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结核分枝杆菌wbbL蛋白质可溶性表达及鉴定

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中国公共卫生 2009年第10期25卷 1204-1206页

作者：邬强辛毅马郁芳海南医学院检验医学系海口571101 中国热带农业科学院热带生物技术研究所大连医科大学生物化学教研室大连医科大学生物化学与分子生物学教研室

目的优化结核分枝杆菌wbbL基因在大肠埃希菌中的表达,获得大量可溶性产物并加以鉴定。方法不同条件下诱导pET16b-wbbL质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达;建立外源重组蛋白质与分子伴侣在大肠埃希菌中的共表达体系,优化其表达条件;超声... 详细信息

目的优化结核分枝杆菌wbbL基因在大肠埃希菌中的表达,获得大量可溶性产物并加以鉴定。方法不同条件下诱导pET16b-wbbL质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达;建立外源重组蛋白质与分子伴侣在大肠埃希菌中的共表达体系,优化其表达条件;超声破碎诱导表达的大肠埃希菌,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物;免疫蛋白印迹(Western blotting)法对重组蛋白质进行鉴定。结果共表达体系优化表达的蛋白质主要以可溶性形式存在,经0.5 g/L L-阿拉伯糖30℃诱导5 h、0.5 mmol/L异丙酸-D-硫代半乳糖苷30℃诱导2 h时,可溶性目的蛋白的产量最多,占细胞蛋白总量的55.6%,且所表达的蛋白质为wbbL基因产物。结论在大肠埃希菌中成功表达出大量可溶性结核分枝杆菌wbbL蛋白质,为研究其酶促反应动力学特征以及建立完善的筛选抗结核药物的酶反应体系提供了基础。

关键词：结核分枝杆菌克隆包涵体蛋白质可溶性

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基于培养组学的健康人口腔细菌分离鉴定初探

中国微生态学杂志 2022年第2期34卷 175-178页

作者：王冰孙媛媛马郁芳鄢秋龙大连公共卫生临床中心(大连市第六人民医院) 辽宁116000 大连医科大学生物化学与分子生物学教研室大连医科大学微生物教研室

目的通过对口腔的不同部位进行细菌分离,扩展对口腔微生物多样性的认识,以期为后续的口腔菌群研究提供参考。方法通过培养组学方法分离口腔不同部位的细菌,采集2个健康人扁桃体、唾液、牙菌斑3个部位的样本,使用13种培养基并于需氧和... 详细信息

目的通过对口腔的不同部位进行细菌分离,扩展对口腔微生物多样性的认识,以期为后续的口腔菌群研究提供参考。方法通过培养组学方法分离口腔不同部位的细菌,采集2个健康人扁桃体、唾液、牙菌斑3个部位的样本,使用13种培养基并于需氧和厌氧条件下进行培养,采用16S rRNA基因全长测序分析。结果总计获得144株菌,分属36个种,10个科,3个门。其中,链球菌属细菌种类最多。基于16S rRNA基因全长相似度98.65%的阈值判定,获得5种潜在全新细菌。3个部位中,扁桃体分离的细菌种类多样性最丰富。结论 13种培养基中,BHI培养基获得的口腔细菌多样性最好;BAB培养基与TSA培养基更适合口腔链球菌生长,链球菌的比例更高;LBB培养基上只有较单一的口腔细菌生长,不适于广谱分离口腔细菌。

关键词：口腔菌群培养组学细菌分离

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细菌生物膜耐药机制与相关感染的治疗

现代预防医学 2007年第24期34卷 4667-4669页

作者：邬强马郁芳海南医学院检验医学系大连医科大学生物化学教研室

在自然界、某些工业环境、人和动物体内外,绝大多数细菌是附着在有生命或无生命物体的表面,以生物膜(biofilm,BF)方式生长,而不是以浮游(planktonic)方式生长[1]。细菌生物膜(bacterial biofilm)是细菌在生长过程中为了适应生存环境而... 详细信息

在自然界、某些工业环境、人和动物体内外,绝大多数细菌是附着在有生命或无生命物体的表面,以生物膜(biofilm,BF)方式生长,而不是以浮游(planktonic)方式生长[1]。细菌生物膜(bacterial biofilm)是细菌在生长过程中为了适应生存环境而形成的一种与浮游细胞(planktonic cell)相对应的存在

关键词：细菌生物膜形成结构耐药治疗

耻垢分枝杆菌glmU基因克隆、表达及多克隆抗体的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第6期24卷 601-603页

