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甘菊和毛华菊PHYA和PHYB同源基因表达分析及ClPHYB功能验证

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甘菊和毛华菊PHYA和PHYB同源基因表达分析及ClPHYB功能验证

作者：马朝峰北京林业大学

学位级别：硕士

菊花(Chrysanthemum ×morifolium Ramat.)是起源于中国的世界名花,其产值和产量在世界花卉产业中始终位居前列。开花期是观赏植物重要的栽培特性,也是影响花卉产业化生产的关键因素之一。菊花为典型的短日植物(Short-day plant,SDP),... 详细信息

菊花(Chrysanthemum ×morifolium Ramat.)是起源于中国的世界名花,其产值和产量在世界花卉产业中始终位居前列。开花期是观赏植物重要的栽培特性,也是影响花卉产业化生产的关键因素之一。菊花为典型的短日植物(Short-day plant,SDP),自然开花期主要集中于秋季,这使其周年生产和园林应用受到一定的局限。目前,菊花的周年生产主要利用其响应短日照诱导成花的特性通过遮光和补光的方法调控开花时间以适应市场需求,这种方法极为耗能。因此,研究菊花响应短日照成花的机制,培育快速响应光周期诱导成花的菊花新品种是亟待解决的问题。作为一类重要的光受体,光敏色素参与调控高等植物的开花时间调控主要通过光周期途径中对CO蛋白稳定性及FT转录水平的调控实现,而在已知的6种开花途径的相互整合上,光敏色素则发挥了更重要的作用。已有研究表明,光敏色素(Phytochrome,PHY)在长日植物拟南芥中具有调控开花时间的功能,基因家族PHY4、PHYB、PHYC、PHYD和PHYE不同成员间既相互独立,又存在功能冗余,PHYA和PHYB是光敏色素基因家族的最早分支成员,具有更高的保守性。拟南芥中PHYA主要参与植物的避阴反应,而PHYB除了避阴反应还在调控开花时间中发挥不同的功能,但其在短日植物开花调控上的功能尚待深入研究。本研究以参与栽培菊花起源的菊属近缘野生种二倍体甘菊(C lavandulifolium)和六倍体毛华菊(***)为试验材料,在确认其响应短日照开花特性的基础上,克隆PHYA和PHYB基因全长并分析基因组织特异性及响应光周期的表达模式,进而克隆启动子序列分析预测可能的保守调控元件,最后利用农杆菌介导法将ClPHYB转化野生型和缺失突变体拟南芥以初步解析其功能。本研究获得的主要结果如下:1.结合甘菊和毛华菊转录组数据库,利用3'RACE技术的方法克隆得到甘菊和毛华菊PHYA和PHYB基因,分别命名为ClPHYA、ClPHYB和CvPHYA、CvPHYB。C1PHYA和CvPHYA均包含3366 bp的开放阅读框,编码1121个氨基酸残基;C1PHYB和CvPHYB分别包含3394 bp和3357 bp的开放阅读框。多序列比对发现C1PHYA和CvPHYA序列相似性为99.82%,ClPHYB和CvPHYB序列相似性为78.36%。系统进化分析发现蛋白分为2支··PHYA蛋白和PHYB蛋白,并且科属相近的植物聚在一起。甘菊、甘野菊(***)和毛华菊聚在一支。2.甘菊和毛华菊PHYA和PHYB基因表达的组织特异性及光周期响应特点分析表明,甘菊ClPHYA、ClPHYB和毛华菊CvPHYA、CvPHYB均为在叶片中的表达水平最高。甘菊ClPHYA、ClPHYB和毛华菊CvPHYA、CvPHYB均可响应短日照诱导表达,表达模式有一定的相似性。随着短日照诱导时间的延长,甘菊ClPHYA和毛华菊CvPHYA的表达丰度逐渐升高,在短日照诱导16-20 d时出现表达高峰,进而表达丰度下降。甘菊ClPHYB和毛华菊CvPHYB的表达丰度先随短日照诱导时间的延长逐渐降低,在12-16d表达量降低,推测该基因表达和功能可能在短日照菊属植物中较为保守性。3.利用染色体步移法克隆获得了甘菊ClPHYA基因5'端696 bp和ClPHYB基因5'端901 bp调控序列,启动子保守元件预测结果表明,ClPHYA启动子包括多个光响应元件,如Box 4,P-box,chs-CMA2a等;ClPHYB基因启动子也包括多个光响应元件,如 ATCT-motif、BoxII、G-box、GA-motif、I-box、LAMP-element、chs-CMA2b等,二者还包含多个与激素相关的作用元件和参与干旱诱导MYB结合位点MBS等其他顺势作用元件,说明甘菊ClPHYA和ClPHYB基因表达都有可能受光周期、生长发育和赤霉素GA、生长素等植物激素的调控,但二者启动子上包含的顺式作用元件数量及种类上存在明显的差异。4.鉴于PHYB除了参与避阴反应,还在调控开花时间中发挥不同的功能,且系统进化分析发现短日照甘菊ClPHYB与长日照拟南芥AtPHYB亲缘关系较远,故为进一步研究ClPHYB的基因功能,利用农杆菌转化pBI121m-ClPHYB过表达载体,侵染野生型和PHYB突变体phyb-1拟南芥,共得到35S::ClPHYB/Col-0 T1代3个株系和相35S::ClPHYB/phyb T1代2个株系。白光下35S::ClPHYB/Col-0拟南芥的下胚轴长度缩短。长日照条件下Col-0、35S::ClPHYB/Col-0和35S::ClPHYB/phyb-1转基因拟南芥开花时间不存在显著差异;短日照条件下35S::ClPHY

