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B细胞活化因子的纯化和复性参数的优化研究

重庆医学 2005年第1期34卷 87-89页

作者：吉清钟小林高会广李蓉芬彭家和何凤田第三军医大学生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的　获得高纯度和高活性的B细胞活化因子 (BcellactivatingfactorbelongingtotheTNFfamily ,BAFF)。方法　重组原核表达载体 pQE 80L BAFF112 2 85在大肠杆菌DH5α中经IPTG诱导表达rhBAFF112 2 85,超声碎菌 ,提取包涵体 ,经Ni2 + ... 详细信息

目的　获得高纯度和高活性的B细胞活化因子 (BcellactivatingfactorbelongingtotheTNFfamily ,BAFF)。方法　重组原核表达载体 pQE 80L BAFF112 2 85在大肠杆菌DH5α中经IPTG诱导表达rhBAFF112 2 85,超声碎菌 ,提取包涵体 ,经Ni2 + NTA亲和层析和SepharcrylS 2 0 0凝胶过滤层析纯化后 ,选择不同氧化还原条件进行复性 ,进而检测其生物学活性。结果　得到了有较高纯度和较好生物学活性的rhBAFF112 2 85蛋白。结论　优化了BAFF蛋白的纯化和复性的参数 ,所获结果为进一步研究创造了条件。

关键词： B细胞活化因子(BAFF) 包涵体纯化复性

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某军队中心医院医疗纠纷成因与对策

实用医药杂志 2017年第4期34卷 376-378页

作者：高会广景涛解放军海军404医院医务处山东威海264200

目的分析医疗纠纷发生的特点和规律,并提出防范对策和建议。方法采用回顾性分析方法 ,对某军队中心医院2011年—2015年发生的医疗纠纷进行分析。结果医疗纠纷主要责任人以中级职称人员为主;内科纠纷发生率最高,其次是外科;医疗纠纷发生... 详细信息

目的分析医疗纠纷发生的特点和规律,并提出防范对策和建议。方法采用回顾性分析方法 ,对某军队中心医院2011年—2015年发生的医疗纠纷进行分析。结果医疗纠纷主要责任人以中级职称人员为主;内科纠纷发生率最高,其次是外科;医疗纠纷发生的主要原因为违反规章制度,医疗技术责任,医患沟通不到位,患方缺乏医学知识;医患协商仍是医疗纠纷解决的主要途径。结论医疗纠纷的产生,既有医方因素,也有患方因素,但医方因素仍是主要原因。医院应加强医疗管理,健全和落实规章制度,提高医疗技术水平,规范和完善医疗纠纷的处理办法,以预防医疗纠纷,促进医院健康发展。

关键词：医疗纠纷成因对策

人可溶性B淋巴细胞刺激因子结合小肽的筛选及其免疫抑制功能分析

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中华风湿病学杂志 2004年第11期8卷 641-643页

作者：吉清郑英如李蓉芬钟小林高会广何凤田第三军医大学生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学大坪医院妇产科

目的筛选和鉴定B淋巴细胞刺激因子(BLyS)的抑制性小肽。方法用重组人BLyS筛选噬菌体构象型7肽库,人工合成小肽鉴定其免疫抑制功能。结果经过筛选,得到两个阳性噬菌体克隆,人工合成的两个小肽在体外能特异性地抑制BLyS刺激细胞增生的活... 详细信息

目的筛选和鉴定B淋巴细胞刺激因子(BLyS)的抑制性小肽。方法用重组人BLyS筛选噬菌体构象型7肽库,人工合成小肽鉴定其免疫抑制功能。结果经过筛选,得到两个阳性噬菌体克隆,人工合成的两个小肽在体外能特异性地抑制BLyS刺激细胞增生的活性。结论获得了两个能够抑制BlyS功能的小肽。

关键词： B淋巴细胞刺激因子免疫抑制筛选噬菌体刺激细胞体克体外结论目的方法

人可溶性TRAILcDNA的克隆及新型原核表达载体的构建

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第三军医大学学报 2002年第4期24卷 442-443页

