染色体C带结果显示：二倍体泥鳅核型公式为2n=50=10M+4SM+36T，三倍体的核型公式为3n=75=15M+6SM+54T，二倍体及杂交三倍体泥鳅均只具有臂端C带及着丝粒C带，没有发现臂间C带，无论是二倍体还是杂交三倍体的臂端C带均为位于M1短臂端部，而且臂端C带均比着丝粒C带大，信号也比着丝粒位置上的强;并且二倍体有两对臂端C带，三倍体有三对臂端C带。

关键词：三倍体泥鳅 Ag-NORs CMA3/DA/DAPI FISH C带

短期低浓度混合重金属污染对鲫鱼血红蛋白中过氧化氢酶活力的影响

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河南农业科学 2012年第2期41卷 143-145页

作者：闫永峰任培丽高养春商丘师范学院生命科学学院河南商丘476000 商丘医学高等专科学校基础医学部河南商丘476100

为了探讨低浓度混合重金属污染物短期内对鲫鱼血红蛋白中过氧化氢酶(CAT)活力的影响,选用鲫鱼(Carassius auratus)为研究对象,以煤矸石浸出液作为低浓度混合重金属污染物,在实验室条件下研究了鲫鱼血红蛋白中CAT活力的变化。结果表明:... 详细信息

为了探讨低浓度混合重金属污染物短期内对鲫鱼血红蛋白中过氧化氢酶(CAT)活力的影响,选用鲫鱼(Carassius auratus)为研究对象,以煤矸石浸出液作为低浓度混合重金属污染物,在实验室条件下研究了鲫鱼血红蛋白中CAT活力的变化。结果表明:试验组CAT活力〔(0.71±0.27)U/mg〕显著低于对照组CAT活力〔(1.21±0.50)U/mg〕。表明短期低浓度混合重金属污染抑制了鲫鱼血红蛋白中CAT的活力。

关键词：鲫鱼煤矸石混合重金属污染过氧化氢酶

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冷休克诱导大鳞副泥鳅雄核发育单倍体

水产学报 2014年第2期38卷 161-169页

作者：王玉生李雅娟于长宁姜志强李霞王伟刘博高养春李佳奇大连海洋大学农业部北方海水增养殖重点实验室

为探索诱导鱼类雄核发育单倍体的新方法及形成机制,以大鳞副泥鳅为研究对象,无须卵子失活,仅用冷休克诱导雄核发育单倍体,并对其后代的早期胚胎发育、染色体数目、分裂胚细胞学观察等进行了系统分析。早期胚胎发育结果显示,0℃与3℃处... 详细信息

为探索诱导鱼类雄核发育单倍体的新方法及形成机制,以大鳞副泥鳅为研究对象,无须卵子失活,仅用冷休克诱导雄核发育单倍体,并对其后代的早期胚胎发育、染色体数目、分裂胚细胞学观察等进行了系统分析。早期胚胎发育结果显示,0℃与3℃处理组的孵化率分别为0.83%和57.42%,二者之间孵化率差异显著(P<0.05),0℃和3℃处理组均表现出单倍体综合征。染色体倍性鉴定结果显示,0℃处理组染色体分布为18~27,单倍体率为81.40%,3℃处理组染色体分布为20~30,单倍体率为68.97%。分裂胚细胞学观察结果显示,3℃处理组受精后60 min,卵核和第二极体位于胚表面,有一同释放迹象。结果表明,对大鳞副泥鳅受精卵进行3℃冷休克处理60 min,可以成功诱导雄核发育单倍体,研究推测冷休克诱导大鳞副泥鳅雄核发育的细胞学机制是雌核和第二极体一同释放。

关键词：大鳞副泥鳅冷休克诱导雄核发育单倍体

杂交三倍体泥鳅染色体C带及rDNA序列的FISH定位

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水产学报 2018年第2期42卷 178-185页

作者：周贺徐其征高养春张蕊李霞庄子昕梁雨婷李雅娟大连海洋大学农业部北方海水增养殖重点实验室中国科学院生态环境研究中心

对杂交三倍体泥鳅(4n♀×2n♂)的胚胎染色体进行了C带及染色体荧光原位杂交(FISH)分析,首次探讨了杂交三倍体泥鳅C带特征,为准确鉴别染色体提供依据,研究了核糖体5.8S+28S r DNA在杂交三倍体泥鳅胚胎中期染色体上的数目和位置。C带结果... 详细信息

对杂交三倍体泥鳅(4n♀×2n♂)的胚胎染色体进行了C带及染色体荧光原位杂交(FISH)分析,首次探讨了杂交三倍体泥鳅C带特征,为准确鉴别染色体提供依据,研究了核糖体5.8S+28S r DNA在杂交三倍体泥鳅胚胎中期染色体上的数目和位置。C带结果表明,杂交三倍体泥鳅的染色体C带包括臂端C带和着丝粒C带,没有发现臂间C带。M染色体只有1号染色体既有臂端C带又有着丝粒C带,但臂端C带均比着丝粒C带大,信号也比着丝粒的强;而其他M染色体及SM染色体、T染色体只有着丝粒C带。FISH分析显示,核糖体5.8S+28S r DNA清楚地定位在杂交三倍体泥鳅中期染色体中部着丝粒染色体(M)的端部区域,在杂交三倍体泥鳅中期染色体上可以检测到三簇杂交信号。该结果从分子细胞遗传学层面进一步证实了杂交三倍体泥鳅是含有三套染色体组的遗传三倍体。

