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牛的泰勒虫18S rRNA基因序列比较研究

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牛的泰勒虫18S rRNA基因序列比较研究

中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：刘爱红殷宏关贵全刘志杰刘军龙马米玲党志胜李有全罗建勋中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室

本研究对中国兽医微生物菌种保藏中心原虫资源库内收藏3种牛的泰勒虫的10个地方分离株(包括:环形泰勒虫4株、瑟氏泰勒虫3株和中华泰勒虫3株的18S rRNA基因序列进行了测定,并用所测得的牛的泰勒虫中国株基因序列和自GenBank下载的各种泰...

本研究对中国兽医微生物菌种保藏中心原虫资源库内收藏3种牛的泰勒虫的10个地方分离株(包括:环形泰勒虫4株、瑟氏泰勒虫3株和中华泰勒虫3株的18S rRNA基因序列进行了测定,并用所测得的牛的泰勒虫中国株基因序列和自GenBank下载的各种泰勒虫18S rRNA基因序列构建了系统发生树。结果显示:牛的泰勒虫18S rRNA基因大小在1740-1890 bp之间,环形泰勒虫、瑟氏泰勒虫和中华泰勒虫规律地分置于3个不同的进化枝上,且种内地方分离株之间的同源性明显大于种问同源性,说明采用18S rRNA基因序列测定方法对牛的泰勒虫进行分类与传统分类方法具有较好的符合性。该研究也可为建立针对18S rRNA基因为靶标的牛的泰勒虫病PCR检测方法奠定基础。

关键词：

微小牛蜱Bm86基因的克隆及真核表达载体的构建

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中国兽医科技 2005年第2期35卷 124-128页

作者：李文卉罗建勋刘磊党志胜高金亮关贵全刘志杰刘爱红马米玲任巧云殷宏甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730046

为了克隆微小牛蜱Bm86 基因及构建该基因的表达载体,以微小牛蜱饥饿幼蜱的破解物提取的总RNA为模板,参照已发表的微小牛蜱Bm86基因的核苷酸序列,设计了1对引物,采用RT-PCR技术获得微小牛蜱Bm86基因;将Bm86基因克隆入载体,并进行序列分析... 详细信息

为了克隆微小牛蜱Bm86 基因及构建该基因的表达载体,以微小牛蜱饥饿幼蜱的破解物提取的总RNA为模板,参照已发表的微小牛蜱Bm86基因的核苷酸序列,设计了1对引物,采用RT-PCR技术获得微小牛蜱Bm86基因;将Bm86基因克隆入载体,并进行序列分析,结果证明,克隆的Bm86基因序列与GenBank上登录的Bm86基因序列的同源性达97.4%,而且该序列包含完整的开放阅读框。将该基因克隆入真核表达载体 pPIC9K,构建并获得了重组真核表达载体pPIC9K-Bm86。

关键词：微小牛蜱 Bm86基因克隆重组表达载体

基于等位特异的PCR方法对我国牛瑟氏泰勒虫的多态性分析

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基于等位特异的PCR方法对我国牛瑟氏泰勒虫的多态性分析

中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：刘爱红关贵全刘军龙李有全马米玲牛庆丽任巧云白启殷宏罗建勋中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省兽医寄生虫病重点实验室

牛瑟氏泰勒虫(Theileria sergenti)是一种广泛分布于世界各地的蜱传性疾病,其裂殖子主要表面蛋白(MPSP)基因是泰勒虫属的一种保守性蛋白,在温和性泰勒虫属中,该基因已做为流行病学调查和分类学研究的标志性蛋白。本实验中笔者以泰勒虫...

