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大鼠大脑皮质神经元的分离及培养

中国农业大学学报 2007年第3期12卷 1-4页

作者：霍桂桃尹晓敏周向梅马李颖赵德明中国农业大学动物医学院/国家动物海绵状脑病实验室北京100094

为了给更好地研究神经元病理变化提供物质材料,对新生大鼠大脑皮质神经元进行体外分离和培养。无菌操作取新生大鼠的大脑皮质,采用机械法和胰蛋白酶消化法相结合的方法分离细胞,制备单层细胞悬液接种培养板;5-氟脱氧尿嘧啶处理等方法纯... 详细信息

为了给更好地研究神经元病理变化提供物质材料,对新生大鼠大脑皮质神经元进行体外分离和培养。无菌操作取新生大鼠的大脑皮质,采用机械法和胰蛋白酶消化法相结合的方法分离细胞,制备单层细胞悬液接种培养板;5-氟脱氧尿嘧啶处理等方法纯化神经元,甲苯胺蓝染色法及抗NSE单克隆抗体对纯化后的神经元进行鉴定。结果表明,培养的神经元生长良好,形态正常,纯度高达90%以上。采用本方法培养的神经元可作为深入研究中枢系统疾病的细胞模型材料。

关键词：大鼠大脑皮质神经元培养胰蛋白酶

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一步法RT-PCR快速检测口蹄疫O型病毒

中国兽医杂志 2007年第1期43卷 47-49页

作者：周向梅赵德明孙艳明杨建民马李颖中国农业大学动物医学院北京海淀100094

目前检测口蹄疫(foot-and-mouth disease, FMD)常用技术主要有动物接种、病毒分离和血清学试验等[1,2],但这些方法存在费时、敏感性低等缺点.近年来,随着分子生物学的发展和PCR技术的建立,许多学者又将PCR技术应用于FMDV的检测[3～8],... 详细信息

目前检测口蹄疫(foot-and-mouth disease, FMD)常用技术主要有动物接种、病毒分离和血清学试验等[1,2],但这些方法存在费时、敏感性低等缺点.近年来,随着分子生物学的发展和PCR技术的建立,许多学者又将PCR技术应用于FMDV的检测[3～8],该方法克服了目前常规方法的某些缺点,具有良好的特异性,与动物血清中和试验比较具有简便、快速的优点.本试验以PCR方法为基础,参照国外报道[9～11],对此方法加以改进,用RT-PCR一步法扩增FMDV特异序列,省却了逆转录和 PCR扩增之间更换缓冲液的步骤,减少了样品污染的机会,使诊断更简便和快速.

关键词： PCR快速检测一步法扩增病毒分离口蹄疫 RT 血清学试验 PCR技术 O型

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中国实验小型猪朊蛋白基因的克隆与序列分析

中国农业大学学报 2005年第5期10卷 62-64页

作者：孟丽平赵德明王金秀宁章勇马李颖中国农业大学动物医学院国家动物海绵状脑病实验室北京100094

根据已发表的猪朊蛋白基因(PRNP)序列设计特异性引物,进行PCR直接扩增,得到了中国实验小型猪(CEMP)的朊蛋白基因(PRNP),将其克隆到pGEM-T Easy载体中。序列分析表明上述CEMP的PRNP基因ORF区全长为774 bp,编码257个氨基酸的前体蛋白,分... 详细信息

根据已发表的猪朊蛋白基因(PRNP)序列设计特异性引物,进行PCR直接扩增,得到了中国实验小型猪(CEMP)的朊蛋白基因(PRNP),将其克隆到pGEM-T Easy载体中。序列分析表明上述CEMP的PRNP基因ORF区全长为774 bp,编码257个氨基酸的前体蛋白,分子质量约为28.3 ku,其PRNP序列与已发表的猪PRNP序列(L07623)差异微小,仅在第4位氨基酸残基处有变异(Ser→Asn);绘制CEMP与其他15种属动物朊蛋白的氨基酸序列进化树发现,CEMP与多种哺乳动物朊蛋白的氨基酸序列遗传距离比较接近,与水貂最近,而与禽类朊蛋白氨基酸的遗传距离较远。

关键词：中国实验小型猪朊蛋白克隆序列分析

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猴脑病理性物质沉着的观察

中国兽医杂志 2005年第5期41卷 17-18页

作者：徐雪芳赵德明李秦王金秀杜昕波马李颖中国农业大学动物医学院实验动物所北京海淀100094 第四军医大学实验动物研究中心陕西西安710032

自从1906年Alzheimer首先报道Alzheimer病病例后, 直到近10年才将早老年痴呆和老年期痴呆归为一类痴呆, 称为Alzheimer's病(AD)或Alzheimer型老年性痴呆(SDAT)[1].AD病是一种以进行性痴呆为特征的神经慢性脑变性疾病,神经病理的改变为... 详细信息

自从1906年Alzheimer首先报道Alzheimer病病例后, 直到近10年才将早老年痴呆和老年期痴呆归为一类痴呆, 称为Alzheimer's病(AD)或Alzheimer型老年性痴呆(SDAT)[1].AD病是一种以进行性痴呆为特征的神经慢性脑变性疾病,神经病理的改变为弥漫性大脑皮质萎缩,皮质神经细胞减少,而大脑皮质中的新、旧老年斑、神经元纤维缠结和颗粒空泡变性为其病理特点[2,3].临床表现主要为进行性智能丧失,包括记忆功能、语言功能和认知功能,精神运动异常等症状,查体一般不能发现明确定位体征.

