检索结果-南通市图书馆

杆状病毒表达系统中NLS序列对鸭圆环病毒Cap基因表达的影响及其免疫原性研究

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黑龙江畜牧兽医 2024年第3期 66-72页

作者：栾明朱马跃宇刘立孙莉李明费东亮马鸣潇锦州医科大学畜牧兽医学院辽宁锦州121001 内蒙古赤峰市克什克腾旗农牧局内蒙古赤峰024000

为了研究核定位信号肽(Nuclear localization signal,NLS)序列对鸭圆环病毒(duck Circovirus,DuCV)Cap蛋白表达的影响,并探究不同免疫策略下重组蛋白的免疫原性,试验将去除和未去除NLS序列的DuCV Cap基因分别克隆至杆状病毒载体pFastBa... 详细信息

为了研究核定位信号肽(Nuclear localization signal,NLS)序列对鸭圆环病毒(duck Circovirus,DuCV)Cap蛋白表达的影响,并探究不同免疫策略下重组蛋白的免疫原性,试验将去除和未去除NLS序列的DuCV Cap基因分别克隆至杆状病毒载体pFastBacⅠ中,通过杆状病毒表达系统进行表达,分析NLS序列对Cap蛋白表达的影响。采用不同的免疫策略,分别以原核表达系统构建的重组蛋白rCap(rCap组)、杆状病毒表达系统构建的rvAc-Cap(rvAc-Cap组)及rCap与rvAc-Cap联合(Prime-Boost组)作为免疫源免疫Balb/c小鼠,并设置PBS对照组,定期采血,检测DuCV IgG抗体水平、淋巴细胞增殖指数(SI)和γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)等细胞因子水平,评价其免疫效果。结果表明:利用杆状病毒表达系统成功表达出重组杆状病毒rvAc-Cap和rvAc-NLS-Cap,且去除NLS序列的Cap基因表达水平更高;小鼠免疫重组蛋白rCap后,重组蛋白rCap与重组杆状病毒rvAc-Cap均能够刺激小鼠产生特异性IgG抗体,三免后Prime-Boost组的IgG抗体水平最高,而与其他免疫组差异不显著(P>0.05);三免后各免疫组淋巴细胞增殖指数显著高于PBS对照组,差异显著(P<0.05);各免疫组IFN-γ、IL-2和IL-4水平与PBS对照组比较差异显著(P<0.05),且Prime-Boost组水平最高。说明在杆状病毒表达系统中去除NLS序列可以提高Cap基因的表达;重组杆状病毒rvAc-Cap能够活化小鼠的免疫系统,刺激小鼠机体产生体液免疫与细胞免疫,而Prime-Boost免疫策略有效提高了免疫效果。

关键词：鸭圆环病毒 Cap蛋白核定位信号肽杆状病毒表达系统免疫原性

小鼠仙台病毒HN蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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黑龙江畜牧兽医 2024年第9期 66-70页

作者：李泽睿王霄孙莉费东亮马跃宇马鸣潇李明锦州医科大学畜牧兽医学院辽宁锦州121011

为了制备小鼠仙台病毒(Sendai virus,SeV)HN蛋白单克隆抗体,试验采用SeV参考毒株HN基因(GenBank登录号为NC_001552.1)对编码HN蛋白的基因密码子优化后克隆重组至原核表达载体pGEX-6P-1上获得重组质粒pGEX-6P-1-HN,将其转化至大肠杆菌BL2... 详细信息

为了制备小鼠仙台病毒(Sendai virus,SeV)HN蛋白单克隆抗体,试验采用SeV参考毒株HN基因(GenBank登录号为NC_001552.1)对编码HN蛋白的基因密码子优化后克隆重组至原核表达载体pGEX-6P-1上获得重组质粒pGEX-6P-1-HN,将其转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,用IPTG进行诱导表达,并对纯化的重组蛋白rHN进行SDS-PAGE分析。用重组蛋白rHN免疫Balb/c小鼠6次,取其脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,通过亚克隆技术和间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,然后注入小鼠腹腔制备抗HN蛋白单克隆抗体,分析单克隆抗体的免疫活性、特异性和稳定性。结果表明:获得3株分泌抗SeV HN蛋白抗体的杂交瘤细胞2F9、5D8、10H2,分泌的抗体效价均为1∶16 000左右。3株单克隆抗体的亚型均为IgG1,均可特异性识别SeV,并不与其他小鼠病毒产生交叉反应,具有良好的特异性。经过10次传代,3株单克隆抗体的效价均在1∶8 000以上,稳定性较好。说明试验成功制备了具备良好免疫活性、特异性和稳定性的抗SeV HN蛋白单克隆抗体,可以为SeV的检测提供有效试剂。

