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表没食子儿茶素没食子酸酯对脂多糖诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎性损伤和凋亡的干预作用

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中国畜牧兽医 2024年第5期51卷 2122-2131页

作者：宝华户春丽安彦昊张春华马燕芬内蒙古自治区农牧业科学院动物营养与饲料研究所呼和浩特010031 宁夏大学动物科技学院银川750021

【目的】探究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对脂多糖(LPS)诱导的奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)炎症和凋亡的影响及其潜在的保护机制。【方法】利用LPS诱导BMECs构建细胞炎症模型。通过CCK-8检测细胞活力,筛选EGCG最佳浓度。将BMECs分为对... 详细信息

【目的】探究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对脂多糖(LPS)诱导的奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)炎症和凋亡的影响及其潜在的保护机制。【方法】利用LPS诱导BMECs构建细胞炎症模型。通过CCK-8检测细胞活力,筛选EGCG最佳浓度。将BMECs分为对照组、LPS处理组和EGCG+LPS共处理组,利用实时荧光定量PCR检测细胞中炎性因子、凋亡因子以及抗氧化相关基因mRNA表达水平;利用试剂盒检测BMECs的线粒体膜电位和活性氧(ROS)水平;通过流式细胞术检测BMECs凋亡情况。【结果】使用LPS处理BMECs后,与0 h相比,各时间段细胞中炎性因子白细胞介素-6(IL-6)、IL-8和IL-1β基因mRNA表达量均极显著或显著升高(P<0.01;P<0.05),成功构建BMECs细胞炎性损伤模型。CCK-8检测细胞活力结果显示,EGCG最佳作用浓度为5μmol/L。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,LPS诱导的BMECs中IL-6、IL-8、丙二醛(MDA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天门冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)基因mRNA表达量均极显著升高(P<0.01),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、B细胞淋巴瘤蛋白-2(Bcl-2)基因mRNA表达量极显著降低(P<0.01);与LPS组相比,EGCG+LPS组细胞中IL-6、IL-8、IL-1β、MDA、Bax和Caspase-3基因mRNA表达量均显著或极显著降低(P<0.05;P<0.01),GSH-Px、超氧化物歧化酶(SOD)、Bcl-2基因mRNA表达量均显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01)。线粒体膜电位检测结果显示,与对照组相比,LPS组BMECs红色荧光明显减弱,绿色荧光有所增强,而EGCG和LPS共孵育后则对BMECs红色荧光没有明显影响,绿色荧光相对减弱;ROS水平检测结果显示,与对照组相比,LPS组细胞绿色荧光明显增强,而EGCG和LPS共孵育后,细胞绿色荧光有所减弱。流式细胞术检测结果显示,与对照组相比,LPS处理后死亡细胞和凋亡细胞明显增多,细胞凋亡率极显著升高(P<0.01),而EGCG和LPS共孵育后凋亡细胞则明显减少,细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。【结论】EGCG可以通过抑制LPS诱导BMECs中ROS释放和缓解线粒体损伤等综合作用,缓解炎性反应并抑制细胞凋亡,研究结果为EGCG预防和治疗奶牛乳腺炎提供理论基础。

关键词：奶牛乳腺上皮细胞(BMECs) 表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG) 脂多糖(LPS) 炎性损伤细胞凋亡

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奶牛肠源性乳腺炎发病机制及短链脂肪酸的防控作用

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生命科学 2024年第4期36卷 554-560页

作者：马莉花马学虎户春丽马燕芬宁夏大学动物科技学院银川750021

奶牛乳腺炎是一种影响奶牛群的疾病,严重制约着乳品行业的发展。通常情况下认为乳腺炎是由致病菌通过乳腺导管侵入乳腺引起的局部炎症,最近的研究发现奶牛的内源性“肠-乳腺”轴在诱导乳腺炎中发挥同样重要作用,即肠源性乳腺炎。因此,... 详细信息

奶牛乳腺炎是一种影响奶牛群的疾病,严重制约着乳品行业的发展。通常情况下认为乳腺炎是由致病菌通过乳腺导管侵入乳腺引起的局部炎症,最近的研究发现奶牛的内源性“肠-乳腺”轴在诱导乳腺炎中发挥同样重要作用,即肠源性乳腺炎。因此,靶向调控胃肠道,可能是防控“肠源性乳腺炎”的有效方法和途径。短链脂肪酸(SCFAs)是具有维持胃肠道菌群稳态、恢复血乳屏障通透性、抑制乳腺炎症发展的一种新型膳食物质。选用SCFAs靶向调控肠-乳腺轴,可有效防治奶牛肠源性乳腺炎。该文就奶牛肠源性乳腺炎的发病机理及SCFAs的防控作用进行综述,以期为奶牛肠源性乳腺炎的防治提供新的思路。