关键词：猴脑部病理性物质沉着老年斑硫酸多糖病理变化年龄老年性痴呆

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生物敷料对大鼠深Ⅱ度烧伤创面愈合的作用

中国兽医学报 2004年第3期24卷 283-284,288页

作者：秦秀慧康爱君赵德明杨建民宁章勇黄丽王传武于书敏马李颖中国农业大学实验动物研究所北京100094 北京大学医学部实验动物科学部北京100083

为了评价生物敷料对烧伤创面的治疗效果 ,将 SPF猪皮细化处理后制成软膏制剂 ,以其作为生物敷料对大鼠深度烧伤进行了治疗试验 ,对照组采用普遍油纱布敷料处理 ,观察烧伤大鼠创面愈合程度 ,记录愈合时间 ,并测定了大鼠在烧伤前后的血... 详细信息

为了评价生物敷料对烧伤创面的治疗效果 ,将 SPF猪皮细化处理后制成软膏制剂 ,以其作为生物敷料对大鼠深度烧伤进行了治疗试验 ,对照组采用普遍油纱布敷料处理 ,观察烧伤大鼠创面愈合程度 ,记录愈合时间 ,并测定了大鼠在烧伤前后的血液学指标。结果显示 ,试验组比对照组创面愈合时间短 ,愈合率高。

关键词：生物敷料大鼠烧伤创面愈合 SPF猪皮软膏制剂

梅花鹿朊蛋白基因(PRNP)的克隆及序列分析

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中国兽医学报 2006年第6期26卷 637-638,641页

作者：孟丽平赵德明杨建民徐广贤马李颖中国农业大学动物医学院国家动物海绵状脑病实验室北京100094

根据GenBank中鹿朊蛋白基因序列设计特异性扩增引物,采用PCR方法从中国梅花鹿基因组中扩增得到梅花鹿的朊蛋白基因,采用PCR产物直接测序,并将其克隆到pGEM-TEasy载体中测序进行进一步确认,通过分析表明所克隆的梅花鹿朊蛋白基因的ORF基... 详细信息

根据GenBank中鹿朊蛋白基因序列设计特异性扩增引物,采用PCR方法从中国梅花鹿基因组中扩增得到梅花鹿的朊蛋白基因,采用PCR产物直接测序,并将其克隆到pGEM-TEasy载体中测序进行进一步确认,通过分析表明所克隆的梅花鹿朊蛋白基因的ORF基因片段包含771bp,编码256个氨基酸的前体蛋白,相对分子质量约为28200。与已报道的其他品种鹿朊蛋白基因序列进行对比分析,核苷酸及氨基酸序列的同源性均在98%以上。本试验为进一步研究中国梅花鹿朊蛋白的多态性提供了数据。

关键词：梅花鹿朊蛋白朊蛋白基因序列分析

用实时荧光定量RT-PCR方法定量绵羊PrP基因的表达

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中国农业大学学报 2006年第2期11卷 61-64页

作者：韩彩霞赵德明吴长德宁章勇杨建民刘美丽马李颖国家动物海绵状脑病实验室中国农业大学北京100094

为快速、准确定量绵羊PrP基因的mRNA,建立了绵羊PrP基因实时荧光定量聚合酶链反应检测方法。根据已报道的绵羊PrP基因序列,设计合成引物;采用RT-PCR方法扩增目的片段;构建标准重组质粒制备标准曲线,用于样品检测。结果发现,中枢神经系... 详细信息

为快速、准确定量绵羊PrP基因的mRNA,建立了绵羊PrP基因实时荧光定量聚合酶链反应检测方法。根据已报道的绵羊PrP基因序列,设计合成引物;采用RT-PCR方法扩增目的片段;构建标准重组质粒制备标准曲线,用于样品检测。结果发现,中枢神经系统组织PrP基因的表达量(copies/ng总RNA,39420)比外周组织(为7845)的高;在中枢神经系统中,脑干的PrP基因的表达量最高(为67020);外周器官中,淋巴结PrP基因的表达量最高(为29086),肾脏的表达量最低(为125)。建立绵羊PrP基因实时荧光定量PCR方法,对PCR扩增反应中每一个循环的产物进行定量分析,为进一步研究绵羊组织器官的PrP表达在传染性海绵状脑病发生中的作用提供基础数据。

关键词：朊蛋白 RT—PCR 基因表达实时荧光定量PCR

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小脑颗粒神经元细胞模型材料制备

中国兽医学报 2005年第4期25卷 403-405页

作者：宁章勇赵德明杨建民崔亚利郝永新秦秀慧马李颖中国农业大学国家动物传染性海绵状脑病实验室北京100094

小脑颗粒神经元是动物传染性海绵状脑病发生、发展过程中的主要反应性细胞之一,小脑颗粒神经元的体外分离、纯化和鉴定是建立动物传染性海绵状脑病细胞作用模型的关键步骤。根据大鼠小脑颗粒神经元的生存特性,按照抑制筛选的原理,对小... 详细信息

小脑颗粒神经元是动物传染性海绵状脑病发生、发展过程中的主要反应性细胞之一,小脑颗粒神经元的体外分离、纯化和鉴定是建立动物传染性海绵状脑病细胞作用模型的关键步骤。根据大鼠小脑颗粒神经元的生存特性,按照抑制筛选的原理,对小脑颗粒神经元进行了体外分离和培养,经神经元特异性的烯醇化酶(NSE)免疫组织化学染色,表明体外培养的小脑颗粒神经元细胞纯度较高,可以用于细胞作用模型的建立。

关键词：小脑颗粒神经元培养鉴定

胰岛素喷鼻液浓度与剂量对正常绵羊鼻粘膜吸收的影响

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