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10种农药与绿僵菌的相容性测定

江西农业大学学报 2009年第2期31卷 242-246页

作者：任巧云殷宏关贵全马米玲刘爱红李有全刘军龙牛庆丽金玉荣罗建勋中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为研究10种农药对绿僵菌生长的影响情况,选用10种不同农药,稀释成不同浓度分别加入到SDAY培养基中,用直径为4 mm的无菌打孔器在其中央打孔,然后吸取50μL绿僵菌孢子悬浮液分别注入孔中,置温度25℃、湿度80%的条件下培养,十字法测量菌落... 详细信息

为研究10种农药对绿僵菌生长的影响情况,选用10种不同农药,稀释成不同浓度分别加入到SDAY培养基中,用直径为4 mm的无菌打孔器在其中央打孔,然后吸取50μL绿僵菌孢子悬浮液分别注入孔中,置温度25℃、湿度80%的条件下培养,十字法测量菌落的直径和观察孢子颜色变化。结果表明:杀菌剂多菌灵对绿僵菌的生长抑制作用最强,生物化学农药吡虫啉对绿僵菌的生长抑制作用最弱;随着农药浓度的降低,所试农药对绿僵菌的生长抑制作用也随之降低。通过测定10种农药与绿僵菌的相容性,选择生物相容性好的农药以低剂量与之配伍,既可使菌剂增效,又可大幅度降低农药用量,为开发防治害虫的绿僵菌制剂奠定基础。

关键词：绿僵菌相容性农药

莫氏巴贝斯虫裂殖子cDNA表达文库的构建及免疫学筛选

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畜牧兽医学报 2012年第12期43卷 1931-1937页

作者：王锦明刘军龙刘爱红马米玲牛庆丽任巧云杨吉飞刘志杰李有全罗建勋殷宏关贵全中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046

为了构建莫氏巴贝斯虫(Babesia motasi)裂殖子cDNA表达文库,从中筛选和鉴定功能基因,利用差速离心法从莫氏巴贝斯虫感染的红细胞中纯化裂殖子,提取总RNA并纯化mRNA。在合成的双链cDNA两端加上含EcoRⅠ和HindⅢ定向接头后连接到λSCREEN... 详细信息

为了构建莫氏巴贝斯虫(Babesia motasi)裂殖子cDNA表达文库,从中筛选和鉴定功能基因,利用差速离心法从莫氏巴贝斯虫感染的红细胞中纯化裂殖子,提取总RNA并纯化mRNA。在合成的双链cDNA两端加上含EcoRⅠ和HindⅢ定向接头后连接到λSCREEN载体上。通过体外包装形成完整的噬菌体颗粒,并用之转染ER1647,构建莫氏巴贝斯虫裂殖子的cDNA表达文库。用莫氏巴贝斯虫阳性血清筛选cDNA文库,获得的阳性克隆,经过测序和Blast软件分析鉴定,然后利用末端快速扩增技术(RACE)对筛选到的功能基因片段进行全长扩增。结果表明构建的cDNA表达文库其初级库容量约为1.0×106 PFU,扩增文库为3.5×109 PFU;通过免疫学筛选,获得50个阳性克隆。测序和Blast分析后,鉴定出10个莫氏巴贝斯虫基因片段,RACE扩增获得了其中8个基因的全长。本试验构建的莫氏巴贝斯虫裂殖子的cDNA表达文库和筛选到的10个结构和功能基因,为研究巴贝斯虫生物学特性、筛选疫苗与诊断用抗原及药物靶位奠定了基础。

关键词：莫斯巴贝斯虫 cDNA表达文库免疫筛选 RACE

牛的巴贝斯虫18S rRNA基因序列比较研究

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畜牧兽医学报 2005年第9期36卷 906-911页

作者：罗建勋殷宏刘光远关贵全刘志杰刘爱红党志胜马米玲鲁炳义孙彩琴白启吕文顺陈溥言中国农业科学院兰州兽医研究所兰州730046 南京农业大学动物医学院南京210095

对中国已报道的8株牛的巴贝斯虫(包括1株牛巴贝斯虫、1株双芽巴贝斯虫、1株大巴贝斯虫、3株卵形巴贝斯虫和2株巴贝斯虫未定种)的18S rRNA基因序列进行了测定与比较.自感染动物的血液中纯化虫体,提取基因组DNA,PCR扩增靶基因,然后将其连... 详细信息