作者：李蓉芬何凤田高会广陈姗江渝叶治家彭家和陈敏第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的　克隆人可溶性TRAIL (sTRAIL)cDNA并构建其原核表达载体 ,为制备新型抗癌分子创造条件。方法　提取HL 60细胞总RNA ,经RT PCR扩增编码人TRAIL 114～ 2 81氨基酸残基的cDNA序列 ,将其克隆至载体pUC19进行序列测定 ,然后构建于新型... 详细信息

目的　克隆人可溶性TRAIL (sTRAIL)cDNA并构建其原核表达载体 ,为制备新型抗癌分子创造条件。方法　提取HL 60细胞总RNA ,经RT PCR扩增编码人TRAIL 114～ 2 81氨基酸残基的cDNA序列 ,将其克隆至载体pUC19进行序列测定 ,然后构建于新型原核表达载体pQE 80L中。结果　RT PCR扩增得到了 5 0 4bp的DNA片段 ,序列分析表明与GeneBank中报道的编码人TRAIL 114～ 2 81氨基酸残基的cDNA序列完全一致。结论　sTRAILcDNA的克隆及其原核表达载体的构建 ,为进一步制备具有抗肿瘤活性的sTRAIL奠定了基础。

关键词： sTRAIL RT-PCR 克隆序列分析 cDNA 原核表达载体

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人HMGB1酸性尾端对其抗菌活性的影响

中国生物化学与分子生物学报 2006年第7期22卷 524-529页

作者：龚薇何凤田李蓉芬高会广张艳黎松黄刚第三军区大学生物化学与分子生物学教研室重庆400038 匹兹堡大学

为研究人高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box-1,HMGB1)酸性尾端对其抗菌活性的影响,提取人外周血单个核细胞总RNA,经RT-PCR扩增得到编码人HMGB1的cDNA及其缺失酸性尾端的突变体cDNA(mcDNA),原核表达载体pQE-80L分别表达重组人HM... 详细信息

为研究人高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box-1,HMGB1)酸性尾端对其抗菌活性的影响,提取人外周血单个核细胞总RNA,经RT-PCR扩增得到编码人HMGB1的cDNA及其缺失酸性尾端的突变体cDNA(mcDNA),原核表达载体pQE-80L分别表达重组人HMGB1蛋白(rhHMGB1)及缺失酸性尾端的突变体蛋白(mrhHMGB1),经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化两种蛋白.通过试管稀释法、琼脂扩散法两种体外抗菌实验观察,并比较rhHMGB1及mrhHMGB1抗菌活性的差异.实验结果显示,rhHMGB1对大肠杆菌JM109、ATCC25922、DH5α有明确的抗菌活性,其抗菌活性强弱依次为JM109>ATCC25922>DH5α,而mrhHMGB1对大肠杆菌JM109、ATCC25922、DH5α则均无抗菌活性.实验结果表明,人HMGB1的酸性尾端对其抗菌活性的发挥至关重要,此研究为进一步探讨人HMGB1抗菌功能的机制奠定了基础.

关键词：人高迁移率族蛋白B1(HMGB1) 酸性尾端原核表达抗菌活性

重组人BAFF_(112-285)的制备及活性分析

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免疫学杂志 2003年第3期19卷 178-182页

作者：何凤田郑英如高会广李蓉芬郑汉其吉青江渝陈敏钟小林第三军医大学生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学大坪医院妇产科重庆400042 香港中文大学生物化学系

目的　制备具有功能活性的重组人TNF家族的B细胞激活因子 (BcellactivatingfactorbelongingtotheTNFfa mily ,BAFF)胞外区 1 1 2～ 2 85氨基酸残基段 (rhBAFF1 1 2 -2 85) ,为BAFF的深入研究奠定基础。方法　提取人HL 6 0细胞总RNA ,经R... 详细信息

