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塔拉单宁液气射流氧化法制备鞣花酸

化学工业与工程 2024年第1期41卷 40-46页

作者：李瑞君徐涓张弘刘兰香马金菊张加研西南林业大学化学工程学院昆明650224 中国林业科学研究院高原林业研究所昆明650233

为解决五倍子原料稀缺的问题,以塔拉粉为原料,采用液气射流技术对塔拉单宁溶液进行氧化制备鞣花酸,探究鞣花酸的纯化方案,确定一条比较理想的工艺技术。通过高效液相色谱仪、紫外可见分光光度计、傅里叶变换红外光谱仪、同步热分析仪检... 详细信息

为解决五倍子原料稀缺的问题,以塔拉粉为原料,采用液气射流技术对塔拉单宁溶液进行氧化制备鞣花酸,探究鞣花酸的纯化方案,确定一条比较理想的工艺技术。通过高效液相色谱仪、紫外可见分光光度计、傅里叶变换红外光谱仪、同步热分析仪检测分析得到的样品。结果表明,以塔拉粉为原料制备鞣花酸的较优工艺条件为:采用水提法提取得到塔拉单宁溶液,塔拉单宁浓度为30 g·L^(-1),用12%NaOH溶液调节反应液的pH值至8.5,反应温度30℃,反应时间6 h,所得到的固相经碱溶酸沉后其鞣花酸的收率为44.58%,质量分数为88.69%,选用溶剂洗涤法对碱溶酸沉后鞣花酸样品进行再纯化,此时得到鞣花酸的收率为61.70%,质量分数为94.69%。此制备方法大幅度缩短了制备的反应时间且质量分数较高。

关键词：塔拉塔拉单宁鞣花酸液气射流

东海原甲藻dot-核酸层析试纸条检测技术的建立

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东海原甲藻dot-核酸层析试纸条检测技术的建立

作者：马金菊哈尔滨工业大学

学位级别：硕士

有害藻华(Harmful algal blooms,HABs)作为一种异常的生态现象,近年来其发生频率和危害程度明显上升,对生态环境、海洋经济以及人类健康造成了严重威胁。东海原甲藻(Prorocentrum donghaiense)作为一种有害微藻,在东海引发HABs的频率和... 详细信息

有害藻华(Harmful algal blooms,HABs)作为一种异常的生态现象,近年来其发生频率和危害程度明显上升,对生态环境、海洋经济以及人类健康造成了严重威胁。东海原甲藻(Prorocentrum donghaiense)作为一种有害微藻,在东海引发HABs的频率和规模均位居第一,为了减少该藻引起的HABs造成的经济损失,有必要建立快速有效的检测技术。近年来,试纸条检测技术由于具备简单、快速、成本低和肉眼可判断结果等优势已经得到了广泛的研究与应用。因此,本研究以东海原甲藻为目标藻种,建立了两种特异性的核酸层析试纸条检测技术,即聚合酶链式反应结合dot-核酸层析试纸条(Polymerase chain reaction integrated with dot nucleic acid chromatography strip,PCR-dNACS)和酶保护分析结合dot-核酸层析试纸条(Nuclease protection assay integrated with dot nucleic acid chromatography strip,NPA-dNACS),以期为东海原甲藻的现场检测提供新方法。(1)首先提取东海原甲藻的基因组DNA,利用通用引物D1/D2扩增核糖体大亚基(Ribosomal large subunit DNA,LSU rDNA)序列。将扩增产物进行纯化回收、T-A克隆和测序,确定目标藻种的LSU序列,并以其为目标序列设计用于PCR-dNACS的引物FP-Tag1/RP-Tag2以及用于NPA-dNACS的探针NPAP、CP1/CP2。以凡纳滨对虾的肌动蛋白基因(Penaeus vannamei actin gene,Genebank入口号:LOC113819259)为靶区间,设计用于dNACS的三条探针,即纳米金颗粒标记探针GNPs-cTag1、检测探针cTag2和控制探针Tag1。(2)基于特异性设计的引物标签序列Tag1/Tag2和dNACS上的探针序列之间的互补杂交建立了PCR-dNACS检测技术。然后对PCR扩增体系进行了优化,确定的最佳扩增条件如下:退火温度62℃,引物浓度0.15μM,Mg浓度1.5 mM。接着对dNACS体系进行了优化,确定的GNPs-cTag1探针最优浓度为0.4μM,cTag2探针最优浓度为2.5μM。将经过优化的PCR体系与dNACS结合验证探针的特异性以及检测技术的灵敏度和稳定性。特异性实验结果表明探针对目标藻具有特异性,与其它控制微藻不发生反应。用目标藻基因组DNA和含有目标藻LSU序列的重组质粒DNA为模板分别进行灵敏度测试,结果表明PCR-dNACS的灵敏度比普通PCR高10倍。稳定性测试结果表明干扰藻不会对目标藻的检测结果产生影响。此外,应用PCR-dNACS对含有目标藻的模拟自然水样进行检测,结果显示该技术的细胞检测限为1.27×10 cells mL。(3)为简化实验步骤和降低对大型仪器的依赖,本研究在PCR-dNACS的基础上,又建立了NPA-dNACS检测技术。首先以东海原甲藻LSU为目标序列设计特异性酶保护分析探针(Nuclease protection assay probe,NPAP)和捕获探针(Capture probe,CP)CP1/CP2,通过与其他微藻进行特异性实验,确定了探针对目标藻的特异性。其次,对NPA过程中涉及到的NPAP与rRNA的杂交温度和杂交时间、对核酸杂交过程中涉及到的CP1/CP2的浓度以及NPAP与CP1/CP2的杂交时间和杂交温度分别进行了优化,系统建立了NPA-dNACS检测体系。另外,通过梯度稀释的RNA作为分析样品评估NPA-dNACS的灵敏度,结果显示,NPA-dNACS对目标藻RNA的检测限是0.70 ng。最后通过模拟自然水样测试对NPA-dNACS的实用性进行验证,结果表明该技术可以满足东海原甲藻HABs的预警检测需求。

