检索结果-南通市图书馆

医学检验与临床 2019年第9期30卷 10-12页

作者：林洁高会广张立解放军第九七〇医院检验科山东威海264200

目的:研究并分析荧光定量PCR在甲型流感病毒检测中的应用。方法:将2018年2月~2018年12月我院网络实验室接受135名疑似甲型流感的呼吸道标本作为研究对象,收集标本135份,分别采用荧光定量PCR、病毒分离培养、胶体金检测法检验,对比检验... 详细信息

目的:研究并分析荧光定量PCR在甲型流感病毒检测中的应用。方法:将2018年2月~2018年12月我院网络实验室接受135名疑似甲型流感的呼吸道标本作为研究对象,收集标本135份,分别采用荧光定量PCR、病毒分离培养、胶体金检测法检验,对比检验结果。结果:检测结果显示荧光定量PCR法阳性率为70.37%,胶体金检测法阳性率为61.48%,病毒分离培养法阳性率为59.26%。与荧光定量PCR法相比,胶体金检测法灵敏度是82.11%,特异度是87.50%,病毒分离培养法的灵敏度是84.21%,特异度为100%。结论:荧光定量PCR法灵敏度、准确性显著高于股体金检测法与病毒分离培养法,应用荧光定量PCR检测甲型流感病毒古确性与及时性好,该种检测方式值得在临床中进行推广与使用。

关键词：荧光定量PCR 胶体金检测法病毒分离培养法甲型流感病毒检测

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重组人SMAC及SMAC-PTD的制备

第三军医大学学报 2006年第9期28卷 958-960页

作者：胡颖何凤田李蓉芬高会广黄刚胡大强龚薇第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的制备重组人SMAC及SMAC-PTD。方法经RT-PCR从人HeLa细胞中扩增人野生型SMAC及SMAC-PTD cDNA,分别构建于原核表达质粒pET28 a(+),测序正确后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,N i2+-NTA层析纯化,SDS-PAGE和W estern b lot鉴定目的蛋白。结果RT-PCR扩增分别得到编码人SMAC及SMAC-PTD cDNA片断,测序结果正确,重组蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达。结论成功制备了高纯度的人野生型SMAC及SMAC-PTD融合蛋白,为进一步研究奠定了基础。

关键词： SMAC 蛋白转导域凋亡

4项肿瘤标志物联合检测在胃肠道疾病中的诊断价值分析

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医学检验与临床 2016年第7期27卷 1-3页

作者：高会全王德广范小艺董桂芝杜朝晖高会广解放军第404医院肿瘤中心山东威海264200 解放军第404医院影像科山东威海264200 威海市威海卫人民医院山东威海264200 解放军第404医院医务处山东威海264200

目的：探讨血清癌胚抗原（CEA）、糖类癌抗原199（CA19—9）、糖类癌抗原724（CA72—4）、糖类癌抗原242（CA242）等4项肿瘤标志物联合检测在不同肠道疾病中的诊断价值。方法：观察26例胃肠道癌患者（其中胃癌10例，结肠癌7例，直肠癌9... 详细信息

目的：探讨血清癌胚抗原（CEA）、糖类癌抗原199（CA19—9）、糖类癌抗原724（CA72—4）、糖类癌抗原242（CA242）等4项肿瘤标志物联合检测在不同肠道疾病中的诊断价值。方法：观察26例胃肠道癌患者（其中胃癌10例，结肠癌7例，直肠癌9例）和胃肠良性疾病（胃炎、肠炎、息肉）以及26例健康体检者外周血CEA、CA19-9、CA72—4、CA242的量，并进行分析、比较组间差异。结果：与健康对照组相比，胃肠道恶性肿瘤，胃肠炎症、息肉中CEA、CA19-9、CA72-4、CA242指标水平及阳性率均具有统计学差异（p〈0．05）CEA、CA19—9、CA72-4、CA242联合检测在诊断胃癌、结肠癌和直肠癌中的敏感性最高，分别达到了100％、86％和100％。结论：联合检测CEA、CA19-9、cA72—4、CA2424项指标具有互补作用，能提高胃肠道疾病的检出率。

关键词：胃肠道肿瘤诊断肿瘤标志物联合检测

人β防御素3融合蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化与活性分析

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生物工程学报 2004年第4期20卷 490-495页

作者：陈姗何凤田董燕麟李蓉芬高会广陈敏彭家和第三军医大学生物化学与分子生物学教研室重庆400038

近年来由于抗生素的不规范使用等多种原因 ,细菌耐药问题日益严重 ,人们正努力从各个方面来解决 ,其中机体天然产生的肽抗生素 (peptideantibiotics)由于其对耐药菌的强大抗菌作用而受到人们的关注。肽抗生素是一种阳离子小分子多肽 ,... 详细信息