关键词：泥鳅杂交三倍体 C带 rDNA FISH

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不同倍性泥鳅杂交后代染色体数目组成的研究

大连海洋大学学报 2012年第4期27卷 326-332页

作者：李雅娟钱聪印杰高敏高养春刘博王玉生大连海洋大学农业部北方海水增养殖重点实验室辽宁大连116023 湖北省水产科学研究所湖北武汉430071

以泥鳅Misgurnus anguillicaudatus为研究对象,通过染色体计数法,对二倍体泥鳅与天然四倍体泥鳅正交(2n×4n)、反交(4n×2n)杂交后代的早期胚胎、6月龄及12月龄阶段的染色体数目进行了统计分析。结果表明:早期胚胎正、反杂交后代的染色... 详细信息

以泥鳅Misgurnus anguillicaudatus为研究对象,通过染色体计数法,对二倍体泥鳅与天然四倍体泥鳅正交(2n×4n)、反交(4n×2n)杂交后代的早期胚胎、6月龄及12月龄阶段的染色体数目进行了统计分析。结果表明:早期胚胎正、反杂交后代的染色体数目为67～81、67～82,在良好的中期分裂相(100、100个)中,染色体数目为75的整三倍体众数百分比最高(22%,20%),此外还有大量染色体数目75的超三倍体(41%,29%);6月龄正、反杂交后代的染色体数目为68～79、66～80,在良好的中期分裂相(58、63个)中,整三倍体(3n=75)众数百分比最高(26%,41%),此外还有大量亚三倍体(34%,49%)和超三倍体(40%,10%);12月龄正、反杂交后代的染色体数目为68～82、69～83,在良好的中期分裂相(71、50个)中,三倍体(3n=75)众数百分比最高(28%,54%),此外还有大量亚三倍体(48%,20%)和超三倍体(24%,26%)。研究表明,二倍体泥鳅与天然四倍体泥鳅正、反杂交后代均出现大量能存活的非整三倍体个体,并随养殖时间的延长,非整三倍体率呈下降趋势。

关键词：泥鳅正、反杂交三倍体染色体数目非整三倍体

不同倍性泥鳅鳍细胞培养及染色体标本制备方法的研究

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大连海洋大学学报 2013年第6期28卷 557-562页

作者：刘博李雅娟李霞隋燚高养春王玉生马辰大连海洋大学农业部北方海水增养殖重点实验室辽宁大连116023

以天然二倍体、杂交三倍体(4n♀×2n♂)和天然四倍体泥鳅Misgurnus anguillicaudatus的鳍组织为材料,对短期培养的消毒方法、秋水仙素的浓度(1.0、1.5、2.0μg/mL)与处理时间(2、3、4 h)和低渗处理时间(30、40、50 min)等细胞培养技术,... 详细信息

以天然二倍体、杂交三倍体(4n♀×2n♂)和天然四倍体泥鳅Misgurnus anguillicaudatus的鳍组织为材料,对短期培养的消毒方法、秋水仙素的浓度(1.0、1.5、2.0μg/mL)与处理时间(2、3、4 h)和低渗处理时间(30、40、50 min)等细胞培养技术,及染色体标本制备方法进行了研究。结果表明:选择100 g/L的碘伏溶液杀菌效果良好,对于细胞生长影响较小,尤以处理15 min时的效果最明显,细胞迁出迅速;在终止培养前3 h加入秋水仙素至终浓度为1.5μg/mL,天然二倍体、杂交三倍体和天然四倍体泥鳅鳍细胞中期分裂相染色体众数最高,分别为93.33%、90.00%、70.00%;25℃下低渗处理40 min时,可以获得大量图像清晰、长度适中、分散良好、染色体数目完整的染色体中期分裂相。本研究中初步建立了以鳍组织培养法作为材料来源快速制备不同倍性泥鳅染色体标本的方法。

关键词：泥鳅天然四倍体杂交三倍体二倍体鳍组织染色体

利用宏DNA条形码研究浮游动物多样性——以鸭绿江口为例

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生态学报 2020年第11期40卷 3822-3832页

作者：高养春李海涛王孝程孙艺战爱斌 Aileen TAN Shau-Hwai 李宏俊国家海洋环境监测中心大连116023 中国科学院生态环境研究中心北京100853 国家海洋局南海环境监测中心广州510300 Centre for Marine and Coastal Studies Universiti Sains Malaysia(USM)11800PenangMalaysia 广东省生物资源应用研究所广州510260

为评价宏DNA条形码技术在我国海洋生物多样性监测中的应用潜力,采集了22份鸭绿江口浮游动物样品,分别利用宏条形码分子鉴定和形态鉴定方法对优势类群桡足类进行多样性的比较研究。结果显示:(1)利用宏条形码分子鉴定方法共鉴定出4目23科3... 详细信息

