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吡格列酮对小鼠脑缺血再灌注海马区神经元损伤的影响

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首都医科大学学报 2023年第4期44卷 645-651页

作者：王荣亮闫峰田悦黄语悠罗玉敏马舒贝首都医科大学宣武医院脑血管病研究室北京100053 大连理工大学附属中心医院神经内科辽宁大连116033

目的研究吡格列酮对小鼠脑缺血再灌注后海马区神经元的影响,并对其作用机制进行探讨。方法将36只青年雄性C57BL/6J小鼠按随机数字表法完全随机分为3组:假手术组、对照组及吡格列酮组(n=12)。采用大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery ... 详细信息

目的研究吡格列酮对小鼠脑缺血再灌注后海马区神经元的影响,并对其作用机制进行探讨。方法将36只青年雄性C57BL/6J小鼠按随机数字表法完全随机分为3组:假手术组、对照组及吡格列酮组(n=12)。采用大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)的方式制备小鼠脑缺血再灌注损伤模型。小鼠脑缺血后再灌注即刻按照25 mg/kg体质量的剂量灌胃吡格列酮或等体积的0.9%(质量分数)氯化钠注射液,每天1次,持续7 d。分别在术后3、7 d采用神经功能缺损程度评分(Neurological Severity Scores,NSS)对小鼠神经功能进行评估。术后7 d处死小鼠,脑组织制作石蜡切片,通过尼氏(Nissl)染色检测脑梗死百分比及小鼠脑组织皮质区、纹状体区、海马区的齿状回(dentate gyrus,DG)、CA1和CA3区的神经元数量;通过免疫印迹法检测脑组织海马区凋亡相关蛋白B-细胞淋巴瘤因子2(B-cell leukemia/lymphoma 2,Bcl2)和Bcl2关联X蛋白(Bcl2 associated X protein,Bax)的表达。结果与对照组小鼠比较,吡格列酮组小鼠在脑缺血后第3、7 d的NSS评分差异无统计学意义,而脑梗死体积百分比则显著减小(P<0.05),皮质区和海马CA3区尼氏小体的数量显著升高(P<0.05),并伴随Bcl2/Bax比值的升高(P<0.05)。结论吡格列酮可以减轻小鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织海马CA3区神经元丢失程度,其作用机制可能与调节海马区Bcl2/Bax比值有关。

关键词：吡格列酮脑缺血神经元损伤神经保护

变构促红细胞生成素对中年雌性脑缺血小鼠白质损伤的作用研究

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中国脑血管病杂志 2022年第1期19卷 24-34页

作者：王荣亮杨振宏马舒贝王韬罗玉敏焦力群首都医科大学宣武医院脑血管病研究室北京100053 首都医科大学宣武医院神经外科北京100053 大连市中心医院神经内科

目的研究变构促红细胞生成素(MEPO)对成年雌性脑缺血小鼠白质的保护作用。方法将30只成年雌性C57BL/6J小鼠按随机数字表法完全随机分为3组:假手术组(Sham组),脑缺血模型组(Vehicle组)及脑缺血MEPO治疗组(MEPO组),每组10只。采用大脑中... 详细信息