近年来由于抗生素的不规范使用等多种原因 ,细菌耐药问题日益严重 ,人们正努力从各个方面来解决 ,其中机体天然产生的肽抗生素 (peptideantibiotics)由于其对耐药菌的强大抗菌作用而受到人们的关注。肽抗生素是一种阳离子小分子多肽 ,在天然免疫和获得性免疫中都发挥着重要作用。防御素 (defensin)是肽抗生素中较为重要的一种 ,主要来源于皮肤、呼吸道等的上皮组织 ,是正常机体抵抗外界病原微生物入侵的重要防线。人 β 防御素 3(humanbeta defensin 3,hβD 3)参与人体免疫屏障 ,并因具有广谱抗菌和抗菌活性不被盐离子浓度抑制等特点而具特别的研究开发价值。提取中国人扁桃体组织总RNA ,以RT PCR技术扩增编码hβD 3成熟肽的cDNA并构建于原核表达载体pQE 80L ,IPTG诱导表达后利用SDS PAGE、免疫印记等方法对重组蛋白进行分析。重组蛋白表达量达到细菌表达总量的 4 0 %。重组蛋白自表达菌包涵体中提取后 ,经亲和层析法纯化目的蛋白达到电泳纯 ,经多步透析法复性 ,在体外抗菌实验中表现出了对金黄色葡萄球菌、多重耐药金黄色葡萄球菌等的抗菌活性。

关键词： hβD-3 肽抗生素克隆融合表达

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TAT修饰的小鼠IFNγ的制备

第三军医大学学报 2006年第8期28卷 795-797页

作者：胡大强何凤田郑英如李蓉芬高会广龚薇黄刚第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科重庆400042

目的制备小鼠IFNγ-TAT,为TAT影响IFN体内分布等研究作准备。方法采用RT-PCR扩增编码mIFNγ的cDNA序列,经3轮PCR扩增编码mIFNγTAT片段,克隆到质粒pUC19,测序鉴定正确后构建到pQE80L表达质粒载体中,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后1.2%琼脂糖... 详细信息

目的制备小鼠IFNγ-TAT,为TAT影响IFN体内分布等研究作准备。方法采用RT-PCR扩增编码mIFNγ的cDNA序列,经3轮PCR扩增编码mIFNγTAT片段,克隆到质粒pUC19,测序鉴定正确后构建到pQE80L表达质粒载体中,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后1.2%琼脂糖凝胶电泳鉴定;利用SDSPAGE和Westernblot检测表达的目的蛋白。结果PCR扩增得到编码mIFNγTAT的cDNA片段,测序结果正确,SDSPAGE和Westernblot分析显示重组蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达。结论成功制备了TAT修饰的小鼠IFNγ,为进一步实验室研究奠定了基础。

关键词：干扰素蛋白转导域构建表达蛋白纯化

噬菌体抗体库技术制备胃癌单抗MGd1的抗独特型抗体

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第三军医大学学报 2005年第19期27卷 1911-1914页

作者：何凤田李蓉芬郑英如高会广吉清龚薇胡颖第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科重庆400042

目的获得胃癌单抗MGd1的噬菌体呈现型抗独特型抗体(抗-Id),为研制针对MGd1的抗-Id重组胃癌瘤苗创造条件。方法分离经单抗免疫鼠脾脏的mRNA,经RT-PCR分别扩增抗体VH和VLDNA,进而连接形成ScFvDNA。将ScFvDNA与载体pCANTAB5E的连接产物转... 详细信息

目的获得胃癌单抗MGd1的噬菌体呈现型抗独特型抗体(抗-Id),为研制针对MGd1的抗-Id重组胃癌瘤苗创造条件。方法分离经单抗免疫鼠脾脏的mRNA,经RT-PCR分别扩增抗体VH和VLDNA,进而连接形成ScFvDNA。将ScFvDNA与载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经M13KO7挽救后获得噬菌体呈现型ScFv文库。以MGd1对文库进行4轮筛选后,随机挑取克隆经ELISA筛选呈现抗-IdScFv的噬菌体单克隆,进而经竞争ELISA对其所属抗-Id类型进行初步鉴定。结果VH、VL和ScFvDNA分别约为340、320和750bp。抗体ScFv文库经4轮筛选后,在随机筛检的40个克隆中得到17个呈现抗-IdScFv的噬菌体单克隆。在17个克隆中,有3个呈现β或γ型抗-IdScFv。结论应用噬菌体抗体库技术成功制备了针对单抗MGd1的抗-IdScFv,从而为筛选新的胃癌重组抗-Id瘤苗奠定了基础。