关键词：奶牛肠源性乳腺炎胃肠道菌群短链脂肪酸

circADAMTS16的表达谱分析及其对牛脂肪细胞分化的影响

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西北农业学报 2024年第2期33卷 208-217页

作者：户春丽雷召雄汪书哲盛辉高玉红马燕芬马云宁夏大学农学院宁夏回族自治区反刍动物分子细胞育种重点实验室银川750021

旨在探究 circADAMTS16在牛不同组织和前体脂肪细胞中的表达水平及其对牛脂肪细胞分化的影响,为进一步研究circRNA在细胞分化和脂肪组织发育过程中的调控作用提供依据。采用组织块法分离培养牛原代前体脂肪细胞并诱导分化,模拟牛脂肪组... 详细信息

旨在探究 circADAMTS16在牛不同组织和前体脂肪细胞中的表达水平及其对牛脂肪细胞分化的影响,为进一步研究circRNA在细胞分化和脂肪组织发育过程中的调控作用提供依据。采用组织块法分离培养牛原代前体脂肪细胞并诱导分化,模拟牛脂肪组织生长发育过程;通过qRT-PCR检测 circADAMTS16在牛不同组织(心、肝、脾、肺、肾、肌肉、脂肪)和脂肪细胞分化不同阶段(0 d、2 d、4 d、8 d、10 d)的表达水平;构建 circADAMTS16的过表达载体(pCD2.1- circADAMTS16),设计合成 circADAMTS16的小干扰RNA (si- circADAMTS16),采用(Lipofectamine3000)转染试剂将pCD2.1- circADAMTS16和si- circADAMTS16转染牛前体脂肪细胞,利用qRT-PCR法检测转染效果,同时检测脂肪分化标志基因PPARγ、C/EBPα和C/EBPβ的表达量变化,并进行油红O染色,综合分析干扰和过表达 circADAMTS16对牛脂肪细胞分化的影响。结果如下:(1)qRT-PCR检测结果表明 circADAMTS16在心脏中表达量最高,肝脏次之,脾最低;(2)在牛原代前体脂肪细胞分化过程中, circADAMTS16在第2天显著高表达,随后逐渐降低,在第8天时达到最低。(3)在牛前体脂肪细胞中过表达 circADAMTST16后,脂肪分化标志基因PPARγ、C/EBPα、C/EBPβ的表达量显著下降;油红O染色结果显示,过表达后脂滴形成数量明显少于对照组;而干扰 circADAMTS16表达后,脂肪分化标志基因PPARγ和C/EBPα表达量显著上升。综上所述, circADAMTS16对牛原代前体脂肪细胞的分化过程具有显著的调控作用,过表达 circADAMTST16可抑制牛原代前体脂肪细胞分化进程,而干扰 circADAMTS16表达可以促进牛原代前体脂肪细胞分化进程,探明 circADAMTS16对牛原代前体脂肪细胞分化的具体调控作用。

关键词：牛 circADAMTS16 脂肪细胞载体构建过表达

奶牛代谢病发病机制解析及植物提取物的防控作用

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中国饲料 2024年第11期 8-14页

作者：马莉花王娜娜马学虎徐晓锋马云马燕芬宁夏大学动物科技学院宁夏回族自治区反刍动物分子细胞育种重点实验室宁夏银川750021

奶牛在养殖过程中易患各种疾病,极大的制约了养殖业的发展。植物提取物具有天然、绿色、毒副作用小等优点,引起了饲料行业的广泛关注。植物提取物作为一种来源广泛且含有生物碱、皂苷、单宁和多糖等多种生物活性物质的饲料添加剂,具有... 详细信息

奶牛在养殖过程中易患各种疾病,极大的制约了养殖业的发展。植物提取物具有天然、绿色、毒副作用小等优点,引起了饲料行业的广泛关注。植物提取物作为一种来源广泛且含有生物碱、皂苷、单宁和多糖等多种生物活性物质的饲料添加剂,具有抗氧化、抗应激、提高免疫力、改善肠道健康等特殊生物调控作用,在奶牛养殖方面具有广阔的应用前景。本文围绕植物提取物对奶牛常见疾病的调控进行综述,旨在为植物提取物在奶牛疾病方面的研究和实际生产中的应用提供参考。

关键词：奶牛疾病植物提取物胃肠道菌群氧化应激

PCYOX1L基因调控LPS诱导的牛子宫内膜上皮细胞的功能研究

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中国畜牧兽医 2024年第7期51卷 2984-2997页

