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鹅细小病毒在雏鹅体内分布的免疫组织化学检测

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中国兽医科学 2012年第7期42卷 681-684页

作者：杨静红马德星李广兴山东工商学院山东烟台264005 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

采用间接免疫酶组织化学染色法对14日龄雏鹅人工感染鹅细小病毒后不同时间段病毒抗原在体内的定位及分布情况进行了检测,同时应用图像分析软件对免疫组织化学图像中的抗原强度进行了定量分析。结果显示,感染后第1天到第21天,在心、肺、... 详细信息

采用间接免疫酶组织化学染色法对14日龄雏鹅人工感染鹅细小病毒后不同时间段病毒抗原在体内的定位及分布情况进行了检测,同时应用图像分析软件对免疫组织化学图像中的抗原强度进行了定量分析。结果显示,感染后第1天到第21天,在心、肺、脾、肝、法氏囊、胸腺、腺胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、食管12种组织器官中检测到了病毒抗原。其中感染后第5天的感染组织最广泛,抗原染色强度最高,在检测的组织中以空肠的检出率最高。病毒抗原广泛分布于肠道的上皮细胞、腺上皮细胞,肺泡壁细胞和肾小管的上皮细胞内。始终未能从大脑、胰腺和骨骼肌中检测到鹅细小病毒。可见该病毒感染雏鹅后存在于患病鹅的大部分组织器官内,进一步证实该病毒是一种泛嗜性病毒。

关键词：鹅细小病毒间接免疫酶组织化学染色法染色强度分布规律

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鸡球虫病细胞介导免疫研究

黑龙江畜牧兽医 2004年第1期 65-67页

作者：胡京友郑世民马德星东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

鸡球虫病是由艾美耳属原生球虫引起的鸡肠道内疾病,被认为是对养禽业最具经济破坏力的传染病之一.多年来,抗球虫药物在球虫疾病的防治中发挥了十分重要的作用.但随着耐药虫株的不断产生,特别是药物残留对畜产品品质及人类健康和环境影... 详细信息

鸡球虫病是由艾美耳属原生球虫引起的鸡肠道内疾病,被认为是对养禽业最具经济破坏力的传染病之一.多年来,抗球虫药物在球虫疾病的防治中发挥了十分重要的作用.但随着耐药虫株的不断产生,特别是药物残留对畜产品品质及人类健康和环境影响等问题日益突出,迫使学者们寻找更为安全、有效的途径以控制球虫病.因此,球虫免疫学的研究日益引起广大学者的重视.

关键词：鸡球虫病细胞免疫球虫抗原性细胞因子抗球虫感染

Ea3-1E与mChIL-15融合基因的构建及其真核表达质粒的免疫效果

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中国兽医科学 2010年第9期40卷 913-919页

作者：马德星潘龙杨静红唐丽李广兴东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

应用重叠扩增PCR技术将鸡堆形艾美球虫子孢子表面抗原3-1E基因片段(Ea3-1E)与编码鸡白细胞介素15成熟蛋白基因片段(mChIL-15)进行串联连接,并在这2个基因片段之间引入4个柔性连接肽SPGS,获得融合基因Ea3-1E-linker-mChIL-15。以pcDNA3.1... 详细信息

应用重叠扩增PCR技术将鸡堆形艾美球虫子孢子表面抗原3-1E基因片段(Ea3-1E)与编码鸡白细胞介素15成熟蛋白基因片段(mChIL-15)进行串联连接,并在这2个基因片段之间引入4个柔性连接肽SPGS,获得融合基因Ea3-1E-linker-mChIL-15。以pcDNA3.1(+)为载体构建并鉴定真核表达质粒pcD-NA3.1-Ea3-1E-linker-mChIL-15。应用磷酸钙法将质粒体外转染293T细胞,通过间接免疫荧光技术和免疫组织化学技术对重组质粒的体外瞬时表达进行检测。将重组质粒pcDNA3.1-Ea3-1E-linker-mChIL-15、pcDNA3.1-Ea3-1E和pcDNA3.1分别于14和21日龄经腿部肌肉注射免疫SPF雏鸡,28日龄时,除非免疫非感染组外,各组感染5×104个堆形艾美球虫孢子化卵囊,观察真核表达质粒的免疫保护效果。结果显示,成功构建了融合基因3-1E-linker-mChIL-15,转染后第30小时可检测到融合基因编码蛋白在293T细胞中的瞬时表达。与质粒pcDNA3.1-Ea3-1E相比,质粒pcDNA3.1-Ea3-1E-linker-mChIL-15二次免疫后可提供明显的抗球虫免疫保护效果,提高相对增重率(96.48%),降低卵囊排出率(68.35%),降低十二指肠病变记分等。抗球虫指数为183.78。