作者：张文利申慧辛毅马郁芳大连医科大学生物化学教研室辽宁大连116044 大连医科大学生物技术系

目的:制备抗耻垢分枝杆菌(Smeg)GlmU的多克隆抗体,并对其特异性进行鉴定。方法:用PCR技术扩增SmegglmU,构建可在大肠杆菌中表达的重组质粒pET29b-SmegglmU,用IPTG诱导表达,经Ni-NTA-Agarose柱层析纯化后,以其为免疫原制备抗SmegGlmU的... 详细信息

目的:制备抗耻垢分枝杆菌(Smeg)GlmU的多克隆抗体,并对其特异性进行鉴定。方法:用PCR技术扩增SmegglmU,构建可在大肠杆菌中表达的重组质粒pET29b-SmegglmU,用IPTG诱导表达,经Ni-NTA-Agarose柱层析纯化后,以其为免疫原制备抗SmegGlmU的多克隆抗体,并以间接ELISA方法测定抗体效价,以Western blot方法鉴定抗体的特异性。结果:在大肠杆菌中得到了可溶性表达的SmegGlmU;以其免疫小鼠获得抗血清,Western blot鉴定显示获得了能特异性地作用于耻垢分枝杆菌GlmU的多克隆抗体,ELISA测定表明其效价高于1∶6400。结论:获得了能特异性地作用于耻垢分枝杆菌GlmU的高效价多克隆抗体,为应用反义RNA技术研究glmU基因的功能奠定了基础。

关键词： GlmU 多克隆抗体分枝杆菌

microRNA-29在心血管疾病中的研究进展

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大连医科大学学报 2014年第6期36卷 601-604,608页

作者：杨帆康健马郁芳大连医科大学七年制辽宁大连116044 大连医科大学生物化学教研室辽宁大连116044

miRNA是一类内源性非编码的小RNA,它可以通过降解或抑制靶mRNA参与基因表达的调控。miRNA在心血管的生理病理改变中起着重要的作用。miRNA-29家族是其中之一,它既参与维持主动脉血管的完整性,又参与了动脉粥样硬化的调节,它还在心肌纤... 详细信息

miRNA是一类内源性非编码的小RNA,它可以通过降解或抑制靶mRNA参与基因表达的调控。miRNA在心血管的生理病理改变中起着重要的作用。miRNA-29家族是其中之一,它既参与维持主动脉血管的完整性,又参与了动脉粥样硬化的调节,它还在心肌纤维化过程中发挥作用等。这些研究可以为临床诊治提供基因水平的诊断依据和新的治疗方向。

关键词：微小RNA-29 心血管疾病 miRNA-29

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自噬在环境污染物细胞毒性机制中的作用

环境与职业医学 2015年第9期32卷 892-896页

作者：姚晓峰马郁芳大连医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室辽宁116044

自噬是指细胞内受损细胞器及大分子物质包裹于双层或多层膜结构,形成自噬小体,自噬小体与溶酶体融合并对其内容物进行消化的过程。正常水平的自噬是一种通过降解胞内异常组分以维持细胞稳态的过程,然而自噬水平过度上调则引起细胞自噬... 详细信息

自噬是指细胞内受损细胞器及大分子物质包裹于双层或多层膜结构,形成自噬小体,自噬小体与溶酶体融合并对其内容物进行消化的过程。正常水平的自噬是一种通过降解胞内异常组分以维持细胞稳态的过程,然而自噬水平过度上调则引起细胞自噬性死亡。本文通过总结自噬在环境污染物毒作用机制中发挥的作用,为环境污染物的毒作用机制研究提供线索。

关键词：自噬环境污染物毒作用机制自噬性细胞死亡溶酶体膜通透性凋亡

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一种源于蜗牛的壳聚糖水解酶性质的研究

大连医科大学学报 2007年第5期29卷 442-444,447页

作者：苏莉辛毅马郁芳大连医科大学辽宁大连116044

[目的]确定一种源于蜗牛的壳聚糖水解酶的性质。[方法]PAHBAH法测定酶活性,电泳法测定分子量,Lin-eweare-Burk双倒数做图法测定酶促反应动力学特性,等电聚焦凝胶电泳测定等电点。[结果]纯化后的酶分子中外切酶的活性已经被除去,分子量为... 详细信息

[目的]确定一种源于蜗牛的壳聚糖水解酶的性质。[方法]PAHBAH法测定酶活性,电泳法测定分子量,Lin-eweare-Burk双倒数做图法测定酶促反应动力学特性,等电聚焦凝胶电泳测定等电点。[结果]纯化后的酶分子中外切酶的活性已经被除去,分子量为100 kD,酶的反应动力学符合Michaelis-Menten动力学规律,在25℃反应条件下,米氏常数Km为0.154 mmoL/L,最大反应速率Vmax为0.305μmoL/L.h,等电点为5.45。[结论]确定了一种壳聚糖水解酶的性质,壳聚糖水解酶水解的壳聚糖产物壳寡糖有抗肿瘤、抗病毒的作用。