关键词：甘菊毛华菊光敏色素开花时间

毛华菊CvCRY2基因的克隆、生物信息学及表达分析

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分子植物育种 2019年第17期17卷 5578-5585页

作者：马朝峰邓成燕戴思兰北京林业大学园林学院花卉种质创新与分子育种北京市重点实验室国家花卉工程技术研究中心城乡生态环境北京实验室林木花卉遗传育种教育部重点实验室

蓝光受体隐花色素(Cryptochromes)在高等植物开花时间调控中发挥重要作用。结合毛华菊转录组数据库,利用RACE技术克隆得到毛华菊CRY2基因,命名为CvCRY2,并对该基因及其蛋白进行了生物信息学和表达模式分析。结果显示,CvCRY2基因编码区... 详细信息

蓝光受体隐花色素(Cryptochromes)在高等植物开花时间调控中发挥重要作用。结合毛华菊转录组数据库,利用RACE技术克隆得到毛华菊CRY2基因,命名为CvCRY2,并对该基因及其蛋白进行了生物信息学和表达模式分析。结果显示,CvCRY2基因编码区全长为1 839 bp,共编码613个氨基酸,预测蛋白相对分子量为69.954 kD,理论等电点(pI)为5.69,为亲水性蛋白。同源氨基酸序列比对结果表明,CvCRY2与甘菊、青蒿等功能已确认的CRY2同源性较高,氨基酸序列相似性均达80%以上,与拟南芥AtCRY2的相似性为56.82%;系统进化分析表明CvCRY2蛋白与甘菊、青蒿亲缘关系更近;CvCRY2蛋白功能结构域分析表明其具有高度保守DNA photolyase区域和FADbinding7结构域。CvCRY2蛋白二级结构中α-螺旋占38.66%和无规则卷曲占46.49%。利用qRT-PCR技术对毛华菊根、茎、叶、蕾、花和顶芽等组织器官中CvCRY2基因表达进行相对定量分析,发现CvCRY2在叶片中的表达量最高,其次是茎尖、茎、花、花蕾,在根中的表达量最低。CvCRY2响应短日照处理的表达模式分析发现该基因表达丰度受短日照的影响。随着短日照诱导时间的延长,其表达丰度逐渐升高,在短日照诱导16 d时出现一个表达高峰。本研究可为毛华菊CvCRY2基因的功能解析及调控机制研究提供参考。

关键词：毛华菊(Chrysanthemum vestitum) 隐花色素开花时间

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甘遂野生变家种的研究

中草药 1996年第11期27卷 679-683页

作者：任江海马朝峰李绒仙樊玉玲俞正言山西省运城地区药材公司 044000 山西省医药总公司

1992～1994年，通过对甘遂生活习性，生物学特性，种子处理，病虫害防治等调研和试验研究，肯定有性繁殖优于无性繁殖，有性秋播优于春播。发现了种籽后熟，植株夏眠等生物学特性。1994年底收获表明，有性3、4年生甘达，个大、色白、粉... 详细信息

