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微小牛蜱4D8基因原核表达及免疫原性分析

动物医学进展 2009年第10期30卷 11-14页

作者：刘军龙关贵全李有全马米玲刘爱红任巧云殷宏罗建勋家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730046

按GenBank已知微小牛蜱的4D8基因核苷酸序列设计1对表达引物。提取微小牛蜱幼蜱总RNA,反转录合成双链cDNA,用设计的表达引物扩增出4D8基因,扩增得到的核苷酸长486 bp,编码161个氨基酸,该蛋白预计分子质量为18 ku。将该基因亚克隆到原核... 详细信息

按GenBank已知微小牛蜱的4D8基因核苷酸序列设计1对表达引物。提取微小牛蜱幼蜱总RNA,反转录合成双链cDNA,用设计的表达引物扩增出4D8基因,扩增得到的核苷酸长486 bp,编码161个氨基酸,该蛋白预计分子质量为18 ku。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX4T-1,构建重组原核表达载体pGEX4T-1-4D8,转化BL21宿主菌,经IPTG诱导,可成功表达。重组融合蛋白分子质量为45 ku左右,与预期大小一致。Western blot显示,兔抗微小牛蜱唾液腺、肠道和卵巢抗体能够识别重组表达蛋白。

关键词：微小牛蜱 4D8基因原核表达

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对蜱致病性球孢白僵菌培养条件的优化

微生物学通报 2011年第7期38卷 1022-1030页

作者：孙明任巧云关贵全刘志杰李有全马米玲刘爱红牛庆丽杨吉飞殷宏罗建勋中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

对前期筛选得到的具有生防潜力的杀蜱真菌Beauveria bassiana AT17菌株进行相关生物学性状的研究,建立一套规范的实验室培养的技术和方法,同时对其液固双相发酵技术进行优化,在于提供优质高效的生防材料,为其真菌制剂的规模化生产提供... 详细信息

对前期筛选得到的具有生防潜力的杀蜱真菌Beauveria bassiana AT17菌株进行相关生物学性状的研究,建立一套规范的实验室培养的技术和方法,同时对其液固双相发酵技术进行优化,在于提供优质高效的生防材料,为其真菌制剂的规模化生产提供实践和理论基础。通过采用单因素筛选方案对其最适基础培养基、温度、pH值、碳源、氮源、微量元素及液固双相发酵配方进行研究,发现该菌株在PDA、PPDA、PDAY、SDAY、SMAY 5种培养基上均能较好生长,在PDA上生长最快,在PDAY上产孢量最大。温度对菌丝的生长和产孢影响显著,25°C菌丝生长最快,且产孢量最大。*** AT17菌株在pH 4-10范围内均可生长,在偏碱性环境内生长最快,在pH 5-6的偏酸性环境内产孢量最大。综合评价真菌各项指标后,葡萄糖和酵母粉为菌丝生长和产孢的最佳碳源和氮源,固体物料麦麸+玉米粉+米粉与基础培养液3/4 SDAY按2:1均匀混合后,添加0.05%K+可作为菌株固体发酵的最佳物料配方组合。

关键词：球孢白僵菌培养条件优化蜱

微小牛蜱饱血雌蜱高毒力绿僵菌菌株的筛选及应用

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湖北农业科学 2009年第12期48卷 3095-3097页

作者：任巧云关贵全李有全马米玲刘爱红刘军龙牛庆丽罗建勋殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部草食动物疫病重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046

为筛选微小牛蜱的高毒力菌株,采用浸渍法测定了8株绿僵菌对微小牛蜱饱血雌蜱的存活指数。结果显示,菌株MaAT.4对微小牛蜱饱血雌蜱的毒力最强,其孢子悬浮液推荐杀蜱浓度为1×108个·mL-1。

关键词：微小牛蜱绿僵菌筛选

一株白僵菌的分离鉴定及其对微小牛蜱的致病力试验

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动物医学进展 2009年第12期30卷 14-16页

作者：任巧云关贵全李有全马米玲刘爱红刘军龙牛庆丽罗建勋殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为了得到用于防控微小牛蜱的高毒力菌株,本试验从野外微小牛蜱饱血雌蜱体表分离出一株白僵菌,通过形态学和分子生物学方法进行了鉴定,确认该分离株为球孢白僵菌。致病力研究表明,当孢子浓度达到108孢子/mL,该菌株对微小牛蜱饱血成蜱的... 详细信息

