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风疹病毒E1重组蛋白及其抗原肽在大肠杆菌中的表达

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风疹病毒E1重组蛋白及其抗原肽在大肠杆菌中的表达

作者：马贞丽暨南大学

学位级别：硕士

目的利用重叠PCR合成风疹病毒E1全长基因,同时扩增E1主要抗原表位的基因序列,分别构建它们的原核表达载体并表达蛋白,为研发高灵敏度风疹ELISA诊断试剂奠定基础。方法对风疹E1基因进行生物信息学分析,根据大肠杆菌密码子偏爱性对其密码... 详细信息

目的利用重叠PCR合成风疹病毒E1全长基因,同时扩增E1主要抗原表位的基因序列,分别构建它们的原核表达载体并表达蛋白,为研发高灵敏度风疹ELISA诊断试剂奠定基础。方法对风疹E1基因进行生物信息学分析,根据大肠杆菌密码子偏爱性对其密码子进行优化;设计多对寡核苷酸引物,以重叠PCR法分别合成该基因的3个片段,再用酶切连接法将各段拼接成全长为1 443 bp的RV E1,将E1基因的全长序列克隆导入原核表达载体pET32a获得pET32-RV E1克隆并测序;选取E1全长基因中195 aa-305 aa抗原肽基因序列进行扩增,再以酶切连接的方法将合成的抗原肽序列克隆导入原核表达载体pET32a,获得重组质粒载体pET32-E1epitope测序鉴定。将重组原核表达载体pET32-RV El和pET32-E1epitope在大肠杆菌BL21(DE3)表达株中利用IPTG诱导蛋白表达并优化蛋白表达量, SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。结果1.分别进行了8轮、5轮和6轮的重叠PCR扩增,合成风疹E1全长基因3个片段;以酶切连接法将3个片段拼接成全长E1基因并克隆入pET32a,构建载体pET32-RV E1,PCR、酶切和测序鉴定结果表明,合成的E1基因大小、序列与预期相符;构建获得重组质粒pET32-RV E1。在37℃下用终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导蛋白表达,Western blot检测到预期的蛋白条带;2.以PCR扩增成功获得风疹E1抗原肽基因并构建重组质粒pET32-El epitope,测序结果正确;在37℃下以终浓度为1 mmol/L IPTG诱导抗原肽表达,SDS-PAGE和Western blot检测到预期的蛋白条带;且以IPTG终浓度为0.1 mmol/L诱导6小时后表达量达到最高。结论成功合成了密码子优化的风疹病毒E1基因并构建其重组质粒pET32-RV E1,表达完整E1蛋白;同时成功扩增风疹病毒E1抗原肽段基因,构建其原核表达载体pET32-E1epitope并表达该抗原肽。

关键词：风疹病毒E1蛋白 E1抗原肽重叠PCR 酶切连接原核表达

重叠PCR-酶切连接法人工合成风疹病毒E1基因及其重组质粒构建

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第6期31卷 544-549页

作者：芦春斌马贞丽暨南大学生命科学技术学院生殖免疫研究所广东广州510632

目的:利用重叠PCR-酶切连接法人工合成风疹病毒E1基因的全长序列。方法:对风疹E1基因进行生物信息学分析,根据大肠杆菌密码子偏爱性对其密码子进行优化;设计多对寡核苷酸引物,以重叠PCR法分别合成该基因的3个片段,测序鉴定后以酶切连接... 详细信息

目的:利用重叠PCR-酶切连接法人工合成风疹病毒E1基因的全长序列。方法:对风疹E1基因进行生物信息学分析,根据大肠杆菌密码子偏爱性对其密码子进行优化;设计多对寡核苷酸引物,以重叠PCR法分别合成该基因的3个片段,测序鉴定后以酶切连接法将各段拼接成全长为1 443 bp的RVrE1,将E1基因的全长序列克隆导入原核表达载体pET32a。结果:分别进行8轮、5轮和6轮的重叠PCR扩增,合成风疹基因3个片段;以酶切连接法将3个片段拼接成全长rE1基因并克隆入pET32a构建成载体pET32-RV rE1,PCR、酶切和测序鉴定结果表明,合成的E1基因大小、序列与预期相符;构建获得重组质粒pET32-RV rE1。结论:成功合成了密码子优化的风疹病毒E1基因并构建其重组质粒pET32-RV rE1。