关键词：堆形艾美球虫融合基因真核表达质粒免疫效果

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中国兽医科学 2011年第11期41卷 1176-1181页

作者：马德星高铭扬马春丽宋春林东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学食品学院黑龙江哈尔滨150030

为建立鸡Toll样受体2(ChTLR2)信号通路中相关分子的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法,根据GenBank中TLR2信号通路中的5种相关分子即ChTLR2-1,ChTLR2-2,ChTLR6,鸡骨髓分化蛋白88(ChMyD88)及鸡核因子κB(ChNF-κB)基因序列,以鸡3-磷酸甘油脱氢酶(ChGAPDH)基因为参考基因,设计特异引物扩增目的基因片段。将6种基因克隆至pMD8-T载体后得到各自的阳性克隆质粒,以6种阳性质粒为标准品建立了标准曲线并进行熔解曲线分析以及灵敏性、特异性和重复性试验分析。应用建立的方法对堆形艾美耳球虫核酸疫苗pcDNA/Ea3-1E免疫SPF雏鸡脾中ChMyD88和ChNF-κB mRNA的转录水平进行检测。结果显示,当标准品稀释度为1×102～1×1010copies/μL时,6种基因Ct值与浓度间具有良好的线性关系,相关系数均大于0.995。熔解曲线分析表明,产物为特异性单峰且重复性较好。免疫雏鸡脾中ChMyD88和ChNF-κB mRNA转录水平的检测结果表明,免疫组2种分子mRNA转录水平均极显著高于空白对照组(P<0.01)。本研究为ChTLR信号通路中相关分子的定量分析提供了技术平台。

关键词：鸡 TLR2信号通路 SYBRGreenⅠ 实时荧光定量RT-PCR

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白细胞介素15的研究进展

黑龙江畜牧兽医 2003年第12期 64-66页

作者：马德星李广兴胡京友东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

白细胞介素 15 (interleukin 15IL - 15 )是近年发现的一种在分子结构及生物学性质方面与白细胞介素 2 (inter leukin 2IL - 2 )相似的细胞因子。自 1994年发现以来 ,由于其在医学及兽医学上重要的生物学作用而受到研究者们的重视。现对... 详细信息

白细胞介素 15 (interleukin 15IL - 15 )是近年发现的一种在分子结构及生物学性质方面与白细胞介素 2 (inter leukin 2IL - 2 )相似的细胞因子。自 1994年发现以来 ,由于其在医学及兽医学上重要的生物学作用而受到研究者们的重视。现对IL - 15及其在兽医学上具潜在应用价值的鸡IL - 15近年来取得的研究进展作一综述。

关键词：白细胞介素15 研究进展结构受体细胞因子基因表达生物学作用免疫

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鸡IFN-γ作为治疗剂的应用前景

黑龙江畜牧兽医 2004年第6期 81-82页

作者：王海艳赵振华马德星内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为了得到长期的保护性免疫,需要使用高效的佐剂,但大多数佐剂是油性的,会导致副的局部反应,从而使肉质量下降.另外,注射后严重的局部反应可能使抗原在注射部位被包裹,因而不会被免疫系统的细胞所识别.抗生素虽然普遍使用,但耐药菌的出现... 详细信息

为了得到长期的保护性免疫,需要使用高效的佐剂,但大多数佐剂是油性的,会导致副的局部反应,从而使肉质量下降.另外,注射后严重的局部反应可能使抗原在注射部位被包裹,因而不会被免疫系统的细胞所识别.抗生素虽然普遍使用,但耐药菌的出现,又对人类造成新的威胁.同样,长期使用化学药物,增加了环境污染并导致肉制品中药物残留.这些因素驱使人们寻找另一种天然的疫苗佐剂.细胞因子由于效力高、副作用小而在治疗中得到高度重视.ChIFN-γ同哺乳动物IFN-γ一样,是细胞因子的典型代表,它是-个重要的免疫调节蛋白,它对免疫系统的发育、成熟及功能的发挥具有多方面的调节作用.此外,IFN-γ具有抗肿瘤、病毒、细菌和寄生虫等作用.