1992～1994年，通过对甘遂生活习性，生物学特性，种子处理，病虫害防治等调研和试验研究，肯定有性繁殖优于无性繁殖，有性秋播优于春播。发现了种籽后熟，植株夏眠等生物学特性。1994年底收获表明，有性3、4年生甘达，个大、色白、粉性足，产量达254．99～344，989／m2。栽培后植物鉴定无变异。有性栽培和野生甘遂成分的初步对比分析研究表明：成分相同，符合药典规定，能同等入药。总结出一套完整、切实可行的栽培技术，为保护中药资源及药农种药致富提供了科学依据．

关键词：甘遂种栽家种

综放工作面过风氧化带顶底板注浆加固数值模拟研究

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山西煤炭管理干部学院学报 2016年第1期29卷 22-24页

作者：马朝峰太原理工大学山西太原030024

以平朔三矿39107综放工作面过风氧化带为研究背景,运用UDEC3.1计算程序对开采时顶、底板稳定性进行数值计算与分析,确定顶、底板注浆加固厚度。结果表明:1)当顶煤厚度大于2m时,端面破坏区不会与其上方的风氧化带贯通,不会造成端面大的... 详细信息

以平朔三矿39107综放工作面过风氧化带为研究背景,运用UDEC3.1计算程序对开采时顶、底板稳定性进行数值计算与分析,确定顶、底板注浆加固厚度。结果表明:1)当顶煤厚度大于2m时,端面破坏区不会与其上方的风氧化带贯通,不会造成端面大的破坏。2)顶、底板的注浆加固厚度分别为不小于2m、不小于1.5m。

关键词：冈氧化带注浆加固数值模拟

奥沙利铂联合卡培他滨对晚期结直肠癌患者免疫功能及癌细胞恶性生物行为的影响

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药品评价 2021年第19期18卷 1207-1209页

作者：马朝峰焦作煤业(集团)有限责任公司中央医院河南焦作454000

目的:探讨奥沙利铂联合卡培他滨在晚期结直肠癌患者中的应用价值。方法:选择2020年1月至12月焦作煤业(集团)有限责任公司中央医院收治的晚期结直肠癌患者78例,按随机数字表法分为两组,各39例。对照组采用卡培他滨治疗,研究组加用奥沙利... 详细信息

目的:探讨奥沙利铂联合卡培他滨在晚期结直肠癌患者中的应用价值。方法:选择2020年1月至12月焦作煤业(集团)有限责任公司中央医院收治的晚期结直肠癌患者78例,按随机数字表法分为两组,各39例。对照组采用卡培他滨治疗,研究组加用奥沙利铂治疗,以3周为1个疗程,两组均连续治疗3个疗程。比较两组免疫功能、癌细胞恶性生物行为及不良反应。结果:治疗前,两组诱导性T细胞(CD4^(+))、抑制性T细胞(CD8^(+))、CD4^(+)/CD8^(+)及病灶组织中胶原三股螺旋重叠蛋白1(CTHRC1)、成蛋白样3型蛋白(FMNL3)、存活蛋白(Survivin)基因表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,研究组CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)高于对照组,CD8^(+)及病灶组织中CTHRC1、FMNL3、Survivin的表达量低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:奥沙利铂联合卡培他滨能够改善晚期结直肠癌患者免疫功能,抑制癌细胞的增殖、侵袭,促进癌细胞凋亡,且安全可靠。

关键词：结直肠癌奥沙利铂卡培他滨免疫功能癌细胞恶性生物行为

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平潭野菊混合瓣型株系再生体系的建立

植物学报 2023年第3期58卷 449-460页

作者：廖敏凌蒲娅武晓云马朝峰王文奎戴思兰北京市林木分子设计育种高精尖创新中心北京林业大学园林学院国家花卉工程技术研究中心花卉种质创新与分子育种北京市重点实验室城乡生态环境北京实验室北京100083 福州市规划设计研究院集团有限公司福州350108

菊科植物因其丰富的舌状花变异类型而具有很高的观赏价值。野菊(Chrysanthemum indicum)作为栽培菊花(C.×morifolium)的近缘野生种之一,其自然群体中常具有典型的平瓣、匙瓣及管瓣的舌状花变异类型,是研究菊科植物瓣型变异的优异材料,... 详细信息