目的研究变构促红细胞生成素(MEPO)对成年雌性脑缺血小鼠白质的保护作用。方法将30只成年雌性C57BL/6J小鼠按随机数字表法完全随机分为3组:假手术组(Sham组),脑缺血模型组(Vehicle组)及脑缺血MEPO治疗组(MEPO组),每组10只。采用大脑中动脉远端血管永久性闭塞的方式制备小鼠脑缺血模型。MEPO组小鼠在大脑中动脉远端血管永久性闭塞即刻通过腹腔注射MEPO(5000 IU/kg),Vehicle组在制模后注入等量的等渗盐水,Sham组只进行血管暴露,不进行闭塞。脑缺血后第2天开始3组小鼠每天以50 mg/kg的剂量腹腔注射5-溴-2′-脱氧尿苷(BrdU),每日1次,持续至术后11 d。术前、术后每日记录各组小鼠的体质量。分别在术前及术后1、3、5、9、12、14 d采用贴条实验对小鼠神经功能进行评估[记录小鼠第1次触碰贴条所用的时间(接触时间)和将贴条撕掉所用的时间(移除时间)]。小鼠脑缺血后第3天,每组处死5只小鼠,2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色观察脑梗死和脑水肿程度(脑梗死百分比和脑水肿百分比)。脑缺血后第14天处死其余生存的小鼠,免疫荧光染色分别检测脑白质损伤程度[髓鞘碱性蛋白(MBP)/神经丝200(NF200)荧光强度比值]、小胶质细胞表型(采用Iba1标记小胶质细胞,CD16/Iba1标记M1型小胶质细胞,CD206/Iba1标记M2型小胶质细胞)、少突胶质细胞[2′,3′-环腺苷酸-3′-磷酸二酯酶(CNPase)标记成熟少突胶质细胞,BrdU标记新生细胞,两者共染阳性(CNPase+/BrdU+)表示新生的少突胶质细胞]以及CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)在小胶质细胞中的表达情况(以C/EBPβ+/Iba1+表示)。结果(1)死亡:Vehicle组小鼠死亡2只(分别于术后12 d和13 d),MEPO组小鼠死亡1只(术后3 d),Sham组小鼠无死亡。(2)体质量:与Vehicle组比较,MEPO组小鼠体质量虽然有增加趋势,但差异均无统计学意义(均P>0.05)。(3)神经功能:与Vehicle组小鼠比较,MEPO组小鼠在脑缺血后第1、5、14天的移除时间均明显降低(均P<0.05)。(4)脑梗死和脑水肿体积百分比:脑缺血后3 d,MEPO组脑梗死百分比和脑水肿百分比分别为(22.7±5.9)%、(1.9±0.5)%,明显低于Vehicle组[分别为(37.0±9.8)%、(4.3±1.4)%],差异均有统计学意义(均P≤0.05)。(5)白质损伤:小鼠脑缺血后第14天,免疫荧光染色结果显示,Vehicle组和MEPO组小鼠均发生脱髓鞘,MEPO组脱髓鞘明显轻于Vehicle组;Sham组、Vehicle组、MEPO组小鼠的MBP/NF200荧光强度比值分别为4.6±0.8、0.9±0.5、2.9±1.0,差异有统计学意义(F=18.750,P<0.01);与Sham组比较,Vehicle组和MEPO组小鼠脑组织皮质区MBP/NF200荧光强度比值显著降低(均P<0.05);MEPO组小鼠脑组织皮质区MBP/NF200荧光强度比值明显高于Vehicle组(P<0.05)。(6)小胶质细胞表型变化:小鼠脑缺血后第14天,免疫荧光染色结果显示,Sham组的小胶质细胞处于相对静息状态,与Sham组比较,Vehicle组和MEPO组的M1和M2型小胶质细胞均发生活化。与Vehicle组比较,MEPO组小鼠脑组织中CD16+/Iba1+小胶质细胞数量有减少趋势,但差异无统计学意义[(154±47)个/mm^(2)比(237±47)个mm^(2),P=0.068];而MEPO组中CD206+/Iba1+小胶质细胞数量比Vehicle组明显增多[(218±49)个/mm^(2)比(121±43)个/mm^(2),P=0.042],小胶质细胞更倾向于M2表型极化。(7)少突胶质细胞新生:小鼠脑缺血后第14天,Sham组、Vehicle组、MEPO组CNPase+/BrdU+的细胞数量分比为(1.6±0.9)、(15.7±4.9)、(26.3±5.1)个/mm^(2),3组间差异有统计学意义(F=48.000,P<0.01);与Vehicle组比较,MEPO组中CNPase+/BrdU+细胞数量明显增加(P<0.05)。(8)小胶质细胞中C/EBPβ的表达:小鼠脑缺血后14 d,Sham组、Vehicle组、MEPO组C/EBPβ+/Iba1+细胞数量分别为(1.4±1.1)、(33.3±11.6)、(18.3±6.7)个/mm^(2),3组间差异有统计学意义(F=21.750,P<0.01);与Vehicle组比较,MEPO组中C/EBPβ+/Iba1+细胞数量明显减少(P<0.05)。结论MEPO对雌性小鼠脑缺血有神经保护作用,减轻了雌性小鼠脑缺血后的白质损伤程度,可能与降低

关键词：促红细胞生成素脑缺血白质损伤 CCAAT增强子结合蛋白β

大鼠局灶性脑缺血后血管生成素-1及2 mRNA的表达变化

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大鼠局灶性脑缺血后血管生成素-1及2 mRNA的表达变化

作者：马舒贝吉林大学

学位级别：硕士

研究目的研究大鼠在局灶性脑缺血的早期脑内血管生成素(angiopoietin)-1、2mRNA在不同时间点的表达变化。试图探求其中的规律并探讨分析脑缺血后Ang-1、Ang-2可能的作用机制,推测其在缺血性脑卒中后的作用。对于它们的研究将为缺血性脑... 详细信息