关键词：风疹E1基因重叠PCR 酶切连接密码子优化

利用华支睾吸虫的排卵规律和消炎利胆片提高虫卵检出率的研究

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国际检验医学杂志 2020年第3期41卷 355-357页

作者：戴芳王新黄冬梅马贞丽广西中医药大学附属瑞康医院

目的利用华支睾吸虫的排卵规律和服用消炎利胆片来提高华支睾吸虫虫卵的检出率。方法将300例血清肝吸虫免疫球蛋白G(IgG)抗体阳性的疑似华支睾吸虫感染者随机分成3组,第1组为常规方法留取标本的对照组,第2组为服用消炎利胆片组,第3组则... 详细信息

目的利用华支睾吸虫的排卵规律和服用消炎利胆片来提高华支睾吸虫虫卵的检出率。方法将300例血清肝吸虫免疫球蛋白G(IgG)抗体阳性的疑似华支睾吸虫感染者随机分成3组,第1组为常规方法留取标本的对照组,第2组为服用消炎利胆片组,第3组则根据华支睾吸虫的排卵周期,分别于第1天、10天、20天留取粪便标本;各组送检的粪便标本均采用改良加藤厚涂片法、水洗沉淀法和醚醛沉淀法三种方法检测华支睾吸虫卵,并对检测结果进行χ^2检验分析。结果第2组和第3组检测华支睾吸虫卵的检出率明显高于第1组,差异有统计学意义(P0.05)。结论利用华支睾吸虫的排卵规律留取标本和服用消炎利胆片均能明显提高华支睾吸虫虫卵检出率,有助于明确华支睾吸虫病的诊断,在临床上合理用药。

关键词：华支睾吸虫排卵规律消炎利胆片检出率

深圳地区HIV-1感染者的本底耐药水平调查初探

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现代预防医学 2008年第17期35卷 3388-3390+3393页

作者：吴永胜马贞丽赵锦赵广录王晓辉陈琳甘永霞张燕冯铁建深圳市疾病预防控制中心

[目的]建立一套完善,可靠,适合深圳人群的HIV-1耐药性基因型检测方法,调查分析深圳地区未接受抗病毒治疗的HIV感染者/AIDS患者的病毒株耐药突变及其本底流行情况。[方法]从未接受抗病毒治疗的HIV-1感染者血浆中提取病毒RNA,采用RT-PCR... 详细信息

[目的]建立一套完善,可靠,适合深圳人群的HIV-1耐药性基因型检测方法,调查分析深圳地区未接受抗病毒治疗的HIV感染者/AIDS患者的病毒株耐药突变及其本底流行情况。[方法]从未接受抗病毒治疗的HIV-1感染者血浆中提取病毒RNA,采用RT-PCR扩增目的基因片断,并对扩增片断进行序列测定和分析。[结果]通过HIV-1耐药性基因型检测法能够获得1300bp长度的目的基因片断。经序列分析所得的21份RT基因结果中有8份对NRTI产生耐药突变(38.5%),5份对NNRTI产生耐药突变(23.81%);另外分析所得的12份PR基因结果中1份产生对蛋白酶抑制剂主要耐药突变(8.33%),5份产生对蛋白酶抑制剂次要耐药突变(41.67%)。[结论]HIV-1耐药性基因型检测法能有效地监测HIV-1感染者血浆中的耐药性病毒株的存在,并且检测结果表明,深圳地区未接受抗病毒治疗的HIV-1感染者中已经存在耐药突变株。

关键词： HIV-1 RT-PCR 序列测定蛋白酶基因逆转录酶基因耐药性

探讨磁珠法与煮沸法对乙型肝炎病毒基因分型检出率及其与HBV DNA定量的关系

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中国社区医师 2021年第27期37卷 119-120页

作者：马贞丽田玉玲戴芳罗靖广西中医药大学附属瑞康医院广西南宁530011

目的:研究磁珠法与煮沸法用于检测乙型肝炎病毒(HBV)基因分型的检出率,并探讨基因分型检出情况与HBV DNA定量间的关系。方法:2019年6月-2019年9月收治乙肝患者95例,随机分为两组,A组应用磁珠法,B组应用煮沸法对血浆进行处理,提取HBV DN... 详细信息