为评价宏DNA条形码技术在我国海洋生物多样性监测中的应用潜力,采集了22份鸭绿江口浮游动物样品,分别利用宏条形码分子鉴定和形态鉴定方法对优势类群桡足类进行多样性的比较研究。结果显示:(1)利用宏条形码分子鉴定方法共鉴定出4目23科32属229个操作分类单元(Operational Taxonomic Units, OTUs),形态方法共鉴定出3目5科5属6种;同时,利用形态鉴定得到的分类阶元多数(目:100%、科:80%、属:80%)能用宏条形码分子鉴定方法鉴定出来,而宏条形码分子鉴定方法鉴定得到的分类阶元多数(目:25%、科:83%、属:88%)却未能用形态鉴定出来,表明宏条形码分子鉴定方法在鉴定物种丰富度方面具有明显优势。(2)利用宏条形码分子鉴定与形态鉴定桡足类的多样性指数呈显著的一致性(r=0.524,P=0.024),表明宏条形码鉴定方法与形态方法在评价物种多样性方面具有较好的可比性。本研究表明宏条形码分子鉴定方法在我国海洋浮游动物业务化监测中具有较高的应用潜力。

关键词：浮游动物群落结构宏DNA条形码 18S 鸭绿江口

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银鲫与普通鲫早期胚胎发育的比较研究

大连海洋大学学报 2015年第5期30卷 472-477页

作者：马海艳周贺高养春孙效文鲁翠云曹顶臣江振华大连海洋大学农业部北方海水增养殖重点实验室辽宁大连116023 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所黑龙江哈尔滨150070

为了解黑龙江水系银鲫Carassius auratus gibelio和普通鲫C. auratus auratus的胚胎发育过程,对银鲫（3n♀×3n ♂, SS）和普通鲫（2n♀×2n♂, DD）的胚胎发育过程进行了比较观察。结果表明： SS （ DD）成熟的卵子呈浅黄色,卵膜透明,... 详细信息

为了解黑龙江水系银鲫Carassius auratus gibelio和普通鲫C. auratus auratus的胚胎发育过程,对银鲫（3n♀×3n ♂, SS）和普通鲫（2n♀×2n♂, DD）的胚胎发育过程进行了比较观察。结果表明： SS （ DD）成熟的卵子呈浅黄色,卵膜透明,圆形,有黏性,卵径为1.3~1.7 mm （1.2~1.6 mm ）；水温为（23×1）℃条件下, SS （DD）受精后1 h 08 min （1 h 03 min）进入卵裂期,受精后2 h 54 min （5 h 02 min）进入囊胚期,受精后8 h 06 min （6 h 49 min）进入原肠胚期,受精后10 h 25 min （10 h 51 min）进入神经胚期,受精后14 h 22 min（16 h 20 min）进入器官形成期,59 h 31 min（59 h 05 min）后出膜。研究表明, SS和DD均具有正常的早期胚胎发育过程,这为进一步了解SS和DD的遗传背景和生殖方式提供了生物学依据。

关键词：银鲫普通鲫胚胎发育

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煤气化细灰理化性质及其电磁波吸收性能

复合材料学报 2024年第5期41卷 2559-2574页

作者：高圣涛张元春安徽理工大学化学工程学院煤炭安全精准开采国家地方联合工程研究中心淮南232001

煤气化技术作为煤炭清洁利用的主要途径之一在中国得到快速发展,细灰是煤气化过程中不可避免产生的新型固体废物。国家对绿色、清洁生产和发展循环经济逐步推行,细灰的资源化利用和无害化处理技术成为实现煤气化技术环保效益和经济效益... 详细信息

煤气化技术作为煤炭清洁利用的主要途径之一在中国得到快速发展,细灰是煤气化过程中不可避免产生的新型固体废物。国家对绿色、清洁生产和发展循环经济逐步推行,细灰的资源化利用和无害化处理技术成为实现煤气化技术环保效益和经济效益兼得的关键所在。以煤气化细灰为研究对象,对细灰进行干燥、球磨预处理得到中位径为2μm的样品,利用XRD、Raman、SEM、TEM和XPS等分析测试技术对其晶体结构、微观形貌、组成、分子构造和元素化学态进行表征,并测试了细灰电磁波吸收性能。结果表明:细灰中含有部分石墨化的碳和单质铁,具有较完整的孔隙结构,这为其作为电磁波吸收材料提供了可能性;细灰/石蜡吸波剂在较薄厚度下同时表现出较宽的有效吸收带宽和一定强度的反射损耗,当匹配厚度为1.7 mm时,该吸波剂在15.6 GHz时达到最小反射损耗值,为-17.6 dB,此时有效吸收带宽(反射损耗值≤-10 dB)达到4.2 GHz。此外,雷达散射截面模拟结果表明:该吸波涂层能有效降低完美导体基板的电磁波散射。

关键词：煤气化细灰电磁波吸收煤炭清洁利用理化性质固体废物