关键词：有害藻华东海原甲藻 dot-核酸层析试纸条 PCR 酶保护分析

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氧化胭脂虫红酸用于蘑菇中的铁离子检测

食品科学 2022年第24期43卷 342-348页

作者：刘兰香李想唐保山谭瑞徐涓马金菊张弘中国林业科学研究院高原林业研究所国家林业和草原局特色森林资源工程技术研究中心国家林业和草原局资源昆虫培育与利用重点实验室云南昆明650233 西南林业大学生命科学学院云南昆明650224

为进一步开发胭脂虫红酸的荧光检测应用,以胭脂虫红酸为原料,高碘酸钾为氧化剂,通过乙醇/水热法一步合成水溶性可发射蓝色荧光的氧化胭脂虫红酸(oxidized carminic acid,OCA)。通过傅里叶变换红外光谱法和X射线光电子能谱分析表明OCA结... 详细信息

为进一步开发胭脂虫红酸的荧光检测应用,以胭脂虫红酸为原料,高碘酸钾为氧化剂,通过乙醇/水热法一步合成水溶性可发射蓝色荧光的氧化胭脂虫红酸(oxidized carminic acid,OCA)。通过傅里叶变换红外光谱法和X射线光电子能谱分析表明OCA结构中含有共轭芳香环结构和丰富的含氧官能团,透射电子显微镜和动态散射光测试表明其平均粒径约为7.5 nm。光学测试表明,OCA的荧光发射位于380~620 nm区间,最大激发波长为336 nm,最大发射波长为445 nm;其荧光在pH 1~9的溶液和含有不同阴离子的盐溶液中稳定性良好;紫外-可见光测试显示其在波长225 nm处有最大吸收峰。OCA对铁离子(Fe^(3+))有良好的选择性,加入Fe^(3+)会导致其荧光强度明显降低,荧光发射峰积分面积减小率与Fe^(3+)质量浓度在11.2~56.0 mg/L范围内具有良好的线性关系,检出限为2.5 mg/L。应用结果表明,基于OCA作为荧光传感器的荧光检测方法用于实际样品中Fe^(3+)的检测,样品回收率在95.3%~110.4%之间,相对标准偏差在2.3%~4.6%之间,表明该方法可用于香菇、白菇和杏鲍菇等蘑菇中Fe^(3+)的含量检测,方法可靠。

关键词：胭脂虫红酸高碘酸钾荧光检测蘑菇铁离子

基于代谢组学法鉴定液体果蜡中漂白紫胶的模型构建

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食品科学 2023年第14期44卷 377-383页

作者：李坤张雯雯唐保山邢淑婕马金菊朱静雷福厚张弘信阳农林学院食品学院河南信阳464000 中国林业科学研究院高原林业研究所国家林业和草原局特色森林资源工程技术研究中心云南昆明650233 广西民族大学广西林产化学与工程重点实验室广西林产化学与工程协同创新中心广西南宁530006