为了得到用于防控微小牛蜱的高毒力菌株,本试验从野外微小牛蜱饱血雌蜱体表分离出一株白僵菌,通过形态学和分子生物学方法进行了鉴定,确认该分离株为球孢白僵菌。致病力研究表明,当孢子浓度达到108孢子/mL,该菌株对微小牛蜱饱血成蜱的致死率即可达到100%,为微小牛蜱的生物防控试剂的研究及应用奠定了基础。

关键词：白僵菌微小牛蜱生物防治

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微小牛蜱幼蜱cDNA表达文库的构建

中国兽医科技 2005年第12期35卷 994-996页

作者：李文卉罗建勋殷宏高金亮关贵全刘志杰党志胜马米玲刘爱红任巧云中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为了研究微小牛蜱功能性抗原基因,从微小牛蜱(Boophilus microplus)幼蜱中提取总RNA并分离纯化mRNA。采用Oligo(dT)引物合成双链cDNA,在其两端加EcoRⅠ、HindⅢ定向接头,用Mini Column Fractionation凝胶过滤柱纯化后定向克隆到λSCREE... 详细信息

为了研究微小牛蜱功能性抗原基因,从微小牛蜱(Boophilus microplus)幼蜱中提取总RNA并分离纯化mRNA。采用Oligo(dT)引物合成双链cDNA,在其两端加EcoRⅠ、HindⅢ定向接头,用Mini Column Fractionation凝胶过滤柱纯化后定向克隆到λSCREEN载体。经体外包装,成功构建了我国微小牛蜱幼蜱cDNA表达文库,铺板测定原始库容量为4.5×105PFU,扩增后的滴度为7.2×1010PFU/mL。

关键词：微小牛蜱 cDNA表达文库抗原基因

环形泰勒虫中国分离株表面蛋白氨基酸序列分析(英文)

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2010年第3期28卷 205-209页

作者：党志胜罗建勋刘爱红白启关贵全刘志杰马米玲李有全高金亮山本千寻殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046 日本北海道大学人兽共患病研究中心国际协力教育机构

目的研究环形泰勒虫表面蛋白(TaSP)在中国分离株中的多态性。方法将来自内蒙古自治区、宁夏回族自治区和新疆维吾尔自治区的3个环形泰勒虫分离株在RPMI1640培养液中进行培养,PCR扩增裂殖体基因组DNA中TaSP基因并进行测序。测序结果用Clu... 详细信息

目的研究环形泰勒虫表面蛋白(TaSP)在中国分离株中的多态性。方法将来自内蒙古自治区、宁夏回族自治区和新疆维吾尔自治区的3个环形泰勒虫分离株在RPMI1640培养液中进行培养,PCR扩增裂殖体基因组DNA中TaSP基因并进行测序。测序结果用ClustalW2多序列比对软件进行分析,应用在线生物软件进行蛋白质分子组成和基元的预测。结果 3个中国分离株TaSP氨基酸序列比对表明,被称为高免疫原性区的中央部分(第38-161个氨基酸)无论在长度还是氨基酸序列组成上均呈多态性,而N-末端(前37个氨基酸)和C-末端(最后154个氨基酸)极端保守。系统进化树和同源百分比分析表明,中国分离株与土耳其分离株具有较近的亲缘关系,而与印度、摩洛哥和突尼斯分离株差异较大。更为重要的是,在中国分离株之间TaSP存在变异性。这种变异性引起不同分离株间在某些基元,特别是酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点的分布和数量上的变化。结论环形泰勒虫TaSP在不同的中国分离株中具有多态性。

关键词：环形泰勒虫环形泰勒虫表面蛋白(TaSP) 中国分离株序列分析多态性

吕氏泰勒虫主要表面蛋白P32基因的克隆与序列分析

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动物医学进展 2010年第2期31卷 7-10页

作者：刘爱红关贵全刘军龙李有全马米玲牛庆丽任巧云殷宏罗建勋中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室甘肃兰州730046