牛瑟氏泰勒虫(Theileria sergenti)是一种广泛分布于世界各地的蜱传性疾病,其裂殖子主要表面蛋白(MPSP)基因是泰勒虫属的一种保守性蛋白,在温和性泰勒虫属中,该基因已做为流行病学调查和分类学研究的标志性蛋白。本实验中笔者以泰勒虫裂殖子主要表面蛋白基因(MPSP)为靶标,使用等位特异的PCR方法和DNA测序相结合,对我国牛瑟氏泰勒虫的多态性进行分析。对采自不同省份的288份牛的血液样品进行等位特异的PCR检测,结果表明98份阳性。对已筛选的阳性样品,分别使用三对不同的等位特异型引物(Chitose C-、IkedaI-和buffeli B-型)做PCR检测。结果表明:大多数基因型属C-和I-型,其中C-型的阳性率为83%,I-型的阳性率为69%,而B-型仅为36%,且有三种型的混合感染。除上述三种基因型之外,国外已报道的Thai-型未检测到。对部分阳性样品进行基因测序,进化分析表明:在中国,感染牛的瑟氏泰勒虫依据其裂殖子表面蛋白基因分析,至少可以分为四个型,即C-、I-、B1-和B2型,没有Thai-型。

关键词：

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一种用于非洲猪瘟病毒检测的PCR方法

畜牧兽医学报 2011年第8期42卷 1201-1206页

作者：杨吉飞关贵全刘志杰汪月凤李有全马米玲刘爱红任巧云陈泽苟惠天杜鹏飞罗建勋殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室兰州730046

基于非洲猪瘟病毒(ASFV)VP72基因设计引物,建立一种检测非洲猪瘟病毒的PCR方法。应用本研究所建立的方法与OIE参考的方法进行比较,并对参考实验室提供的非洲猪瘟病毒17个分离株的基因组以及本实验室收集的野外样品进行检测。结果显示:... 详细信息

基于非洲猪瘟病毒(ASFV)VP72基因设计引物,建立一种检测非洲猪瘟病毒的PCR方法。应用本研究所建立的方法与OIE参考的方法进行比较,并对参考实验室提供的非洲猪瘟病毒17个分离株的基因组以及本实验室收集的野外样品进行检测。结果显示:本研究设计的引物具有良好的特异性,与猪的其他病原没有交叉反应;其敏感性与OIE参考的方法相当;所建立的PCR方法能够成功扩增非洲猪瘟病毒17个分离株的基因组,野外样品检测均为阴性。根据上述研究结果,本研究所建立的方法具有很好的应用性,能够用于非洲猪瘟疫病的诊断以及防控。

关键词：聚合酶链式反应非洲猪瘟诊断

我国绵羊无浆体16S rRNA基因序列的同源性比较

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我国绵羊无浆体16S rRNA基因序列的同源性比较

中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会

作者：刘志杰殷宏罗建勋关贵全马米玲刘爱红党志胜高金亮任巧云中国农业科学院兰州兽医研究所

绵羊无浆体病是绵羊和山羊红细胞内专性寄生的,由节肢动物传播的立克次氏体引起的传染性疾病.据调查,我国的羊无浆体只有1种,即,绵羊无浆体(Anaplasma ovis),本病广泛分布于我国的北方省区,给疫区的养羊业造成一定的威胁,但各地报道病... 详细信息

绵羊无浆体病是绵羊和山羊红细胞内专性寄生的,由节肢动物传播的立克次氏体引起的传染性疾病.据调查,我国的羊无浆体只有1种,即,绵羊无浆体(Anaplasma ovis),本病广泛分布于我国的北方省区,给疫区的养羊业造成一定的威胁,但各地报道病原致病性上存在较大的差异,由于病原的鉴定均是通过形态和传统生物学手段作出的,有些人怀疑它们是否为同一个种.本实验从采自甘肃省景泰、榆中和张家川,河北省承德和河南卢氏的五株绵羊无浆体中提取了DNA,利用根据16S rRNA 基因在原核生物上的保守性合成的引物对其进行扩增,并将扩增产物与pGEM-T 载体相连,转化大肠杆菌JM109,筛选阳性克隆进行测序。通过将测得的序列与GenBank 中源自美国、乌拉圭、南非、津巴布韦、澳大利亚、以色列和日本的12株边缘无浆体,4株中央无浆体和3株绵羊无浆体的16S rRNA 基因序列的同源性百分率的比较,绘制了系统发生树.结果表明:不同种的无浆体位于系统发生树上的不同枝上,而我国分离的5株绵羊无浆体的序列均与国外已知的三株绵羊无浆体位于进化树的同一分枝上,且基因序列的同源性大于99.3%,这说明分离于我国的这5株羊无浆体均属于绵羊无浆体,且与国外分离株具有较高的同源性。