对中国已报道的8株牛的巴贝斯虫(包括1株牛巴贝斯虫、1株双芽巴贝斯虫、1株大巴贝斯虫、3株卵形巴贝斯虫和2株巴贝斯虫未定种)的18S rRNA基因序列进行了测定与比较.自感染动物的血液中纯化虫体,提取基因组DNA,PCR扩增靶基因,然后将其连接到pGEM-T Easy载体上,进行克隆测序.研究结果显示:牛的巴贝斯虫18S rRNA基因大小在1 653～1 699 bp之间;用所测得的和自GenBank下载的各种动物的巴贝斯虫18SrRNA基因序列构建了系统发生树,发现由刻点血蜱传播的大巴贝斯虫伊犁株与由长角血蜱传播的3株卵形巴贝斯虫存在明显差别,应属于2个独立种;由小亚璃眼蜱传播的牛巴贝斯虫未定种不同于目前已报道的任何种类,在中国应为一个新种.因而,中国存在5种牛的巴贝斯虫,即:牛巴贝斯虫,双芽巴贝斯虫、大巴贝斯虫,卵形巴贝斯虫和巴贝斯虫未定种.

关键词：比较系统发生树 18S rRNA 牛的巴贝斯虫

边缘无浆体MSP5蛋白基因的克隆及原核表达

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中国兽医科学 2007年第7期37卷 578-582页

作者：马米玲罗建勋殷宏关贵全李有全刘志杰高金亮刘爱红任巧云刘军龙赵海平王凡中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

参照已发表的边缘无浆体主要表面蛋白5(MSP5)基因的核苷酸序列,设计了1对特异性引物,以边缘无浆体基因组DNA为模板,采用PCR技术扩增获得了MSP5蛋白基因。将其克隆到pGEM-T Easy载体,并进行测序分析。结果表明,克隆的MSP5基因与GenBank... 详细信息

参照已发表的边缘无浆体主要表面蛋白5(MSP5)基因的核苷酸序列,设计了1对特异性引物,以边缘无浆体基因组DNA为模板,采用PCR技术扩增获得了MSP5蛋白基因。将其克隆到pGEM-T Easy载体,并进行测序分析。结果表明,克隆的MSP5基因与GenBank上登录的Florida株MSP5蛋白基因的序列同源性达98.6%,编码氨基酸的同源性为99.0%,并且该序列包含有完整的开放阅读框,大小为633 bp。将该基因亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,构建了重组原核表达载体。将其转化到DH5α宿主菌中,用IPTG进行诱导表达,实现了融合表达,表达产物的分子质量为45 ku。Western-blot分析表明,此表达产物能够被抗边缘无浆体阳性血清所识别。

关键词：边缘无浆体 MSP5蛋白基因克隆原核表达

羊的大型巴贝虫未定种的形态学和致病性初步研究

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中国兽医科技 2001年第11期31卷 35-36页

作者：关贵全殷宏罗建勋吕文顺张其才马米玲袁改玲鲁炳义王远江木合塔尔中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730046 新疆喀什地区兽医站新疆喀什844000

用采自新疆羊体的半饱血血红扇头蜱 (Rhipicephalussanguineus)与小亚璃眼蜱 (Hyalommaanatolicum )成虫感染 1只除脾绵羊。感染后逐日做血片检查 ,在感染后第 11d的血片上发现一大型巴贝虫 (Babesiasp .)。虫体形态以双梨子形、单梨子... 详细信息

用采自新疆羊体的半饱血血红扇头蜱 (Rhipicephalussanguineus)与小亚璃眼蜱 (Hyalommaanatolicum )成虫感染 1只除脾绵羊。感染后逐日做血片检查 ,在感染后第 11d的血片上发现一大型巴贝虫 (Babesiasp .)。虫体形态以双梨子形、单梨子形、圆形及卵圆形虫体为主 ,双梨子形虫体大小为 3 .0— 4.0 μm× 1.1— 2 .1μm。在感染后第 14d ,感染羊体温升至 41.2℃。染虫率最高达到 0 .2 5 % ,之后逐渐下降。感染羊自然耐过。

关键词：血红扇头蜱小亚璃眼蜱羊大型巴贝虫形态学致病性

非洲猪瘟病毒环介导恒温扩增快速检测技术的建立及应用

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中国动物传染病学报 2011年第4期19卷 7-12页

作者：杨吉飞关贵全刘志杰汪月凤李有全马米玲刘爱红任巧云苟惠天杜鹏飞罗建勋殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室兰州730046

本研究基于非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)vp72基因设计引物,建立了能够快速检测非洲猪瘟病毒的环介导恒温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)。将LAMP与OIE参考的PCR检测方法进行比较,并且应用LAMP对非洲猪瘟参考实验室提供的非洲猪瘟病毒17个毒株的基因组以及国内收集的50份猪的基因组、30份蜱的基因组进行检测。结果显示,本研究设计的引物具有良好的特异性和敏感性,所建立的LAMP能够成功扩增非洲猪瘟病毒17个毒株的基因组,而野外收集的猪和蜱的基因组检测均为阴性。因此,本研究所建立的方法能够用于非洲猪瘟的快速诊断以及防控。