目的:研究磁珠法与煮沸法用于检测乙型肝炎病毒(HBV)基因分型的检出率,并探讨基因分型检出情况与HBV DNA定量间的关系。方法:2019年6月-2019年9月收治乙肝患者95例,随机分为两组,A组应用磁珠法,B组应用煮沸法对血浆进行处理,提取HBV DNA后通过实时荧光聚合酶链式反应(PCR)进行肝炎基因分型及DNA定量。比较两组患者检测结果并探讨基因分型结果检出率与HBV DNA定量水平的关联。结果:A组患者B型、D型、B/C混合型及总检出率均显著高于B组,C型检出率显著低于B组,差异有统计学意义(P<0.05);两种方法检测HBV基因型检出率与HBV DNA水平呈正比,但应用磁珠法对低DNA水平样本的基因型检出明显优于煮沸法。结论:磁珠法提取核酸阳性率与灵敏度均较高,对于非C型及低病毒载量患者具有较高检出率。

关键词：磁珠法煮沸法乙型肝炎病毒基因分型 HBV DNA定量

医学检验课程教学中学生自主学习能力培养的探讨与实践

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广西中医药大学学报 2019年第2期22卷 110-113页

作者：田玉玲马贞丽高小坚罗靖雷力民广西中医药大学瑞康临床医学院

医学检验技术是医学类一个重要的专业。检验专业从基础课到专业课的教学模式都是教师讲授为主,学生很少参与其中,教师台上讲,学生下面听,在课堂呈现"高耗讲课、低效接收"的现象,考什么就重点教什么,不考的就简单了解,所以学生学习的主... 详细信息

医学检验技术是医学类一个重要的专业。检验专业从基础课到专业课的教学模式都是教师讲授为主,学生很少参与其中,教师台上讲,学生下面听,在课堂呈现"高耗讲课、低效接收"的现象,考什么就重点教什么,不考的就简单了解,所以学生学习的主动性不够,积极性不高,学习效率低下。怎样结合检验课程的特点,选择恰当的教学方法,来激发学生的学习兴趣、促进学生自主学习检验专业的知识、提升教学效果和质量,是摆在医学检验技术专业教师面前的一个重要课题。

关键词：医学检验仪器技术自主学习参与式教学

艾滋病和丙型肝炎病毒感染吸毒者的树突状细胞表面分子基因多态性分析

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中华预防医学杂志 2008年第12期42卷 901-905页

作者：赵锦赵广录马贞丽吴肖冰冯铁建石向东王晓辉王辉朱托夫广东省深圳市疾病预防控制中心艾滋病预防控制科 518020 深圳市东湖医院美国华盛顿大学医学院

目的研究吸毒人群中艾滋病病毒（HIV）和丙型肝炎病毒（HCV）感染者与未感染者中，等位基因树突状细胞表面特异性分子同源物（DC—SIGNR）的分布情况，筛选出HIV或HCV抗性基因。方法选择深圳市戒毒所吸毒人群血液样本500份，其中313份... 详细信息

目的研究吸毒人群中艾滋病病毒（HIV）和丙型肝炎病毒（HCV）感染者与未感染者中，等位基因树突状细胞表面特异性分子同源物（DC—SIGNR）的分布情况，筛选出HIV或HCV抗性基因。方法选择深圳市戒毒所吸毒人群血液样本500份，其中313份来自静脉注射吸毒者，对他们进行HIV及HCV抗体筛查，并提取外周血基因组DNA，对DC—SIGNR颈区基因进行聚合酶链反应（PCR）扩增，对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测和基因序列测定分析。结果检出97例HIV阳性吸毒者，均为静脉注射吸毒者，且全部为HCV阳性；HIV阴性吸毒人群中，HCV抗体阳性率57．57％（232／403）；HIV阴性静脉注射吸毒者中，HCV阳性率63．89％（138／216）；而采用鼻吸等其他方式吸毒者的阳性率为50．26％（94／187），静脉注射吸毒与其他方式吸毒者阳性率的差异具有统计学意义（x^2=7．61，P=0．0058）。x^2检验结合确切概率法分析显示，HIV阳性的吸毒者中，DC—SIGNR颈区5／6和5／8等位基因型的出现频率[4．55％（4／88）和2．27％（2／88）]高于HIV未感染组[1．04％（4／384）和0（0／384），确切概率法P=0．043和P=0．034]，具有统计学意义；HCV阳性吸毒人群中，各类杂合子及纯合子的出现频率与HCV阴性吸毒人群间差异无统计学意义，静脉注射吸毒者与其他方式吸毒者之间差异无统计学意义。结论在吸毒人群中，DC—SIGNR颈区等位基因分布与HCV感染无明显相关性，而等位基因型5／6可能与HIV感染相关，但由于频率较低，仍需进一步验证。