作者：冀国尚盛辉张俊星冯雪户春丽王雅春马燕芬李莉杨文飞马云宁夏大学动物科技学院宁夏回族自治区分子细胞育种重点实验室银川750000 宁夏动物疾病预防控制中心银川750000 宁夏新澳农牧有限公司灵武751400

【目的】探究异戊二烯基半胱氨酸氧化酶-1样蛋白(prenylcysteine oxidase 1 like protein,PCYOX1L)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的牛子宫内膜上皮细胞(bovine endometrial epithelial cells,BEECs)的炎症、增殖和凋亡的调控作用,以期明确PCYOX1L基因对奶牛子宫内膜炎发生的调控机制。【方法】利用LPS刺激BEECs构建体外炎症模型,设计合成PCYOX1L基因的小干扰RNA(si-PCYOX1L)和过表达质粒载体(pcDNA3.1-PCYOX1L),采用Lipofectamine 3000转染试剂将si-PCYOX1L和pcDNA3.1-PCYOX1L转染至BEECs,通过实时荧光定量PCR检测干扰和过表达PCYOX1L基因对细胞炎症、增殖和凋亡标志基因mRNA表达水平的影响,利用ELISA方法检测白细胞介素-1(IL-1)的蛋白表达水平。利用试剂盒检测BEECs中活性氧(ROS)含量,并采用EdU、CCK-8和流式细胞术检测细胞活力、增殖及周期。利用线粒体膜电位试剂盒检测细胞线粒体损伤,并通过流式细胞术检测细胞凋亡情况。【结果】试验成功构建pcDNA3.1-PCYOX1L过表达载体,并筛选出si-PCYOX1L-385的干扰效果最佳。与对照组相比,干扰PCYOX1L基因后,炎症标志基因(IL-1β、IL-6、IL-8)mRNA表达量极显著下调(P<0.01),IL-1蛋白含量显著降低(P<0.05),细胞内ROS水平极显著降低(P<0.01);增殖标志基因(CDK2、CDK4、PCNA、CCND2)mRNA表达量极显著或显著上调(P<0.01;P<0.05),细胞活力上升,促进细胞从S期向G2期的转变;促凋亡基因Bax表达水平显著降低(P<0.05),抑凋亡基因BCL2表达水平上升,极显著降低了BEECs凋亡率(P<0.01)。过表达PCYOX1L基因后结果与干扰PCYOX1L基因后结果相反。【结论】PCYOX1L基因促进了BEECs炎症的发生,抑制细胞增殖,并促进细胞凋亡。本研究结果为进一步探究PCYOX1L基因调控奶牛子宫内膜炎发生的分子机制提供基础数据。

关键词：奶牛子宫内膜炎 PCYOX1L基因细胞增殖细胞凋亡

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组学技术在判定奶牛酮病发病中的应用

当代畜禽养殖业 2024年第2期44卷 36-39页

作者：沙萍马敏宝华张春华马燕芬孙天昊宋利平宁夏大学动物科技学院宁夏银川750021 内蒙古自治区农牧业科学院内蒙古呼和浩特010031 内蒙古大学生命科学学院内蒙古呼和浩特010070 托克托县双河镇综合保障和技术推广中心内蒙古呼和浩特010200

酮病作为围产期奶牛常见的群发性营养代谢病,会显著降低奶牛机体健康和生产性能,给养殖业带来巨大经济损失。近年来,转录组学和代谢组学技术被越来越多地应用于研究动物疾病的发生发展过程,有效助推了奶业高质量发展。本文主要综述奶牛... 详细信息

酮病作为围产期奶牛常见的群发性营养代谢病,会显著降低奶牛机体健康和生产性能,给养殖业带来巨大经济损失。近年来,转录组学和代谢组学技术被越来越多地应用于研究动物疾病的发生发展过程,有效助推了奶业高质量发展。本文主要综述奶牛酮病发病特点、转录组学和代谢组学,并重点介绍转录组学和代谢组学在筛选奶牛酮病发病的生物标志物中的应用情况,总结出已有研究中奶牛酮病发病的候选基因、代谢物及生物学途径,为后续筛选奶牛酮病发病生物标志物提供理论参考依据和技术支撑。

关键词：奶牛酮病转录组学代谢组学生物标志物

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过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α对奶牛脂肪肝的调节作用及机制

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动物营养学报 2023年第1期35卷 63-70页

作者：安彦昊马贵孙奕烁马燕芬宁夏大学农学院宁夏回族自治区反刍动物分子细胞育种重点实验室银川750021 内蒙古自治区农牧业科学院动物营养与饲料研究所呼和浩特010031