研究目的研究大鼠在局灶性脑缺血的早期脑内血管生成素(angiopoietin)-1、2mRNA在不同时间点的表达变化。试图探求其中的规律并探讨分析脑缺血后Ang-1、Ang-2可能的作用机制,推测其在缺血性脑卒中后的作用。对于它们的研究将为缺血性脑血管病的早期治疗研究提供新的科学依据和基础。研究方法选择健康Wistar雄性大鼠,鼠龄3个月,体重25080g,由长春高新技术园区动物中心提供,随机分为正常对照组、假手术组和缺血组,缺血组又分为缺血1、3、6、12、24、48、72小时组,每组7只。大鼠术前自由进食进水。采用根据Koizumi、Zea longa等报道的方法所改进的线栓法,即采用颈外动脉插入线栓法制成永久性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测各组标本脑内缺血区和缺血半影区内Ang-1mRNA及Ang-2mRNA的表达水平。研究结果正常对照组和假手术组Ang-1mRNA中等量表达,Ang-2mRNA极低量表达;缺血组中,在脑缺血早期3小时检测到Ang-1mRNA表达水平下调,脑缺血48小时后Ang-1mRNA表达水平上调,上调的趋势延伸到缺血后72小时;缺血组中,在脑缺血早期检测到Ang-2mRNA在缺血3小时表达上调,且在脑缺血后12小时左右出现高峰,这种表达一直持续到脑缺血后72小时。结论1.利用线栓法成功制作大鼠MCAO模型。2.局灶性脑缺血诱导了缺血中心区和缺血半影区脑组织中缺血后72小时内Ang-1mRNA表达呈先下降后上升的波动性变化。3.局灶性脑缺血诱导了缺血后72小时内,缺血中心区和缺血半影区脑组织中Ang-2mRNA早期表达水平的上升。4. Ang-1和Ang-2可能在局灶性脑缺血后与其它血管特异性生长因子共同参与缺血半影区的新血管形成并抑制神经元细胞凋亡,有利于改善缺血半影区血液供应和促进神经功能恢复。

关键词：局灶性脑缺血血管生成素-1 血管生成素-2 逆转录 PCR

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脑出血的研究进展和治疗现状

中国脑血管病杂志 2015年第5期12卷 272-276页

作者：马舒贝吉训明罗玉敏首都医科大学宣武医院脑血管病研究室北京100053

脑出血占所有卒中的10%~20%[1],是目前循证医学证实有效治疗手段较少的卒中之一[2]。规范治疗和综合管理能明显降低病死率,改善脑出血的结局。超早期止血、控制颅内高压、急性期合理降低血压、脑室内组织型纤溶酶原激活剂溶栓和微创手... 详细信息

脑出血占所有卒中的10%~20%[1],是目前循证医学证实有效治疗手段较少的卒中之一[2]。规范治疗和综合管理能明显降低病死率,改善脑出血的结局。超早期止血、控制颅内高压、急性期合理降低血压、脑室内组织型纤溶酶原激活剂溶栓和微创手术等技术的合理应用,有望改变目前脑出血匮乏的临床治疗策略,降低病死率,改善患者远期生存质量[3]。

关键词：脑出血止血颅内高压超早期止血治疗血压管理外科治疗

地塞米松对痴呆大鼠模型脑内炎症损伤的保护作用

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中国老年学杂志 2007年第22期27卷 2183-2186页

作者：孙威马涤辉马舒贝大连市第三人民医院神经内科吉林大学第一医院神经内科吉林长春130021 大连市中心医院

目的观察地塞米松对Aβ所致AD大鼠模型脑内炎症的抑制作用,从而为探索AD的炎症损伤机制的可能性提供依据。方法Aβ溶液及生理盐水作海马立体定向注射后,地塞米松腹腔注射治疗模型大鼠并以生理盐水作对照,采用方差对量化指标行统计学处理... 详细信息

目的观察地塞米松对Aβ所致AD大鼠模型脑内炎症的抑制作用,从而为探索AD的炎症损伤机制的可能性提供依据。方法Aβ溶液及生理盐水作海马立体定向注射后,地塞米松腹腔注射治疗模型大鼠并以生理盐水作对照,采用方差对量化指标行统计学处理,采用免疫组织化学染色,显示胶质细胞反应及IL-1β,TNF-α表达情况。结果Aβ组大鼠海马区小胶质细胞和星形胶质细胞数目多,分布密集,染色深。Aβ+地塞米松组大鼠海马区小胶质细胞和星形胶质细胞反应性增生及神经元丧失情况明显减轻。结论凝聚态的Aβ1-40使胶质细胞过度激活,表达IL-1β和TNF-α,并可被地塞米松抑制,证明AD的发病机制中可能存在慢性炎症反应过程的参与。