为鉴定液体果蜡中是否含有漂白紫胶,借鉴代谢组学的研究思路和方法,采用液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱定性,并结合液相色谱蒸发光散射检测器对不同来源的漂白紫胶进行靶向化合物分析。通过无监督的主成分分析和有监督的偏最小二乘判... 详细信息

为鉴定液体果蜡中是否含有漂白紫胶,借鉴代谢组学的研究思路和方法,采用液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱定性,并结合液相色谱蒸发光散射检测器对不同来源的漂白紫胶进行靶向化合物分析。通过无监督的主成分分析和有监督的偏最小二乘判别分析等多元统计分析,筛选出12种靶向化合物。根据变量投影重要性值分为5种差异性化合物和7种共性化合物。最后,以共性化合物为生物标识物,在市售的商业化液体果蜡产品中,验证了该方法的可行性,通过该研究结论并结合色谱-质谱联用技术可以鉴定液体果蜡中是否含有漂白紫胶。

关键词：漂白紫胶鉴定液体果蜡液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱

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紫胶皂化废液中回收紫胶桐酸工艺研究

林产化学与工业 2023年第5期43卷 56-62页

作者：王世贤唐保山张弘马金菊刘兰香徐涓中国林业科学研究院高原林业研究所国家林业和草原局特色森林资源工程技术研究中心国家林业和草原局资源昆虫培育与利用重点实验室云南昆明650233 南京林业大学化学工程学院江苏南京210037

为提高紫胶桐酸得率,以工厂制备紫胶桐酸所残留的紫胶皂化废液为原料,通过构型转化法经盐析、酸析、脱色、重结晶等步骤回收紫胶桐酸,通过单因素试验优化紫胶桐酸构型转化工艺,采用核磁、质谱、红外、热重对制备的紫胶桐酸结构进行分析... 详细信息

为提高紫胶桐酸得率,以工厂制备紫胶桐酸所残留的紫胶皂化废液为原料,通过构型转化法经盐析、酸析、脱色、重结晶等步骤回收紫胶桐酸,通过单因素试验优化紫胶桐酸构型转化工艺,采用核磁、质谱、红外、热重对制备的紫胶桐酸结构进行分析,采用差示扫描量热、高效液相色谱C18柱拆分法等表征方法对制备的紫胶桐酸进行构型分析。研究结果表明:通过构型转化法回收紫胶桐酸可提高紫胶桐酸得率,确定了最佳制备条件为原料和浓盐酸的料液比3∶5(g∶mL)、反应温度100℃、反应时间7 h,活性白土用量为紫胶桐酸粗品质量的10%,活性白土脱色及使用20%乙醇溶液重结晶各2次后,所制备的紫胶桐酸得率为3.78%±0.5%,纯度为80.65%±0.41%。产物结构及构型分析结果表明:所制备的产物为赤式紫胶桐酸。该方法制备的紫胶桐酸来自废弃物,且精制后杂质较少,从而可有效提高紫胶桐酸得率。

关键词：紫胶桐酸构型转化苏式构型赤式构型

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构建“生问课堂”提升学科核心素养

读写算 2023年第17期 29-31页

作者：马金菊福建省福州市上街红峰小学

随着新课改的持续推进，无论是家长还是教师都在力求为学生营造一个优质的成长环境和学习环境。在小学数学教学中，传统的“师问生答”的教学理念和模式已经难以适应学生的个性化成长需要，为此教师应立足于教学实际，采取有效的措施构... 详细信息

随着新课改的持续推进，无论是家长还是教师都在力求为学生营造一个优质的成长环境和学习环境。在小学数学教学中，传统的“师问生答”的教学理念和模式已经难以适应学生的个性化成长需要，为此教师应立足于教学实际，采取有效的措施构建一个良好的“生问课堂”，使学生在勇于提问并积极提问的过程中提升学科核心素养，实现自我全面发展。

关键词： “生问课堂” 建构意义建构策略

基于SI-ATRP法制备的新型离子交换和固定金属亲和膜色谱固定相及其吸附性能

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基于SI-ATRP法制备的新型离子交换和固定金属亲和膜色谱固定相及...