关键词：鸡 IFN-γ 治疗剂免疫佐剂基因克隆生产

鸡堆形艾美球虫3-1E基因真核表达质粒的构建及其抗球虫免疫保护作用

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中国兽医科学 2009年第10期39卷 900-904页

作者：马德星潘龙杨静红蔡浩璠李广兴东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从堆形艾美球虫SH株子孢子中扩增3-1E基因片段,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)-3-1E。质粒纯化后体外转染293T细胞,通过间接免疫荧光技术和免疫组织化学技术检... 详细信息

应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从堆形艾美球虫SH株子孢子中扩增3-1E基因片段,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)-3-1E。质粒纯化后体外转染293T细胞,通过间接免疫荧光技术和免疫组织化学技术检测3-1E蛋白在转染细胞中的表达情况。将构建的重组质粒以及空载体质粒分别于14、21日龄分2次经腿部肌肉注射免疫SPF雏鸡,28日龄除非免疫非感染对照组外各组攻击性感染5×104个堆形艾美球虫孢子化卵囊,观察真核表达质粒对球虫感染鸡的免疫保护作用并探讨其免疫保护机理。结果显示,与载体对照组相比,质粒pcDNA3.1(+)-3-1E 2次免疫后可显著提高脾CD8+T淋巴细胞亚型数量,并具有一定的抗球虫免疫保护作用,可显著减少每克粪便的卵囊排出量,降低十二指肠病变记分,减少增重下降等。

关键词：堆形艾美球虫 3-1E基因真核表达质粒免疫保护

鸡堆型艾美耳球虫3-1E基因真核表达质粒的构建及其体外表达

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黑龙江畜牧兽医 2010年第5期 98-100页

作者：马德星潘龙杨静红李广兴东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为了构建鸡堆型艾美耳球虫(***)3-1E基因真核表达质粒,试验应用RT-PCR技术从***子孢子中扩增出3-1E基因片段,将其连接到克隆载体pMD18-T中得到重组克隆质粒pMD18-3-1E,阳性克隆质粒经鉴定正确后将3-1E基因片段亚克隆入真核表达载体pcD-N... 详细信息

为了构建鸡堆型艾美耳球虫(***)3-1E基因真核表达质粒,试验应用RT-PCR技术从***子孢子中扩增出3-1E基因片段,将其连接到克隆载体pMD18-T中得到重组克隆质粒pMD18-3-1E,阳性克隆质粒经鉴定正确后将3-1E基因片段亚克隆入真核表达载体pcD-NA3.1(+)中,得到重组阳性表达质粒pcDNA3.1(+)-3-1E。结果表明:阳性表达质粒经鉴定正确后应用磷酸钙法体外转染293T细胞,通过间接免疫荧光法和免疫组织化学技术检测到了3-1E蛋白在293T细胞中的表达,说明***3-1E基因真核表达质粒构建成功。

关键词： 3-1E 转染体外表达

三种鸡细胞因子mRNA实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

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中国兽医科学 2013年第2期43卷 184-189页

作者：高铭扬马春丽马德星李广兴张瑞莉东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学食品学院黑龙江哈尔滨150030

为建立鸡细胞因子SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法,根据GenBank中三种重要的鸡细胞因子即ChIL-12、ChIL-15、ChIL-18的基因序列,以鸡3-磷酸甘油脱氢酶(ChGAPDH)基因为内参,设计特异引物扩增目的基因。将四种基因克隆至pMD18-T... 详细信息

为建立鸡细胞因子SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法,根据GenBank中三种重要的鸡细胞因子即ChIL-12、ChIL-15、ChIL-18的基因序列,以鸡3-磷酸甘油脱氢酶(ChGAPDH)基因为内参,设计特异引物扩增目的基因。将四种基因克隆至pMD18-T载体上,得到各自阳性克隆质粒,以四种阳性质粒为标准品建立标准曲线并进行熔解曲线分析以及灵敏性、特异性和重复性试验。结果显示,当标准品稀释度为1×102～1×1010 copies/μL时,四种基因的Ct值与浓度间具有良好的线性关系,相关系数均大于0.985。熔解曲线分析表明,产物为特异性单峰且重复性较好。应用建立的方法对堆型艾美耳球虫核酸疫苗pcDNA-Ea3-1E免疫的SPF雏鸡脾中ChIL-12mRNA和ChIL-18 mRNA的相对表达量进行检测,免疫组ChIL-12mRNA和ChIL-18mRNA的相对表达量均极显著高于空白对照组(P<0.01)。研究结果为ChIL-12、ChIL-15、ChIL-18的定量分析提供了技术平台。

关键词：鸡细胞因子 SYBR GreenⅠ 实时荧光定量RT-PCR