菊科植物因其丰富的舌状花变异类型而具有很高的观赏价值。野菊(Chrysanthemum indicum)作为栽培菊花(C.×morifolium)的近缘野生种之一,其自然群体中常具有典型的平瓣、匙瓣及管瓣的舌状花变异类型,是研究菊科植物瓣型变异的优异材料,而目前缺乏对其再生体系的研究。在福建平潭岛分布的野菊中发现大量舌状花形态变异植株,该研究以其混合瓣型株系茎间薄层和叶盘为外植体建立再生体系。结果表明,以茎间薄层为外植体,诱导愈伤组织和不定芽分化的最优培养基为MS+1.0 mg∙L^(-1)6-BA+0.5 mg∙L^(-1) NAA,接种14天愈伤组织诱导率可达100%。不定芽平均分化时间为25天,接种40天不定芽分化率可达82%。最佳生根培养基为1/2MS+0.5 mg∙L^(-1) NAA,10天生根。移栽植株全部成活,植株生长状态良好且均保留了混合瓣型的形态特征。该研究初步建立了平潭野菊混合瓣型株系茎间薄层的离体培养再生体系,为进一步建立其遗传转化体系奠定了基础,也为解析菊花瓣型变异机理提供了技术方法。

关键词：野菊植物生长调节剂再生体系混合瓣型株系茎间薄层

西妥昔单抗联合XELOX方案治疗转移性结直肠癌患者的临床疗效

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癌症进展 2023年第8期21卷 887-890,899页

作者：马朝峰高丹李茜焦作煤业(集团)有限责任公司中央医院肿瘤内二科河南焦作454000

目的探讨西妥昔单抗联合奥沙利铂+卡培他滨(XELOX)方案治疗转移性结直肠癌(CRC)患者的临床疗效。方法根据治疗方法的不同将118例转移性CRC患者分为对照组(n=58)和联合组(n=60),对照组患者采用单纯XELOX方案治疗,联合组患者采用西妥昔单... 详细信息

目的探讨西妥昔单抗联合奥沙利铂+卡培他滨(XELOX)方案治疗转移性结直肠癌(CRC)患者的临床疗效。方法根据治疗方法的不同将118例转移性CRC患者分为对照组(n=58)和联合组(n=60),对照组患者采用单纯XELOX方案治疗,联合组患者采用西妥昔单抗联合XELOX方案治疗。比较两组患者的近期疗效、肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)、糖类抗原125(CA125)、糖类抗原50(CA50)]水平、T淋巴细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+))水平、不良反应发生情况及生存情况。结果联合组患者的疾病控制率为76.67%,高于对照组患者的58.62%,差异有统计学意义(P0.05)。随访18个月,联合组患者的生存率为70.00%,高于对照组患者的51.72%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论西妥昔单抗联合XELOX方案治疗转移性CRC患者能够提高近期疗效和生存率,降低肿瘤标志物水平,改善免疫功能,且具有一定的安全性。

关键词：转移性结直肠癌西妥昔单抗 XELOX方案肿瘤标志物 T淋巴细胞亚群

吉非替尼单药治疗与联合化疗对EGFR突变晚期非小细胞肺癌的疗效分析

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内蒙古医学杂志 2021年第10期53卷 1228-1229,1232页

作者：靳桂红王道军马朝峰焦作市焦煤集团中央医院肿瘤内科河南焦作454000

目的分析吉非替尼联合化疗及吉非替尼单药治疗表皮生长因子受体(EGFR)突变晚期非小细胞肺癌的临床效果。方法选取2017年2月至2018年11月我院EGFR突变晚期非小细胞肺癌患者88例,按随机数字表法分为试验组44例和对照组44例,对照组予以吉... 详细信息

目的分析吉非替尼联合化疗及吉非替尼单药治疗表皮生长因子受体(EGFR)突变晚期非小细胞肺癌的临床效果。方法选取2017年2月至2018年11月我院EGFR突变晚期非小细胞肺癌患者88例,按随机数字表法分为试验组44例和对照组44例,对照组予以吉非替尼单药治疗,试验组予以吉非替尼联合化疗治疗。对比两组疗效、症状改善时间、不良反应发生率、生存率变化。结果试验组疾病控制率81.82%(36/44)较对照组61.36%(27/44)高,差异有统计学意义(P0.05);试验组1年生存率64.10%(25/39)、2年生存率46.15%(18/39)较对照组35.71%(15/42)、23.81%(10/42)高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论与吉非替尼单药治疗相比,吉非替尼联合化疗治疗EGFR突变晚期非小细胞肺癌患者可提高疾病控制率,改善临床症状,提高生存率,且未明显增加不良反应发生率,具有安全性。

关键词：表皮生长因子受体突变晚期非小细胞肺癌化疗生存率

菊花日中性品种组织培养中外植体消毒及试管苗生根研究

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菊花日中性品种组织培养中外植体消毒及试管苗生根研究