作者：马金菊西北大学

学位级别：硕士

膜色谱是一种常用的生物大分子分离纯化技术,膜色谱高效分离的基础是性能优良且稳定的膜,传统方法制备的膜吸附容量低,影响了膜色谱分离效率。基于表面引发原子转移自由基聚合(SI-ATRP)法具有修饰密度高且接枝量可控的特点,本论文利用SI... 详细信息

膜色谱是一种常用的生物大分子分离纯化技术,膜色谱高效分离的基础是性能优良且稳定的膜,传统方法制备的膜吸附容量低,影响了膜色谱分离效率。基于表面引发原子转移自由基聚合(SI-ATRP)法具有修饰密度高且接枝量可控的特点,本论文利用SI-ATRP技术对再生纤维素(RC)膜表面进行改性分别制备了强阳离子交换膜和固定金属亲和膜,并研究了它们对蛋白质的吸附性能。全文主要内容包括： (1)以RC膜为基质,首先将2-溴异丁酰溴键合到膜表面作为引发剂,然后用SI-ATRP法将4-苯乙烯磺酸钠(NASS)接枝到膜表面,制备了高容量强阳离子交换膜,并通过改变ATRP聚合时间来控制接枝率。ATR-FTIR和XPS图谱证明4-苯乙烯磺酸钠己成功接枝到RC膜表面;SEM和AFM图谱显示改性膜表面形貌明显发生了变化;膜改性后纯水通量减小,说明膜表面修饰在一定程度上减小了膜孔径。用溶菌酶(LYZ)作为模型蛋白,研究了改性膜在静态和动态两种条件下对蛋白质的吸附性能,结果表明改性膜的静态和动态吸附容量均随着ATRP聚合时间延长而增大。当聚合时间为24h时,膜的静态和动态吸附容量分别达到138.3,92.9mg/mL,高于用传统方法制备的强阳离子交换膜的吸附容量。 (2)以RC膜为基质,将甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)通过SI-ATRP技术接枝到RC膜表面,再先后与乙二胺、POCl3反应,制备了膦酸化膜,通过螯合Zr4+,使之转化为固定Zr4+金属亲和膜。以XPS确定了固定金属亲和膜的化学结构。以标准磷酸化蛋白(β-酪蛋白)和标准非磷酸化蛋白(牛血清白蛋白,溶菌酶)为模型蛋白,测定了固定金属亲和膜对这三种蛋白的吸附量分别为38.5,5.0,5.8mg/mL,说明了固定Zr4+金属亲和膜能选择性分离富集磷酸化蛋白,在蛋白组学研究中具有潜在应用价值。

关键词：膜色谱再生纤维素膜原子转移自由基聚合强阳离子交换膜固定金属亲和膜

mTOR信号通路过度激活介导糖尿病小鼠海马组织Tau蛋白异常磷酸化

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mTOR信号通路过度激活介导糖尿病小鼠海马组织Tau蛋白异常磷酸化

作者：马金菊中南大学

学位级别：硕士

目的：研究链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病小鼠海马组织mTOR信号通路(p-mTOR和p-p70S6K)的变化及其与Tau蛋白过度磷酸化的关系。方法：6周龄雄性C57BL/6J小鼠50只随机分成正常组(Con组)10只和糖尿病组40只。适应性喂养一周... 详细信息

目的：研究链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病小鼠海马组织mTOR信号通路(p-mTOR和p-p70S6K)的变化及其与Tau蛋白过度磷酸化的关系。方法：6周龄雄性C57BL/6J小鼠50只随机分成正常组(Con组)10只和糖尿病组40只。适应性喂养一周后,采用腹腔注射STZ(200mg/kg)的方法建立糖尿病组,48小时后测尾静脉随机血糖>16.7mmol/I视为造模成功(n=38);正常对照组(Con组,n=10)小鼠予以腹腔注射等量柠檬酸缓冲。建模成功后将糖尿病组随机分为糖尿病对照组(DM组,n=19)和糖尿病雷帕霉素干预组(Rap组,n=19)。Rap组小鼠给予腹腔注射雷帕霉素溶液(2000ul/kg即2.5mg雷帕霉素粉末溶入2000ul DMSO中),每日一次,DM组和Con组小鼠予以相同容积的DMSO溶液腹腔注射,每日一次。干预15天后,一部分小鼠取血检测血糖,取新鲜海马组织-80℃冻存,用于提取组织蛋白行Western bloting检测p-mTOR、p-p70S6K、p-Tau的表达,剩余的小鼠用4%多聚甲醛灌注后取脑,石蜡切片行免疫组化染色。结果：(1)海马组织HE染色结果显示,Con组海马组织结构完整,锥体细胞排列整齐,致密,形态正常。DM组和Rap组锥体细胞层紊乱、中断、数量减少。(2)海马组织免疫组化结果显示,与Con组相比,DM组小鼠海马组织锥体细胞p-Tau(Ser396)表达增加,胞浆中可见大量深棕黄色阳性表达颗粒,染色强度明显增强;与DM组相比,Rap组小鼠海马组织锥体细胞p-Tau(Ser396)表达减少,见小量的棕黄色表达颗粒,染色强度较浅。(3)与Con组相比,DM组小鼠海马组织p-Tau(Ser396)表达增加,差异有统计学意义(p<0.05);与DM组相比,Rap组小鼠海马组织p-Tau(Ser396)表达减少,差异有统计学意义(p<0.05)。(4)与Con组相比,DM组小鼠海马组织p-mTOR(Ser2448)及p-p70S6K(Thr421/Ser424)表达增加,差异均有统计学差异(p<0.05);与DM组相比,Rap组小鼠海马组织p-mTOR(Ser2448)及p-p70S6K(Thr421/Ser424)表达减少,差异均有统计学差异(p<0.05)。结论：mTOR信号通路在STZ诱导的糖尿病小鼠海马组织中过度激活,并介导糖尿病小鼠海马组织Tau蛋白异常磷酸化。