关键词：环介导恒温扩增技术聚合酶链式反应非洲猪瘟诊断

吕氏泰勒虫cDNA表达文库的构建及其抗原基因的免疫筛选

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中国农业科学 2009年第1期42卷 331-339页

作者：李有全罗建勋高金亮关贵全马米玲刘志杰刘军龙刘爱红任巧云党志胜鲁炳义刘光远白启殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室

【目的】构建吕氏泰勒虫裂殖子cDNA表达文库,并从中筛选抗原候选基因。【方法】从吕氏泰勒虫裂殖子直接提取和纯化mRNA,采用oligo(dT)引物合成双链cDNA,并在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头。将所产生的cDNA分子定向克隆到具有EcoRⅠ/Hin... 详细信息

【目的】构建吕氏泰勒虫裂殖子cDNA表达文库,并从中筛选抗原候选基因。【方法】从吕氏泰勒虫裂殖子直接提取和纯化mRNA,采用oligo(dT)引物合成双链cDNA,并在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头。将所产生的cDNA分子定向克隆到具有EcoRⅠ/HindⅢ粘性末端的λSCREEN载体的两臂之间。用PhageMaker extract对连接产物进行体外包装以形成完整的噬菌体,并用之转染大肠杆菌ER1647,从而构建成吕氏泰勒虫的cDNA表达文库。用吕氏泰勒虫阳性血清和兔抗绵羊IgG-AP筛选得到阳性克隆,经测序和Blast软件分析并获得新基因。【结果】成功构建吕氏泰勒虫裂殖子cDNA表达文库,其初级库容量约为1.0×106PFU,扩增文库的滴度为8.2×108PFU·ml-1,文库重组率为100%;通过免疫学筛选、测序和Blast软件分析,共获得30个新基因,其中15个基因已登录GenBank/NCBI。【结论】为研究泰勒虫疫苗、新型医药和诊断抗原,以及发展可持续性防制羊泰勒虫病提供基本材料。

关键词：吕氏泰勒虫 cDNA表达文库构建免疫筛选

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同方期刊数据库

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用溶血素从感染红细胞分离羊泰勒虫裂殖子

畜牧兽医学报 2007年第10期38卷 1093-1097页

作者：李有全罗建勋关贵全马米玲高金亮刘志杰党志胜刘爱红刘军龙任巧云鲁炳义白启殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046

用嗜水气单胞菌产生的细胞毒素—溶血素Ah-1,裂解羊泰勒虫感染的红细胞,通过Percoll密度梯度离心分离羊泰勒虫裂殖子,建立了一种自感染红细胞中分离泰勒虫裂殖子的快速方法。光学显微镜观察显示,所分离的羊泰勒虫裂殖子基本保留原有的... 详细信息

用嗜水气单胞菌产生的细胞毒素—溶血素Ah-1,裂解羊泰勒虫感染的红细胞,通过Percoll密度梯度离心分离羊泰勒虫裂殖子,建立了一种自感染红细胞中分离泰勒虫裂殖子的快速方法。光学显微镜观察显示,所分离的羊泰勒虫裂殖子基本保留原有的正常形态,并从宿主细胞成分中游离。

关键词：羊泰勒虫裂殖子溶血素嗜水气单胞菌

tPA溶栓引起的出血性转化机制及小分子化合物干预作用研究进展

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药学研究 2024年第4期43卷 384-390,401页

作者：黄娟张米玲余俊河宫帅帅寇俊萍中国药科大学中药学院中药药理与中医药系江苏南京211198

组织型纤溶酶原激活剂(tissue type plasmin activator,tPA)是美国食品药品监督管理局唯一批准的用于急性缺血性卒中治疗的药物,但由于治疗时间窗狭窄以及会导致严重的出血性转化(hemorrhagic transformation,HT),其临床应用受到限制。... 详细信息

组织型纤溶酶原激活剂(tissue type plasmin activator,tPA)是美国食品药品监督管理局唯一批准的用于急性缺血性卒中治疗的药物,但由于治疗时间窗狭窄以及会导致严重的出血性转化(hemorrhagic transformation,HT),其临床应用受到限制。本文拟从血脑屏障破坏、神经炎症、氧化应激以及亚硝酸应激等方面对HT发展的机制及近7年来发表在国内外期刊上的小分子化合物对HT保护的研究进展予以综述,为缺血性中风的新药开发和药物联用提供一定参考。

关键词：组织型纤溶酶原激活剂出血性转化小分子化合物研究进展

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