随着畜牧业发展对畜禽养殖和畜产品品质要求的提高,营养代谢疾病在动物群体中的发病率也呈逐渐增加趋势。脂肪肝作为营养代谢性疾病的一种,常发生在围产期高产奶牛群体中,长期处于能量负平衡状态的高产奶牛,过量的动员体脂造成肝脏甘油... 详细信息

随着畜牧业发展对畜禽养殖和畜产品品质要求的提高,营养代谢疾病在动物群体中的发病率也呈逐渐增加趋势。脂肪肝作为营养代谢性疾病的一种,常发生在围产期高产奶牛群体中,长期处于能量负平衡状态的高产奶牛,过量的动员体脂造成肝脏甘油三酯堆积,从而形成脂肪肝。患有脂肪肝的奶牛不仅会导致其产奶量降低,产犊间隔延长,还会诱发其他疾病的发生,对奶牛的生产性能和畜牧业的发展产生巨大的负面作用。核转录辅激活因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α(PGC-1α)参与多种核受体及转录因子相互作用,从而调控相关靶基因的表达。PGC-1α与奶牛脂肪肝、酮病和乳腺炎等疾病有着密切的关系,有可能成为新的疾病治疗靶点。本文综述了PGC-1α调控的各种分子途径,将调控脂质代谢、线粒体功能障碍、氧化应激、胰岛素抵抗和炎症反应联系起来,进一步阐明PGC-1α在奶牛脂肪肝中发挥调节作用的最新研究进展。

关键词：奶牛过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α 脂肪肝作用机制

宁夏地区荷斯坦牛泌乳性状的变化规律及影响因素分析

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中国畜牧杂志 2023年第3期59卷 137-143页

作者：王忠虎红红温万马燕芬马云宁夏反刍动物分子细胞育种重点实验室宁夏大学农学院宁夏银川750021 宁夏畜牧工作站宁夏银川750001

为探究影响宁夏地区荷斯坦牛泌乳性状变化的非遗传因素,以2008—2021年间56个牧场135 533头荷斯坦牛DHI数据为研究材料,运用SAS 9.2软件GLM过程分析场规模、胎次、产犊年份、采样年份、产犊季节和采样季节对9项泌乳性状的影响。结果表明... 详细信息

为探究影响宁夏地区荷斯坦牛泌乳性状变化的非遗传因素,以2008—2021年间56个牧场135 533头荷斯坦牛DHI数据为研究材料,运用SAS 9.2软件GLM过程分析场规模、胎次、产犊年份、采样年份、产犊季节和采样季节对9项泌乳性状的影响。结果表明:上述因素对9项泌乳性状均有极显著影响。日产奶量随场规模、胎次(≤4胎)、产犊年份增加极显著递增,奶牛秋、冬季产犊日产奶量高于夏季(P5 000头最高;乳糖率、脂蛋比和高峰奶量随产犊年份逐年上升。乳脂率和SCS逐胎上升;乳蛋白率和高峰奶量随胎次增加呈先升后降趋势;1胎次乳糖率高于其他胎次(P<0.01)。春、秋、冬季产犊的奶牛脂蛋比、高峰奶量和305 d产奶量高于夏季(P<0.01),但乳蛋白率、SCS夏季最高。本研究结果为研究荷斯坦牛产奶量、乳成分及相关指标变化规律提供了理论依据。

关键词：荷斯坦牛泌乳性状非遗传因素相关性

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代谢组学在筛选奶牛酮病生物标志物中的应用

动物营养学报 2022年第8期34卷 4829-4835页

作者：安彦昊马学虎孙奕烁马燕芬宁夏大学农学院宁夏回族自治区反刍动物分子细胞育种重点实验室银川750021 内蒙古自治区农牧业科学院动物营养与饲料研究所呼和浩特010031

酮病作为围产期奶牛最为常见的一种营养代谢病,严重损害奶牛健康、生产性能、繁殖性能,其病因学的一些问题至今尚未解决。代谢组学作为系统生物学的重要组成部分,不仅可以对某一生物或细胞在某一特定生理时期内小分子量的代谢产物进行... 详细信息

酮病作为围产期奶牛最为常见的一种营养代谢病,严重损害奶牛健康、生产性能、繁殖性能,其病因学的一些问题至今尚未解决。代谢组学作为系统生物学的重要组成部分,不仅可以对某一生物或细胞在某一特定生理时期内小分子量的代谢产物进行定性、定量分析,还可以为动物营养代谢疾病研究提供一定的理论基础和技术平台。本文就代谢组学在奶牛酮病生物标志物筛选上的应用进行综述。

关键词：生物标志物代谢组学奶牛酮病