关键词：小鼠仙台病毒 HN蛋白单克隆抗体原核表达杂交瘤细胞

基于BOPPPS教学模式的兽医免疫学试验课程思政设计与实践——以炭疽诊断及皮毛检疫试验为例

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中国免疫学杂志 2023年第6期39卷 1199-1202页

作者：王书全马鸣潇高慎阳李丽锦州医科大学畜牧兽医学院锦州121000

课程思政是高校教师实现“立德树人”根本任务的重要途径。本文以兽医免疫学试验-炭疽诊断及皮毛检疫试验为例,基于以学生为中心的BOPPPS教学模式深入挖掘课程思政相关元素,将思政元素与BOPPPS教学模式的教学内容自然融合,将价值塑造、... 详细信息

课程思政是高校教师实现“立德树人”根本任务的重要途径。本文以兽医免疫学试验-炭疽诊断及皮毛检疫试验为例,基于以学生为中心的BOPPPS教学模式深入挖掘课程思政相关元素,将思政元素与BOPPPS教学模式的教学内容自然融合,将价值塑造、知识传授和能力培养三者融为一体,达到潜移默化的育人效果。

关键词：兽医免疫学试验课程思政 BOPPPS教学方法

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中蜂囊状幼虫病毒非编码区对蛋白翻译的影响

病毒学报 2022年第6期38卷 1429-1437页

作者：王莹莹马跃宇费东亮李明孙莉马鸣潇锦州医科大学畜牧兽学院锦州121000

RNA病毒非编码区对病毒RNA的转译起始、稳定及病毒蛋白表达等方面均起着重要作用,为研究中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)非编码区(Untranslated region,UTR)是否对蛋白翻译存在作用,将CSBV 5’UTR和3’UTR分别插入报告... 详细信息

RNA病毒非编码区对病毒RNA的转译起始、稳定及病毒蛋白表达等方面均起着重要作用,为研究中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)非编码区(Untranslated region,UTR)是否对蛋白翻译存在作用,将CSBV 5’UTR和3’UTR分别插入报告基因绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)5’端,通过观察绿色荧光强度研究CSBV非编码区对蛋白翻译的影响。此外,利用双荧光素酶检测试剂盒检测5’UTR和3’UTR对荧光素酶活性的影响。结果表明:CSBV 5’UTR和3’UTR能够有效抑制绿色荧光蛋白EGFP表达,其中3’UTR抑制绿色荧光蛋白表达作用更强;经双荧光素酶报告系统检测,质粒pGLl-3’UTR和pGL3-5’UTR中报告基因相对活性分别为对照质粒pGL3-control的0.39和0.69,差异极其显著(P<0.001)。由此可见,CSBV 5’UTR和3’UTR对其蛋白翻译存在抑制作用,且3’UTR作用更加明显。通过本研究,为深入认识CSBV 5’UTR和3’UTR在病毒复制和病毒蛋白翻译中的功能提供了帮助,也有助于对CSBV分子致病机制的研究。

关键词：中蜂囊状幼虫病病毒非编码区双荧光素酶抑制

城市公共空间景观活力研究及提升策略——以聊城市为例

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城市公共空间景观活力研究及提升策略——以聊城市为例

作者：马鸣潇聊城大学

学位级别：硕士

城市公共空间是满足城市居民公共生活和户外活动需求的重要场所,其合理的规划与设计可以有效美化城市环境、改善城市生态,同时可以更好的展现城市人文风貌、满足居民生活需求。景观活力呈现水平作为衡量城市公共空间品质的重要标准,可... 详细信息