目的　制备具有功能活性的重组人TNF家族的B细胞激活因子 (BcellactivatingfactorbelongingtotheTNFfa mily ,BAFF)胞外区 1 1 2～ 2 85氨基酸残基段 (rhBAFF1 1 2 -2 85) ,为BAFF的深入研究奠定基础。方法　提取人HL 6 0细胞总RNA ,经RT PCR扩增编码人BAFF胞外区 1 1 2～ 2 85氨基酸残基 (BAFF1 1 2 -2 85)的cDNA ,行序列测定后 ,构建于原核表达载体pQE 80L并转化大肠杆菌DH5α ,经IPTG诱导表达rhBAFF1 1 2 -2 85,Ni2 + NTA层析纯化 ,进而经3 H TdR掺入实验检测其免疫学活性。结果　RT PCR扩增得到了 5 2 5bp的DNA片段 ,序列分析与GenBank中报道的编码人BAFF1 1 2 -2 85的cDNA序列一致 ,该胞外区片段在大肠杆菌中获得了高效表达 ,表达水平达细菌总蛋白的 4 5 .7% ,经纯化后纯度可达 98.4 % ,活性检测证实其能明显刺激外周血淋巴细胞活化。结论　利用大肠杆菌可高效表达rhBAFF1 1 2 -2 85,所获纯化产物具有生物学活性。

关键词：重组人BAFFll2-285 制备活性原核表达淋巴细胞活化

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联勤体制下救护艇医疗队建设体验

实用医药杂志 2010年第11期27卷 1048-1049页

作者：孙志宏高会广 404医院

救护艇医疗队是海上机动卫勤保障体系的重要力量,战时对海上落水人员和伤病员实施紧急救治与后送[1],平时担负巡回医疗、灾难救援和卫勤机动支援任务,在海上医疗后送体系中起到重要的桥梁与纽带作用。

关键词：联勤体制救护艇医疗队

重组人可溶性B淋巴细胞激活因子的制备及活性分析

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医学分子生物学杂志 2004年第5期1卷 274-278页

作者：陈麟凤何凤田李蓉芬钟小林张艳高会广吉清第三军医大学生物化学与分子生物学教研室重庆市400038

目的　制备具有功能活性的人TNF家族的B细胞激活因子 (BcellactivatingfactortotheTNFfamily ,BAFF)胞外区 134～ 2 85氨基酸残基段 ,为BAFF的深入研究创造条件。方法　提取人新鲜扁桃体组织总RNA ,经RT PCR扩增编码人BAFF胞外区 134～ ... 详细信息

目的　制备具有功能活性的人TNF家族的B细胞激活因子 (BcellactivatingfactortotheTNFfamily ,BAFF)胞外区 134～ 2 85氨基酸残基段 ,为BAFF的深入研究创造条件。方法　提取人新鲜扁桃体组织总RNA ,经RT PCR扩增编码人BAFF胞外区 134～ 2 85氨基酸残基cDNA ,经序列测定后 ,构建于原核表达载体 pQE 80L并转化大肠杆菌DH5α ,经IPTG诱导表达及Ni2 + NTA柱层析纯化目的蛋白 ,行SDS PAGE和Western印迹检测。最后经MTT法检测其增殖活性。结果　RT PCR扩增得到了 4 5 9bp的cDNA片段 ,序列分析与GenBank中报道的编码人BAFF13 4 2 85的cDNA序列一致 ,SDS PAGE及Western印迹证实表达蛋白确实为 6×His BAFF13 4 2 85融合蛋白并存在于包涵体中。活性检测证实其能明显刺激肿瘤细胞的增殖。结论　利用大肠杆菌可高效表达rhBAFF13 4 2 85,得到的纯化蛋白具有较高的生物学活性 ,为进一步的研究奠定了基础。

关键词： TNF家族的B细胞激活因子(BAFF) cDNA克隆原核表达淋巴细胞活化

两种核酸提取方法在丙肝病毒核酸定量检测中的应用比较

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两种核酸提取方法在丙肝病毒核酸定量检测中的应用比较