关键词：肝炎病毒 HIV 多态性,单核苷酸突变

1例不同方法学对甲、戊型肝炎病毒抗体检测结果的差异分析

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中国社区医师 2023年第6期39卷 105-107页

作者：马贞丽唐芳玫李颖罗欢刁志宏广西中医药大学附属瑞康医院检验科广西南宁530011

目的:分析1例不同方法学对甲、戊型肝炎病毒抗体检测结果的差异。方法:选取2021年9月广西中医药大学附属瑞康医院收治的1例初次检测及复查结果均显示为甲型肝炎病毒(HAV-IgM)弱阳性、戊型肝炎病毒(HEV-IgM)阳性的患者作为研究对象。患... 详细信息

目的:分析1例不同方法学对甲、戊型肝炎病毒抗体检测结果的差异。方法:选取2021年9月广西中医药大学附属瑞康医院收治的1例初次检测及复查结果均显示为甲型肝炎病毒(HAV-IgM)弱阳性、戊型肝炎病毒(HEV-IgM)阳性的患者作为研究对象。患者初次采用酶联免疫吸附法检测,结果显示HAV-IgM弱阳性、HEV-IgM阳性,复查结果与初次检测结果保持一致;随后前往其他医院检测(化学发光法),结果均为阴性。为探讨检测结果矛盾的原因,分别采用多家公司试剂盒及免疫印迹法进行验证。结果:该例患者HAV-IgM为阳性,初检及复查的安图结果与实验室罗氏验证的结果一致;HEV-IgM为阴性,安图结果与免疫印迹结果一致。结论:HAV-IgM、HEV-IgM具有多种不同方法学试剂,实验室应根据自身临床实验室的条件选择适合的方法学开展项目检测。针对异常结果应积极与临床沟通,结合临床症状判断,或采用准确度更高的方法学复查,并建议受检者定期复检。

关键词：甲型肝炎戊型肝炎抗体检测免疫印迹

SAST教学模式在临床生物化学检验实验教学中的应用研究

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检验医学与临床 2022年第18期19卷 2582-2584,2592页

作者：罗欢张建国陈华粟艳梅唐芳玫李颖马贞丽刁志宏广西中医药大学附属瑞康医院广西南宁530011

目的探讨SAST教学模式在临床生物化学检验实验教学中的应用效果。方法选取2017~2019级医学检验技术专业的本科生303名,随机分为试验组和对照组,分别采用SAST教学模式和传统教学模式。通过综合试卷实验考核、学生对各项能力提高程度的自... 详细信息

目的探讨SAST教学模式在临床生物化学检验实验教学中的应用效果。方法选取2017~2019级医学检验技术专业的本科生303名,随机分为试验组和对照组,分别采用SAST教学模式和传统教学模式。通过综合试卷实验考核、学生对各项能力提高程度的自我评价及对SAST教学模式满意度的评价等指标来比较两组的教学效果。结果试验组学生的综合试卷实验考核优于对照组,总成绩差异有统计学意义(P<0.05);问卷调查统计提示试验组对各项能力提高程度的自我评价明显优于对照组(P<0.05);98.7%的试验组学生对SAST教学模式的教学效果感到满意。结论SAST教学模式可提高学生的自主学习能力,培养学生的科研创新思维和团队协作精神,从而提高了临床生物化学检验技术学科的教学质量,值得进一步推广应用。

关键词： SAST教学模式生物化学检验实验教学