城市公共空间是满足城市居民公共生活和户外活动需求的重要场所,其合理的规划与设计可以有效美化城市环境、改善城市生态,同时可以更好的展现城市人文风貌、满足居民生活需求。景观活力呈现水平作为衡量城市公共空间品质的重要标准,可以有效的反映出城市公共空间在居民公共生活中发挥出的效用水平。本研究通过探索各类公共空间的景观活力构成与表征规律,对城市公共空间景观活力的提升策略进行探索,为日后城市公共空间提升景观活力提供策略参考及建议,以期更好的满足未来城市发展和市民公共生活日益增长的新需求。聊城市作为著名的历史文化名城和宜居城市,城市公共空间资源丰富、种类繁多,且景观活力构成与表征特点鲜明,对本研究的实践具有良好的支撑意义。研究选取公园、广场、绿道三种典型的公共空间类型作为调研主要内容,以聊城公园等六处公共空间作为主要数据收集地点,实现了针对多类型、多样本的城市公共空间进行研究,保障了研究的全面性和有效性。本研究立足于城市公共空间的相关理论,结合具体公共空间样本进行实地调研,实现了对公共空间活力的探索,并提出了具体的提升公共空间活力的策略。本文由六章构成。第一章,具体说明研究的背景、目的和意义,详细概述了国内外相关研究进展情况,整体介绍了研究方法、基本框架。第二章,解释了城市公共空间、景观活力等基本概念,界定并介绍了本次研究的三种公共空间类型,即公园、广场、绿道;对作为本次研究具有重要参考价值的三种相关理论,环境行为学、需求层次理论以及场所理论进行了详细解读;以“构成”和“表征”两种维度对景观活力进行全面深入阐述,将景观活力构成提炼为区位要素、自然要素、空间要素、设施要素、人文要素五种分类形式,将景观活力表征划分为使用者特征、活动时间、活动形式、空间认知四个方面;明确了研究在实地调研阶段的具体内容。第三章,将相关科学理论作为基础指导,以多个实际项目为调研蓝本,在聊城市区筛选出三种类型公共空间各两处,作为本研究的主要调研对象进行长期观察和样本采集。第四章,经过对样本的筛选和分析,归纳出三种空间类型景观活力“构成”和“表征”两种维度的差异性总结。第五章,根据实地调研论据,同时结合相关文献资料观点和优秀案例经验分析作为参考,提出针对提升城市公共空间景观活力的提升策略,包括五项基本原则和十四条具体措施。第六章,对研究得出的论点进行归纳总结。

关键词：城市公共空间景观活力提升策略

小鼠肝炎病毒逆转录-重组酶聚合酶扩增检测方法的建立、验证及应用

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中国生物制品学杂志 2022年第6期35卷 729-733页

作者：闫雪李明张旭张振王霄马跃宇马鸣潇费东亮锦州医科大学畜牧兽医学院辽宁锦州121000 锦州市疾病预防控制中心辽宁锦州121000

目的建立小鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)的逆转录-重组酶聚合酶扩增(reverse-trancription recombinase ploymerase amplification,RT-RPA)检测方法。方法以GenBank中登录的MHV-FJ株(FJ6647223)M基因保守区段(82~317 bp)为靶基因,设计合成6对RPA扩增引物(M-MHV-1~6),筛选1对最适引物,同时优化反应温度(31、33、35、37、39、41℃)和时间(20、25、30、35 min),并验证该方法的特异性和敏感性。采用优化方法检测32份野生田鼠肝脏组织样本,并与RT-PCR法检测结果进行对比。结果筛选最适引物为M-MHV-2,最适反应温度和时间分别为37℃和30 min。该方法的检测下限为4.75×10;copies/μL,对鼠肺炎病毒(Pneumonia virus of mice,PVM)、仙台病毒(Sendai virus,SV)、汉坦病毒(Hantaan virus,HV)、鼠细小病毒(minute virus of mice,MVM)、呼肠弧病毒Ⅲ型(reovirus typeⅢ,ReoⅢ)无交叉反应。32份野生田鼠肝脏组织样本中,检测出阳性样本1份,检出率为3.13%(1/32),与RT-PCR检测结果一致。结论建立了MHV的RT-RPA检测方法,该方法的特异性及灵敏性良好,且具有反应迅速、操作简单等优点。本研究为MHV快速检测方法的进一步研发奠定了基础。

关键词：小鼠肝炎病毒重组酶聚合酶优化验证

中蜂囊状幼虫病毒VP1基因在杆状病毒表达系统中的表达

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中国生物制品学杂志 2013年第7期26卷 902-905,911页

作者：费东亮马鸣潇程健辽宁医学院畜牧兽医学院辽宁锦州121001

目的利用杆状病毒系统表达中蜂囊状幼虫病毒(chinese sacbrood virus,CSBV)结构蛋白VP1基因。方法提取感染CSBV的中蜂囊状幼虫总RNA,RT-PCR法扩增VP1基因,克隆至载体pFastBacI中,构建重组转座质粒pFastBacI-VP1,转化至感受态大肠埃希菌D... 详细信息