关键词：阿尔茨海默病 β淀粉蛋白肿瘤坏死因子-1α 白细胞介素-1β 地塞米松神经胶质细胞

脑白质损伤加重db/db小鼠远端大脑中动脉闭塞后焦虑行为

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中国医师进修杂志 2022年第5期45卷 407-414页

作者：马舒贝王建懿孙威潘心赵红玲大连市中心医院神经内科大连116033 西安交通大学第一附属医院神经内科西安710061 大连市第三人民医院神经内科大连116033

目的研究db/db小鼠远端大脑中动脉闭塞(dMCAO)后焦虑行为加重的机制。方法选择db/db小鼠作为2型糖尿病模型,选择同窝杂合子小鼠(db/+)和C57野生型(WT)小鼠作为双对照组。采用dMCAO模型作为急性脑缺血模型。测量假手术组和dMCAO前后各品... 详细信息

目的研究db/db小鼠远端大脑中动脉闭塞(dMCAO)后焦虑行为加重的机制。方法选择db/db小鼠作为2型糖尿病模型,选择同窝杂合子小鼠(db/+)和C57野生型(WT)小鼠作为双对照组。采用dMCAO模型作为急性脑缺血模型。测量假手术组和dMCAO前后各品系小鼠的血糖水平。通过免疫荧光染色检测微管相关蛋白-2表达,评估dMCAO后35 d时各品系小鼠的脑组织缺损体积。选择旷场测试评估小鼠的焦虑行为。选择免疫荧光染色检测非磷酸化神经丝蛋白4(SMI32)和髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达以评估小鼠dMCAO术后35 d时脑白质损伤情况,并将SMI32和MBP的免疫荧光强度比值与旷场测试的中心停留时间和角落停留时间进行相关性分析以评估脑白质损伤程度与焦虑行为的相关性。选择流式细胞技术检测小鼠缺血侧脑组织中T细胞,包括调节性T细胞(Tregs)和B细胞的数量。结果假手术组和dMCAO组中db/db小鼠术前和术后血糖水平明显高于db/+小鼠和WT小鼠(均P0.05)。旷场测试结果:假手术组和dMCAO组db/db小鼠在旷场行走总路径距离均明显少于db/+小鼠、WT小鼠(P0.05)。dMCAO组db/db小鼠和WT小鼠脑梗死周边外囊区SMI32/MBP荧光强度比值与旷场中心停留时间呈负相关(r=-0.67,P=0.02);dMCAO组db/db小鼠和WT小鼠脑梗死周边外囊区SMI32/MBP荧光强度比值与旷场角落停留时间呈正相关(r=0.62,P=0.03)。dMCAO后3 d,db/db小鼠梗死侧脑组织中总T细胞、CD8+T细胞以及CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞数量均明显少于WT小鼠(4079±1345比70055±3374、141.30±28.36比2714.00±463.20、148.00±61.15比3007.00±639.90)(P0.05)。结论通过对比分析db/db小鼠dMCAO后焦虑行为严重程度,脑白质脱髓鞘损伤程度及梗死侧脑组织中T细胞数量,尤其是CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞数量,推测卒中后免疫介导的脑白质损伤可能参与加重db/db小鼠dMCAO后焦虑行为。因存在基因剂量效应,db/+小鼠在涉及焦虑行为评估的动物实验中可能不适宜作为db/db小鼠的对照组使用。

关键词：小鼠焦虑远端大脑中动脉闭塞脑白质损伤

db/db小鼠远端大脑中动脉闭塞模型行为学评估方法的筛选

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中国脑血管病杂志 2020年第9期17卷 520-530页

作者：马舒贝孙威赵海苹罗玉敏辽宁省大连市中心医院神经内科 116033 大连市第三人民医院神经内科首都医科大学宣武医院脑血管病研究室

目的通过对比分析瘦素受体突变导致自发性2型糖尿病的db/db小鼠远端大脑中动脉闭塞(dMCAO)后行为学评估结果,筛选适合db/db小鼠dMCAO模型的行为学评估方法。方法选择db/db小鼠作为2型糖尿病模型,选择同窝杂合子小鼠(db/+)和C57野生型小... 详细信息