关键词：胃癌单克隆抗体抗独特型抗体噬菌体抗体库

甘氨酸/丝氨酸置换146位半胱氨酸对sBAFF功能的影响

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第三军医大学学报 2006年第8期28卷 753-756页

作者：黄刚何凤田李蓉芬高会广陈麟凤张立胡大强第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的探讨甘氨酸/丝氨酸置换146位半胱氨酸对sBAFF功能的影响,为深入探讨sBAFF的功能和机制奠定基础。方法采用一步反向PCR法,将编码sBAFF第146位半胱氨酸(Cys)的核苷酸序列置换为甘氨酸(G)和丝氨酸(S)的编码序列,测序正确后,亚克隆到高... 详细信息

目的探讨甘氨酸/丝氨酸置换146位半胱氨酸对sBAFF功能的影响,为深入探讨sBAFF的功能和机制奠定基础。方法采用一步反向PCR法,将编码sBAFF第146位半胱氨酸(Cys)的核苷酸序列置换为甘氨酸(G)和丝氨酸(S)的编码序列,测序正确后,亚克隆到高效原核表达载体pQE80L;以IPTG诱导表达,SDSPAGE和Westernblot检测表达产物,Ni2+NTA柱层析纯化目的蛋白;最后经MTT法检测其促B淋巴细胞增殖活性。结果经一步反向PCR扩增后均得到459bp的DNA片段,经测序分析表明分别为sBAFF第146位半胱氨酸残基点突变为甘氨酸和丝氨酸的序列,目的蛋白在大肠杆菌中得到高效表达。活性检测证实其能明显刺激B淋巴细胞系Raji细胞增殖,与正常sBAFF相比,置换为丝氨酸后活性升高,置换为甘氨酸后活性无明显改变。结论在原核表达时,通过置换146位半胱氨酸为丝氨酸可明显提高sBAFF的活性,为进一步探讨sBAFF的功能机制奠定了基础。

关键词： TNF家族的B细胞激活因子(BAFF) cDNA克隆原核表达蛋白纯化细胞活化

抗环瓜氨酸肽抗体与抗角蛋白抗体检测在类风湿关节炎诊断中的应用价值

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实用临床医药杂志 2019年第15期23卷 110-111,115页

作者：林洁高会广张立解放军第九七〇医院检验科

目的探讨抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)与抗角蛋白抗体(AKA)检测在类风湿关节炎(RA)诊断中的应用价值.方法选取64例RA患者为A组,同期64例非RA患者为B组,同期64名健康体检者为C组.3组均采用抗CCP抗体与AKA检测法,比较3组检测结果.结果在... 详细信息

目的探讨抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)与抗角蛋白抗体(AKA)检测在类风湿关节炎(RA)诊断中的应用价值.方法选取64例RA患者为A组,同期64例非RA患者为B组,同期64名健康体检者为C组.3组均采用抗CCP抗体与AKA检测法,比较3组检测结果.结果在特异性方面,抗CCP抗体检测与AKA检测结果有显著差异(P0.05);联合检测结果方面,特异性与灵敏度均较单独的抗CCP抗体检测、AKA检测有显著差异(P广与应用,进一步提高诊断的准确性.

关键词：瓜氨酸抗角蛋白抗体抗核周因子抗体类风湿关节炎诊断

PDP-PEG_(2000)-DSPE修饰的长春新碱脂质体的制备及其包封率测定

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实用预防医学 2006年第3期13卷 480-482页

作者：张立何凤田高会广李蓉芬吴波第三军医大学生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的研制载有长春新碱并用PDP-PEG2000-DSPE对脂质体膜修饰的脂质体并且测定其包封率。方法采用薄膜蒸发超声分散法制备长春新碱脂质体,并用PDP-PEG2000-DSPE对脂质体膜修饰。应用激光电位粒度仪Zeta3000,以去离子水为分散介质测定样品... 详细信息

目的研制载有长春新碱并用PDP-PEG2000-DSPE对脂质体膜修饰的脂质体并且测定其包封率。方法采用薄膜蒸发超声分散法制备长春新碱脂质体,并用PDP-PEG2000-DSPE对脂质体膜修饰。应用激光电位粒度仪Zeta3000,以去离子水为分散介质测定样品的体积平均粒径。以高效液相色谱法测定其含量和包封率。结果长春新碱脂质体的平均体积粒径大约150nm左右,包封率40%。结论薄膜蒸发超声分散法适用于制备长春新碱脂质体;高效液相色谱法操作简单,准确,重复性好,可用于测定长春新碱脂质体的含量和包封率。

关键词：长春新碱脂质体薄膜蒸发超声分散法包封率高效液相色谱法