目的利用杆状病毒系统表达中蜂囊状幼虫病毒(chinese sacbrood virus,CSBV)结构蛋白VP1基因。方法提取感染CSBV的中蜂囊状幼虫总RNA,RT-PCR法扩增VP1基因,克隆至载体pFastBacI中,构建重组转座质粒pFastBacI-VP1,转化至感受态大肠埃希菌DHl0Bac中,获得重组杆粒rBacmid-VP1,转染至昆虫细胞sf9中,获得第1代重组杆状病毒,经透射电镜观察杆状病毒粒子;病毒连续传代3次后,RT-PCR鉴定重组杆状病毒,SDS-PAGE检测VP1蛋白的表达情况,Western blot检测表达产物的反应原性。结果重组杆粒经PCR鉴定构建正确;第1代重组杆状病毒经透射电镜观察,可见杆状病毒粒子;重组杆状病毒以M13通用引物和VP1基因特异引物进行PCR扩增,分别可见3 263和963 bp的片段,大小均与理论值一致;CSBV VP1基因能够在sf9细胞中表达,表达的重组VP1蛋白相对分子质量约31 000,可与兔抗CSBV-VP1阳性血清发生特异性反应。结论成功利用杆状病毒表达系统表达了CSBV VP1基因,为深入研究CSBV的感染机制和蜜蜂的免疫机制以及中蜂囊状幼虫病血清诊断试剂盒的研制奠定了基础。

关键词：中蜂囊状幼虫病毒 VP1基因杆状病毒表达系统

成果导向教育模式在动物免疫学实验教学中的应用

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中国免疫学杂志 2017年第10期33卷 1564-1565页

作者：孙莉马鸣潇锦州医科大学畜牧兽医学院锦州121001

成果导向教育（Outcome-based education,OBE）源于20世纪80年代北美基础教育改革运动,其创始人斯派蒂（B.Spady）提出：＂基于结果的教育明确地意味着关注和组织教育系统中的每件事物围绕着一个根本的目标,让所有的学生在完成他们的学... 详细信息

成果导向教育（Outcome-based education,OBE）源于20世纪80年代北美基础教育改革运动,其创始人斯派蒂（B.Spady）提出：＂基于结果的教育明确地意味着关注和组织教育系统中的每件事物围绕着一个根本的目标,让所有的学生在完成他们的学习经历后都能获得成功＂[1,2]。这种模式强调学生个人的进步和学业成就,要求教师清楚学生毕业时应达到的结果,然后设计适宜有效的教学手段使他们达到这些结果[3]。

关键词：教育模式免疫学实验教学导向应用动物教育改革教育系统学业成就

小鼠仙台病毒TaqMan-MGB探针荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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病毒学报 2023年第1期39卷 144-152页

作者：孙权麟马跃宇孙莉费东亮白杰英张旭李明马鸣潇锦州医科大学锦州121000 北京大学未来技术学院分子医学研究院北京100871 锦州市疾病预防控制中心锦州121000

仙台病毒(Sendai virus, SeV)能够引起啮齿类动物呼吸道疾病,引起免疫应答,严重影响SPF级动物模型实验结果,实验动物质量国家标准T/CALAS49-2017也将其作为SPF级大小鼠质量检测必检项目之一。为了开发用于快速检测及日常监测SeV的分子... 详细信息

仙台病毒(Sendai virus, SeV)能够引起啮齿类动物呼吸道疾病,引起免疫应答,严重影响SPF级动物模型实验结果,实验动物质量国家标准T/CALAS49-2017也将其作为SPF级大小鼠质量检测必检项目之一。为了开发用于快速检测及日常监测SeV的分子生物学诊断方法,本研究基于TaqMan-MGB探针荧光技术,根据GenBank中SeV的L基因的保守区段(8 556-15 242)序列,设计了1对特异性引物与1条5‵端携带羧基荧光素(FAM)与3‵端为淬灭基团(Eclipse)标记的TaqMan探针,标准品进行稀释建立标准曲线,并经反应条件优化,建立了TaqMan-MGB探针荧光定量RT-PCR检测方法,并对其特异性、敏感性与重复性进行评估。结果显示,最佳优化反应条件为:反应体系,20μmol/L;引物和探针浓度,10μmol/L和15μmol/L;退火温度,54℃;在特异性试验中,除SeV检测出现特异性曲线外,其他鼠类常见病毒均未出现特异性曲线;在敏感性试验中,Sev最低检测限为5.29×10^(1)拷贝/μL。在重复性试验中,其批内变异系数为0.44%~0.77%,批间变异系数为0.44%~1.03%。对临床样本进行检测,检出率高于常规的RT-PCR方法。因此,以SeV L基因保守序列为靶基因建立的TaqMan探针荧光定量RT-PCR方法具有敏感性高、特异性强、良好的重复性等优点,适用于对SPF级实验动物的SeV定期监测以及对野生鼠类的SeV日常监测和流行病学调查,为相关研究提供了良好的技术支持。

关键词：仙台病毒(SeV) TaqMan-MGB探针 qRT-PCR方法