关键词：糖尿病海马 mToR Tau蛋白过度磷酸化 p70S6K

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PCERG-1102多晶型研究

PCERG-1102多晶型研究

作者：马金菊郑州大学

学位级别：硕士

PCERG-1102在临床上主要应用于癌症的治疗,其在工业生产中所采用的晶型为无定型,该晶型不稳定、易分解、杂质含量高,需要保存在低温干燥的环境下,保存条件很苛刻,而且工业生产除杂工艺复杂、收率低、周期长。目前,该药物已有四种晶型被... 详细信息

PCERG-1102在临床上主要应用于癌症的治疗,其在工业生产中所采用的晶型为无定型,该晶型不稳定、易分解、杂质含量高,需要保存在低温干燥的环境下,保存条件很苛刻,而且工业生产除杂工艺复杂、收率低、周期长。目前,该药物已有四种晶型被专利保护,这使得国内企业在该产品的生产竞争中处于不利地位,为了突破专利的限制,本文对PCERG-1102的多晶型行为进行系统研究。由于杂质对溶解度和介稳区、结晶成核以及晶体生长过程等存在影响,实验室首先通过溶析结晶方法对原料药进行纯化,降低杂质对结晶过程中的影响。采用溶析结晶法对原料药进行除杂研究,分别考察不同溶剂体系对杂质含量的影响,并确定了溶剂为X,溶析剂为Y,该溶剂体系得到的产品纯度高,杂质含量低,纯度可以达到99.39%,杂质A为0.04%,杂质B为0.05%,杂质C为0.08%,均达到厂家要求含量。采用高通量晶型筛选法对高纯度的PCERG-1102进行的系统的晶型筛选,并考察了溶剂、操作温度等操作条件对PCERG-1102结晶产品晶型的影响。利用X-射线粉末衍射、差式热量扫描、热重分析法对实验室制备出的PCERG-1102的产品进行了表征,将特征图谱与专利文献对比发现,不仅筛选专利己报道的两个晶型,还得到了出四种新的晶型,分别命名为：晶型A、晶型D、晶型Ⅰ、晶型Ⅱ、晶型Ⅲ、晶型Ⅳ,其中晶型A、晶型D、晶型Ⅱ、晶型Ⅲ、晶型Ⅳ为无水物,晶型Ⅰ为溶剂化物。对筛选出来的六种晶型进行晶型转化研究,考察了溶剂体系、温度和水等因素对晶型之间转化的影响,稳定性评价中考察了原料药及六种晶型在25℃、40℃及-20℃的三种温度条件下的加速试验,结果显示晶型Ⅱ为比较稳定的晶型,晶型不易发生转化,杂质含量比较稳定,作为优势晶型进行结晶工艺优化。采用称重法对专利已报道的PCERG-1102晶型A、晶型D以及新筛选出来的晶型Ⅰ和晶型Ⅱ进行溶解度测定。本文确定晶型Ⅱ为优势晶型,并对晶型Ⅱ进行工艺优化,考察了温度、搅拌强度、悬浮密度等因素对PCERG-1102晶型Ⅱ结晶过程的影响,并确定了最佳的工艺条件：结晶温度为60℃;搅拌强度为300rpm;悬浮密度为25mg/mL等。

关键词：结晶多晶型晶型转化稳定性工艺优化