关键词：壳聚糖水解酶蜗牛酶壳寡糖

携带CD基因骨髓间充质干细胞对C6大鼠胶质瘤体内抑制作用研究

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生物化学与生物物理进展 2012年第5期39卷 448-457页

作者：宋飞邢琪宋克东刘健姬广春马郁芳刘天庆马学虎田晓峰大连医科大学第二附属医院神经外科大连116027 大连理工大学精细化工国家重点实验室干细胞与组织工程研发中心大连116024 大连医科大学第一附属医院麻醉科大连116011 大连医科大学生物化学与分子生物学系大连116044 大连医科大学第二附属医院普外科大连116027

为了研究自杀基因——胞嘧啶脱氨酶基因(cytosine deaminase gene,CD基因)对大鼠脑胶质瘤的体内治疗效果,采用基因转导系统将慢病毒包装的CD基因转染骨髓间充质干细胞(MSC)并使其长时间、高效表达,然后移植到使用颅内立体定向接种法制作... 详细信息

为了研究自杀基因——胞嘧啶脱氨酶基因(cytosine deaminase gene,CD基因)对大鼠脑胶质瘤的体内治疗效果,采用基因转导系统将慢病毒包装的CD基因转染骨髓间充质干细胞(MSC)并使其长时间、高效表达,然后移植到使用颅内立体定向接种法制作的40只SD大鼠胶质瘤模型中.按接种细胞类型将实验SD大鼠分为5组,每组8只:①C6胶质瘤;②C6+MSCs细胞(1∶1);③C6+MSCs细胞(1∶2);④C6+MSC-codA/eGFP细胞(1∶1);⑤C6+MSC-codA/eGFP细胞(1∶2).瘤龄7天后腹腔注射500 mg/(kg.d)5-氟胞嘧啶(5-flucytosine,5-FC),共14天.用磁共振成像(MRI)动态监测肿瘤的体积并进行了大鼠存活期观察、常规病理分析、RT-PCR检测、HE染色.结果显示,第①组瘤龄14天时病灶呈圆形,中心见坏死区,肿瘤平均246 mm3,均存活期15.3天,第②组平均生存期16.0天,第③组平均生存期16.6天,第④⑤组自然存活期均大于30天,14天时病灶平均体积分别为55 mm3、40 mm3,28天时肿瘤抑制率分别为77.24%、83.28%.MRI扫描可清楚显示肿瘤的大小、形态和内部结构,与病理结果高度相关;MRI动态观察可证实携带CD基因的骨髓间充质干细胞及5-FC治疗系统治疗C6颅内胶质瘤有效;RT-PCR检测结果证实肿瘤组织内有胞嘧啶脱氨酶表达.

关键词：磁共振成像胶质瘤基因治疗 CD基因骨髓间充质干细胞

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一种源于蜗牛的壳聚糖水解酶的纯化和定性

中国微生态学杂志 2007年第6期19卷 496-498页

作者：苏莉辛毅马郁芳辽宁医学院科学实验中心辽宁锦州121001 大连医科大学辽宁大连116027

目的研究属于蜗牛的壳聚糖水解酶的纯化方法,得到壳聚糖水解酶的纯品,从而为氨基酸序列分析、基因克隆及工业菌制备奠定前期基础。方法建立检测蜗牛壳聚糖水解酶活性的手段并考察影响酶活性的各种因素,比较现有层析方法纯化蜗牛壳聚糖... 详细信息

目的研究属于蜗牛的壳聚糖水解酶的纯化方法,得到壳聚糖水解酶的纯品,从而为氨基酸序列分析、基因克隆及工业菌制备奠定前期基础。方法建立检测蜗牛壳聚糖水解酶活性的手段并考察影响酶活性的各种因素,比较现有层析方法纯化蜗牛壳聚糖水解酶的实际效果,确定纯化的最佳条件,从而设计出最合理的纯化方案。结果经苯基琼脂糖柱层析,DEAE-Sepharose离子交换层析和Sephacryl S-300凝胶过滤分离,得到高纯高活性蛋白质,在SDS-PAGE上用银染的方法呈单一蛋白质条带,比活性提高33.333倍,纯化倍数为18.272,得率为0.15。结论实验建立了1种从蜗牛中分离高效高纯度壳聚糖水解酶的方法,为壳寡糖的酶解工业生产提供了新思路、新方法。

关键词：壳聚糖聚糖酶水解酶寡糖蜗牛酶