目的通过对比分析瘦素受体突变导致自发性2型糖尿病的db/db小鼠远端大脑中动脉闭塞(dMCAO)后行为学评估结果,筛选适合db/db小鼠dMCAO模型的行为学评估方法。方法选择db/db小鼠作为2型糖尿病模型,选择同窝杂合子小鼠(db/+)和C57野生型小鼠(WT)作为双对照组。采用dMCAO作为脑缺血模型。测量各品系小鼠血糖水平及dMCAO后3、35 d时脑组织缺损体积以评估合并糖尿病的卒中模型造模是否成功。选择以下行为学评估方法进行分析:转棒测试、圆筒测试、粘贴撕除测试、错步测试方法评估dMCAO模型的感觉运动功能及运动协调性;选择Morris水迷宫测试和新事物认知测试评估模型认知功能;选择旷场测试评估模型焦虑状态和一般运动能力及探索能力。结果db/db小鼠dMCAO前后血糖水平均明显高于db/+和WT小鼠(均P0.05)。结论通过对db/db、db+、WT小鼠dMCAO后行为学评估结果的对比分析,提示粘贴撕除测试和错步测试适用于感觉运动功能和运动协调性的评估;新事物认知测试适用于认知功能评估;旷场测试适用于焦虑状态和一般运动能力及探索能力评估;因存在基因剂量效应,db/+小鼠在可能涉及焦虑状态的行为学评估中不能作为完全正常对照组使用。

关键词： db/db小鼠行为学评估远端大脑中动脉闭塞

大鼠局灶性脑缺血后脑组织Ang-1和Ang-2mRNA的表达及意义

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吉林大学学报（医学版） 2009年第1期35卷 30-33页

作者：马舒贝孙威李霞刘亢丁吉林大学第一医院神经内科吉林长春130021 辽宁省大连市中心医院神经内科辽宁大连116033 辽宁省大连市第三人民医院神经内科辽宁大连116033

目的：观察大鼠在局灶性脑缺血早期脑组织内血管生成素（Ang）-1和Ang-2mRNA在不同时间点的表达变化，探讨其变化规律并分析脑缺血后Ang-1、Ang-2在缺血性脑卒中发病中的作用机制。方法：大鼠随机分为正常对照组（C组）、假手术组（S组... 详细信息

目的：观察大鼠在局灶性脑缺血早期脑组织内血管生成素（Ang）-1和Ang-2mRNA在不同时间点的表达变化，探讨其变化规律并分析脑缺血后Ang-1、Ang-2在缺血性脑卒中发病中的作用机制。方法：大鼠随机分为正常对照组（C组）、假手术组（S组）和缺血组（I组），缺血组又分为缺血1、3、6、12、24、48和72h组，采用改进的线栓法制做永久性大脑中动脉闭塞（MCAO）模型，采用RT—PCR技术检测各组大鼠脑组织缺血半影区内Ang-1 mRNA及Ang-2 mRNA的表达水平。结果：正常对照组和假手术组Ang-1 mRNA中等量表达，两组表达量比较差异无显著性（P〉0．05）；Ang-2 mRNA极低量表达，两组表达量比较差异无显著性（P〉0．05）；缺血组Ang-1 mRNA表达水平在脑缺血早期（3～6h）低于C组（P〈0．01），脑缺血48～72h高于C组（P〈0．01）；Ang-2 mRNA在脑缺血后3h表达水平高于C组，在脑缺血后12h出现高峰，且持续至脑缺血后72h（P〈0．01）。结论：Ang-1和Ang-2可能在局灶性脑缺血后与其他血管特异性生长因子共同参与缺血半影区的新血管形成并抑制神经元细胞凋亡，有利于改善缺血半影区血液供应和促进神经功能恢复。

关键词：局灶性脑缺血血管生成素-1 血管生成素-2 逆转录聚合酶链反应

伴有听力下降的CADASIL一家系报告及文献复习

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中风与神经疾病杂志 2013年第12期30卷 1123-1124页

作者：马舒贝王苏平王晓虹大连市中心医院神经内科辽宁大连116033

伴皮质下梗死和白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病（cerebral autosomal dominant arteriopathywith subcorticalin—farcts and leukoencephalopathy，CADASIL）是一种家族遗传性非动脉硬化性、非淀粉样变脑血管病。

关键词： CADASIL 一家系报告常染色体显性遗传性脑动脉病文献复习听力下降皮质下梗死动脉硬化性家族遗传性