关键词：绵羊无浆体 16S rRNA基因进化关系

八种杀蜱药物与球孢白僵菌分生孢子的生物相容性

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中国兽医科学 2009年第5期39卷 456-460页

作者：任巧云关贵全李有全马米玲刘爱红刘军龙牛庆丽金玉荣王子坚罗建勋殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为探索绿色高效的杀蜱新制剂,采用营养液萌发法和平板生长法测定了8种杀蜱药物与球孢白僵菌分生孢子的生物相容性。结果显示,这8种药物与白僵菌的相容性和药物浓度呈负相关,次亚致死剂量的苦皮藤素、灭幼脲和溴氰菊酯与白僵菌的相容性良... 详细信息

为探索绿色高效的杀蜱新制剂,采用营养液萌发法和平板生长法测定了8种杀蜱药物与球孢白僵菌分生孢子的生物相容性。结果显示,这8种药物与白僵菌的相容性和药物浓度呈负相关,次亚致死剂量的苦皮藤素、灭幼脲和溴氰菊酯与白僵菌的相容性良好,萌发率均在85%以上;用浸渍法测得白僵菌孢子浓度在1×107/mL时对蜱的致死率可达100%。结果表明,所试验的8种药物中,苦皮藤素、灭幼脲和溴氰菊酯可与白僵菌配伍使用;白僵菌的最佳使用浓度为1×107/mL。

关键词：杀蜱药物球孢白僵菌蜱生物相容性

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10种农药与绿僵菌的相容性测定

江西农业大学学报 2009年第2期31卷 242-246页

作者：任巧云殷宏关贵全马米玲刘爱红李有全刘军龙牛庆丽金玉荣罗建勋中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为研究10种农药对绿僵菌生长的影响情况,选用10种不同农药,稀释成不同浓度分别加入到SDAY培养基中,用直径为4 mm的无菌打孔器在其中央打孔,然后吸取50μL绿僵菌孢子悬浮液分别注入孔中,置温度25℃、湿度80%的条件下培养,十字法测量菌落... 详细信息

为研究10种农药对绿僵菌生长的影响情况,选用10种不同农药,稀释成不同浓度分别加入到SDAY培养基中,用直径为4 mm的无菌打孔器在其中央打孔,然后吸取50μL绿僵菌孢子悬浮液分别注入孔中,置温度25℃、湿度80%的条件下培养,十字法测量菌落的直径和观察孢子颜色变化。结果表明:杀菌剂多菌灵对绿僵菌的生长抑制作用最强,生物化学农药吡虫啉对绿僵菌的生长抑制作用最弱;随着农药浓度的降低,所试农药对绿僵菌的生长抑制作用也随之降低。通过测定10种农药与绿僵菌的相容性,选择生物相容性好的农药以低剂量与之配伍,既可使菌剂增效,又可大幅度降低农药用量,为开发防治害虫的绿僵菌制剂奠定基础。

关键词：绿僵菌相容性农药

牛的巴贝斯虫18S rRNA基因序列比较研究

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畜牧兽医学报 2005年第9期36卷 906-911页

作者：罗建勋殷宏刘光远关贵全刘志杰刘爱红党志胜马米玲鲁炳义孙彩琴白启吕文顺陈溥言中国农业科学院兰州兽医研究所兰州730046 南京农业大学动物医学院南京210095

对中国已报道的8株牛的巴贝斯虫(包括1株牛巴贝斯虫、1株双芽巴贝斯虫、1株大巴贝斯虫、3株卵形巴贝斯虫和2株巴贝斯虫未定种)的18S rRNA基因序列进行了测定与比较.自感染动物的血液中纯化虫体,提取基因组DNA,PCR扩增靶基因,然后将其连... 详细信息