从吕氏泰勒虫宁县株中提取RNA,用RT-PCR方法扩增主要表面蛋白P32基因的cDNA片段,克隆后测定其核苷酸序列,并推导了相应的氨基酸序列。结果表明,扩增的P32基因长度为875个核苷酸,共编码284个氨基酸。核苷酸序列与已发表的牛的4种泰勒虫... 详细信息

从吕氏泰勒虫宁县株中提取RNA,用RT-PCR方法扩增主要表面蛋白P32基因的cDNA片段,克隆后测定其核苷酸序列,并推导了相应的氨基酸序列。结果表明,扩增的P32基因长度为875个核苷酸,共编码284个氨基酸。核苷酸序列与已发表的牛的4种泰勒虫的主要表面蛋白基因相比较,其与瑟氏泰勒虫俄罗斯株、日本株、中国辽阳株的核苷酸和氨基酸序列相似性均在98.9%以上。其推导的氨基酸序列中有3个糖基化位点。

关键词：吕氏泰勒虫表面蛋白P32基因克隆序列分析

采用PCR方法对我国蜱伯氏疏螺旋体感染的流行病学调查

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中国预防兽医学报 2010年第12期32卷 984-987页

作者：牛庆丽关贵全杨吉飞付钰广马米玲李有全刘军龙郝雪峰罗建勋殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046

通过调查我国已有的4种蜱伯氏疏螺旋体的感染情况,以进一步阐明莱姆病在中国的分布与流行状况。本研究通过筛选扩增伯氏疏螺旋体外膜蛋白A(OspA)基因片段的通用引物,获得1对特异性引物,优化反应条件后建立用于检测蜱体内伯氏疏螺旋体的... 详细信息

通过调查我国已有的4种蜱伯氏疏螺旋体的感染情况,以进一步阐明莱姆病在中国的分布与流行状况。本研究通过筛选扩增伯氏疏螺旋体外膜蛋白A(OspA)基因片段的通用引物,获得1对特异性引物,优化反应条件后建立用于检测蜱体内伯氏疏螺旋体的PCR方法,其扩增片段大小为307 bp。该方法可检测出10 pg的阿氏疏螺旋体(Ba)、1 pg的伽氏疏螺旋体(Bg)和0.01 pg的狭义伯氏疏螺旋体(Bb)的3种不同基因型的伯氏疏螺旋体的OspA基因组DNA,表明其敏感性较好,适用于蜱感染伯氏疏螺旋体状况的调查。本研究从我国7个省采集到的667只蜱,进行伯氏疏螺旋体感染的流行病学调查,分类鉴定表明这些蜱分属革蜱属、血蜱属、牛蜱属和扇头蜱属。PCR检测所获数据表明它们的感染率分别为4%(10/264)、6%(11/137)、31.4%(59/185)和31%

关键词：伯氏疏螺旋体 OspA基因 PCR 流行病学调查

羊泰勒虫主要表面蛋白P32基因的克隆及真核表达载体的构建

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动物医学进展 2009年第12期30卷 17-20页

提取羊泰勒虫裂殖子总RNA,用特异性引物扩增出其主要表面蛋白P32基因,并成功地将该基因纯化后克隆到pGEM-TEasy载体上,经PCR和EcoRⅠ酶切鉴定均为阳性的重组质粒进行了测序和分析。随后将该基因从克隆载体上双酶切,与毕赤酵母分泌性表... 详细信息

提取羊泰勒虫裂殖子总RNA,用特异性引物扩增出其主要表面蛋白P32基因,并成功地将该基因纯化后克隆到pGEM-TEasy载体上,经PCR和EcoRⅠ酶切鉴定均为阳性的重组质粒进行了测序和分析。随后将该基因从克隆载体上双酶切,与毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K相连接,构建重组表达载体pPIC9K-MPSP-P32,转化大肠埃希菌JM109,经测序证实,基因序列完全正确。

关键词：羊泰勒虫表面蛋白P32基因真核表达载体