对中国已报道的8株牛的巴贝斯虫(包括1株牛巴贝斯虫、1株双芽巴贝斯虫、1株大巴贝斯虫、3株卵形巴贝斯虫和2株巴贝斯虫未定种)的18S rRNA基因序列进行了测定与比较.自感染动物的血液中纯化虫体,提取基因组DNA,PCR扩增靶基因,然后将其连接到pGEM-T Easy载体上,进行克隆测序.研究结果显示:牛的巴贝斯虫18S rRNA基因大小在1 653～1 699 bp之间;用所测得的和自GenBank下载的各种动物的巴贝斯虫18SrRNA基因序列构建了系统发生树,发现由刻点血蜱传播的大巴贝斯虫伊犁株与由长角血蜱传播的3株卵形巴贝斯虫存在明显差别,应属于2个独立种;由小亚璃眼蜱传播的牛巴贝斯虫未定种不同于目前已报道的任何种类,在中国应为一个新种.因而,中国存在5种牛的巴贝斯虫,即:牛巴贝斯虫,双芽巴贝斯虫、大巴贝斯虫,卵形巴贝斯虫和巴贝斯虫未定种.

关键词：比较系统发生树 18S rRNA 牛的巴贝斯虫

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牛泰勒虫病通用血清学诊断方法的建立

牛泰勒虫病通用血清学诊断方法的建立

中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会

作者：赵帅阳李有全刘爱红刘军龙马米玲赵洪喜杨聪山殷宏关贵全罗建勋中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室

牛泰勒虫病是由泰勒虫属的原虫寄生于牛的网状内皮细胞和红细胞内所引起的蜱传性血液原虫病,以发热、贫血、黄疸及体表淋巴结肿大为典型特征,呈全球性分布,其中小泰勒虫和环形泰勒虫是致病性最强的两种病原。在我国,已报道的有环形泰勒... 详细信息

牛泰勒虫病是由泰勒虫属的原虫寄生于牛的网状内皮细胞和红细胞内所引起的蜱传性血液原虫病,以发热、贫血、黄疸及体表淋巴结肿大为典型特征,呈全球性分布,其中小泰勒虫和环形泰勒虫是致病性最强的两种病原。在我国,已报道的有环形泰勒虫、瑟氏泰勒虫和中华泰勒虫三种病原。环形泰勒虫的媒介蜱为残缘璃眼蜱、小亚璃眼蜱和盾糙璃眼蜱,瑟氏泰勒虫的媒介蜱主要是长角血蜱,中华泰勒虫的媒介蜱为青海血蜱。本研究以主要梨浆虫表面膜蛋白(Maior Piroplasm Surface Protein,MPSP)为研究对象,以原核表达系统对环形泰勒虫、瑟氏泰勒虫和中华泰勒的MPSP分别进行表达纯化,其中瑟氏泰勒虫和中华泰勒虫重组蛋白从上清中用镍柱纯化得到,浓度分别0.2 mg/ml和0.28mg/ml,环形泰勒虫来自于包涵体,蛋白经变性和复性后,溶度为0.2 mg/ml;这3种重组蛋白的反应原性和特异性实验表明,这3种泰勒虫的重组蛋白均能与其他两种牛泰勒虫阳性血清反应,但与牛巴贝斯虫、大巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫和羊的巴贝斯虫、吕氏泰勒虫、尤氏泰勒虫以及羊无形体阳性血清没有交叉反应,从而表现出泰勒虫属特异性;以3种重组抗原,在同一抗原浓度浓度及反应条件下进行间接ELISA反应,发现它们与Western Blot结果一致,考虑到蛋白活性,浓度以及反应原性等因素,最后选择中华泰勒虫MPSP重组蛋白为抗原建立了牛泰勒虫病的通用ELISA诊断方法并进行相关条件的优化,最终确定抗原、血清及二抗稀释倍数为1:100、1:200和1:40000,封闭液为2%BSA,并用MedCalc对47份PCR检测为阴性的血清和67阳性血清OD值的ROC曲线进行分析,从而确定该ELISA方法的阈值为30.33%,敏感性和特异性分别为100%和95.7%;最后建立的间接ELISA方法对我国陕西、青海、新疆、西藏、甘肃、河北、河南、辽宁、吉林和内蒙古10个省份的1936血清进行了检测,抗体阳性率在23.1%-67.3%之间,并结合媒介蜱的自然地理分布情况,对这些地区牛泰勒虫病的流行情况进行了讨论,为我国牛泰勒虫的防治提供了相关信息和技术支持。

关键词：牛泰勒虫 MPSP Western-blot ELISA 血清学调查